吡格列酮对THP-1源性巨噬细胞胆固醇流出调节蛋白ABCA1,ABCG1及SR-BⅠ表达的影响

目的:探讨吡格列酮对THP-1源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1 (ABCA1)、ATP结合盒转运蛋白G1(ABCG1)及B族Ⅰ型清道夫受体(SR-B Ⅰ)表达的影响及可能作用机制.方法:Real time PCR及Westernblot检测不同浓度吡格列酮(1,10,20,30 μmol/L)作用24 h,THP-1源性巨噬细胞ABCA1,ABCG1及SR-BⅠmRNA和蛋白的表达.使用过氧化物酶体增殖物激活型受体γ(PPARγ)特异性拮抗剂GW9662(2 μmol/L)阻断吡格列酮(10 μmol/L),24 h后检测THP-1源性巨噬细胞ABCA1,ABCG1及SR-B Ⅰ mRNA和蛋白的表达.结果:吡格列酮可浓度依赖性增高24 h THP-1源性巨噬细胞ABCA1,ABCG1及SR-BⅠ mRNA和蛋白的表达,GW9662可显著抑制吡格列酮诱导的THP-1源性巨噬细胞ABCA1,ABCG1及SR-BⅠ mRNA和蛋白表达的增高(P＜0.05).结论:吡格列酮激动PPARγ上调THP-1源性巨噬细胞胆固醇流出调节蛋白ABCA1,ABCG1及SR-BⅠ基因的表达.     

PCSK9 siRNA对THP-1源性巨噬细胞CD36?SR-A1及SR-B1表达的影响

目的:研究前蛋白转换酶枯草溶菌素9(PCSK9) siRNA对THP-1源性巨噬细胞CD36?SR-A1及SR-B1表达的影响?方法:以THP-1源性巨噬细胞为研究对象,应用Lipofectamine 2000转染不同浓度PCSK9 siRNA进THP-1源性巨噬细胞中,RT-PCR及Western blot筛选出最有效的siRNA,再转染入THP-1源性巨噬细胞,24 h后加入ox-LDL处理24 h,采用油红O染色检测细胞内脂质蓄积情况,RT-PCR分析细胞CD36?SR-A1及SR-B1表达?结果:浓度为80 nmol/L的PCSK9 siRNA基因沉默效应最佳;油红O染色结果表明ox-LDL组细胞内脂质蓄积情况最为明显,PCSK9 siRNA转染组次之;PCSK9 siRNA转染组CD36 mRNA表达水平相对于ox-LDL组降低(P < 0.05),而ox-LDL组和PCSK9 siRNA转染组SR-A1及SR-B1 mRNA表达无明显差异?结论:PCSK9可能通过影响摄取脂质的细胞膜表面受体CD36表达,参与动脉粥样硬化的发生发展?     

内脂素对THP-1源性泡沫细胞形成中过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达的作用

目的:观察内脂素(visfatin)诱导人类单核细胞白血病细胞株THP-1源性泡沫细胞形成中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达作用。方法:给予不同浓度的visfatin处理THP-1源性巨噬细胞,并加入低密度脂蛋白(LDL)孵育24 h后,运用油红O染色观察细胞内脂滴的变化,运用逆转录聚合酶链反应和Western-blot检测PPARγ的mRNA和蛋白表达水平。结果:高浓度的visfatin刺激负荷LDL的THP-1源性巨噬细胞24 h后,细胞质内的脂滴明显增多。visfatin呈浓度依赖性的下调负荷LDL的THP-1源性巨噬细胞中PPARγmRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论:visfatin对THP-1源性泡沫细胞形成中PPARγ表达水平的下调,这可能在动脉粥样硬化的发生发展起重要作用。     

不对称二甲基精氨酸对THP-1源性巨噬细胞表达MIF和分泌TNF-α、IL-8的影响(英文)

目的观察不对称二甲基精氨酸(ADMA)对THP-1源性巨噬细胞表达巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和分泌TNF-α、IL-8的影响。方法用PMA诱导单核细胞THP-1分化为巨噬细胞。将分化后的THP-1源性巨噬细胞用不同浓度的ADMA作用24 h后,分别采用RT-PCR、Western blot和ELISA方法检测MIF mRNA和蛋白表达水平及培养上清中TNF-α与IL-8的含量。结果 ADMA剂量依赖性的上调了THP-1源性巨噬细胞内MIF mRNA和蛋白表达,15μmol/L ADMA对MIFmRNA和蛋白表达的上调作用最明显。随着ADMA浓度增加,THP-1源性巨噬细胞培养上清中TNF-α和IL-8的水平逐渐升高,在15μmol/LADMA作用时达到峰值。结论 ADMA能够上调巨噬细胞内MIF的表达,促进TNF-α和IL-8的分泌。     

达格列净在ox-LDL诱导形成的THP-1源性泡沫细胞焦亡中的作用

目的 探讨达格列净(DAPA)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导形成的人髓系白血病单核细胞(THP-1)源性泡沫细胞焦亡中的作用。方法 通过ox-LDL诱导THP-1源性巨噬细胞构建THP-1源性泡沫细胞焦亡模型。设置实验分组为：空白对照(NC)组、ox-LDL组和药物干预(ox-LDL+DAPA)组;以油红O法检测巨噬细胞泡沫化水平;细胞增殖与毒性检测试剂盒(CCK-8)检测DAPA对泡沫细胞活力的影响;Hoechst 33342/PI双染检测THP-1源性泡沫细胞焦亡;细胞免疫荧光双染检测DAPA对泡沫细胞焦亡中焦亡关键因子Caspase-1表达的影响;采用微量酶标法检测细胞培养基中乳酸脱氢酶(LDH)活性;采用qRT-PCR和Western blot分别检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、消皮素D(GSDMD)、白细胞介素(IL)-18、IL-1β mRNA和蛋白表达水平。结果 CCK-8法检测结果提示DAPA的最佳干预浓度为10μmol/L;油红O染色结果示THP-1巨噬细...     

血红素氧化酶-1抑制氧化低密度脂蛋白诱导的THP-1源性巨噬细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1的表达

目的：探讨氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）诱导的血红素氧化酶（HO）-1对THP-1源性巨噬细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体（LOX）-1表达的影响。方法：不同浓度（0．0、25．0、50．0、100．0mg／L）OX-LDL刺激THP-1源性巨噬细胞;Westernblot检测H0-1蛋白表达。用10gmol／LZnPPIX（HO．1抑制剂）和CoPPIX（HO．1诱导剂）干预THP．1源性巨噬细胞12h后,再用100mg／LOX-LDL刺激24h;用RT-PCR和Westernblot分别检NLOX-1mRNA和蛋白表达。结果：OX-LDL组可上调HO．1蛋白表达,呈明显剂量．效应关系（P〈0．01）。CoPPIX组LOX．1mRNA和蛋白表达较100mg／LOX．LDL组明显下降（P〈0．01）。结论：OX-LDL可上调THP-1源性巨噬细胞HO-1的表达;诱导HO-1的高表达可抑制THP一1源性巨噬细胞LOX．1的表达。     

Visfatin诱导THP-1源性泡沫细胞形成的机制研究

目的观察内脂素(visfatin)对人单核细胞株(THP-1)源性巨噬细胞胆固醇代谢相关基因ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)和酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)表达的影响,探讨visfatin诱导THP-1源性泡沫细胞形成的机制。方法 THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞,随机分组,给予不同浓度和不同作用时间的visfatin进行干预,分别运用油红O染色观察细胞质脂滴变化,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组细胞ABCA1及ACAT1 mRNA和蛋白表达,酶荧光学法检测细胞内总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)含量,TC与FC之差为胆固醇酯(CE)含量。结果与对照组比较,visfatin干预组细胞质脂滴明显增多,细胞内FC和CE含量增加(均P<0.05),CE与TC的比值明显增加(>50%),ABCA1 mRNA和蛋白表达水平降低(均P<0.05),ACAT1 mRNA和蛋白表达水平升高(均P<0.05)。相关分析显示,visfatin呈浓度和时间依赖性下调ABCA1 mRNA和蛋白的表达,上调ACAT1 mRNA和蛋白的表达。结论 visfatin下调巨噬细胞ABCA1的表达,上调ACAT1的表达,使细胞内FC流出减少,CE合成增加,从而诱导THP-1源性泡沫细胞的形成,这可能为visfatin致动脉粥样硬化发病机制的研究提供一个新的理论依据。     

葡萄糖抑制THP-1巨噬细胞载脂蛋白E的表达

目的:观察葡萄糖对人单核细胞性白血病细胞株(human monocytic leukemia cell line,THP-1)巨噬细胞的载脂蛋白E(Apo E)表达的影响。方法:用佛波脂诱导THP-1细胞使其分化成巨噬细胞。再用含不同浓度葡萄糖的RPMI 1640培养基培养巨噬细胞72 h后,RT-PCR和Western Blot分别检测巨噬细胞Apo E的mRNA和蛋白的表达,同时用MTT法检测各组细胞活力。结果:葡萄糖呈剂量依赖性(20~30 mmol/L),明显抑制THP-1巨噬细胞Apo E的表达。结论:葡萄糖抑制THP-1巨噬细胞Apo E的表达,其可能是导致动脉粥样硬化的机制之一。     

人胚胎干细胞源神经干细胞微囊泡对巨噬细胞极化的影响

目的: 探究人胚胎干细胞源神经干细胞微囊泡对巨噬细胞极化的影响。方法: Dil标记神经干细胞微囊泡,流式细胞仪和共聚焦显微镜观察THP-1巨噬细胞对微囊泡的内化;实时荧光定量PCR筛选微囊泡最适浓度;100 ng/mL 脂多糖刺激THP-1细胞6 h后,微囊泡处理12 h,实时荧光定量PCR检测巨噬细胞炎性因子IL-1β,肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)以及IL-6的mRNA表达水平;微囊泡处理24 h, 蛋白免疫印迹法检测诱导型一氧化氮合酶 (inducible nitric oxide synthase, iNOS)和精氨酸酶1 (Arginase-1, Arg-1)蛋白表达水平;流式细胞术检测THP-1巨噬细胞M1极化表面标志CD86表达。结果： THP-1巨噬细胞在12 h和24 h均能明显内化神经干细胞微囊泡;0.12 μg/mL微囊泡具有最适调控作用;与未处理细胞相比,脂多糖处理后明显增加THP-1细胞IL-1β,TNF-α,IL-6等mRNA和iNOS蛋白,Arg-1蛋白表达差异无统计学意义(P<0.05);经神经干细胞微囊泡处理后THP-1细胞IL-1β,TNF-α,IL-6等mRNA和iNOS蛋白表达明显降低(P<0.05);与未处理细胞相比,脂多糖和微囊泡处理后THP-1巨噬细胞CD86表达差异无统计学意义。结论： 人胚胎干细胞源神经干细胞微囊泡能够减少THP-1细胞炎性细胞因子和iNOS表达,抑制巨噬细胞M1极化。     

Ox-LDL对PMA诱导的THP-1巨噬细胞自噬的影响

目的探讨氧化型低密度脂蛋白（Ox-LDL）对PMA诱导的THP-1巨噬细胞自噬的影响。方法 PMA诱导THP-1细胞24 h,使其分化为巨噬细胞,再分别用0、10、20、40或80 mg/L的Ox-LDL处理24 h,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹技术（Western blotting）分别检测Beclin-1以及LC3的mRNA及蛋白表达;细胞免疫荧光检测LC3在细胞内的含量;MDC染色检测自噬囊泡的形成。结果随着Ox-LDL浓度的增加,THP-1源性巨噬细胞Beclin-1 mRNA及蛋白表达显著降低（P〈0.05）;LC3 mRNA表达无明显改变（P〉0.05）,但蛋白水平LC3II/LC3I显著降低（P〈0.001）;免疫荧光结果表明随着Ox-LDL浓度的增加,LC3II含量降低,MDC染色结果显示自噬囊泡随着Ox-LDL浓度的增加而减少。结论 Ox-LDL抑制PMA诱导的THP-1巨噬细胞自噬。     

辛伐他汀对THP-1巨噬细胞胆固醇外流及ABCA1、CD36表达影响

目的研究不同剂量辛伐他汀对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的THP-1巨噬细胞胆固醇外流及ATP结合盒受体A1(ABCA1)、CD36表达的影响。方法建立ox-LDL诱导泡沫细胞模型,THP-1巨噬细胞体外培养,用辛伐他汀进行干预,用[3H]标记胆固醇,液体闪烁计数法检测胆固醇外流量,油红O染色观察细胞泡沫化程度,Western Blot、RT-PCR检测细胞内ABCA1及CD36蛋白和mRNA表达。结果辛伐他汀组较ox-LDL诱导组胆固醇外流明显增加,ABCA1受体蛋白及mRNA表达明显增加(P<0.05),同时CD36受体蛋白及mRNA表达明显下调(P<0.05)呈剂量依赖性。结论辛伐他汀可促进ox-LDL诱导的泡沫细胞胆固醇外流,抑制巨噬细胞泡沫化,该作用可能与辛伐他汀上调ABCA1及抑制CD36表达有关。     

游离脂肪酸对THP-1巨噬细胞NALP3炎性通路的影响

目的：探讨NALP3 炎性小体在非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH) 的炎症发 生发展中的可能作用。方法：选择THP-1 构建体外巨噬细胞模型,用不同浓度的棕榈酸干预24 h;用不同浓度 的N- 乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC) 预处理细胞后加入高浓度的棕榈酸孵育24 h。分别用活性氧(reactive oxygen species,ROS) 指示剂结合流式细胞仪检测THP-1 中ROS 的变化;ELISA 检测细胞上清液中IL-1 的浓 度;免疫荧光技术检测NALP3,caspase-1 蛋白的表达;荧光定量PCR 检测NALP3 蛋白复合体各组分(NALP3, ASC,caspase-1)mRNA 的表达水平。结果：与空白组相比,各棕榈酸组细胞内ROS 增加,NALP3 和caspase-1 蛋 白表达及其分泌IL-1 水平均增加(P<0.05),并随棕榈酸浓度增加而增强;NAC 预处理后,与单纯棕榈酸组相比, 各NAC 组THP-1 产生ROS 水平均下降,同时NALP3 和caspase-1 蛋白表达水平,NALP3 复合体各组分mRNA 水 平及其分泌IL-1 的能力均降低(P<0.05),此抑制作用随NAC 浓度增加而增强。结论：游离脂肪酸可通过产生 ROS 调节巨噬细胞NALP3 炎性小体信号通路的活化引起炎症因子分泌,该通路可能是NASH 的发病机制之一。     

番石榴叶总黄酮抑制泡沫细胞形成及LOX-1表达的实验研究

目的 研究番石榴叶总黄酮抑制泡沫细胞形成及LOX-1表达的作用。方法 建立THP-1单核-巨噬细胞源性泡沫细胞模型,根据CCK-8法测定的番石榴叶总黄酮对该细胞的安全浓度范围,将配制的番石榴总黄铜溶液在其安全范围内选取低、中、高三个剂量组,以无血清培养液的空白对照组及ox-LDL模型组为对照。采用油红O染色观察细胞内脂质堆积情况,酶偶联比色法检测细胞内总胆固醇含量,Western blot法检测LOX-1的蛋白表达水平。结果 三个剂量组细胞内总胆固醇含量均低于模型组（P〈0.05）,并随番石榴叶总黄酮浓度升高而下降;三个剂量组的LOX-1蛋白表达均低于模型组（P〈0.05）,抑制作用随剂量升高而增强。结论 番石榴叶总黄酮通过抑制LOX-1的表达,减少巨噬细胞摄取ox-LDL,抑制泡沫细胞形成,从而起到抗动脉粥样硬化的作用。     

Ox-LDL对大鼠血管平滑肌细胞OPG及RANKL表达的影响

目的：观察氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）骨保护素（OPG）及核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）表达的影响。方法：体外培养大鼠VSMCs细胞株（A7r5）,采用不同浓度Ox-LDL（75、150、300μg/mL）或不同时间（4、12、24h）处理构建VSMCs损伤模型,分别采用定量PCR、Western blot方法检测大鼠主动脉OPG、RANKL表达情况。结果：经过oxLDL干预后,VSMCs高表达OPG而低表达RANKL,且呈现浓度和时间的依赖性。结论：ox-LDL能够促进大鼠VSMCs OPG表达,并同时抑制RANKL表达。     

MicroRNA155通过下调清道夫受体表达抑制巨噬细胞泡沫化形成

 探讨microRNA-155(miR-155)对巨噬细胞泡沫化过程的影响及机制。【方法】 实时定量PCR检测miR-155的表达,Western Blot方法检测巨噬细胞A类清道夫受体SR-A和B型清道夫受体CD36的表达,激光共聚焦显微镜观察miR-155对THP-1结合、摄取DiI标记氧化型低密度脂蛋白(DiI-oxLDL)能力的影响。【结果】 80μg/mL的氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)时间依赖性地诱导巨噬细胞miR-155表达上调。过表达miR-155抑制SR-A和CD36的表达,同时巨噬细胞结合、摄取DiI-oxLDL的能力明显降低。而反义-miR-155则明显上调SR-A和CD36的表达,同时巨噬细胞结合、摄取DiI-oxLDL的能力明显增强。【结论】 MiR-155通过降低巨噬细胞SR-A和CD36的表达抑制巨噬泡沫细胞的形成。     

STAT3 siRNA对肺腺癌A549细胞STAT3及其下游基因表达的影响

目的：观察RNA干扰沉默STAT3基因对人肺腺癌A549细胞STAT3、CyclinD1、Bcl-2、BAX、Caspase-9蛋白表达的影响及其相关性及对细胞生长的影响,探讨肺癌基因治疗的新途径。方法：采用化学合成法,合成针对STAT3基因不同位点设计的3条小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）序列（siRNA1-3）和1条带有荧光标记的应用STAT3-siRNA转染处理人肺腺癌细胞系A549,转染16h后荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR检测STAT3基因表达的变化,蛋白免疫印迹法检测转染后A549细胞STAT3,CyclinD1,BAX,Bcl-2,Caspase-9蛋白表达,AM-BLUE检测A549细胞生长情况。结果：经RNA干扰能有效减低A549细胞STAT3mRNA表达水平（P〈0.05）,转染后A549细胞STAT3、CyclinD1、Bcl-2蛋白的表达水平均显著降低（P〈0.05）,而BAX、Caspase-9蛋白的表达水平升高（P〈0.05）。STAT3蛋白表达分别与CyclinD1、Bcl-2蛋白表达呈正相关（r=0.854,0.910,P〈0.05）;与BAX蛋白表达程负相关性（r=-0.848,P〈0.05）;与Caspase-9蛋白表达程无相关性（r=-0.787,P〉0.05）。RNA干扰法沉默STAT3基因后,A549细胞增殖受到明显抑制。结论：STAT3-siRNA可有效抑制STAT3、CyclinD1、Bcl-2在人肺腺癌A549细胞中的表达,升高BAX、Caspase-9在人肺腺癌A549细胞中的表达,抑制A549细胞生长。     

熊果酸诱导甲状腺乳头状癌细胞TPC-1凋亡的实验

目的 研究熊果酸 (ursolic acid UA) 在体外对人甲状腺乳头状癌细胞株TPC-1增殖的抑制作用.方法采用不同浓度的UA干预细胞 (对照组0μM, 实验组3μM、6μM、12μM) ;MTT法观察同一时间不同浓度的UA和不同时间同一浓度的UA对TPC-1细胞生长情况的影响;流式细胞术 (FCM) 检测应用UA后TPC-1细胞凋亡情况及细胞周期分布情况;QRT-PCR检测UA干预后TPC-1细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-9 m RNA的表达情况;Western blot检测UA干预后TPC-1细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-9蛋白的表达情况.结果 MTT实验结果显示UA对TPC-1细胞增殖的抑制呈现出浓度和时间的依赖性, 24 h、48 h、72 h的IC50分别为14.21μM、10.56μM、10.39μM;流式Annexin V-FITC/PI双染检测显示UA呈浓度依赖性诱导TPC-1细胞凋亡, 且将TPC-1细胞的生长阻滞在S期;QRT-PCR实验发现, 对照组与实验组均有Bcl-2、Bax、Caspase-9 m RNA的表达, UA呈浓度依赖性下调Bcl-2 m RNA的表达, 上调Bax和Caspase-9 m RNA的表达;Western blot结果显示, 对照组与实验组均有Bcl-2、Bax、Caspase-9蛋白的表达, UA呈浓度依赖性下调Bcl-2的表达, 上调Bax和Caspase-9的表达.结论 熊果酸可显著抑制人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的增殖并诱导其凋亡, 为甲状腺癌治疗提供一定思路.     

三七总皂苷诱导U937细胞凋亡及对Caspase-3表达的影响

目的观察三七总皂苷（PNS）对人急性单核细胞白血病细胞系U937细胞的增殖、凋亡及Caspase-3表达的影响。方法用不同浓度PNS作用于U937细胞,采用MTT法检测细胞增殖活性,用流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western-blot法检测Caspase-3蛋白表达。结果 PNS抑制U943细胞生长并呈时间和剂量依赖性;分别予100、200、400、800mg/L处理U937细胞48h,细胞凋亡率分别为（5.93±0.15）%、（7.43±0.70）%、（12.3±0.38）%和（20.4±0.91）%,对照组细胞凋亡率为（1.73±1.50）%（P〈0.01）,并诱导细胞G1期阻滞;Western-blot结果显示,PNS使Caspase-3蛋白表达上调。结论 PNS能抑制U937细胞增殖,并可能通过上调Caspase-3蛋白表达诱导细胞凋亡。