利多卡因对大鼠海马锥体神经元GABA_A-Cl~-电流的影响

目的　研究利多卡因对大鼠海马锥体神经元全细胞γ 氨基丁酸介导的氯电流 (GABA Cl-电流 )的影响 ,及其中枢致惊厥作用的可能机制。方法　酶解急性分离 2周龄左右大鼠海马锥体神经元 ,采用全细胞膜片钳技术 ,记录利多卡因对单个海马锥体神经元GABA Cl-电流的影响。结果　将钳制电位固定在 - 6 0mV ,GA BA以剂量依赖性方式诱导出内向电流 ;利多卡因明显抑制GABA诱导的Cl-电流 (IGABA) ,5 0 %抑制浓度 (IC50 )为 4 .0 5mmol/L ,10mmol/L可使GABA浓度效应曲线明显右移 ,5 0 %有效浓度 (EC50 )由 7.72mmol/L增加到17.2mmol/L ,且最大电流明显降低。结论　利多卡因以非竞争性的方式 ,抑制海马锥体神经元GABAA Cl-电流 ,可能是其中枢致惊厥作用的机制。     

大鼠海马锥体神经元的急性分离方法

目的：建立一种适用于膜片钳技术的大鼠海马锥体神经元急性分离方法,并对其离子通道进行描述。方法：采用酶加机械分离法制备10~12 d鼠龄的大鼠海马锥体神经元,用全细胞膜片钳技术测定其生理学特性。结果：分离出的神经元形态正常,有较长突起;用膜片钳技术证实,其保存了主要的离子通道活性。结论：建立一种简单快速的适用于膜片钳技术的大鼠海马锥体神经元急性分离方法。     

异丙酚对大鼠海马CA1区锥体神经元GABSAA受体的作用

目的：研究异丙酚对大鼠海马CA1区锥体神经元γ－氨基丁酸A型（GABAA）受体的作用。方法：采用膜片钳全细胞记录技术。结果：临床血药浓度异丙娄（3－12μg/ml）对海马脑片CA1区锥体神经元电压门控性钠、钾、钙离子通道的开放、失活、最大电流幅值没有影响。海马脑片CA1区锥体神经元自发抑制性突触后电位（sIPSC）可被GABAA受体特异性阻断剂荷包牡丹碱（Bic）所阻断。异丙酚对海马脑片CA1区锥体神经元sIPSC濉有增频作用，但对其幅度没有影响，且其增频作用可被Bic阻断。结论：临床浓度的异丙酚对海马脑片CA1区锥体神经元的sIPSC具有增频作用，说明海马可能是异丙酚作用的靶器官。     

老年大鼠海马CA1区锥体神经元的“空泡变性”的观察

目的：观察老年大鼠海马ＣＡ１区锥体神经元的超微结构变化，以期探讨大鼠老化的形态学机理。方法：电子显微镜。结果：在老年大鼠海马ＣＡ１区锥体神经元的核周体、核及树突中均存在一种特殊的空泡，且与以往学者所述的“颗粒空泡变性”现象不同。结论：我们认为是一种较为特殊的变化，称其为“空泡变性”（Ｖａｃｕｏｌａｔｉｏｎ），并推测此种“空泡变性”现象可能是大鼠老化的形态学标志之一。     

铝对海马神经元电压依赖性钙电流的作用及其机制

目的探讨金属铝对急性分离的大鼠海马锥体神经元的作用及其机制。方法利用全细胞膜片钳技术研究大鼠海马CA1 区锥体神经元,观察其高电压激活钙通道电流 (IHVA)的变化。结果铝在低浓度范围 ( <0.2mM)内对IHVA的幅度具有抑制作用。8 Br cAMP并不能抵消铝在低浓度范围内对IHVA的抑制作用。结论铝对钙通道具有抑制作用可能是其导致神经毒性作用的原因之一;铝对IHVA幅度的抑制可能不是通过影响钙通道的磷酸化过程而起作用的。     

马桑内酯对大鼠海马锥体神经元钙激活钾通道的影响

目的　了解致痫剂马桑内酯 (CL)对培养的大鼠海马锥体神经元细胞膜钙激活钾通道 (KCa)的调节作用及癫痫的发病机理。方法　采用膜片钳单通道电流记录技术进行定量研究。结果　 1在内面向外式膜片下 ,KCa(12 0 .34± 2 5 .12 ) p S表现出钙离子浓度依赖性 (n=6 )、电压依赖性 (n=17)和四乙基胺 (TEA)阻断特点 ;2在细胞贴附式膜片下 ,浴液中加入 CL 可明显激活 KCa(P<0 .0 1) ;3在对称性高钾溶液中 ,使浴液 [Ca2 + ]i 为 10 - 8m ol/L,维持神经元膜电位为 2 0 m V,当 CL 为 0 μl/ m l和 1.0 μl/ m l时 ,可分别使 KCa开放概率从 0 .0 2 5增加到 0 .5 5 3(P<0 .0 1) ,通道活动的平均开放时间 (ms)从 1.875± 0 .4 12增加到 6 .82 9± 0 .136 ,平均关闭时间 (m s)从 179.342±13.831降低到 6 .4 12± 1.383(n=2 5 ,P<0 .0 1)。结论　在 CL 诱导的癫痫发病中 ,钙激活钾通道活化可能起重要的负反馈调节作用。     

异丙酚对大鼠海马CA1区锥体神经元GABA_A受体的作用

目的 :研究异丙酚对大鼠海马CA1区锥体神经元γ 氨基丁酸A型 (GABAA)受体的作用。方法 :采用膜片钳全细胞记录技术。结果 :临床血药浓度异丙酚 (3～ 12 μg ml)对海马脑片CA1区锥体神经元电压门控性钠、钾、钙离子通道的开放、失活、最大电流幅值没有影响。海马脑片CA1区锥体神经元自发抑制性突触后电位 (sIP SC)可被GABAA 受体特异性阻断剂荷包牡丹碱 (Bic)所阻断。异丙酚对海马脑片CA1区锥体神经元sIPSC具有增频作用 ,但对其幅度没有影响 ,且其增频作用可被Bic阻断。结论 :临床浓度的异丙酚对海马脑片CA1区锥体神经元的sIPSC具有增频作用 ,说明海马可能是异丙酚作用的靶器官     

马桑内酯对大鼠海马锥体神经细胞内钙稳态的影响

目的　了解钙离子及钙通道在癫痫发病中的作用 ,探讨马桑内酯 (coriaria lactone,CL)调节神经细胞内钙稳态的机理。方法　利用激光扫描共聚焦显微镜和细胞培养技术 ,观察致痫剂 CL 对 Wistar乳鼠海马单个锥体神经细胞内游离钙离子 (Ca2 +)浓度的影晌。结果　经致痫剂 CL 作用后 ,锥体神经细胞内 Ca2 +浓度高于正常对照组 (P<0 .0 1) ,但其升高不呈剂量依赖性 (P>0 .0 5 ) ;经钙通道阻滞剂尼莫地平处理后 ,CL 虽然仍能引起神经元胞内 Ca2 +浓度升高 (P<0 .0 1) ,但与单纯使用 CL 组相比仍有明显差异 (P<0 .0 0 1)。结论　 L-型钙通道开放在痫性放电的发生、发展上起了重要作用 ,促进钙通道开放可能是马桑内酯致痫的重要途径之一。     

尼卡地平对脑缺血后海马CA1锥体神经元的影响

目的　观察尼卡地平对脑缺血后海马CA1锥体神经元的影响。方法　 30只沙土鼠随机分成假手术组 (Ⅰ组 ,n =10 )、缺血组 (Ⅱ组 ,n =10 )和尼卡地平处理组 (Ⅲ组 ,n =10 )。Ⅰ组只进行手术操作 ,不行脑缺血 ;Ⅱ组阻断双侧颈总动脉 15min造成前脑缺血模型 ;Ⅲ组在脑缺血前 30min腹腔注射尼卡地平 2mg/kg体重。 3d后取出动物脑组织 ,HE染色计数海马CA1区 1mm长度内正常锥体细胞数。结果　与Ⅰ组相比 ,Ⅱ组和Ⅲ组正常锥体细胞数明显减少 (P <0 .0 1) ;Ⅱ组的正常锥体细胞数少于Ⅲ组 (P <0 .0 1)。结论　尼卡地平能减轻脑缺血后脑细胞损伤。     

胃动素对大鼠海马神经元放电活动的影响

目的研究大鼠海马胃扩张神经元的特点及胃动素对胃扩张神经元放电活动的影响。方法采用微电极细胞外记录方法在体观察胃动素是否对82只大鼠海马胃扩张(GD)神经元放电有影响,胃扩张神经元根据刺激后的变化可分为胃扩张兴奋性神经元和胃扩张抑制性神经元。结果①在82只大鼠上记录到的358个海马单位电活动,根据神经元放电模式可分为位相性、连续性和单个性。神经元放电频率可分为:高频(>10Hz)、中频(5～10Hz)和低频(0～5Hz)。②海马内358个对GD刺激有反应的171个GD神经元中,放电频率增加的海马神经元有130个(70.5±4.8)%,为GD兴奋性神经元(GD-E);GD引起海马神经元放电频率减少的神经元41个(-60.3±4.2)%,为GD抑制性神经元(GD-I);③海马CA1区内的66个GD-E神经元中有38个(57.6%)对胃动素呈现兴奋性效应;在18个GD-I神经元中有10个神经元(55.6%)表现为兴奋效应,6个神经元放电频率降低。结论海马区有胃扩张反应性神经元;胃动素对海马胃扩张神经元有兴奋作用。     

高原环境对大鼠海马神经元凋亡的影响

目的:观察高原低氧应激对大鼠海马神经元凋亡的影响.方法:将Wistar大鼠随机分为3组,即平原对照组(山东菏泽,海拔50 m)、高原实验Ⅰ组(青海玉树结古镇,海拔3 700 m)、高原实验Ⅱ组(青海玉树治多县,海拔4 950 m),在不同海拔高度生活4 h后,取大鼠海马,应用流式细胞仪检测海马神经元凋亡率.结果:暴露于高原后的大鼠海马神经元凋亡率明显高于平原对照组,且随海拔的增加而明显升高.结论:高原低氧应激可诱导海马神经元凋亡.     

可溶性Aβ25-35对大鼠海马CA3区神经元延迟整流钾电流的抑制作用

目的研究可溶性β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)对大鼠海马CA3区锥体神经元延迟整流钾电流(IK)的影响。方法采用酶消化法急性分离新生大鼠海马CA3区神经元,全细胞膜片钳技术观察加入可溶性Aβ25-35后IK的变化。结果可溶性Aβ25-35对IK的作用具有时间依赖性,IK随Aβ25-35作用时间的延长而减小,加药5～7min后作用趋于稳定。可溶性Aβ25-35对IK有明显抑制作用,加入5μmol/LAβ25-35前后IK峰值分别为(6.987±1.152)和(2.540±0.349)nA(n=8,P<0.01);该抑制作用没有明显的浓度依赖性,1、2.5和5μmol/L3个浓度的Aβ25-35使IK峰值减小率都在60%左右。5μmol/LAβ25-35可显著影响IK激活过程,作用前后的半数激活电压分别为(4.114±0.730)和(-5.463±0.950)mV(n=15,P<0.05),但不改变激活曲线的斜率因子。结论可溶性Aβ25-35对海马CA3区神经元IK的抑制作用可能是其产生神经毒性的作用机制之一。     

一种大鼠海马神经元的原代培养方法

目的 建立一种简便高效的海马神经元的原代培养方法.方法 无菌环境下取新生SD大鼠(24 h内)海马,清洗、剪碎,以0.25%胰蛋白酶消化,200目滤网过滤,混合培养,约5 d后加入阿糖胞苷抑制神经胶质细胞的生长.采用免疫细胞化学方法检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达情况,观察海马神经元形态.结果 海马神经元纯度≥90%.神经元接种3 d后具有典型的形态特征,13～14 d突起形成密集的神经纤维网络,14 d后细胞出现凋亡.结论 本实验方法步骤简便,可获得纯度较高的海马神经元,为研究与海马神经元相关的疾病提供了实验基础.     

帕罗西汀对应激抑郁模型大鼠海马锥体神经元的保护作用

目的：探讨帕罗西汀对应激抑郁模型大鼠海马锥体神经元的保护作用。方法：强迫大鼠游泳4周建立抑郁模型。用Nid染色观察海马CA1和CA3区锥体神经元的形态。结果：用药4周（Ⅵ）组的大鼠海马CA1区锥体神经元的计数显著高于其他各组（P〈0．05或P〈0．01）。在CA3区，模型组、用药1次组和用药1周组海马锥体神经元计数均显著少于对照（Ⅰ）组（P〈O．05），用药2周组与Ⅰ组比无统计学意义（P〉0．05），Ⅵ组CA3区神经元计数显著高于Ⅰ组（P〈0．05）。结论：帕罗西汀长期用药对慢性应激抑郁模型大鼠的海马锥体神经元的存活具有保护作用。     

糖尿病脑病海马神经元凋亡的实验研究

目的 检测糖尿病大鼠学习与记忆成绩及海马神经元凋亡情况，探讨糖尿病对学习与记忆影响的机制。方法 Wistar大鼠共24只，随机分成2组，对照组12只，糖尿病组12只，糖尿病组用链脲服佐菌素（STZ）制模，满12周后，用Y-迷宫检测大鼠学习与记忆成绩，处死动物取脑，应用TUNEL法、HE染色及图像分析技术对大鼠海马进行观察。结果 糖尿病组大鼠学习成绩降低（P〈0．05），海马神经元数目较正常组减少（P〈0．05），并出现TUNEL法阳性细胞。结论 海马神经元凋亡可能是糖尿病大鼠学习与记忆障碍的机制之一．     

阿片受体参与催产素对大鼠海马CA1神经元诱发放电的调制作用

目的 :探讨侧脑室注射催产素 (oxytocin ,OT)对大鼠左背侧海马CA1神经元诱发放电的影响以及OT与阿片受体之间可能的相互作用。方法 :应用细胞外记录单位放电技术 ,通过电刺激坐骨神经诱导神经元诱发放电。结果 :侧脑室分别注射 1,10和 10 0ng·(5 μl) -1OT使海马CA1神经元诱发放电频率明显降低 ,剂量依赖关系明显 ,OT对CA1神经元诱发放电的抑制作用可被侧脑室预先注射催产素受体拮抗剂d(CH2 ) 5 OVT 2 0 0ng·(2 .5 μl) -1所阻断 ;侧脑室注射纳洛酮 1μg·(2 .5 μl) -1可明显减弱OT 10ng·(5 μl) -1的作用。结论 :OT通过激活OT受体可抑制海马CA1神经元对外周传入电信号的反应 ,中枢内阿片受体在其中也起着重要作用。     

补肾健脾养血活血法对VCI大鼠海马锥体细胞的影响

目的观察补肾健脾养血活血法对VCI大鼠海马锥体细胞形态学和计数的影响。方法采用改良2VO法建立VCI大鼠模型,通过Morris水迷宫观察模型大鼠逃避潜伏期和穿越平台次数,HE染色观察海马CA1区椎体细胞的形态改变并对神经元数目进行定量分析。结果与VCI模型组大鼠相比,补肾健脾养血活血法可改善大鼠行为学变化,使其逃避潜伏期缩短,穿越平台次数增加（P〈0.05）。HE染色：模型组大鼠海马锥体细胞出现明显的病理变化,康欣胶囊及其简化方组大鼠海马椎体细胞的病理改变明显改善,且海马椎体细胞的数目明显多于模型组（P〈0.05）。结论补肾健脾养血活血立法的康欣胶囊能改善VCI大鼠的学习记忆能力,对缺血再灌注损伤有一定的保护作用.