三种表达肽检测进展期白癜风患者血清酪氨酸酶抗体的比较

目的 应用三种表达肽TYR240-300,TYR240-479和TYR检测进展期白癜风患者血清酪氨酸酶IgG抗体,比较三者的抗体检测差异,筛选优势抗原.方法 原核表达、纯化三种表达肽TYR240-300,TYR240-479和TYR,Western印迹鉴定纯化蛋白;以纯化的三种表达肽作为抗原,以提取的黑素细胞总蛋白作为阻断抗原,进行阻断ELISA分析;以纯化的三种表达肽作为抗原,检测100例进展期白癜风患者血清中酪氨酸酶IgG抗体,比较三种表达肽的抗体检测阳性率及滴度差异.结果 三种表达肽均能被天然的黑素细胞抗原所阻断,100例进展期白癜风患者血清中,抗TYR240-300 IgG抗体与抗TYR240-479 IgG抗体阳性率分别为32.0%和62.0%,不同型别患者两种抗体检出阳性率差异较大,泛发性(8例)分别为4例和7例,局限性(8例)分别为3例和4例,散在性(48例)分别为31.3%和60.4%,肢端性(19例)分别为20.0%和52.6%,节段型(17例)分别为47.1%和82.4%.40例进展期白癜风患者血清中抗TYR240-479 IgG抗体与抗TYR IgG抗体的阳性率相近,分别为62.5%和60.0%.表达肽TYR240-479和TYR检测的进展期白癜风患者血清中IgG抗体最高滴度均为1:320,而表达肽TYR240-300检测的进展期白癜风患者血清中IgG抗体最高滴度均为1:160.结论 TYR 240-479是用于白癜风患者中酪氨酸酶抗体检测的优势抗原.     

白癜风患者病程与抗酪氨酸酶抗体的相关分析

目的 应用酪氨酸酶表达肽TYR240-479作为抗原,检测654例白癜风患者血清抗酪氨酸酶IgG抗体水平,分析白癜风患者病程与体内抗酪氨酸酶抗体水平的关联性。方法 以TYR240-479作为包被抗原,应用ELISA法检测白癜风患者血清中抗酪氨酸酶IgG抗体的滴度。不同病程患者抗体阳性检出率的差异以及病程与抗体水平的关联性分析应用卡方检验,多组率的两两比较应用Bonferroni校正。平均滴度差异比较应用one-way ANOVA,组间两两比较应用LSD－t检验。结果 各病程组抗体检测总阳性率具有显著性差异,P＝0.027,r＝0.112。其中病程1～5年（含5年）组与5～10年（含10年）组具有显著性差异,P＝0.007。病程是否超过5年与抗体水平的关联强度分析表明病程与抗体水平有关联,P＝0.025,OR＝1.473,95％CI（1.049-2.068）,但各病程组间抗体平均滴度无显著性差异。 结论 与病程超过5年的患者相比,病程5年之内的患者抗体阳性率更高,与抗体水平的关联更为紧密。白癜风病程与患者抗酪氨酸酶抗体水平有一定的关联性。     

白癜风患者血清中抗酪氨酸酶IgG抗体及抗酪氨酸酶相关蛋白1 IgG抗体的检测

目的：探讨白癜风患者血清中抗酪氨酸酶IgG抗体（TYR IgG）和抗酪氨酸酶相关蛋白1 IgG抗体（TRP?1 IgG）与白癜风的关系。方法用酶联免疫吸附测定检测260例白癜风患者和50例健康对照血清中TYR IgG和TRP?1 IgG的含量。结果白癜风组TYR IgG和（或）TRP?1 IgG阳性率57.31%（149/260）,TYR IgG阳性率37.3%（97/260）,TRP?1 IgG阳性率33.5%（87/260）,均明显高于对照组（χ2=25.441、21.630,P＜0.01）。TYR IgG阳性与TRP?1 IgG阳性不相关（r=-0.032,P＞0.05）。白癜风组TYR IgG阳性率男女间差异无统计学意义（P＞0.05）,但TRP?1 IgG阳性率女性高于男性（χ2=5.811,P＜0.05）。白癜风TYR IgG阳性率≤20岁（35.9%）与＞20岁（38.3%）比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,而TRP?1 IgG阳性率≤20岁组明显高于＞20岁组（χ2=6.498,P＜0.05）。结论检测TYR IgG和TRP?1 IgG可为白癜风的诊断和治疗提供一定依据。     

血清中抗酪氨酸酶抗体的检测与白癜风活动性的关系

目的：探讨白癜风患者血清中抗酪氦酸酶IgG、IgM抗体滴度与疾病活动程度的关系和意义。方法：抗酪氯酸酶IgG、IgM抗体检测采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法。结果：①白癜风患者血清抗酪氨酸酶IgG抗体、平均滴度为0．316，显著高于正常对照组0．082（P〈0．001）；抗酪氨酸酶IgM抗体平均滴度为0．238，显著高于正常对照组0．065（P〈0．001），②活动期白癜风患者血清抗酪氨酸酶IgG、IgM抗体滴度明显高于稳定期白癫风患者（均P〈0.001）；泛发型白癜风患者血清抗酪氨酸酶IgG、IgM抗体滴度明显高于局限型白癜风患者（均P〈0．001）。③抗酪氨酸酶IgG、IgM抗体滴度与抗黑素细胞IGg抗体性呈正相关（均P〈0．001）；抗酪氨酸酶IgG、IgM抗体滴度与抗黑素细胞IgM抗体阳性呈正相关（均P〈0．001）。①糖皮质激素治疗后患者抗酪氨酸酶IgG、IgM抗体滴度均低于治疗前（均P〈0．001）。结论：白癜风患并血清抗酪氨酸酶IgG、IgM抗体与疾病活动性和严重程度相关。     

白癜风患者血清甲状腺球蛋白抗体和甲状腺过氧化物酶抗体的检测

目的 探讨白癜风患者甲状腺球蛋白抗体（ATG）和甲状腺过氧化物酶抗体（ATPO）检测的临床意义。方法 采用化学发光法检测87例白癜风患者和年龄、性别相匹配的90例正常人对照组血清ATG、ATPO、游离T3、游离T4和促甲状腺激素（TSH）水平,并按年龄、性别分层进行比较。结果 白癜风组的血清ATG和ATPO阳性率以及TSH平均浓度显著高于正常人对照组,且ATG和ATPO阳性者均为寻常型白癜风。白癜风组11 ～ 20岁和21 ～ 40岁年龄段ATG和ATPO阳性率显著高于同年龄段的正常人对照组,且白癜风组女性ATG和ATPO阳性率均为34.1%,显著高于正常人对照组女性（8.5%和10.6%）,χ2值分别为8.90和7.29,P值 < 0.01和0.05;在白癜风患者中,11 ～ 20岁年龄段ATG和ATPO阳性率最高,达53.3%,其次为21 ~ 40岁年龄段,为34.5%;20例ATG和ATPO阳性的白癜风患者中,14例（70%）随后诊断为自身免疫性甲状腺疾病, 显著高于ATG和ATPO阳性的正常人对照组发病率（16.7%）,χ2 = 5.4,P < 0.05。结论 ATG和ATPO出现在青少年女性寻常型白癜风患者中,并与自身免疫性甲状腺疾病的发生相关。     

驱虫斑鸠菊注射液对儿童进展期白癜风患者血清抗酪氨酸酶抗体的影响

目的探讨儿童进展期白癜风患者血清抗酪氨酸酶抗体的变化及驱虫斑鸠菊对其的影响。方法选择符合诊断标准的120例进展期白癜风患儿为进展期组,120例稳定期白癜风患儿为稳定期组,120例健康体检儿童为对照组。各组儿童均抽取空腹外周血3mL离心分离血清样本,进展期组患儿接受驱虫斑鸠菊注射液治疗3个月后抽取血清样本,以ELISA法检测抗酪氨酸酶抗体滴度（光密度值）。稳定期组及对照组儿童未接受任何干预治疗。结果进展期组患儿治疗前血清抗酪氨酸酶IgG、IgM抗体滴度明显高于对照组及稳定期组（P〈0.01）。治疗3个月后,进展期组IgG抗体滴度仍明显高于对照组（P〈0.01）,但与稳定期组差异无统计学意义（P=0.1086）;IgM仍明显高于对照组及稳定期组（P〈0.01）。进展期组治疗后较治疗前抗体滴度均明显降低（P〈0.001）。结论进展期白癜风患儿血清抗酪氨酸酶抗体升高,驱虫斑鸠菊治疗可降低其血清抗体滴度。     

中药对豚鼠皮肤酪氨酸酶mRNA水平的影响及致色素作用

目的 探讨中药对皮肤酪氨酸酶基因表达、色素生成和黑素细胞增殖的影响。方法 选择在离体实验中对酪氨酸酶有激活作用的旱莲草等7种中药,以棕色豚鼠为动物模型,采用mRNA原位杂交观察中药外涂对豚鼠皮肤酪氨酸酶mRNA水平的影响,并用Schmorl法染色和多巴-氧化酶染色观察中药促色素生成及黑素细胞增殖的作用。结果 原位杂交显示中药处理组的酪氨酸酶阳性细胞数和杂交信号明显高于对照组(P<0.01),尤其以旱莲草、夏枯草、刺蒺藜等显著。Schmorl法和多巴-氧化酶染色示7种中药能使豚鼠表皮基底层内含有黑素颗粒的细胞数和多巴阳性细胞的数量增多(P<0.05),但7种中药的两种作用并不完全平行(P>0.1)。结论 旱莲草等7种中药均具有上调豚鼠皮肤酪氨酸酶的基因表达、促进黑素生成和黑素细胞增殖的作用,提示中药的作用不仅限于转录水平,有可能影响黑素细胞的增殖和黑素颗粒的生成。     

治疗黄褐斑的中药复方对酪氨酸酶活性的影响

目的 研究中药对酪氨酸酶活性的影响,筛选有治疗作用的中药方剂,为应用中药治疗色素障碍性皮肤病提供实验依据。方法 通过计算机排序选定5个应用频次较高的治疗黄褐斑的复方中药,采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法体外测定酪氨酸酶活性。结果 治疗黄褐斑中药复方中六味地黄丸、补中益气汤组酪氨酸酶活性降低(水提物P<0.05,醇提物P>0.05),逍遥丸、桃红四物汤增高(P<0.05,金匮肾气丸降低P>0.05)。六味地黄丸组方中药水提物熟地黄、牡丹皮组酪氨酸酶活性增高,茯苓、山药、山茱萸降低;醇提物中牡丹皮、泽泻增高,茯苓、山药、山茱萸降低。结论 六味地黄丸、补中益气汤使酪氨酸酶活性降低(水提物);六味地黄丸组方中药熟地黄、牡丹皮使酪氨酸酶活性增高,茯苓、山药、山茱萸使酪氨酸酶活性降低,泽泻组醇提物增高,水提物降低。     

196味中药乙醇提取物对酪氨酸酶的抑制作用

目的评估196味中药乙醇提取物对酪氨酸酶的抑制作用。方法用多巴色素法测定对酪氨酸酶的抑制作用,底物为L-多巴,在475nm处测定透过率。结果通过筛选196味中药发现光果甘草、五倍子、蝉衣、牡丹皮、苦参、珍珠绣线菊、苍耳子、桑树根皮(鲜)、大黄(生)在高浓度(500μg/mL)时对酪氨酸酶的抑制作用超过浓度为1mmol/L的熊果苷的抑制作用(P<0.01),其中以光果甘草的抑制作用最强(高浓度时抑制率达98.3%);六月雪、泥湖菜、地骨皮、炒川断、天麻、连翘、茶条槭、甘草、败酱草、黄杨(干叶)、双花等11味在高浓度(500μg/mL)时与浓度为1mmol/L的熊果苷的抑制作用相当(P>0.05);茵陈、威灵仙、白芨、紫槿、大蓟、小构树、钩藤、玉竹、熟大黄、莪术、苍术、姜黄、黄芩、虎杖、豚草、狭叶山胡椒、决明子乙醇提取物对酪氨酸酶同时有抑制作用和激活作用。结论光果甘草、五倍子、蝉衣、牡丹皮、苦参、珍珠绣线菊、苍耳子、桑树根皮(鲜)、大黄(生)、六月雪、泥湖菜、地骨皮、炒川断、天麻、连翘、茶条槭(包括阴干组和新鲜组2种)、甘草、败酱草、黄杨(干叶)、双花等20味中药具有治疗因酪氨酸酶活性异常所致的色素增加性皮肤病的应用前景。     

芪白合剂对培养的人黑素细胞生长及酪氨酸酶、MITF基因表达的影响

目的 研究芪白合剂对黑素细胞生长及黑素细胞酪氨酸酶、小眼相关转录因子（MITF）基因表达的影响。方法 芪白合剂组方黄芪、党参、白芷、白蒺藜、鸡血藤，水煎煮浓缩成3 g/mL，取青紫蓝兔，按12 mL&;#8226;kg-1&;#8226;d-1连续灌胃3天后于末次给药1 h，2 h和5 h无菌采血，收集血清；采用体外培养正常人黑素细胞，观察不同采血时间的芪白合剂含药血清对黑素细胞生长、酪氨酸酶的活性、黑素合成以及用RT-PCR的方法测定其对酪氨酸酶、MITF基因表达的影响。结果 含药血清与对照血清比较，能明显促进黑素细胞生长，上调酪氨酸酶的活性和黑素合成（P < 0.05），以1 h和2 h所采血清作用明显。并可以促进酪氨酸酶和 MITF的基因表达。结论 芪白合剂可以通过直接作用于黑素细胞和酪氨酸酶通道来促进黑素合成     

人酪氨酸酶抗原表位肽的表达、纯化及生物学活性分析

目的 探讨人酪氨酸酶抗原表位肽在白癜风患者自身抗体检测中的表达.方法 目的基因克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,转化大肠杆菌BL21菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE分析和蛋白质印迹鉴定目的蛋白表达,ELISA检测其生物学活性.结果 成功构建重组表达载体,SDS-PAGE和蛋白质印迹结果表明,重组蛋白成功表达.应用凝胶分析系统分析蛋白表达量发现,目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的90%.融合蛋白经过试剂盒纯化后,其蛋白纯度达95%以上.ELISA检测纯化蛋白的生物学活性,结果表明,纯化蛋白具有结合白癜风患者IgG的能力.结论 成功表达了人酪氨酸酶抗原表位肽,其表达蛋白具有生物学活性.     

寻常型进行期白癜风患者白斑区角质形成细胞凋亡的检测

目的探讨进行期白癜风患者白斑区角质形成细胞是否出现凋亡及其凋亡相关蛋白的表达。方法标本分别取自15例进行期白癜风患者白斑中心区及15例正常人对照，均取材于胸腹部。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）检测角质形成细胞的凋亡状况，同时采用免疫组化法检测角质形成细胞表达凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase3的情况。结果TUNEL结果显示：15例白癜风患者白斑区均可见角质形成细胞存在不同程度凋亡，主要位于表皮中层及下层，密集或散在分布；15例正常人对照中仅有1例表皮可见10％极为散在的凋亡的角质形成细胞，两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。免疫组化结果显示：7例白癜风患者白斑区可检测到部分角质形成细胞存在促凋亡相关蛋白Bax的弱表达，而对照组仅有1例TUNEL阳性者可检出Bax的弱表达，即白癜风皮损区角质形成细胞Bax表达较正常对照显著升高，差异有统计学意义（P〈0．01）。所有标本中角质形成细胞均未检测到Bcl-2和Caspase3的表达。结论进行期白癜风白斑区角质形成细胞促凋亡蛋白Bax表达升高，其凋亡增加。     

175例白癜风患者15种神经内分泌免疫因子的检测

目的 检测白癜风患者血清中15种神经内分泌免疫因子(ANG-Ⅱ、EP-β、IFN-γ、sICAM-1、5-HT、IL-10、酪氨酸酶抗体IgM、TNF-α、IL-8、IL-6、酪氨酸酶抗体IgG、IL-2、NE、Cortisol、E),并结合维吾尔医理论探讨其与白癜风发病的关系.方法 采用ELISA测定175例白癜风患者血清中上述指标水平,并与60例正常人对照组比较.结果 175例白癜风患者血清ANG-Ⅱ、EP-β、IFN-γ、sICAM-1、5-HT、IL-10、酪氨酸酶抗体:IgG、NE、Cortisol、E的浓度显著性高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).而TNF-α、IL-8、IL-2、IL-6浓度低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).IgM浓度与对照组差异无统计学意义(P>0.05).稳定期患者ANG-Ⅱ、5-HT、IL-8、Cortisol浓度高于进展期患者,差异有统计学意义(P<0.01).其余指标差异无统计学意义.结论 白癜风发病过程是一个神经内分泌免疫网络的综合过程,与维吾尔医"kuwiti tabiiy"(自然力)失调致白癜风理论是否一致值得研究.

Abstract：

Objective To measure the serum levels of 15 neuroendocrine and immune factors, including angiotensin-Ⅱ (ANG-Ⅱ), endorphin-β (EP-β), interferon-γ (IFN-γ), soluble intercellular adhesion molecule-1 (sICAM-1), 5-thrombotonin (5-HT), interleukin-10 (IL-10), IgM, tumor necrosis-α (TNF-α), IL-8, IL-6, IgG,IL-2, norepinephrine, cortisol and adrenaline in patients with vitiligo, and to analyze their association with the development of vitiligo according to traditional Uyghur medicine theory. Methods Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was conducted to measure the serum levels of the above 15 neuroendocrine and immune factors in 175 patients with vitiligo and 60 normal human controls. Results There was a significant increase in the serum levels of ANG-Ⅱ , EP-β, IFN-γ, sICAM-1, 5-HT, IL-10, IgG, norepinephrine, cortisol and adrenaline, together with a decrease in those of TNF-a, IL-8, IL-2 and IL-6 in patients with vitiligo compared with the controls (all P < 0.01). No statistical difference was observed for the serum level of IgM between the patients and controls (P > 0.05). Increased serum levels of ANG-Ⅱ, 5-HT, IL-8 and cortisol were noted in patients with stable vitiligo in comparison with those with progressive vitiligo (all P < 0.01), while the levels of the other factors were similar between the stable and progressive vitiligo patients. Conclusions The development of vitilito is a comprehensive process with the involvement of various neuroendocrine and immune factors,and whether the conclusion agrees with the traditional Uyghur medicine theory that imbalanced "kuwiti tabiiy" ["Nature power" (of human body)] induces vitiligo derserves further studies.     

采用生物信息学方法筛选和分析白癜风差异表达基因

目的:通过生物信息学方法探索与白癜风进展相关的信号通路和基因。方法:从GEO数据库中下载白癜风芯片检测数据集GSE75819,利用R语言软件中limma包的LMFit和eBayes函数筛选15例印度白癜风患者皮损与非皮损组织间的差异表达基因（DEG）。通过京都基因与基因组数据库（KEGG）、基因本体论（GO）分析和基因...