胰腺癌细胞对5—Fu和吉西它滨获得性耐药后bcl—XL和mcl—l表达的变化

目的：探讨胰腺癌细胞对5－Fu和吉西它滨的获得性耐药后bcl-XL和mcl-l表达的变化。方法：应用SRB方法检测5－Fu和吉西它滨对胰腺癌细胞株Panc-1,Mia-Paca-2和Capan-1的细胞毒性作用，应用Western blot法来检测bcl-XL和mcl-l的蛋白表达水平。结果：5－Fu和吉西它滨对3株胰腺癌细胞均产生了细胞毒性作用，5－Fu长期作用后，Capan-1细胞IC50上升了2．1倍（P＜0．05）。吉西它滨长期作用后，Capan-1细胞IC50上升了1．5倍（P＜0．05）。5－Fu或吉西它滨长期作用后，产生了获得性耐药的胰腺癌细胞bcl-XL和mcl-1表达水平上调。结论：5－Fu或吉西它滨长期作用后，产生了获得性耐药，这种耐药与bxl-XL和mcl-l的过度表达相关。     

胰腺癌细胞对5氟脲嘧啶和健择的获得性耐药机制的研究

目的探讨胰腺癌细胞对 5氟脲嘧啶 (5 FU)和健择产生获得性耐药的机制。方法用磺酰罗丹明B蛋白染色法检测细胞毒性作用 ,根据药物剂量与细胞生存的关系计算 5 0 %抑制浓度(IC50 ) ;用RNA酶保护分析和Westernblot法来检测Bcl xL和mcl 1的表达水平。结果 5 FU和健择对 3株胰腺癌细胞均产生了细胞毒性作用。 5 FU长期作用后 ,Capan 1细胞IC50 上升了 2 1倍 (P <0 0 5 ) ;健择长期作用后 ,Capan 1细胞IC50 上升了 1 8倍 (P <0 0 5 ) ;而Mia Paca 2细胞在 5 FU和健择作用前后IC50 明显降低 (P <0 0 5 )。产生获得性耐药细胞的Bcl xL 和mcl 1的表达均上调。结论胰腺癌细胞对 5 FU相对耐药 ,而对健择较为敏感。化疗药物长期作用后 ,抑凋亡基因Bcl xL和mcl 1的表达上调 ,胰腺癌细胞产生了获得性耐药。     

胰腺癌细胞对5-氟尿嘧啶和健择产生获得性耐药的分子生物学机制初探

目的　探索胰腺癌细胞对 5 氟尿嘧啶 ( 5 FU)和健择产生获得性耐药的机制 ,分析这种耐药与凋亡的调控基因———bcl 2家族之间的关系。方法　 5 FU和健择的细胞毒性作用通过磺酰罗丹明B蛋白染色法 (SRB)来检测 ,应用RNA酶保护分析法来检测化疗药物作用前后bcl 2家族mRNA表达水平。结果　 5 FU和健择对 3株胰腺癌细胞均产生了细胞毒性作用 ,5 FU长期作用后 ,Capan 1细胞 5 0 %抑制浓度 (IC50 )上升了 2 .1倍 (P <0 .0 5 )。健择长期作用后 ,Capan 1细胞IC50 上升了 1.8倍 (P <0 .0 5 )。RNA酶保护分析结果提示 ,bcl xL 和mcl 1上调的细胞产生了获得性耐药。结论　化疗药物长期作用后 ,抑凋亡基因bcl xL 和mcl 1上调 ,胰腺癌细胞产生了获得性耐药。阻断这些抑凋亡基因的表达可能提高胰腺癌细胞对 5 FU和健择的敏感性 ,从而产生治疗作用。     

吉西他滨诱导胰腺癌细胞ABCG2表达其化疗耐药的关系研究

目的：探讨吉西他滨诱导胰腺癌细胞ABCG2的表达及与其化疗耐药的关系。 方法：吉西他滨不同浓度、不同时间作用胰腺癌SW1990细胞后,用CCK-8法检测细胞的增殖抑制率,并计算吉西他滨不同作用时间的半数抑制浓度（IC50）;根据IC50值选择合适浓度的吉西他滨,作用SW1990细胞24、48、72 h后,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,并用Western blot和RT-PCR法检测ABCG2蛋白与mRNA的表达。 结果：吉西他滨作用后,SW1990细胞增殖明显抑制,并呈浓度与时间依赖性,但IC50值呈时间依赖性增加（均P<0.05）;3.9 mg/mL吉西他滨作用24、48、72 h后,SW1990细胞总凋亡率逐渐增加,但晚期凋亡率呈降低趋势,ABCG2蛋白与mRNA的表达明显升高,并呈时间依赖性（均P<0.05）。 结论：吉西他滨能抑制胰腺癌细胞SW1990的增殖,但作用呈时间依赖性减弱,这可能与其诱导ABCG2上调表达有关。     

RASSF1A在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨押癌基因RASSF1A在胰腺癌组织中的表达及其与胰腺癌发生、发展的关系.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测48例胰腺癌组织及癌旁正常组织RASSFA mRNA的表达水平.结果 癌旁正常组织RASSF1A mRNA的表达量高于高分化腺癌组织RASSF1A的表达量,差异有统计学意义(P<0.05).高分化腺癌组织RASSF1A mRNA的表达量高于中低分化腺癌组织,差异有统计学意义(P<0.01).TNM分期Ⅲ期RASSF1A mRNA的表达量低于Ⅰ、Ⅱ期,差异有统计学意义(P<0.05).RASSF1A mRNA表达与性别、年龄,肿瘤发生部位无明显关系(P>0.05).结论 RASSF1A表达缺失或低下在胰腺癌的发生、发展中起重要的作用.     

人胰腺癌细胞中5-LOX基因的表达及其抑制剂的作用

目的:探讨人胰腺癌细胞中5-LOX的表达及其抑制剂的作用.方法:应用RT-PCR、免疫细胞化学技术和图像分析检测5-LOX在人胰腺癌细胞Capan-2中的表达水平及抑制剂MK886对5-LOX基因表达水平的影响.结果:MK886能有效降低5-LOXmRNA的表达,MK886作用组5-LOX蛋白低表达或不表达,对照组均呈高表达.结论:5-LOX抑制剂能有效阻止5-LOXmRNA的翻译功能,使其蛋白产物表达下调.     

核因子-κBp65及bcl-xL基因在胰腺癌组织中表达及意义

目的:探讨核因子-κB(NF-κBp65)及凋亡相关基因bcl-xL在胰腺癌组织中的表达及其意义.方法:应用免疫组织化学SABC法,检测52例胰腺癌组织中NF-κBp65及凋亡相关基因bcl-XL的基因蛋白产物,并分析其与胰腺癌临床病理的关系.结果:胰腺癌组织中NF-κ65及bcl-XL的表达率为63.5%和73.1%,显著高于胰腺正常组织(P＜0.01).NF-κΒp65的表达与肿瘤直径、ΤΝΜ分期、淋巴结转移有关,而与分化程度、病理类型无关.bcl-XL的表达与TNM分期有关,且与NF-κBp65呈显著相关.结论:NF-κBp65是一种与胰腺癌有关的癌蛋白,可能通过对bcl-xL的上调作用,进而影响胰腺癌的发生发展.     

吉西他滨诱导胰腺癌细胞PANC-1中survivin基因表达的研究

目的:探讨吉西他滨诱导胰腺癌细胞PANC-1中survivin表达与化疗耐药的关系。方法:胰腺癌细胞株PANC-1用1640液培养，吉西他滨的浓度为1 μg /mL及10 μg/mL，运用RT-PCR和Western blot检测survivin的表达。分析细胞中survivin的表达水平与化疗耐药的关系。结果:用1 μg/mL及10 μg/mL浓度的吉西他滨作用胰腺癌细胞株24 h和48 h，survivin mRNA水平分别上升了(1.34±0.12) 倍,(2.40±0.17)倍和(3.33±0.20)倍,(4.41±0.18)倍;蛋白水平上升了(1.20±0.07)倍,(1.48±0.19)倍和(2.90±0.04)倍,(4.50±0.20)倍，差异有显著性意义(P＜0.05)。结论:胰腺癌细胞株的化疗耐药可能通过吉西他滨的作用上调survivin的表达而增强。     

胰腺癌患者循环microRNA及吉西他滨耐药的胰腺癌患者特异性microRNA表达谱分析

目的 检测胰腺癌患者血浆中表达差异的microRNA及对吉西他滨耐药的胰腺癌患者血浆中表达差异的microRNA,为寻找新的生物标志物用于胰腺癌的无创性诊断及吉西他滨的疗效预测提供新的思路.方法 采用qPCR方法检测并筛选出胰腺癌患者血浆中相比于健康人表达差异明显的microRNA,以及对吉西他滨耐药的胰腺癌患者血浆中相比于对吉西他滨不耐药的胰腺癌患者表达差异明显的microR-NA.结果 胰腺癌患者相较于健康人存在表达差异的microRNA有28个,对吉西他滨耐药的胰腺癌患者相较于不耐药患者存在表达差异的microRNA有28个.结论 胰腺癌患者血浆中microRNA表达与正常人群有较显著的差异,胰腺癌患者中对吉西他滨耐药和不耐药者血浆microRNA也存在较显著差异,其有可能作为胰腺癌的诊断及疗效预测提供潜在的生物标志物.     

下调NDRG1表达对胰腺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨NDRG1在胰腺癌细胞中的表达及其与MMP-7的关系。方法:检测NDRG1与MMP-7蛋白与m RNA在4种胰腺癌细胞株(PANC-1、BXPC-3、CAPAN-2、SW1990)表达;构建靶向NDRG1的干扰质粒si NDRG1,转染PANC-1细胞,检测转染后PANC-1细胞NDRG1与MMP-7蛋白与m RNA的表达,以及增殖与调亡情况。结果:4种细胞株中均有NDRG1与MMP-7蛋白与m RNA的表达,且两者的表达水平随着细胞分化程度的降低而升高(均P<0.05);PANC-1细胞转染si NDRG1后,NDRG1与MMP-7的蛋白与m RNA表达均明显降低、细胞增殖明显抑制、凋亡率明显升高(均P<0.05)。结论:NDRG1的表达与胰腺癌细胞的分化程度密切相关,且可能通过上调MMP-7表达促进胰腺癌细胞的生长。     

胰腺癌微卫星不稳定性、hMLH1启动子甲基化及其蛋白表达研究

目的探讨胰腺癌中微卫星不稳定性（MSI）与hMLH1启动子甲基化及蛋白表达之间的联系，揭示胰腺癌发生的分子机制。方法从35例胰腺癌患者的正常胰腺组织、癌组织中提取DNA；SSCP法检测标本中微卫星不稳定性发生情况；免疫组织化学法检测错配修复基因hMLH1在胰腺癌中的表达情况；MSP法检测hMLH1基因启动子甲基化状态。结果35例胰腺癌中微卫星高度不稳定7例，低度不稳定14例，稳定11例，正常组织中没有出现微卫星不稳定，两者之间差异有统计学意义（P〈0．05）。hMLH1在微卫星不稳定胰腺癌组织中常为缺失表达。在微卫星稳定胰腺癌组织中呈正常表达。35例胰腺癌中hMLH1启动子CpG岛甲基化发生率为60％（21/35）。正常组织中未发现甲基化，两者之间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论与胰腺癌有关的错配修复基因hMLH1启动子CpG岛甲基化是hMLH1基因失活的重要机制，而hMLH1的表达失活则可能导致MSI的产生，促进胰腺癌的发生。     

人平衡核苷转运体1与胰腺癌化疗耐药性的关系

吉西他滨是临床胰腺癌化疗首选药物之一,然而患者对吉西他滨的化疗敏感性并不相同,部分患者对吉西他滨原发或继发耐药.人平衡核苷转运体1是介导吉西他滨进入肿瘤细胞的主要转运体,人平衡核苷转运体1在在不同患者肿瘤细胞中的表达差异性是造成胰腺癌吉西他滨化疗耐约的原因之一.     

三苯氧胺对人胰腺癌细胞mdr1基因表达逆转作用的实验研究

目的：研究三苯氧胺（TAM）对入胰腺癌细胞mdr1基因表达的逆转作用。方法：TAM和5-Fu作用于入胰腺癌细胞株（Capan-Ⅱ、SW1990），用MTT法测定细胞增殖的情况，流式细胞仪检测mdr1基因蛋白表达的变化，RT-PCR检测mdr1基因mRNA的变化。结果：高剂量的TAM对ERa阳性的Capan-Ⅱ细胞有抑制作用，TAM可以逆转Capan-Ⅱ细胞和T47D细胞中mdr1蛋白和mRNA表达。结论：高剂量的TAM对ERa阳性的Capan-Ⅱ细胞有抑制作用，可以逆转mdr1的表达。     

胰腺癌外周血mdr1及其转录区域结合位点甲基化的检测和临床意义

目的：研究胰腺癌肿瘤组织及外周血有核细胞多药耐药基因1（mdr1）及其转录区域结合位点甲基化的表达及其相关性,探索适用于临床观察多药耐药性变化的有效手段。方法：应用免疫组织化学法和FQ-PCR技术、MSP方法分别检测胰腺癌肿瘤组织及其对应外周血标本中的mdr1的表达和转录区域结合位点甲基化程度,并通过Pearson统计学方法分析两者的相关性。结果：胰腺癌P-gp的表达与mdr1mRNA表达明显相关,并与mdr1基因转录区域结合位点甲基化程度显著相关。外周血中mdr1及其转录区域结合位点甲基化的表达与肿瘤组织中的表达存在显著相关性（P〈0.01）。结论：mdr1转录区域结合位点的甲基化与胰腺癌的多药耐药性密切相关;检测外周血mdr1及其甲基化的表达可动态监察胰腺癌病人化疗前后多药耐药性的变化,为临床治疗方案的决择提供依据。     

化疗药物诱导胰腺癌细胞凋亡过程中p53和bcl—2基因表达量？…

目的 本文通过观察化疗药物话导胰腺癌细胞凋亡过程中,Ｐ５３和ＢＣＬ－２基因表达量的变化,探讨化疗药物诱导胰腺癌细胞发生凋亡过程与相关基因表达的关系。方法 采用斑点杂交及激光密度扫描技术对化疗药物配伍;５－氟尿嘧喧（５－ＦＵ）、丝裂霉素（ＭＭＣ）和表柔比星（Ｅ－ＡＤＭ）诱导胰腺癌细胞株细胞发生凋亡过程中Ｐ５３和ＢＣＬ－２基因表达量的变化进行了检测分析。结果 化疗药物诱导胰腺癌细胞株细胞发生凋亡过程中     

转染人高迁移率族蛋白1反义基因对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的　探讨反义高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因对人胰腺癌细胞的抑制作用。方法　应用分子克隆技术构建反义HMGB1基因真核表达载体pcDNA3 1/anti HMGB1,用脂质体法将其导入人胰腺癌细胞PANC 1中,经G4 18筛选获得可稳定表达反义HMGB1的人胰腺癌细胞克隆,通过逆转录聚合酶链反应、免疫印迹法和噻唑蓝比色法检测转染4 8h后胰腺癌细胞HMGB1基因表达和体外增殖活性的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期情况。结果　获得了pcDNA3 1/anti HMGB1真核表达质粒,pcDNA3 1/anti HMGB1转染可使PANC 1细胞HMGB1mRNA和蛋白表达水平显著降低(P <0 .0 1)、肿瘤细胞增殖能力明显受到抑制(P <0. 0 1) ,并出现细胞周期G1期阻滞、凋亡细胞百分数增加。结论　反义HMGB1基因的表达能有效抑制胰腺癌细胞的体外增殖并促进细胞凋亡。