无血清培养液流感病毒分离效果分析

目的对比分析有无血清培养液流感病毒分离效果。方法收集流感哨点医院发病3天内流感样病例咽拭子720份,采用荧光定量PCR法检测流感病毒核酸及分型,犬肾细胞(MDCK)培养法进行病毒分离,细胞病变观察和微量血凝实验(HA)检测病毒是否分离成功并测定HA价。结果 720份标本中病毒核酸阳性130份,阳性率为18.06%。130份阳性标本,采用含血清培养液病毒分离阳性68份,阳性率为52.31%(68/130),其中H1N1亚型6份,H3N2亚型2份,BV亚型58份,BY亚型2份;无血清培养液病毒分离阳性100份,阳性率为76.92%(100/130),其中H1N1亚型12份,H3N2亚型21份,BV亚型63份,BY亚型4份。两种方法分离差异有统计学意义(χ2=17.23,P0.01),其中含血清培养液培养后无血凝滴度标本32份,用无血清培养液培养后血凝滴度在11～1256,且BV和BY亚型血凝滴度较高。结论无血清培养液较有血清培养液流感病毒分离效果更好。     

不同狂犬病毒毒株在Vero细胞上的传代研究

近年来,我国狂犬病流行较为严重,病死数居所有传染病之首。预防和治疗狂犬病的惟一方法是注射狂犬病疫苗,因此,生产优质高效的狂犬病疫苗显得尤为重要。在狂犬病疫苗生产过程中,所选用的毒株直接影响到疫苗的病毒滴度和免疫原性,为了给生产厂家提供一些有效的参考数据,我们对不同的狂犬病毒毒株在Vero细胞上进行了传代比较。1　材料和方法　狂犬病毒液体毒株CTN 1V10 株、CTN BHK株,狂犬病毒脑毒株CTN 1V10 M3 株、aG株,均由中国药品生物制品检定所提供,病毒滴度均在7.0～8.0LogLD50 /ml之间。Vero细胞来源于美国ATCC ,由中国药品…     

用无血培养基分离空肠弯曲菌的效果

关于空肠弯曲菌的分离培养,目前国内外广泛采用含血培养基。但含血培养基不易得到,价格昂贵,易污染变质,又不易保存。因而,我们采用无血培养基与改良Camp-BAP含血培养基(简称含血培养基)对已知空肠弯曲菌株的检出率、染色形态、菌落特征、菌量分布、抑制杂菌等方面进行研究,取得了满意的结果,现报告如下。材料与方法 1、采集标本和接种:采集鸡、人肛拭标本放入消毒的0.3毫升布氏肉汤,反复旋转8～10次将棉拭上的粪样冼下,经充分摇匀后接种子两种培养基上进行培养分离。 2、培养基:(1)含血培养基基础成份的配制按照改良Camp-BAP含血培养基制作法进行;(2)无血培养基的基础成份和抗     

用Vero细胞从病人痰液中分离呼吸道合胞病毒的实验研究

目的：证实本次暴发流行的病原和Vero细胞分离RSV的效果，获得可用于疫苗研制的RSV毒株。方法：用Vero细胞从患儿痰标本中分离RSV并对分离到的毒株进行生物学特性研究。结果：从13例患儿痰标本中分离到3株可稳定传代的病毒株，经RSV单克隆抗体、RT-PCR扩增产物的核酸序列测定及CPE特征等证实为RSV。结论：本次婴幼儿呼吸道疾病暴发是由RSVA型所引起，Vero细胞分离RSV阳性率为23．1％。     

人用纯化Vero细胞狂犬病疫苗效果观察

目前 ,我国已研制成功精制地鼠肾细胞狂犬病疫苗 ,虽然效价已达到ＷＨＯ规定的 2 .5ＩＵ/剂 ,副反应亦有显著降低 ,但由于以原代地鼠肾细胞为基质 ,其制备需人工饲养并解剖大量地鼠 ,不适于工业化大生产 ,且很难控制细胞外源因子。Ｖｅｒｏ细胞是经ＷＨＯ检定合格并推荐作为生产人用灭活狂犬病疫苗的传代细胞 ,它不仅来源方便 ,繁殖速度快 ,维持时间长 ,容易控制外源因子污染 ,且对狂犬病毒敏感 ,适合大规模生产狂犬病疫苗。 1993年我们在卫生部批准立项 ,开始了Ｖｅｒｏ细胞狂犬病疫苗研制工作 ,并于 1998年研制成功。现将该疫苗人体观察结…     

不同狂犬病毒毒株在Vero细胞上培养的病毒滴度与免疫原性比较

在狂犬病疫苗生产过程中 ,所用毒种的病毒滴度和免疫原性与疫苗的效力关系极大。目前 ,我国地鼠肾细胞狂犬疫苗生产过程中所用的毒株主要是ａＧ株。为选择高病毒滴度、高免疫原性的Ｖｅｒｏ细胞适应株 ,我们对几种狂犬病毒毒株在Ｖｅｒｏ细胞上的病毒滴度、免疫原性进行了比较。1　材料与方法1.1　生产用毒株　狂犬病毒ＣＴＮ -Ｖ6株、狂犬病毒ＣＴＮ-Ｖ10 Ｍ3 株、狂犬病毒ＣＴＮ -ＢＨＫ3 株、狂犬病固定毒ａＧ株 ,均由中国药品生物制品检定所提供 ,毒力在 7.5～ 8.0ＬｏｇＬＤ50 /ｍｌ之间。1.2　细胞株　非洲绿猴肾Ｖｅｒｏ细胞 ,来源于…     

应用Vero细胞分离新型布尼亚病毒

目的从不明原因发热伴血小板减少综合征患者血液中分离新型布尼亚病毒。方法应用Vero细胞培养法分离病毒,并用间接免疫荧光检测法(IFA)、实时荧光聚合酶链反应(Real-time PCR)技术进行鉴定。结果从24份不明原因发热患者血液标本中分离出6株发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒。结论应用Vero细胞培养法可以直接从不明原因发热患者血液中分离发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒。     

精制Vero细胞狂犬病疫苗的研制及免疫学效果观察

目的　以Vero细胞为基质，研制新一代精制Vero细胞狂犬病疫苗。方法　以CTN-1V10为生产毒株，以＜150代Vero细胞为培养基质，采用转瓶旋转培养，按不同时间收获病毒液，经过澄清、浓缩、纯化、灭活制成精制Vero细胞狂犬病疫苗。从以此工艺制备的疫苗中选取一批做为免疫学效果观察的受试疫苗。按暴露后免疫程序接种63人，其中受试疫苗接种33人，法国维尔博狂犬病疫苗接种30人，观察不良反应和测定中和抗体。结果　新研制的精制Vero细胞狂犬病疫苗各项指标完全符合WHO的有关质量要求。两种疫苗全程免疫后中和抗体阳转率均为100%，中和抗体受试组为11.94IU/ml;维尔博疫苗对照组为11.69IU/ml。结论　精制Vero细胞狂犬病疫苗不但制造工艺合理，而且副反应轻微，免疫原性良好。     

Vero细胞纯化狂犬疫苗人体反应及免疫效果观察

自人用浓缩狂犬疫苗应用以来，对狂犬病防治起了积极作用，但在使用过程中因个体反应较重，并被迫放弃全程免疫的情况时有发生，影响了犬类致伤人员的免疫保护。1998年按照卫生部Vero细胞疫苗现场观察的（98）16号批件，选用海南生物所研制的纯化Vero细胞狂犬疫苗，对本站100名工作人员进行人体接种临床观察，其中30人分别作血清免疫学观察。现将结果报告如下：巨材料与方法l．互接种对象与分组选择未接种过狂犬疫苗，且无疫苗禁忌症的健康人群作为接种对象，其中30人按lmlX5针接种，另70人按IInlX3外接种。互．2疫苗选择与接种方法试验…     

不同分子量超滤浓缩Vero细胞狂犬病疫苗的效果研究

病毒超滤浓缩技术是生产人用纯化Ｖｅｒｏ细胞狂犬病疫苗的必要手段，国内研制者多采用３０万分子量超滤膜进行浓缩〔１〕。但据ＦＸＭｅｓｌｉｎ等报道，国外多采用１万～１０万分子量超滤膜进行浓缩〔２〕。为避免超滤过程中的病毒丢失，提高疫苗的产出率，我们进行了１...     

人用Vero细胞狂犬病纯化疫苗临床观察及免疫学效果研究

国际上发达国家普遍使用狂犬病纯化疫苗 ,其中较具代表性的是法国巴斯德梅里厄公司生产的狂犬病纯化疫苗 ,该疫苗不仅效价稳定 ,注射后副反应也极其轻微。Ｖｅｒｏ细胞作为基质制备疫苗的安全性已得到国际认可 ,由武汉、长春、兰州生物制品研究所共同研制的Ｖｅｒｏ细胞狂犬病纯化疫苗于1999年获得国家药品监督管理局批准进行临床研究 ,现将临床观察结果报告如下。一、材料与方法1.疫苗 :观察组疫苗由武汉生物制品研究所研制 (武汉苗 ) ,批号 :980 1、2 0 0 0 0 40 1;对照组疫苗为法国维尔博疫苗(法国苗 ) ,批号为Ｐ12 6 0 2。2 .接种对象 …     

应用Vero细胞制备狂犬病疫苗最适条件的研究

我国目前用于预防狂犬病的主要是地鼠肾细胞疫苗,其产量和质量尚不能满足防病、灭病的需要。Ｖｅｒｏ细胞经ＷＨＯ检定合格并推荐作为生产人用灭活狂犬病疫苗的传代细胞,不仅来源方便,繁殖速度快,维持时间长,容易控制外源因子污染,而且对狂犬病毒敏感,适合大规模生...     

不同灭活方法对Vero细胞狂犬病疫苗效力的影响

传统的人用浓缩狂犬病疫苗是采用福尔马林进行灭活,而国际上新型疫苗早已采用β-丙内酯做为灭活剂.为了摒弃旧的生产工艺,提高我国生物制品产品质量,使之尽早与国际接轨,我们对两种灭活方法进行了试验研究.现报告如下.材料与方法(1)病毒原液制备:将Vero细胞与CTN-1株狂犬病毒混合接种于10立升转瓶,培养一定时间后,收获病毒液.     

细胞培养法分离培养生殖支原体的研究

用细胞培养法分离临床标本中的生殖支原体Ｍｇ,探讨天津地区性传播疾病门诊患者中是否存在Ｍｇ感染。方法采集ＳＴＤ门中层得生殖道分泌物,接种于Ｖｅｒｏ细胞,进行分离培养,并用ＳＰ－４培养基传代,对符合ＭＧ生物学特性的阳性培养物用套式ＰＣＲ、电镜代察、代谢抑制试验等方法进行鉴定。结论在１１０例ＳＴＤ患者中分离培养出３株Ｍｇ,分离率为２．７３％。结论在国内首次应用细胞培养法从临床标本中分离培养到Ｍｇ菌株。从     

密度梯度离心法纯化Vero细胞狂犬病疫苗的研究

笔者应用超滤浓缩和密度梯度区带离心技术,对Ｖｅｒｏ细胞制备的人用狂犬病疫苗进行了以蔗糖为介质的密度梯度区带离心纯化研究。1　材料和方法1.1　狂犬疫苗的制备　在10Ｌ转瓶常规培养的Ｖｅｒｏ细胞中接种ＣＴＮ-Ｖ1狂犬病固定毒,于37℃培养3ｄ后,换维持液;每过3～4ｄ收获病毒液3次,即为粗制疫苗。1.2　疫苗的澄清与浓缩　粗制疫苗先经0.45μｍ微孔滤膜澄清过滤,再用截留分子量为30万ＭＷ(美国ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ公司生产)超滤膜浓缩80～100倍,然后用浓度为1/3000～1/5000的β-丙内酯灭活待用。1.3　高速离心去残渣　浓缩后的粗制疫苗经…     

动物细胞培养技术的进展

组织培养技术是 19世纪末由胚胎学技术衍生而来。近一个世纪 ,从能维持组织存活到生长出新细胞 ,从少数组织到各种组织细胞的培养 ,从精细的实验室培养技术到大规模的生产工艺 ,组织培养技术已成为生物制品制备以及基因工程等领域必不可少的工具之一。随着生物制品需求的不断增加 ,动物细胞的培养技术已向着大型化、自动化、精细化的方向发展。本文就近年来动物细胞培养技术有关的微载体、氧供应及无血清培养等问题作一文献回顾。微载体传统的贴壁依赖性细胞的培养是通过静止或转瓶等培养来获得 ,操作繁复 ,且耗费空间及人力。 196 7年 ,ｖ…     

人用Vero细胞狂犬病疫苗纯化工艺的建立

目的 建立人用Vero细胞狂犬病疫苗的纯化工艺。方法 应用2步柱层析对Vero细胞狂犬病疫苗原液进行纯化，对该疫苗效价及残余小牛血清、Vero细胞DNA等纯化指标进行检测。结果 经纯化的疫苗各项纯化指标均达到《中国生物制品规程》的要求，并较好保留了疫苗活性。结论 该法适用于人用Vero细胞狂犬病疫苗的纯化。     

汉坦病毒Vero细胞灭活疫苗候选毒种筛选

目的将肾综合征出血热疫苗后备筛选毒株适应于Vero细胞，并对其抗原性和免疫原性进行研究。方法将新分离的4株汉坦病毒接种敏感动物，在乳沙鼠脑内连续传代。比较脑内病毒抗原的含量以及乳鼠的发病情况；在Vero细胞中传代，比较培养液中的病毒滴度和抗原滴度以及细胞的病变情况；利用筛选出的毒株研制Veto细胞灭活疫苗。研究疫苗的免疫原性。结果4株病毒经乳沙鼠脑内传代，鼠脑悬液的病毒滴度和抗原滴度分别达7．00～7．75LgCCID50／ml和1：3201：1280；4株毒株经Vero细胞连续传5代，培养液病毒滴度和抗原滴度分别达6．50～7．50LgCID50／ml和1：160～1：768；疫苗免疫家兔2针后，其中出血热病毒株Z34与ZJ5株疫苗免疫血清对同型毒株的中和效价达到1：10。结论ZJ4与ZJ5两毒株已适应于Vero细胞，且具有病毒滴度高和免疫原性良好的特性，适合用作Vero细胞肾综合征出血热疫苗理想的候选毒株。