青蒿琥酯治疗食蟹猴疟复燃后感染大劣按蚊的实验观察

目的 观察青蒿琥酯治疗食蟹猴疟原虫复燃后感染大劣按蚊的情况。方法 用血传方法感染实验猴成功后，原虫密度适宜时(1％左右)，供大劣按蚊吸血，吸血结束后结实验猴一次性肌注60mg青蒿琥酯(17．14mg/kg)。给药后第30天复燃，连续4天每天供一批大劣按蚊吸血，于蚊吸血后第9天解剖蚊胃，观察卵囊发育，计算蚊胃阳性率(阳性蚊数／解剖蚊数)、卵囊密度(每只阳性蚊胃所含卵囊数)；第13天解剖涎腺，计算涎腺阳性率(阳性蚊数／解剖蚊数)和子孢子感染度。结果 复燃后第1—3天感染的3批大劣按蚊，有卵囊形成，但不能发育为子孢子进腺，第4天感染的按蚊，卵囊能正常发育为子孢子进腺。结论 原虫受到药物攻击后，受损残留原虫需经过十几个周期甚至更长时间才能逐渐恢复活力(包括增殖能力、感染性等)，其感染性的恢复有时也可能会滞后于增殖能力的恢复。     

恶性疟原虫质粒DNA探针在蚊媒监测中的应用研究

利用克隆的质粒型ＤＮＡ片段用光敏生物素标记后作探针．以核酸分子杂交手段．检验蚊体内的恶性疟原虫．结果表明可从多种模拟感染蚊虫标本中特异地测出恶性疟原虫感染蚊。将一组蚊研磨后集体检测时，可测出２５只蚊虫中有１只感染者或含１００个子孢子的蚊虫，这极利于大样本的快速处理．而单个蚊虫直接任于硝酸纤维素膜上检测，更适于子孢子的精确估计。既能测新鲜蚊，又能测干燥蚊标本．     

简单快速检查按蚊体内子孢子方法的初探

简单快速检查按蚊体内子孢子方法的初探黄亚铭傅伟忠韦海燕自从１８９７年英国军医ＲｏｎａｌｄＲｏｓｓ阐明疟原虫在按蚊体内的生活周期，及疟疾通过叮咬进行传播以来［１］，对按蚊体内子孢子的观察一直是通过解剖蚊唾液腺来完成，在感染度低的情况下，不易观察而且容易...     

恙螨体内肾综合征出血热病毒基因的套式PCR检测

目的：检测恙螨体内微量肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）基因。方法：选择ＨＦＲＳＶ膜蛋白（ＭＰ）基因的保守区核苷酸序列合成两对引物，采用异硫氰酸胍一步抽提ＲＮＡ，建立了反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测鼠体恙螨及游离恙螨体内ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ的方法，扩增产物经凝胶电泳及点印迹杂交证实具有特异性。结果：ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠体恙螨５０只组、１０只组、游离恙螨５０只组，经ＲＴ－ＰＣＲ检测为阳性；ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠体恙螨５只组，ＨＦＲＳＶ抗原阴性鼠体恙螨５０只、１０只和５只组，游离螨１０只和５只组均未见明显扩增带。进一步用ＮｅｓｔｅｄＲＴ－ＰＣＲ检测，在ＲＴ－ＰＣＲ未检测出ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ各组中均检测有ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ，最低检出为５只螨组。并用核酸分子杂交技术进一步证实了上述结果。结论：ＮｅｓｔｅｄＲＴ－ＰＣＲ具有高特异、高敏感的特点，可用于检测恙螨体内微量ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ，从分子生物学角度为恙螨作为ＨＦＲＳＶ的传播媒介提供了直接证据。     

海南岛大劣按蚊杀虫剂防制试验研究

大劣按蚊(Anopheles dirus 1936)是东南亚丛林地区的重要传疟媒介。1954年在海南岛兴隆首次发现大劣按蚊的子孢子自然感染。1954～1957年在海南岛解剖该蚊1,437只,自然感染为2.2～6.2％。证实该蚊是海南岛丛林地区的重要传疟媒介。50年代以来,在海南岛使用杀虫剂防制大劣按蚊进行了许多试验观察,现将主要结果摘要报告如下。     

我国间日疟原虫封邱株的实验研究(摘要)

<正> 我们于分离间日疟原虫郑州株的同时,又分离出封邱株间日疟原虫,其生物学特征与前者不同。该株病源主要来自封邱,实验用媒介按蚊为中华按蚊,志愿者系参加本项研究的工作人员。中华按蚊的感染仍采用羊膜饲血法离体感染,志愿者的自身感染系单只子孢子阳性蚊叮咬。志愿者无疟史,感染前血检疟原虫和间接荧光抗体试验均为阴性,居住区无疟疾新感染发生。感染后每天查血1次,直至发病治疗后原虫转阴为止,     

1998年沈阳市肝炎门诊320例病人检测HBVDNA及乙型肝炎标志物(HB-VM)的血清学分析

为了弄清ＨＢＶＭ与ＨＢＶＤＮＡ的关系,我们对３２０名肝炎门诊病人进行了ＨＢＶＭ与ＨＢＶＤＮＡ的血清学分析。材料和方法　（１）３２０份血清样品采自沈阳市传染病院门诊。（２）ＥＬＩＳＡ方法检测ＨＢＶＭ用试剂盒全部由上海实业科华生物技术有限公司提供。操作方法和结果判定按说明书进行。用美国希尔仪器设备公司提供的ＳＳ３０００酶标仪读取ＯＤ值。（３）ＨＢＶＤＮＡＰＣＲ检测试剂盒由厦门达海科技有限公司提供,严格按说明书操作。ＰＣＲ试剂盒检测血清中的前Ｃ—Ｃ区ＤＮＡ片段,扩增产物为５６８ｂｐ。ＰＣＲ扩增：９４℃…     

淋球菌隐蔽性质粒CppB基因的克隆研究

利用ｐＧＥＭ－Ｔ载体对ＣｐｐＢ基因ＰＣＲ扩增产物进行直接克隆，除常规方法中的限制性内切酶可以节省外，发现该方法不仅过程简便，操作易行，而且可以用ＰＣＲ方法筛选重组子，克隆的阳性率较常规方法高。ＤＮＡ序列测定结果证明在ＰＣＲ产物３′末端的确出现了一个不与模板互补的“Ａ”末端，它可以与ＰＧＥＭ－Ｔ载体Ｔ结合。ＰＣＲ方法筛选重组，克隆的阳性率较常规方法高。ＤＮＡ序列测定结果证明在ＰＣＲ产物克隆片段的基因序列与文献报道相一致，这为获得淋球菌隐蔽性质粒ＣｐｐＢ基因ＰＣＲ诊断标准阳性模板，了解ＣｐｐＢ基因功能奠定了基础。     

山东蒙阴县恙虫病立克次体的PCR检测和分型研究

本文报告采用恙虫病立克次体表面蛋白５６ＫＤａ基因编码区构建的群、型特异引物，ＰＣＲ检测１４份恙虫病患者血提取的ＤＮＡ模板，扩增后均见有３１７～３３２ｂｐ片段的扩增带。与血清学检测比较，ＰＣＲ具有敏感、早期诊断的意义。群引物扩增的阳性产物再经ＰＣＲ分型，结果证明山东蒙阴地区存在Ｋａｗａｓａｋｉ型Ｒｔ。     

日本血吸虫31／32KDa蛋白质基因扩增及克隆

目的 克隆日本血吸虫３１／３２ＫＤａ蛋白质的编码基因，用于血吸虫病免疫诊断和预防，方法 以日本血吸虫成虫ＲＮＡ为模板逆转录合成ｃＤＮＡ链，参照Ｓ．ｍ３１／３２编码序列设计合成引物，用ＰＣＲ法扩增３１／３２ＫＤａ蛋白质基因编码序列，将其克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ载体。并用双酶切和以质粒为模板的ＰＣＲ进行鉴定。结果 ＲＴ－ＰＣＲ扩增出一条约１２７０ｂｐ大小的特异性条带，重组质粒的双酶切和以质粒为模板的ＰＣＲ均     

感染约氏疟小鼠的保护性免疫能力及患鼠服氯喹后疟原虫感染能力的观察

本实验用小白鼠约氏疟原虫和斯氏按蚊系统,做了小白鼠对约氏疟原虫的重复感染实验和患鼠服氯喹后原虫感染能力的观察。结果表明,大部分小白鼠感染约氏疟原虫后能迅速产生保护性免疫力,由子孢子感染的24只小鼠服氯喹治愈后,再以子孢子重复感染,阳性的1只,占4.17%。由输血感染的26只小白鼠服氯喹治愈后,再以输血重复感染,阳性的3只,占11.5%,此结果显示,小白鼠以子孢子感染治愈后对于孢子的免疫力,远远超过输血感染的小白鼠。此外,约氏疟阳性小白鼠服氯喹后对斯氏按蚊感染的成功率明显低于正常阳性小鼠;服药后10h内对原虫感染能力的影响很小,20～24h后感染能力则明显下降。     

蒿甲醚阻断食蟹猴疟原虫孢子增殖期发育研究

用蒿甲醚（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）注射液在食蟹猴疟原虫———大劣按蚊动物模型中的试验结果显示：给感染猴一次性肌注６４ｍｇ／ｋｇ蒿甲醚后，９ｈ内原虫密度无明显变化，配子体数量仍在增加，与治疗前相比，吸血按蚊蚊胃内卵囊阳性率和蚊胃中卵囊数以及唾腺子孢子阳性率均明显降低。２３ｈ后，蚊胃未有卵囊形成；一次性给药达２５５ｍｇ／ｋｇ体重时，５ｈ后吸血按蚊蚊胃内未有卵囊形成。结果提示：蒿甲醚不仅具有快速杀灭疟原虫无性体，毒性低、用量少、在体内滞留时间长等特点，而且还具有抑制蚊胃内卵囊形成的作用。在一定量的药物作用情况下，可阻断疟原虫孢子增殖期的发育，而且时间快     

小鼠内皮抑制素基因的克隆及生物学活性的初步分析

以中国昆明种小鼠组织的总ＲＮＡ为模板,用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增得到小鼠内皮抑制素（ＥＳ）ｃＤＮＡ,与文献报道的序列（Ｌ２２５４５）相比,ＥＳｃＤＮＡ测序结果ｃｔｇ在第２７８碱基处与文献报道（ｇｔｇ）存在一个碱基差异,导致编码的迄基酸由文献报道的Ｖａｌ变为Ｌｅｕ。该ＥＳｃＤＮＡ已被ＧｅｎＢａｎｋ接受,登录号为ＧｅｎＢａｎｋＡＦ２５７７７５。将该ＥＳｃＤＮＡ重组到真核表达载达ｐＳｅｃＴａｇ２－ＥＳ转录Ｃ     

用巢式PCR技术从cDNA文库中快速分离人类新基因5’末端

为了快速获得人类新基因的全长ｃＤＮＡ序列，设计了基因特异性引物和载体特异性引物进行巢式ＰＣＲ扩增，成功地从人脑ｃＤＮＡ文库中快速分离出Ｍ６ｂ１基因５’末端而获得全长ｃＤＮＡ。推测该基因很可能是某种神经系统遗传病的致病基因。因此，巢式ＰＣＲ技术是一种快速灵敏、准确有效的从ｃＤＮＡ文库中分离新基因５’末端乃至全长基因的方法。     

改进一步单管RT—PCR检测水中肠道病毒

为克服常规反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）检测肠道病毒的缺点和不足，在实验基础上建立了一步单管ＲＴ－ＰＣＲ检测水中的脊灰病毒，采用热裂解法提取样品中脊灰病毒的总ＲＮＡ，反转录（ｃＤＮＡ）与ＰＣＲ反应在ＰＣＲ仪上一步进行，操作方法简单，中间可能污染的环节少，最大限度地减少了由环境造成的可能污染。设计合成的引物Ｅ１－Ｅ２取自多种肠病毒保守的５′非编码区核酸序列，可用于多种肠道病毒的扩增；Ｐ１－Ｐ２为脊灰病毒３个血清型的共用引物，只扩增脊灰病毒，具有较强的特异性。改进后的ＲＴ－ＰＣＲ的敏感性与常规ＲＴ－ＰＣＲ比有所提高，可检测到细胞培养悬液或水中１０个ＰＦＵ的脊灰病毒。     

三种利什曼原虫和我国新疆皮肤利什曼原虫kDNA分子…

本研究自新疆克拉玛依地区皮肤利什曼病（ＣＬ）患者的皮肤病变组织内抽提微量的利什曼原虫ｋＤＮＡ，采用引物１３Ａ、１３Ｂ进行ＰＣＲ扩增，获１２０ｂｐ扩增区带（ＣＬ－ＰＣＲ－ＡＰ），并转移到尼龙膜上，分别与地高辛标记的Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａ、Ｌ．ｉｎｆａｎｔｕｍ、Ｌ．ｇｅｒｂｉｌｌｉ ｋＤＮＡ探针进行Ｓｏｕｔｈｅｍ印迹杂交。结果：病变组织内利什曼原虫ｋＤＮＡ的ＰＣＲ扩增区带仅与Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａ ｋＤＮＡ探     

微小按蚊rDNA内转录间隔２区序列差异

目的：比较不同地株微小按蚊核糖体ＤＮＡ（rDNA）内转录间隔２区（ＩＴＳ２）序列差异。方法：通过对ＰＣＲ扩增rDNAＩＴＳ２片段测序,比较其不同地株差异。结果：对６株微小按蚊测序比较,存在有微小按蚊Ａ和Ｃ型。结论：rDNAＩＴＳ２充阢差异可用于建立Ａ、Ｃ型的分子鉴别方法。     

肾综合征出血热病毒分型的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对４株肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病毒进行了分型。ＨＦＲＳ病毒的ＲＮＡ经逆转录为ＣＤＮＡ后用ＮＴＮ（野鼠型）、ＳＥＯ（家鼠型）两种引物进行体外扩增，经琼脂糖凝胶电泳，ＰＣＲ产物的ＮＤＡ片段与Ｍａｒｋ对照，证实扩增出的产物为ＨＦＲＳ病毒ＤＮＡ片段。ＰＣＲ分型与物异性单克隆抗体（ＭｃＡｂ）间接免疫荧光法分型作比较，结果相符合。     

加热与洗涤法对HBV,HCV血清标志的影响

采用ＥＬＩＳＡ和聚合酶链反应（ＰＣＲ），对经６０℃１０ｈ加热的ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、抗－ＨＢＣ及抗－ＨＣＶ阳性血清和洗涤４次的ＲＢＣ洗涤及放散液的血清标志及ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ进行了检测。结果，６０℃加热１０ｈ用ＥＬＩＳＡ检测血清标志均由强阳性转为阳性，ＰＣＲ检测ＨＢＶＤＮＡ及ＨＣＶＲＮＡ均为阴性；洗涤液用ＥＬＩＳＡ和ＰＣＲ检测血清标志及ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ均呈阴性反应，放散液用ＥＬＩＳＡ检测阴性，用ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ１０份标本９份阴性，１份阳性。提示６０℃加热１０ｈ和洗涤ＲＢＣ可灭活或去除血清中大部分ＨＢＶ、ＨＣＶ及其血清标志。     

套式PCR检测恶性疟原虫与间日疟原虫方法的建立及其应用研究

目的建立简便、灵敏、低成本的恶性疟原虫与间日疟原虫套式PCR检测方法,并探讨应用于间日疟原虫实验室检测的效果。方法制备抗凝静脉血的干滤纸血滴标本,采用干滤纸5%Chelex-100煮沸法提取疟原虫DNA,并进行套式PCR反应;通过比较PCR检测结果与疟原虫镜检结果,评价套式PCR检测恶性疟原虫与间日疟原虫方法的效果。结果在42份样本中,有34份血样PCR检测结果与镜检结果一致,占81%;5份镜检结果无法判断的血样,PCR检测为阳性或阴性;2份镜检结果为阴性的血样,套式PCR检测为阳性。结论套式PCR检测恶性疟原虫与间日疟原虫结果可靠,比镜检方法灵敏,有望在疟疾的实验室诊断中得到应用。