CD3AK细胞对膀胱癌细胞的体外杀伤活性研究

目的 探讨CD3AK细胞的某些生物学特征、了解其对膀胱癌细胞的体外杀伤活性。方法 采用抗CD3单抗和IL-2共同刺激健康人外周血单个核细胞诱导出CD3AK细胞，体外动态观察CD3AK细胞的形态特征及增殖能力，并与LAK细胞进行比较；以流式细胞仪测定细胞表型：用MTT法测定CD3AK、LAK细胞对膀胱癌细胞株(124)的杀伤活性。结果 (1)CD3AK细胞增殖能力高于LAK细胞；(2)CD3AK细胞为异质细质细胞群，其细胞类型主要是CD8^ 细胞；(3)在效靶比为10：1及20：1时，培养4d的CD3AK细胞对124细胞的杀伤率为均高于同期培养的LAK细胞对124的杀伤率。结论 (1)CD3AK细胞制备简便，增殖能力强，可以为临床提供充足的过继免疫效应细胞；(2)CD3AK细胞是一明显优于LAK细胞的抗肿瘤效应细胞，对膀胱癌细胞具有较强的杀伤作用。CD3AK细胞在膀胱癌过继免疫治疗中具有重要的临床应用前景。     

CIK细胞的诱导及其对肝癌细胞毒作用的体外研究

目的体外诱导细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK),并研究其生物学活性。方法从外周血和脐血分离单个核细胞(PBMC),经过细胞因子诱导、培养并扩增CIK细胞,以LAK作比较,流式细胞仪检测CIK细胞表面标志CD3、CD56。3H-TdR释放法检测CIK的增殖能力,MTT法检测对肝癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402,正常胎肝细胞L-02的杀伤活性。结果CIK细胞第二周进入快速增殖期,到第31d扩增倍数超过60倍,CD3+CD56+细胞扩增倍数达800倍以上;CIK对肝癌细胞的杀伤能力明显优于LAK细胞(65%～81%);对正常胎肝细胞的细胞毒作用(<5%)。结论CIK细胞是一种具有很强杀瘤活性的免疫活性细胞,具有临床应用前景。     

香烟提取物对人体NK细胞和LAK细胞活性影响

目的　了解烟雾对人类自然杀伤细胞 (NK)和杀伤细胞 (LAK)活性的影响。方法　抽取 4 0名不吸烟的健康自愿者外周血分离单个核细胞 (PBMC) ,将每名自愿者的PBMC分为A、B、C、D 4份 ,A、B用于检测NK细胞 ,C、D用于检测LAK细胞 ,其中B、D不加香烟提取物作为正常对照 ,A、C加入香烟提取物一起培养 ,以K5 6 2 (NK敏感细胞 )为靶细胞经噻唑蓝 (MTT)法检测NK细胞活性 ,以HL 6 0为靶细胞 (NK耐受细胞 )检测LAK细胞活性。观察香烟提取物对NK细胞和LAK细胞的影响。结果　A组NK细胞平均活性为 (43 95± 5 5 7) %,B组为 (45 84±5 6 1 ) %,二者差异无统计学意义 (P >0 0 5 ) ,两组NK细胞活性段位分布比较差异有统计学意义 (P <0 0 5 ) ,C组LAK细胞平均活性为 (2 0 0 7± 1 78) %,D组为 (2 4 5 0± 2 1 7) %,二者差异有统计学意义 (P <0 0 5 )。结论　香烟提取物可影响LAK细胞活性和少数个体NK细胞活性。降低机体免疫监视功能和对癌变细胞清除的能力 ,可能是吸烟者癌症高发的主要原因之一。     

烹调烟雾职业暴露人群免疫功能的调查分析

目的：通过对烹调烟雾职业暴露人群外周血T、B淋巴细胞亚群分析、自然杀伤细胞（NK细胞）自然杀伤活性测定来了解烹调烟雾对机体免疫功能的影响。方法：利用直接荧光法,通过流式细胞仪分析了T细胞亚群、B淋巴细胞;采用MTT比色法检测NK细胞杀伤活性。结果：经成组t检验,暴露组CD3^ 细胞百分率、NK细胞杀伤率明显低于对照组,工龄7年以上被调查者中暴露组CD4^ CD8^-T细胞百分率、CD4^ /CD8^ 细胞比值明显低于对照组,而CD19^ 细胞百分率两组间差异无统计学意义;多因素逐步回归分析表明,暴露与否是影响CD3^ 细胞百分率、NK细胞杀伤活性的主要因素,同时CD3^ 细胞数还与工龄有关。结论：长期接触烹调烟雾对机体细胞免疫功能有一定抑制作用。     

LAK、NK及T细胞亚群在肝癌手术前后的动态变化

研究肝癌患者手术前后LAK、NK细胞活性和T细胞亚群免疫功能的动态变化,检测了31例肝癌患者手术前后和30例正常成人志愿者的淋巴因子活化性杀伤细胞(LAK)、自然杀伤细胞(NK)活性以及T淋巴细胞亚群较肝癌患者的LAK、NK活性以及CD3、CD4和CD4/CD8比值均明显降低(P＜0.01),CD8有增高趋势(P＞0.05);术后16d,上述细胞免疫活性与术前相比显著增高(P＜0.05).结果细胞免疫功能在肝癌患者中严重受损并且与肿瘤的消长有密切关系,LAK、NK、TC细胞亚群活性为判断肝癌手术疗效和预后的重要指标,对肝癌的综合治疗有指导意义.     

慢性乙型肝炎患者CIK细胞生物学特性的研究

目的探讨慢性乙型肝炎外周血CIK细胞的生物学特性,寻求治疗乙型肝炎的一种新方法。方法提取20例慢性乙型肝炎患者和20例健康人外周血单个细胞与IFN-γ、IL-1β、抗CD3mAb和IL-2共同培养诱导CIK细胞,用流式细胞仪检测细胞表型特征和细胞增殖倍数,用LDH酶释放法检测细胞的杀伤活性;同时设立CIK和CD3AK细胞在增殖和杀伤活性作比较。结果慢性乙型肝炎患者CIK细胞的增殖及杀伤活性均低于正常对照组(P<0·01),但较培养前明显增高,于培养后12~24d达高峰。CIK细胞与CD3AK细胞在增殖倍数上无明显差异(P>0·05),但杀伤活性前者比后者有显著提高(P<0·01)。结论慢性乙型肝炎患者CIK细胞的增殖倍数、杀伤活性均低于正常人,但明显高于培养前。诱导12~24d后CIK细胞增殖及杀伤活性均达到高峰,此时期的CIK细胞适合临床应用;CIK细胞其体外杀瘤活性明显优于CD3AK细胞,CIK可作为继CD3AK细胞之后过继免疫治疗乙型肝炎的一种新方法。     

低剂量辐射对脐血LAK细胞体外抗肿瘤活性的影响

目的 探讨低剂量辐射对脐血LAK细胞体外抗肿瘤活性的影响。方法 新鲜分离的脐血单个核细胞用重组白细胞介素2培养72h获取LAK效应细胞,在培养48h时给予1次不同剂量（分别为62mGy,124mGy,186mGy,248mGy）的γ射线照射,应用^3H－TdR释放实验测定LAK体外杀伤肿瘤靶细胞（K562,HL－60）活性。结果 脐血LAK细胞对K562和HL－60的杀伤活性与成人外周血相比差异无显著性（P＞0．05）。接受低剂量辐射的脐血LAK细胞K562和HL－60的细胞毒性显著高于非照射对照组（P＜0．01）。结论 脐血可作为LAK细胞的一个良好来源。低剂量辐射可增强脐血LAK杀伤肿瘤细胞的细胞毒性,从而可能用于清除微小残留病变及在脐血移植时增强移植物抗白血病效应。     

铅中毒儿童外周血T淋巴细胞免疫活性改变及临床意义

【目的】了解铅中毒儿童外周血T淋巴细胞免疫活性改变及体内铅含量对外周血T淋巴细胞免疫功能的影响。【方法】检测127例铅中毒儿童和43名正常儿童的T淋巴细胞亚群CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋和自然杀伤（NK）细胞CD14^＋活性，分析铅中毒不同程度时各免疫指标的变化。【结果】铅中毒儿童外周血T细胞亚群CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋比值显著低于正常儿童组；随着铅中毒程度的加重，CD3^＋、CD4^＋细胞的百分比随之下降。【结论】铅中毒儿童T淋巴细胞亚群免疫活性及NK细胞（CD14^＋）的活性降低，机体免疫功能降低，并与体内铅含量水平成负相关。     

LAK细胞和HSV1-TKc/GCV基因治疗系统对卵巢癌细胞的体外作用

[目的]对LAK细胞和HSV1-TKc/GCV基因治疗系统对卵巢癌细胞的体外作用进行研究分析。[方法]分别将不同比例的LAK细胞和AO细胞混合培养6h(4︰1,20︰1,100︰1,500︰1),采用LDH释放法测定LAK的杀伤活性;HSV1-TKc+及HSV1-TKc-AO细胞按照不同比例培养60h(15︰85,35︰65,50︰50,75︰25,65︰35,85︰15),后更换15μg/ml GCV培养液,6d后采用LDH释放法测定其杀伤活性。对两组实验的效靶比与杀伤活性进行相关性检验,比较两组的杀伤活性。[结果]LAK细胞与靶细胞的比值与杀伤活性呈线性相关性(r=0.996,P﹤0.01),其杀伤活性随着效靶比的增大而增加;AO/HSV1-TKc+与AO/HSV1-TKc-的细胞比例与HSV1-TKc/GCV的杀伤活性成线性相关(r=0.984,P﹤0.01),其杀伤活性随着比例的增大而增加,LAK与HSV1-TKc/GCV两组比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。[结论]LAK细胞与HSV1-TKc/GCV基因治疗系统对卵巢癌细胞的体外具有一定的杀伤作用,但两者比较差异无统计学意义。     

负载肺癌A549抗原的树突状细胞对细胞因子诱导的杀伤细胞特异性激活研究

目的 观察负载肺癌A549抗原的树突状细胞(DC)对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)特异性肿瘤杀伤活性的作用.方法 由正常人富含淋巴细胞白膜分离、细胞因子诱导制备DC细胞和CIK细胞.用流式细胞术分析DC细胞和CIK细胞的表型.经混合淋巴反应和体外细胞毒性实验观察负载A549抗原的DC对CIK具有特异性激活作用.结果 表型分析显示,CIK细胞以CD3 CD56 自然杀伤细胞为主,成熟DC细胞高表达CD40、CD80、CD86和HLA-DR,并可刺激CIK细胞的增殖诱导混合淋巴反应,而负载A549抗原的DC细胞能显著增强CIK细胞特异性杀伤靶细胞的能力(P＜0.05).小鼠注射CIK、DCCIK和Ag·DC·CIK后的肿瘤直径分别为(65.34±12.33)、(70.17±13.26)和(36.79±9.19)mm,后者的抗肿瘤作用较高(P＜0.05).结论 抗原负载的DC细胞可活化CIK细胞,并使其具有特异性杀伤肿瘤细胞的能力.