二甲双胍诱导人胎盘绒毛癌细胞系JAR凋亡的机制初探

目的探索二甲双胍诱导人胎盘绒毛癌细胞系JAR凋亡的作用机制。方法将JAR细胞分为对照组和二甲双胍处理组(终浓度5、10、20、40、80mmol/L)处理24h后选取合适的药物浓度。激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡,分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和免疫蛋白印记(Western blot)检测凋亡相关基因AMPK,p-AMPK,mTOR,Caspase-3,Bcl-2和Bax的变化趋势。结果 40mmol/L的二甲双胍处理能够引发JAR细胞凋亡,并且激活AMPK的磷酸化并下调mTOR的蛋白水平;同时上调Caspase-3和Bax的mRNA及蛋白水平,并且下调Bcl-2的mRNA和蛋白表达,降低Bcl-2和Bax的蛋白水平比例。结论二甲双胍可能是通过AMPK/mTOR和Caspase-3及Bcl-2/Bax两个通路的共同作用诱导JAR细胞发生凋亡。     

HOXA1基因反义寡核苷酸对结直肠癌细胞转移潜能的影响研究

目的探讨HOXA1基因反义寡核苷酸(ASODN)对结直肠癌HCT116细胞侵袭和迁移的影响及机制。方法将HCT116细胞分为:15μmol/L的HOXA1 ASODN处理组(ASODN组)、15μmol/L N-ODN处理的无关对照组(N-ODN组)、15μmol/L的HOXA1 SODN处理的正义对照组(SODN组)及正常对照组。Western blotting检测HOXA1、上皮型钙黏附素(E-cadherin)、神经型钙黏附素(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和磷酸化丝氨酸苏氨酸激酶(p-AKT)蛋白表达。MTT法检测细胞活力。Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力。对比四组上述各指标。结果与其他三组相比较,HOXA1 ASODN组可明显下调HOXA1、N-cadherin、Vimentin、PI3K和pAKT蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达,抑制细胞活力、侵袭和迁移能力。结论 HOXA1基因反义寡核苷酸可明显降低结直肠癌细胞转移潜能,机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路,从而逆转上皮间质转化有关。     

RNA干扰神经膜蛋白2基因表达对骨肉瘤细胞生物学特性的影响

目的探究神经膜蛋白2(NRSN2)对骨肉瘤U2-OS细胞增殖、侵袭、迁移的影响以及作用机制。方法实验分为对照组、siRNA阴性组、siRNA-NRSN2组。对照组为常规培养的细胞,siRNA阴性组和siRNA-NRSN2组通过siRNA技术干扰骨肉瘤细胞中NRSN2基因的表达,分别将siRNA-NC和siRNA-NRSN2转染入U2-OS细胞。CCK-8实验检测干扰NRSN2基因表达对细胞增殖的影响。Transwell小室法检测干扰NRSN2对骨肉瘤U2-OS细胞侵袭、迁移的影响。采用免疫印迹试验(Western Blot)检测NRSN2、钙黏蛋白E(E-cadherin)、钙黏蛋白N(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)水平。结果与对照组相比,siRNA-NRSN2组U2-OS细胞中NRSN2蛋白的表达量显著降低(P0.05)。干扰NRSN2表达显著抑制U2-OS细胞增殖(P0.05),降低其侵袭、迁移能力(P0.05),显著增加Ecadherin蛋白水平,明显降低N-cadherin、Vimentin蛋白水平(P0.05)。结论干扰NRSN2通过抑制上皮-间质转化(EMT)的发生,阻碍骨肉瘤U2-OS细胞的增殖、侵袭、迁移。     

慢病毒介导的赖氨酰氧化酶基因对子宫内膜癌Ishikawa细胞上皮间质转化及转移潜能的影响

目的探讨慢病毒介导的赖氨酰氧化酶(LOX)基因对子宫内膜癌Ishikawa细胞上皮间质转化及转移潜能的影响及其机制。方法采用RT-PCR和Western blot检测人正常子宫内膜KLE细胞和子宫内膜癌Ishikawa细胞中LOX mRNA和蛋白的表达。将Ishikawa细胞随机分为对照组(未转染)、NC组(转染阴性对照慢病毒LV-NC载体)和LOX干扰组(转染慢病毒干扰LV-shRNA-LOX载体)。采用RT-PCR检测细胞中LOX mRNA表达,Western blot检测LOX、E-钙粘附蛋白(E-cadherin)、N-钙粘附素(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞的迁移能力。结果与KLE细胞相比,Ishikawa细胞中LOX mRNA和蛋白的表达水平均明显升高(P0.05)。与对照组相比,LOX干扰组细胞中LOX mRNA表达、LOX蛋白、N-cadherin蛋白、Vimentin蛋白、MMP-2蛋白和MMP-9蛋白表达均显著降低(P0.05),细胞侵袭和迁移能力减弱(P0.05),而E-cadherin蛋白表达升高(P0.05);NC组和对照组间以上指标均无显著差异(P0.05)。结论下调LOX表达可通过引起N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9表达下降、E-cadherin表达升高,降低子宫内膜癌Ishikawa细胞上皮间质转化及转移潜能。     

川楝素抑制AKT/GSK-3β/β-catenin通路对恶性黑色素瘤细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的 探讨川楝素(TSN)对恶性黑色素瘤(MM)细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法 将MM细胞分为对照(NC)组、TSN低剂量组(10μmol/L)、TSN中剂量组(20μmol/L)、TSN高剂量组(40μmol/L)、SC79组[TSN+蛋白激酶B(AKT)激活剂(SC79)]、SC79+CP21R7组[TSN+SC79+糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)抑制剂(CP21R7)]。采用CCK-8法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验及Transwell检测迁移和侵袭,蛋白质印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、酶切含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(C-caspase-3)、波形蛋白(Vimentin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、AKT、磷酸化AKT(p-AKT) Ser⁴⁷³、GSK-3β、磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β) Ser⁹、β-链环蛋白(β-catenin)水平。结果 M...     

IL-6在胃癌细胞株HGC-27上皮间质转化中的作用

摘要：目的：探讨白细胞介素-6(IL-6)对人胃癌细胞株HGC-27上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition, EMT)的影响。 方法：体外用IL-6刺激培养HGC 27细胞,倒置显微镜下观察细胞形态学变化;实时荧光定量RT-PCR及western blot检测EMT相关标志分子E-cadherin、N-cadherin和Vimentin表达情况;Transwell迁移实验和平板克隆形成实验分别检测IL-6处理前后HGC-27细胞迁移和克隆形成能力的变化。 结果：IL-6能诱导HGC-27细胞向间质细胞样形态转化,多数细胞表现为类似成纤维状,部分细胞呈明显的梭形;实时荧光定量RT-PCR结果表明,IL-6作用于HGC-27细胞后E-cadherin表达量明显降低(P<0.01),而N-cadherin和Vimentin表达则显著增强(P均<0.05)。western blot结果表明,IL-6作用HGC-27细胞后E-cadherin蛋白表达量降低(P<0.05),而N-cadherin和Vimentin蛋白表达量均增加(P均<0.05);Transwell实验及平板克隆形成实验结果显示,IL-6作用后HGC-27细胞的克隆形成能力及迁移能力均增强(P均<0.01)。 结论：IL-6可诱导胃癌细胞发生EMT和进一步恶化的潜能。     

罗哌卡因通过Wnt信号通路抑制胃癌细胞NCI-N87增殖、迁移和侵袭的机制

目的 探讨罗哌卡因通过Wnt信号通路抑制胃癌细胞NCI-N87增殖、迁移和侵袭的机制.方法 采用罗哌卡因细胞培养液培养胃癌细胞NCI-N87,并分为对照组(0μg/mL罗哌卡因)、ROP-L组(160 μg/mL罗哌卡因)、ROP-M组(320μg/mL罗哌卡因)、ROP-H组(640 μg/mL罗哌卡因)、ROP-H+ Licl(640 μg/mL罗哌卡因、Wnt信号激活剂Licl)组.MTIT法检测细胞增殖活性;Transwell小室检测细胞迁移和侵袭的能力变化;Westem blot方法分析基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、β-连环蛋白(β-catenin)、钙黏蛋白(N-cadherin)、Wnt1的蛋白表达水平.结果 与对照组比较,ROP-L组、ROP-M组、ROP-H组胃癌细胞迁移和侵袭数目逐渐降低,增殖活性降低,细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平逐步减少,细胞中E-cadherin蛋白表达水平逐步增加,N-cadherin、Wnt1、β-catenin蛋白表达水平逐渐降低(P＜0.05).与ROP-H组比较,ROP-H+ Licl组胃癌细胞迁移数目和侵袭数目升高,MMP-9、MMP-2、N-cadherin、Wnt1、β-catenin蛋白水平升高,E-cadherin蛋白水平降低(P＜0.05).结论 罗哌卡因通过下调Wnt信号通路抑制胃癌细胞NCI-N87的增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT).     

二甲双胍对骨肉瘤干细胞形态、凋亡及分化能力的体外影响

目的 :研究二甲双胍对体外诱导的人骨肉瘤干细胞形态、凋亡及分化能力的生物学影响,并初步探讨其与磷酸腺苷激活的蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)活性及胚胎干细胞标志物Nanog、Oct4表达情况间的相关性。方法 :采用悬浮球生长实验将人骨肉瘤MG63细胞诱导为骨肉瘤干细胞,在倒置显微镜下呈现典型成球过程,并观察二甲双胍处理前、后骨肉瘤干细胞的形态及分化能力差异;采用流式细胞术分析二甲双胍对骨肉瘤干细胞凋亡诱导的情况及作用前、后胚胎干细胞标志物Nanog及Oct4的阳性率;用蛋白印迹法对比骨肉瘤细胞成球前、后的肝激酶B1(liver kinase B1,LKB1)/AMPK变化,并检测二甲双胍作用前、后骨肉瘤干细胞中AMPK/雷帕霉素靶蛋白(the mammalian target of rapamycin,m TOR)/p70核糖体蛋白S6激酶(p70 ribosomal protein S6 kinase,p70S6K)信号通路的表达情况。结果 :在倒置显微镜下发现,加入二甲双胍后骨肉瘤干细胞的球体形态及分化能力均受到一定程度的破坏。流式细胞术分析显示,二甲双胍具有微弱的诱导骨肉瘤干细胞凋亡的能力。二甲双胍组的Nanog及Oct4阳性率分别为45.2%和74.7%,均明显低于对照组的Nanog(73.5%)及Oct4(95.3%)阳性率。蛋白印迹法检测结果显示,骨肉瘤细胞成球后AMPK的活性降低;二甲双胍组中磷酸化AMPK(p-AMPK)相对表达量为0.637 3±0.143 1,明显高于对照组(0.272 5±0.125 1,P<0.05)。结论:二甲双胍可破坏骨肉瘤干细胞的形态,诱导其发生凋亡,并对其分化能力具有一定抑制作用,其机制可能与Nanog、Oct4表达的下调和AMPK的激活有关。     

siRNA干扰技术沉默p66SHC对结直肠癌细胞生物学特性的影响

目的探讨干扰p66shc基因表达对结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移、迁移的影响。方法实验分为对照组(不做任何处理)、NC-siRNA组和p66SHC-siRNA组,NC-siRNA组、p66SHC-siRNA组通过Lipofectamine 2000将特异性siRNA转染入结直肠癌HCT116细胞中。荧光定量PCR(RT-PCR)和免疫印迹试验(Western Blot)检测细胞中p66SHC的表达量;四甲基偶氮唑(MTT)法检测细胞的增殖能力;划痕实验和Transwell法观察细胞迁移、侵袭的变化;Western Blot检测细胞EMT相关蛋白钙黏蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、钙黏蛋白N(N-cadherin)的水平。结果采用siRNA干扰HCT116细胞中p66SHC蛋白的表达后,细胞的增殖能力显著下降(P0.05),明显抑制细胞侵袭、迁移能力(P0.05),E-cadherin蛋白的水平明显上调(P0.05),Vimentin、N-cadherin蛋白的表达水平显著下调(P0.05)。结论干扰p66SHC基因的表达能阻碍EMT的发生,从而降低结直肠癌细胞的增殖、侵袭以及迁移能力。     

Twist1通过NF-κB信号通路对人乳头状甲状腺癌上皮-间质转化的调控机制研究

目的探究Twist1对人乳头状甲状腺癌的侵袭转移的影响及相关蛋白表达的影响。方法利用MTT检测Twist1对人乳头状甲状腺癌乳头状癌细胞(IHH-4)细胞增殖能力的影响;利用转孔小室(Transwell小室)实验检测Twist1对人乳头状甲状腺癌IHH-4细胞侵袭能力的影响;采用免疫印迹试验(Western Blot)检测上皮-间质转化(EMT)相关标志蛋白和核因子(NF-κB)信号通路的分子蛋白的改变情况。结果在人乳头状甲状腺癌IHH-4细胞中沉默Twist1后,细胞的增殖能力没有发生显著变化;通过沉默Twist1可以降低人乳头状甲状腺癌IHH-4细胞侵袭和迁移能力,降低了EMT的恶性程度;Western Blot检测沉默Twist1后EMT相关蛋白上皮钙黏蛋白(E-Cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和NF-κB信号通路的p-NF-κB P65均发生明显改变。结论在人乳头状甲状腺癌中Twist1起到癌基因的作用,并且通过NF-κB信号通路对人乳头状甲状腺癌上皮-间质转化起到促进作用,为临床治疗人乳头状甲状腺癌提供科学依据及新的治疗靶点和思路。     

二甲双胍通过激活腺苷酸活化蛋白激酶抑制大鼠心脏成纤维细胞增殖及胶原合成

目的探讨降糖药物二甲双胍（metformin）对心脏成纤维细胞（CF）增殖及胶原合成的影响及可能的机制。方法培养新生SD大鼠CF,以血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激CF增殖,同时分别单独或联合应用二甲双胍及一磷酸腺苷活化蛋白激酶（P-AMPK）抑制剂Compound C,用MTT法测CF增殖,3H-脯氨酸掺入率法测定CF胶原合成,Western blot测定腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）及P-AMPK水平。结果 CF经AngⅡ刺激24h后,显著增殖,同时胶原率提高;二甲双胍显著抑制了AngⅡ诱导的CF增殖及胶原合成增加;Compound C完全抑制了二甲双胍的这一效应,而单独应用Com-pound C并未进一步加重AngⅡ诱导的CF增殖及胶原合成。二甲双胍显著提高AngⅡ刺激的CF的P-AMPK水平,同时Compound C抑制了二甲双胍对AMPK的磷酸化激活。结论二甲双胍显著抑制了AngⅡ诱导的CF增殖及胶原合成增加,这一效应可能由二甲双胍激活AMPK介导。     

OTUB2表达下调对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭能力及PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨含OTU结构域的泛素醛结合蛋白2(OTUB2)表达下调对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭能力及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响。方法采用Lipofectmine 2000转染试剂向MGC-803细胞中转染OTUB2小干扰RNA(si-OTUB2)序列(si-OTUB2组)和si-NC序列(si-NC组),以不进行任何转染的胃癌MGC-803细胞作为空白对照组。分别采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中OTUB2mRNA及蛋白的表达水平。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、AKT、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达水平。结果与空白对照组和si-NC组比较,siOTUB2组细胞中OTUB2mRNA及蛋白表达水平降低(P0.05),细胞增殖能力减弱(P0.05),细胞迁移数和侵袭数减少(P0.05),细胞中PCNA、N-cadherin和p-AKT蛋白表达水平降低(P0.05),E-cadherin蛋白表达水平升高(P0.05)。结论下调OTUB2可以抑制胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

LGR5对宫颈癌细胞上皮间质转化的影响及潜在机制研究

目的探讨富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(LGR5)对宫颈癌细胞上皮间质转化的影响及潜在机制。方法采用前瞻性研究,以宫颈癌细胞Hela为研究对象,构建过表达和敲低LGR5的细胞株,RT-PCR和Western blot检测LGR5表达。将转染pc DNA3.1-LGR5的Hela细胞作为LGR5组,以转染pc DNA3.1空载体的细胞记为pc DNA3.1组;将转染LGR5 siRNA细胞作为si LGR5组,以转染阴性对照siRNA细胞记为NC组。Western blot分别检测各组细胞中上皮间质标记物钙黏附蛋白E(E-cadherin)、钙黏附蛋白N(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)及Wnt/β-cadherin通路蛋白β链蛋白(β-catenin)和下游蛋白c-Myc、细胞周期蛋白(Cyclin D1)表达变化。Transwell实验检测各组细胞迁移侵袭能力变化。结果 Hela细胞中成功过表达和敲低了LGR5;与pc DNA3.1组相比,Hela细胞转染pc DNA3.1-LGR5后细胞中上皮标志物E-cadherin表达显著降低(P0.05),间质标记物vimentin、N-cadherin表达显著增加(P0.05)。与NC组相比,Hela细胞转染si LGR5后细胞中E-cadherin表达明显增加(P0.05),vimentin、Ncadherin表达明显下降(P0.05)。与pc DNA3.1组相比,Hela细胞过表达LGR5后细胞迁移侵袭能力、Wnt/β-catenin通路蛋白β-catenin及其下游基因c-Myc、Cyclin D1表达均显著增加(P0.05);而Hela细胞沉默LGR5后较NC组细胞迁移侵袭能力、Hela细胞中β-catenin、c-Myc和Cyclin D1表达均明显降低(P0.05)。结论过表达LGR5能够促进宫颈癌细胞Hela上皮间质转化和侵袭迁移,而干扰LGR5则抑制了细胞上皮间质转化和迁移侵袭,其中机制可能与LGR5调控Wnt/β-catenin信号转导有关。     

二甲双胍对SKM-1细胞增殖抑制作用及相关作用机制

目的:探讨二甲双胍对AML-MDS细胞株SKM-1细胞增殖的影响以及相关的机制。方法:采用CCK-8检测细胞增殖;采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;采用蛋白印迹法检测通路蛋白AMPK和周期相关蛋白的表达水平。结果:二甲双胍可抑制SKM-1细胞增殖,该作用依赖于二甲双胍诱导细胞周期G0/G1期停滞而非促进细胞凋亡。G1期相关周期蛋白(CyclinD1、CDK4)表达水平明显下调,而周期抑制蛋白P53、P21CIP1、P27KIP1的蛋白水平上调。此外,与二甲双胍抗肿瘤效应相关的AMPK蛋白磷酸化水平上调。结论:二甲双胍抑制SKM-1细胞增殖活性,这可能与其激活AMPK通路诱导细胞周期停滞有关,但仍需进一步深入研究其相关机制。     

YB-1对卵巢癌细胞EMT标志蛋白表达及黏附能力的影响研究

目的研究Y-box结合蛋白(YB-1)对卵巢癌细胞上皮间质转化(EMT)标志蛋白表达及细胞黏附能力的影响。方法在卵巢癌细胞中转染p Genesil-1.1/YB-1 shRNA和p Genesil-1.1/shRNA control,筛选稳定转染的细胞记为YB-1 shRNA组和shRNA-NC组,把没有转染的细胞作为对照组。以Realtime PCR和Western blot方法检测细胞中YB-1表达水平。用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)方法分别检测细胞增殖和黏附能力,用Western blot检测EMT标志蛋白上皮钙黏附素(E-cadherin)、神经型钙粘素(N-cadherin)和迁移侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平,Transwell小室测定细胞侵袭和迁移情况。结果 YB-1 shRNA组细胞中的YB-1表达水平明显低于对照组和shRNA-NC组(P0.05)。YB-1 shRNA组细胞增殖率和黏附率低于对照组和shRNA-NC组(P0.05)。YB-1 shRNA组细胞中E-cadherin蛋白水平高于对照组和shRNA-NC组,N-cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白水平低于对照组和shRNA-NC组,差异具有统计学意义(P0.05)。YB-1 shRNA组细胞侵袭和迁移数目低于对照组和shRNA-NC组(P0.05)。结论下调YB-1促进卵巢癌细胞E-cadherin表达,抑制N-cadherin表达,抑制细胞EMT,降低细胞黏附、侵袭、迁移能力。     

TAB3过表达促进结肠癌的上皮间质转化和侵袭迁移的研究

目的观察过表达TAB3对结肠癌细胞SW620的上皮间质转化(EMT)和侵袭迁移能力的影响,探究TAB3对NF-κB的影响以及NF-κB在TAB3调控结肠癌EMT和侵袭迁移中的作用,为阐明TAB3在结肠癌发生发展过程中的作用及其分子机制提供理论依据。方法通过qRT-PCR和Western blot检测结肠癌与癌旁组织中TAB3的表达情况。利用结肠癌细胞株SW620构建稳定过表达TAB3的细胞,应用Western blot检测EMT相关分子标记物Vimentin、E-cadherin的表达变化;利用划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力的改变。结果与癌旁组织相比,TAB3在结肠癌组织中呈高表达;过表达TAB3后,结肠癌细胞SW620中Vimentin表达升高,E-cadherin表达下降;划痕实验和Transwell侵袭实验显示过表达TAB3能够上调SW620细胞的侵袭和迁移能力;此外,过表达TAB3使p65表达增加,核内分布增多;NF-κB抑制剂能够减弱过表达TAB3对结肠癌EMT和侵袭迁移的促进作用。结论 TAB3在结肠癌中高表达,其通过NF-κB信号通路调控结肠癌的EMT和侵袭迁移。     

miR-186对HL-60细胞增殖、迁移的调控及机制研究

目的 探讨过表达微小RNA-186(miR-186)对人原髓细胞白血病HL-60细胞上皮间质转化(EMT)、增殖、迁移及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路的调控作用。方法 选取体外培养HL-60细胞,按照不同的转染方式分为对照组、mimic NC组、miR-186组、miR-186+抑制剂组、miR-186+激活剂组。采用实时荧光定量聚合酶链反应、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)、Transwell小室法及蛋白免疫印迹法检测miR-186相对表达水平、增殖率、迁移率、EMT相关因子及其信使RNA(mRNA)相对表达水平并进行比较、分析。结果 与mimic NC组相比,miR-186组HL-60细胞miR-186相对表达水平、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及其mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05),而增殖率、迁移率、磷酸化(p)-PI3K、p-AKT、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤维粘连蛋白(FN)及其mRNA表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与miR-18...     

miR-133b通过介导TGF-βR1表达下调对食管癌细胞侵袭、迁移的抑制作用

目的探讨miR-133b通过介导转化生长因子-β受体1(TGF-βR1)表达下调,抑制食管癌细胞侵袭、迁移的作用及机制。方法采用实时荧光定量PCR检测人正常食管上皮细胞和人食管癌OE19、ECA109细胞中miR-133b的表达;构建miR-133b过表达的人食管癌OE19、ECA109细胞;Transwell小室实验观察不同miR-133b表达水平对食管癌OE19、ECA109细胞迁移和侵袭能力的影响;蛋白免疫印迹法检测不同miR-133b表达水平对食管癌OE19、ECA109细胞中TGF-βR1、SMAD3、p-SMAD3、E-cadherin、N-cadherin蛋白水平的影响;双荧光素酶报告基因试验检测miR-133b对TGF-βR1的靶向调控作用。结果成功构建miR-133b过表达的食管癌OE19和ECA109细胞;miR-133b过表达的食管癌OE19和ECA109细胞的侵袭和迁移能力显著降低(P<0.01);miR-133b过表达的食管癌OE19和ECA109细胞中TGF-βR1、p-SMAD3、N-cadherin蛋白水平明显降低(P<0.01),E-cadherin蛋白水平明显升高(P<0.01)。双荧光素酶报告基因试验检测发现miR-133b可靶向调控TGF-βR1的表达。结论 miR-133b通过介导TGF-βR1表达下调,抑制TGF-βR1/SMAD3信号通路活化,抑制人食管癌OE19和ECA109细胞上皮间质转化的发生,抑制食管癌细胞的侵袭和迁移能力。     

Cripto-1蛋白、E-钙粘蛋白和波形蛋白在乳腺癌中的表达及其意义

目的研究Cripto-1蛋白、E-钙粘蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)在乳腺癌中的表达情况及意义,探讨Cripto-1蛋白与上皮-间质转化(EMT)在乳腺癌的侵袭与转移过程中的关系。方法采用免疫组织化学方法检测86例乳腺癌和40例癌旁组织中Cripto-1蛋白的表达及86例乳腺癌中E-cadherin和Vimentin蛋白表达情况,分析Cripto-1、E-cadherin和Vimentin的蛋白表达与乳腺癌临床病理特征的关系及Cripto-1、E-cadherin和Vimentin蛋白表达的相关性。结果在86例乳腺癌和40例癌旁组织中Cripto-1的阳性率分别为66.3%和7.5%,E-cadherin的低表达率和Vimentin的高表达率在乳腺癌中分别为24.4%和54.6%。Cripto-1的表达与HER2阳性、有淋巴结转移和高组织学分级有关(P0.05);E-cadherin的低表达与患者年龄、有无淋巴结转移和组织学分级有关(P0.05);Vimentin的高表达与肿瘤大小、有无淋巴结转移和组织学分级有关(P0.05)。Cripto-1的表达与E-cadherin低表达和Vimentin的高表达之间呈显著正相关(P0.05)。结论 Cripto-1蛋白在乳腺癌中的阳性率高;Cripto-1可能通过调控E-cadherin和Vimentin的表达来促进EMT,进而在乳腺癌的侵袭和转移过程发挥重要作用。     

结直肠癌组织SDF-1、Ephrin B2、ZNF545表达与EMT标志物、临床病理特征和预后的关系

目的 研究结直肠癌组织基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、肝配蛋白B2(Ephrin B2)、锌指蛋白545(ZNF545)表达与上皮间质转化(EMT)标志物、临床病理特征和预后的关系。方法 选择2020年3月至2021年5月该院收治的结直肠癌患者63例,术中取其结直肠癌组织及癌旁正常组织,采用免疫组织化学法检测SDF-1、Ephrin B2、ZNF545及EMT标志物蛋白[包括神经性钙黏附素(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和上皮性钙黏附素(E-cadherin)]表达情况;采用Spearman相关分析SDF-1、Ephrin B2、ZNF545表达与EMT标志物蛋白表达的相关性;绘制Kaplan-Meier生存曲线分析SDF-1、Ephrin B2、ZNF545阴性、阳性表达患者无复发生存率与总生存率情况。结果 结直肠癌组织SDF-1、Ephrin B2阳性率均高于癌旁正常组织,ZNF545阳性率低于癌旁正常组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。结直肠癌组织N-cadherin、Vimentin、E-cadherin蛋白阳性率分别为50.79%(32/...