微小RNA-146a影响血管平滑肌细胞增殖和凋亡的机制

背景:微小RNA-146a通过负调控核因子κB信号通路介导免疫细胞和肿瘤细胞的增殖,但是否参与血管平滑肌细胞的增殖或凋亡未见研究报道。目的:观察微小RNA-146a对血管平滑肌细胞增殖、凋亡的影响及其相关机制。方法:采用脂质体2000将50nmol/L微小RNA-146a反义寡核苷酸转染至大鼠血管平滑肌细胞,以转染错义链及PBS的细胞作为对照。结果与结论:微小RNA-146a反义寡核苷酸转染48h后,血管平滑肌细胞增殖减少(P<0.01)、凋亡增多(P<0.05),细胞的微小RNA-146a水平明显降低(P<0.01),核因子κBp65、增殖细胞核抗原蛋白表达明显降低(P<0.05)。说明微小RNA-146a可以促进血管平滑肌细胞的增殖,抑制凋亡,其机制与增加核因子κBp65表达有关。     

Toll样受体2/核转录因子-κB基因表达与小鼠肝癌淋巴道转移关系研究

目的：探讨Toll样受体2（TLR-2）和核转录因子-κB（NF-κB）基因在小鼠肝癌淋巴道转移中的作用。方法：采用实时定量聚合酶链反应（RQ-PCR）方法检测TLR-2和NF-κB基因在淋巴道低转移潜能小鼠肝癌细胞系Hca-P和高转移潜能小鼠肝癌细胞系Hca-F中的表达水平。结果：TLR-2基因在Hca-P和HcaF细胞系基因表达分别为（2.14±0.42）×10-3、（4.31±0.62）×10-3,NF-κB基因在Hca-P和Hca-F细胞系表达分别为（1.41±0.48）×10-3、（2.95±0.22）×10-3,差异有统计学意义（P〈0.01）,随转移潜能的增高,其表达水平增加。结论：TLR2基因和NF-κB基因表达水平增高提示其在肝癌的淋巴道侵袭转移中起作用,TLR2基因和NF-κB基因有可能成为肝癌转移预测指标和潜在治疗靶点。     

内毒素诱导肝细胞非经典途径分泌HMGB1

目的 探讨内毒素诱导肝细胞释放高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的胞内途径.方法 采用正常大鼠肝细胞BRL-3A培养,观察不同浓度的内质网-高尔基体途径抑制剂布雷菲德菌素A和核转录因子-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷对100μg/L脂多糖诱导后肝细胞培养上清液中HMGB1含量的影响.HMGB1含量采用酶联免疫吸附试验检测.结果 脂多糖诱导后肝细胞培养上清液中HMGB1含量明显升高(P＜0.01),2,10,50μmol/L布雷菲德菌素A处理对HMGB1含量没有影响,而10,50μmol/L二硫代氨基甲酸吡咯烷显著抑制HMGB1的胞外释放(P＜0.05).结论 内毒素诱导肝细胞HMGB1释放与核转录因子-κB通路有关,但不通过经典的内质网-高尔基体途径分泌.     

脂多糖对中性粒细胞核转录因子-κB活性的影响

目的：探讨在脂多糖（LPS）刺激下,中性粒细胞核转录因子-κB（NF-κB）活性变化及其抑制因子（IκBα）的影响。方法：离体培养人中性粒细胞,分为来普霉素B（LMB）干预组（A组）、LPS刺激组（B组）和LPM＋LPS组（C组）。各组分别在刺激后0、15、60、120min,用NF-κBp65试剂盒检测细胞核NF-κB活性,用Western-blot检测细胞核、浆中IκBα含量。结果：A组中各时相点NF-κB活性无明显变化;同一时相点细胞核、浆之间,以及不同时相点细胞核之间、细胞浆之间IκBα含量无明显变化。B组LPS刺激后,NF-κB活性较0点时明显增强;细胞核、浆中各时相点IκBα较未刺激时显著降低;细胞核、浆中呈现一致性变化。C组NF-κB活性于60min时点后,较B组同时相点明显受抑制;胞浆中IκBα于60min时较B组明显减少,而核中IκBα于60min后较B组明显增加。结论：NF-κB活性与核中IκBα含量呈负相关;IκBα在中性粒细胞存在核浆穿梭,通过抑制IκBα核浆穿梭,可显著降低NF-κB活性。     

微小RNA-498在肝癌中的表达及其对细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响

目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-498在肝癌细胞株中的表达,及其对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法 实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测miR-498在肝癌细胞株中表达水平;根据细胞转染不同的片段,分别将肝癌癌细胞分为3组：空白对照组、miR-498模拟物组和miR-498抑制物组。采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)实验检测肝癌细胞的增殖能力;Transwell法检测miR-498对肝癌癌细胞株侵袭能力;细胞划痕实验检测miR-498对肝癌癌细胞株迁移能力的影响。结果 miR-498在4种肝癌细胞株MHCC97H、HCCLM3、HepG2、HEP3B的表达显著下调,分别为0.19±0.03、0.24±0.02、0.38±0.05、0.53±0.05,差异均有统计学意义(t_MHCC97H=9.831,P=0.001;t_HCCLM3=7.382,P=0.002;t_HepG2=5.476,P=0.002;t_HEP3B=5.476,P=0.005)。C...     

热休克蛋白70对感染性脑水肿核转录因子-κB及其抑制蛋白的影响

目的探讨热休克蛋白70（HSP70）对感染性脑水肿大鼠核转录因子一xB（NF—xB）活化及NF-κB抑制蛋白-α（I-κBa）的影响及意义。方法制备百日咳菌液大鼠感染性脑水肿模型。72只SD大鼠随机分为对照组（NS组）、感染性脑水肿组（BE组）及热休克处理组（HSP组），各组分别于注射百日咳菌液或生理盐水4、8和24h处死，取脑组织，采用Western印迹杂交分析法检测脑组织HSP70及I-κBa表达，凝胶电泳迁移率检测法（EMSA）检测神经细胞核提取物NF-κB活性。结果在热休克处理后，HSP组各时间点HSP70表达明显增加，与NS组和BE组比较差异均有显著性（P均〈0．01）。在BE组各时间点中，NF-κB均显示明显的滞留条带，提示NF-κB活性明显增强，而I-κBα表达则明显减低。HSP组各时间点中，NF-κB滞留条带与BE组比较明显减低，而I-κBα表达则明显增强。结论HSP70表达增加可抑制NF-κB活化及I-κBα蛋白降解，提示HSP70对感染性脑水肿具有保护作用，其机制可能与抑制NF-κB活化及I-κBα蛋白降解有关。     

NF-κB在肝细胞及肝脏疾病中作用的研究进展

核因子-κB（NF-κB）是近年来研究极为广泛的转录调控因子，具有多种转录调节活性。参与细胞因子、活化因子、生长因子和粘附分子及某些急性期反应蛋白转录活性的调控，在正常及疾病状态下、在肿瘤的发生和发展过程中有重要作用。NF-κB在肝细胞、肝癌细胞都有表达，在肝移植、肝缺血再灌注损伤等病理生理过程中均发挥重要作用。     

NF-kB在肝细胞肝癌组织中的表达及其意义

目的:探讨核转录因子-κB(NF—κB)在肝细胞肝癌(HCC)组织的表达意义及NF-κB与HCC病人临床病理特征的关系。方法:采用免疫组织化学S—P法检测30例HCC组织NF—κB的表达．以30例相应癌旁肝组织作为对照,所得结果行卡方检验及相关分析进行比较。结果:NF—κB蛋白在HCC组织、癌旁肝组织阳性表达率分别为63．3%(19/30)、16．7%(5/30),有显著差异(P＜0．05);NF—κB表达与性别、年龄、HBsAg、Child分级、肝硬化背景、肿块大小无相关(P＞0．05),与HCC分化程度、AFP水平相关(P＜0．05)。结论:NF—κB对肿瘤的发生起重要作用。     

中度低温对急性胰腺炎大鼠核转录因子-κB表达的影响

目的观察急性出血坏死性胰腺炎（AHNP）后不同时间点胰腺和肺组织中核转录因子-κB（NF-κB）的DNA结合活性动态变化，以及胰腺炎后应用中度低温对NF-κB活性的影响。方法第一部分实验采用牛磺胆酸钠逆行注射造成大鼠AHNP模型。大鼠随机分为正常对照组以及AHNP常温2、5和12h组，用电泳迁移率改变法（EMSA）测定各组大鼠胰腺和肺组织中NF-κB的活性。第二部分实验将大鼠随机分为假手术组、AHNP常温组和低温组，诱导AHNP后2h和5h测定各组胰腺和肺组织中NF-κB的活性。结果急性胰腺炎后大鼠胰腺和肺组织NF-κB活性均持续增强，且各时间点胰腺组织NF-κB活性显著强于肺组织（P均〈0．01）。与AHNP常温组相比，低温组AHNP后2h和5h肺组织NF-κB活性均显著降低（P均〈0．01），而胰腺组织NF-κB活性与常温组差异不明显。结论急性胰腺炎伴有胰腺和肺组织NF-κB活性的显著增强。中度低温对急性胰腺炎后肺组织NF-κB的激活有抑制作用。     

微小RNA-155与脓毒症的调控

脓毒症的发生机制极其复杂.紊乱的固有免疫和适应性免疫均参与发病机制.MicroRNA-155是一个多功能的microRNA,在固有免疫和适应性免疫中发挥重要作用,可成为调控免疫反应、治疗脓毒症的重要靶点.     

NF-κB 在肝细胞肝癌组织中的表达及其意义

目的：探讨核转录因子-κB（NF-xB）在肝细胞肝癌（HCC）组织的表达意义及NF-κB与HCC病人临床病理特征的关系。方法：采用免疫组织化学S—P法检测30例HCC组织NF-κB的表达，以30例相应癌旁肝组织作为对照，所得结果行卡方检验及相关分析进行比较。结果：NF—κB蛋白在HCC组织、癌旁肝组织阳性表达率分别为63．3％（19／30）、16．7％（5／30），有显著差异（P〈0．05）；NF-κB表达与性别、年龄、HBsAg、Child分级、肝硬化背景、肿块大小无相关（P〉0．05），与HCC分化程度、AFP水平相关（P〈0．05）。结论：NF-κB对肿瘤的发生起重要作用。     

转染miR-544a对肺癌细胞侵袭和转移能力的影响

摘要：目的：探讨miR-544a对肺癌细胞的侵袭和转移能力的影响及其分子机制。 方法：用miRNA芯片对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系95C和95D进行miRNA谱系分析,并用荧光定量PCR验证其miR-544a表达水平;用Targetscan软件预测miR-544a的靶基因;Transwell实验观察细胞的侵袭转移能力的变化; western blot验证其表达。 结果：miRNA芯片及荧光定量PCR结果显示,与95C细胞（1.00±0.00）比较,miR-544a在95D细胞中表达上调（2.95±0.26,t=12.94,P<0.05）;Transwell实验结果显示,95C转染miR-544a mimic后增加（32.00±1.00,q=18.67,P<0.01）,95D转染miR-544ainhibitor后,侵袭和转移能力降低（11.00±1.00,q=13.67, P<0.01）;Targetscan软件预测E 钙粘连素（CDH1）可能为miR-544a的靶基因;western blot显示,95C转染miR-544amimic 后,CDH1表达下调,vimentin表达上调（0.202±0.017,0.574±0.009,q分别为63.86, 9.45,P均<0.01）;而 95D转染miR-544a inhibitor后,CDH1表达上调,而vimentin表达下调(0.769±0.014,0.320±0.020,q分别为18.67, 5.99,P均<0.01）。 结论：miR-544a可能通过下调CDH1和上调vimentin的表达来促进肺癌细胞的侵袭和转移。     

靶向核转录因子-κB P65小干扰RNA对脓毒症所致小鼠急性肝损伤的影响

目的 探讨靶向核转录因子(NF)-κB P65 小干扰RNA(siRNA)对脓毒症所致小鼠急性肝损伤的保护作用.方法 将70只雄性昆明小鼠随机分为四组:即健康对照组、脓毒症组、特异干扰组和乱序对照组,后三组每组均设置术后6、12 h两个时间点,每组每个时间点10只小鼠;术前1 h特异干扰组尾静脉注射NF-κB P65 siRNA逆转录病毒,乱序对照组注射Scrambled siRNA逆转录病毒,健康对照组及脓毒症组分别注射等体积生理盐水;除健康对照组小鼠均行盲肠结扎穿孔(CLP)法构建脓毒症急性肝损伤模型;于术后6、12 h留取肝组织标本,检测组织病理学改变,NF-κB P65蛋白表达水平,TNF-α mRNA及蛋白的表达水平.结果.与脓毒症组和乱序对照组比较,特异干扰组术后6、12 h肝内NF-κB P65蛋白的表达均降低,肝脏病理损害均减轻;特异干扰组术后6 h肝内TNF-α mRNA及蛋白水平显著降低(P<0.05).结论.靶向NF-κB P65 siRNA抑制NF-κB的表达后,能够抑制脓毒症所致过度炎症反应,减轻急性肝损伤.     

水飞蓟宾对急性肝损伤中肝细胞胀亡的影响及其机制

目的:探讨水飞蓟宾(SIL)在急性肝损伤中对肝细胞胀亡的影响及其机制.方法:用D-氨基半乳糖(D-GalN)诱导大鼠急性肝损伤模型,用SIL进行干预,于不同时间点检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性及肝组织核转录因子-κB(NF-κB)活性,观察肝组织病理及肝细胞胀亡情况,并计算胀亡指数(OI).结果:SIL能明显降低急性肝损伤模型大鼠血清ALT、AST活性(P均＜0.05),抑制NF-κB活性(P＜0.05),镜下显示肝组织损伤减轻程度,减少肝细胞胀亡,降低OI(P均＜0.05).结论:SIL可减少D-GalN所致大鼠肝细胞胀亡,其机制可能与抑制NF-κB活性有关.     

RNA干扰介导的核转录因子-κB抑制蛋白激酶α和γ基因沉默对核转录因子-κB信号通路调节作用的影响

目的 观察RNA干扰介导的核转录因子-κB抑制蛋白(IκB)激酶(IKK)α和γ基因沉默对核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的调节作用,进一步阐明其基因调控机制.方法 设计IKKα及IKKγ靶向的小分子干扰RNA(siRNA),合成互补的寡核苷酸链,转染到RAW264.7小鼠巨噬细胞.观察经脂多糖(LPS)刺激后NF-κB的活化、IKKα及IKKγ基因表达的变化、NF-κB p65及p50核移位的变化以及前体蛋白NF-κB p105的表达情况.结果 IKKα及IKKγ基因沉默后,可导致IKKα及IKKγ基因表达出现明显下调,同时NF-κB p65及p50的核移位受到抑制,胞质、胞核中NF-κB p65、p50及p105的表达显著下调,而且能抑制NF-κB p65、p50及p105蛋白的核移位.结论 IKKα及IKKγ两种蛋白激酶参与NF-κB信号通路的调节,不仅能分别在抑制蛋白的泛肽化、组蛋白磷酸化等环节发挥作用,而且还能够通过相互之间的协同作用,弥补其中某种蛋白受到过度抑制时所引起的炎症信号通路的功能障碍.     

NF—κB在大肠腺癌组织中的表达与大肠腺癌浸润及转移关系的研究

目的研究核因子一κB（nuclear factor of Kappa B,NF～κB）及核因子一κB抑制蛋白（inhibi—tionof κB,IκB）在大肠腺癌、大肠管状腺瘤、正常大肠肠黏膜组织中的表达情况,探讨其在大肠腺癌发生、浸润、转移中的作用。方法应用免疫组织化学方法检测60例大肠腺癌、23例大肠管状腺瘤、26例正常肠黏膜组织中NF—κB蛋白表达情况。应用逆转录聚合酶链法检测40例大肠腺癌、15例正常肠黏膜组织中IκBmRNA的表达情况。结果NF—κB蛋白在大肠腺癌组织中的阳性表达明显高于大肠管状腺瘤和正常肠黏组织,且差异均具有统计学意义（P均〈0．05）;NF—κB蛋白表达癌组织侵达浆膜组显著高于侵达肌层组,有淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组,且差异均具有统计学意义（P均〈0．05）;IκBmRNA在大肠腺癌组织中的表达量显著高于正常肠黏膜,且二者差异有统计学意义（P〈0．01）;IκBmRNA表达量癌组织侵达浆膜组显著高于侵达肌层组,有淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组,且差异均有统计学意义（P均〈0．01）;NF—κB蛋白的活化程度和IκBmRNA表达量呈高度正相关（r=0．732,P〈0．01）。结论NF—κB是大肠腺癌的相关因子,在大肠腺癌的发生、发展及浸润、转移过程中有重要作用。     

生长激素对急性肺损伤的影响

目的探讨应激反应阶段生长激素（GH）对脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤（ALI）的影响及其机制。方法112只雄性SD大鼠随机均分为ALI组和GH组，按致伤与否及致伤后的观察时间又随机均分为0、0．5、1、2、4、6和24h7个亚组。分别测定大鼠肺泡隔面积密度（PASAD），肺泡隔中性粒细胞数，肺局部肿瘤坏死因子（TNF）和白细胞介素-6（IL-6）水平，肺组织核转录因子-κB（NF-κB）阳性细胞数和肺匀浆液中NF-κB抑制蛋白（I-κBα）含量。结果致伤后ALI组大鼠PASAD进行性增大，肺泡隔中性粒细胞数进行性增多，两者均于6h达峰值，24h基本恢复正常；GH组大鼠PASAD较ALI组同时间点进一步增大，中性粒细胞数增多更明显。ALI组致伤后0．5h肺局部TNF水平开始迅速升高，1h达峰值，其后维持在较高水平，6h后逐渐恢复；致伤后1h IL-6水平开始明显升高，4h达峰值，6h后逐渐恢复；GH组大鼠IL-6水平升高更明显。ALI组致伤后0．5h肺组织中NF-κB阳性细胞数明显增多，4h达峰值，6h开始恢复；GH组大鼠肺组织NF-κB阳性细胞数明显多于ALI组同时间点。伤后0．5h I-κBn含量开始明显下降，4h达最低值，6h后开始回升；GH组大鼠肺组织I-κBa含量下降更明显。相关性分析显示，PASAD、肺组织TNF和IL-6水平及肺泡隔中性粒细胞浸润程度与NF-κB的表达、活化程度呈正相关。结论NF-κB表达、活化在LPS诱导ALI的发病过程中有重要作用。应激反应阶段应用GH可加剧LPS诱导的ALI。其机制与促进肺局部NF-κB表达与活化而加剧肺局部炎症反应有关。     

NF-κB在肝细胞及肝脏疾病中作用的研究进展

核因子-κB(NF-κB)是近年来研究极为广泛的转录调控因子,具有多种转录调节活性。参与细胞因子、活化因子、生长因子和粘附分子及某些急性期反应蛋白转录活性的调控,在正常及疾病状态下、在肿瘤的发生和发展过程中有重要作用。NF-κB在肝细胞、肝癌细胞都有表达,在肝移植、肝缺血再灌注损伤等病理生理过程中均发挥重要作用。     

微小RNA-1291对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及机制研究

目的 探讨微小RNA-1291(miR-1291)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及机制。方法 通过公共数据库分析miR-1291在胃癌组织、正常胃组织中的表达。培养人胃癌细胞SGC-7901、人胃黏膜上皮细胞GES-1,比较miR-1291表达水平。将miR-1291 mimic、miR-NC、miR-1291 inhibitor、miR inhibitor质粒分别转染至SGC-7901细胞,设为miR-1291组、miR-NC组、miR-1291 inhibitor组、miR inhibitor组。将BMP激活素膜结合抑制因子(BAMBI) mimic质粒、Vector质粒、sh-BAMBI质粒、sh-NC质粒分别转染至SGC-7901细胞中,设为BAMBI组、Vector组、sh-BAMBI组、sh-NC组。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,采用Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-1291和BAMBI mRNA表达水平,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测BAMBI、转化生长因子-β(TGF-β)...