人糖链抗原242电化学发光免疫分析检测法的建立

目的 建立一种快速、特异、灵敏的检测人糖链抗原242(CA242)的电化学发光免疫分析法(ECLIA).方法 以链霉亲和素包被的磁性微粒、生物素标记的抗CA242单克隆抗体、钌复合物标记配对的抗CA242单克隆抗体组成CA242 ECLIA检测试剂,在ECLIA分析仪上对其特异性、精密度、灵敏度等效能进行方法学评价;用...     

免疫PCR检测HIV-p24抗原的实验研究

目的建立检测HIV-p24抗原的高灵敏度免疫PCR方法。方法以金磁微粒为免疫PCR载体、鼠抗HIV-p24单抗为捕获抗体、生物素化的羊抗p24多克隆抗体为检测抗体,通过链亲和素的桥联标记生物素化的多抗,被双抗体夹心捕获的人重组HIV-p24抗原通过PCR扩增报告DNA的方式予以检测;用方阵滴定法确定最适链亲和素和标记DNA浓度,用Quantity One凝胶定量软件分析电泳图像。结果链亲和素浓度和用于标记的DNA的浓度分别控制在0.1mg/L和10ng/L;免疫PCR检测的灵敏度为0.1ng/L,比传统ELISA法检测的灵敏度高。结论高灵敏度的免疫PCR适用于早期筛检HIV-p24抗原。     

生物素-链霉亲和素ELISA检测血清CTGF方法的建立及其初步应用

目的 建立生物素-链霉亲和素ELISA检测血清CTGF的方法(简称“系统ELISA血清CTGF法”),初步评估CTGF在诊断慢性肝炎(CHB)患者肝纤维化的临床价值.方法 用生物素化抗CTGF单克隆抗体和多克隆抗体建立生物素-链霉亲和素ELISA方法,测定CHB患者血清CTGF水平.264例CHB患者根据肝穿刺病理诊断...     

降钙素原生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附分析法的建立

目的建立生物素一链霉亲和素酶联免疫吸附分析（biotin．streptavidinamplifiedELISA,BA．ELISA）法半定量检测人血清中降钙素原含量。方法通过双抗体夹心法,结合生物素一链霉亲和素系统的放大作用,建立降钙素原的半定量检测方法。并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果该方法的最低检测限为0．12mg／mE,线性范围为0．12～20ng／mL,回收率为98．59％。分析内和分析间变异系数分别为4．9％～16．8％和7．1％～14．9％。与降钙素原结构类似物及血清中常见的干扰物质特异性良好。通过对73例血清样本进行检测分析,当阈值为0．5ng／mL时,敏感性和特异性分别为100％和96．0％。结论本研究建立的降钙素原生物素一链霉亲和素酶联免疫吸附分析法具有灵敏、简便、准确等特点,具有良好的应用前景。     

生物素-亲和素ELISA技术检测H BeAg与抗H Be

生物素-亲和素系统(BAS)是一种新型生物反应放大系统,具有很高的灵敏度和特异性.我们参考有关文献建立了生物素-亲和素ELISA 检测技术,提高了检测HBeAg和抗HBe的灵敏度。     

BAS-TRFIA法检测抗环瓜氨酸肽抗体方法学的建立

目的利用生物素-链霉亲和素放大系统建立一种可快速、灵敏地定量检测患者血清中抗环瓜氨酸肽(anticyclic citrullinated peptide,CCP)抗体的时间分辨荧光免疫分析法(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)。方法将链霉亲和素同铕标记二乙烯三胺五乙酸酐结合制备铕标记链霉亲和素衍生物;生物素同兔抗人IgG抗体结合制备生物素化IgG抗体,后者在免疫检测系统中可联结铕标记亲和素和抗CCP抗体从而形成复合物。最后通过测量Eu3+-链霉亲和素在615nm的荧光值计算血清抗CCP抗体水平。结果该方法具有更宽的线性范围,其线性范围为0.58-9463U/ml,而应用ELISA试剂盒检测线性范围只有18.48-591.4U/ml。此外,该方法的抗CCP抗体检测限可达0.5U/mL。回收率为96.45-104.63%。用BAS-TRFIA和ELISA法测得的值具有很好的相关性(R2=0.892 7)。结论本研究数据表明我们的建立的BAS-TRFIA法在测定抗CCP抗体上较传统ELISA试剂盒有很大改进,为RA的诊断和治疗提供了一个更为理想的免疫方法学选择。     

生物素—链霉亲和素免疫学法测定地高辛直接包被方法的研究

笔者曾经成功地应用德国ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｈｅｉｍ公司生产的现成的链霉亲和素包被管建立了生物素－链霉亲和素免疫学潮测定地高辛的反应模型。本文用国产的链霉亲和素自行包被，采用的是一种直接包被方法，即将链霉亲和素溶于去离子水，冰箱过液包被２４ｈ，并应用到地高辛的临床检测中，其灵敏度为０．０７８１μｇ／Ｌ，最低检测限为０．１９５２μｇ／Ｌ，测定三份低、中、高浓度血清标本，批内变异系数分别为８．７％     

BSA系统ELISA检测前列腺特异抗原方法的建立

前列腺特异抗原(PSA)作为肿瘤标志物,可用于前列腺癌的早期诊断,病理分析及疗效监测等[1].国外大多利用放射免疫法检测,其灵敏度高,但需要特殊设备.我们利用生物素-链霉亲和素(BSA)系统建立了检测PSA的方法,特予介绍.     

结合链霉亲和素的高分子造影剂的制备及其初步应用

目的 制备一种结合链霉亲和素的高分子超声造影剂,并与生物素化抗体结合,考察其体外寻靶能力.方法 采用双乳化法制备高分子材料PLGA-COOH超声造影剂;并用碳二亚胺法将造影剂与亲和素耦联,制备出结合链霉亲和素的高分子超声造影剂.检测该造影剂一般特性;采用红外与免疫荧光检测亲和素与PLGA-COOH超声造影剂连接的情况.检测生物素-亲和素技术使该造影剂与生物素化抗体结合后其体外寻靶能力.结果 红外检测与免疫荧光检测显示亲和素被成功地连接在高分子造影剂上,并存在活性.体外寻靶实验显示,与生物素化单抗结合后的靶向高分子造影剂较多并牢固地聚集到肝癌细胞表面.结论 成功制备了结合链霉亲和素的高分子超声造影剂,该造影剂与生物素化抗体结合后于体外对肝癌细胞具有较强的亲和力.     

超声微泡连接特异性抗体的制备方法及靶向化处理因素对超声微泡物理性质的影响

目的 探讨超声微泡连接特异性抗体的制备方法及靶向化处理因素对超声微泡物理性质的影响.方法 应用生物素-链霉亲和素连接系统,使注射用六氟化硫微泡(SonoVue)与特异性抗血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)抗体相连接,用间接免疫荧光法检测抗体与微泡的连接,用马尔文激光粒径分析仪分别测定生物素化处理前后微泡的粒径,采用超声诊断仪评价微泡靶向化构建前后的显像效果.结果 SonoVue与特异性抗体成功连接,间接免疫荧光检测呈阳性.生物素修饰后的微泡粒径分布变窄,与普通微泡的超声显像效果略有差异.结论 通过生物素-链霉亲和素系统可以成功靶向化构建超声微泡,靶向化处理因素对微泡的粒径有一定影响,对微泡的超声显影效果略有影响.     

人血清中总前列腺特异性抗原化学发光免疫分析法的建立

目的建立一种定量分析人血清中总前列腺特异性抗原（t—PSA）的化学发光免疫分析方法。方法采用生物素和碱性磷酸酶分别标记捕获抗体与检测抗体,与样本中的抗原形成免疫复合物,然后通过链霉亲和素与生物素的反应被链霉亲和素标记的磁微粒捕获,利用碱性磷酸酶与发光底物的反应建立了双单抗夹心法检测人血清中t—PSA的化学发光免疫分析方法。结果标准品对WHO96／670国际标准品进行溯源,同时检测血清样本,线性回归方程为y=0．9434X-0．1605,相关系数r=0．99。选择具有等摩尔分子反应性的单抗,对不同存在形式的PSA检测偏差在士3％以内。病人血清样本的测试结果与雅培architecti2000化学发光试剂盒检测结果显著相关,相关系数r=0．989。结论该方法具有较高的灵敏度和重复性,检测结果准确,提高了国产同类试剂的竞争力,同时比同类进口试剂成本低,适于临床检测和科研应用。     

BSA系统ELISA检测前列腺特异抗原方法的建立

前列腺特异抗原(PSA)作为肿瘤标志物,可用于前列腺癌的早期诊断,病理分析及疗效监测等[1]。国外大多利用放射免疫法检测,其灵敏度高,但需要特殊设备。我们利用生物素-链霉亲和素(BSA)系统建立了检测PSA的方法,特予介绍。一、材料和方法1.材料　PSA及兔抗PSA血清见文献[2];活化生物素及链霉亲和素(SA),章谷生教授惠赠。2.方法(1)活化生物素标记兔抗PSA及最佳条件选择　活化生物素用二甲基酰胺法标记兔抗PSA。经多次棋盘滴定确定,每mg抗体标记150μg活化生物素最好,抗体最佳包被浓度为2.5μg/ml,Bio-Ab最适工作滴度为1∶300。(2)SA…     

血清γ-谷氨酰基转肽酶ELISA检测方法的建立及其在原发性肝癌诊断中的临床应用研究

目的建立可用于血清蔓陀罗凝集素(DSA)-γ-谷氨酰基转肽酶(GGT)检测的酶联免疫吸附法(ELISA),并探讨其在原发性肝癌(PHC)诊断中应用价值。方法制备抗DSA-GGT单克隆抗体(McAb),经蛋白G亲和层析柱色谱纯化后进行生物素标记,构建血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法。用建立的方法对健康者、PHC患者和非PHC患者进行DSA-GGT检测,并进行方法学评价;采用受试者工作曲线(ROC曲线)确定DSA-GGT诊断PHC的临界值。结果所构建ELISA检测方法的最低检测限为2μg/L,平均批内、批间变异分别为8.9%和11.5%。健康者血清DSA-GGT水平呈正态分布,参考范围为(1.50±0.51)μg/L;经ROC曲线分析,确定其诊断PHC的临界值为3.25μg/L;其诊断PHC灵敏度为66.7%(28/40)、特异度为91.8%(112/122)。结论所建立的血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法具有良好方法学性能,其诊断PHC的灵敏度、特异度良好,为PHC实验室诊断提供了新的方法。     

生物素—链霉亲和素系统试剂在检测HBsAg中的应用

从ELISA用于检测抗原抗体以来,衍生的各种改良方法不断涌现,使乙型肝炎诊断技术逐步改进和完善。ELISA与生物素一亲和素系统的结合,增高了检测的敏感性,但由于亲和素(AV)对聚苯乙烯有较高的阴性显色,近几年,链霉亲和素(SA)的问世,     

生物素—链霉亲和素系统在检测HBe系统中的应用

应用链霉亲和素(SA)和生物素系统发展成ELISA 的改良法,用于检测HBeAg 和抗-HBe,取得较为满意的效果。标记SA—HRP 时,两者的重量比以0.5～0.8/1为佳,浓度以7μg/ml 时最为理想;SA-HRP 的反应时间以30 min 为适宜。本法和BA 法、普通法进行检测抗-HBe 的灵敏度比较,其相对灵敏度高于后二者。用Abbott 试剂作为标准。检测HBeAg 100人份、抗-HBe 87人份,其阳性、阴性及总符合率均高于BA 法和普通ELISA,BSA 法提高了方法的特异性及灵敏度,在应用上有着广阔的前景。     

血清肝癌特异性γ-谷氨酰转移酶ELISA检验方法的建立及临床应用

目的 应用抗人肝癌组织中蔓陀罗凝集素(DSA)强结合的γ-谷氨酰转移酶(GGT)单克隆抗体(MeAb),建立其血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法 ,并探讨其在原发性肝癌(PHC)诊断的应用价值.方法 通过McAb技术制备的抗DSA-GGT的McAb,采用蛋白G亲和层析柱色谱纯化;纯化的McAb经生物素标记后,构建血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法 .用建立的方法 对39例PHC患者和122例非PHC患者进行初步临床应用研究,用P-P概率图检验119例健康对照血清DSA-GGT分布状态,依据受试者工作曲线(ROC)确定DSA-GGT诊断PHC的cut-off值.结果 获取5株分泌McAb杂交瘤细胞制备的腹腔积液,经纯化后McAb蛋白总量在2.12～6.70 mg之间;McAb的生物素标记率为48.6%～72.2%.所构建的血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法 的最低检出限为2μg/L;平均批内、批间变异分别为8.9%和11.5%.119份健康对照血清DSA-GGT水平呈正态分布,x±s为(1.50±0.51)μg/L;经ROC分析确定其诊断PHC的临界值为3.25μg/L.39例PHC患者26例DSA-GGT阳性,其诊断PHC敏感度为66.7%;122例非PHC患者10例DSA-GGT阳性,其诊断特异度为91.8%.结论 所建立的血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法 具有良好的重复性和可靠性.临床初步应用表明其诊断PHC的敏感度、特异度良好,且方法 操作简便,便于临床推广应用,为PHC实验室诊断提供了新方法 .     

核心链霉亲和素基因的克隆及其在大肠埃希氏菌中的表达

目的 克隆、表达核心链霉亲和素(core-strepavidin,core-SA)基因.方法 人工合成核心链霉亲和素基因;克隆到pET22b原核表达载体中,转化大肠埃希氏菌BL21,IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE分析;目的 蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化,采用改良过碘酸钠法标记HRP,ELISA法检测比较HRP-SA与商品化HRP-SA的活性.结果 人工合成的354bp DNA片段经测序确证为核心链霉亲和素基因.将构建的重组表达质粒pET 22b-core SA转化大肠埃希氏菌BL21,经IPTG诱导后得到可溶性的表达产物.SDS-PAGE显示目的 蛋白相对分子质量为14 000,与理论值相符.在非变性条件下纯化目的 蛋白,经HRP标记后用ELISA法检测,结果 表明自制的HRP-SA与商品化HRP-SA的活性相当.结论 成功克隆和表达了核心链霉亲和素基因.     

心肌营养素-1 ELISA测定法的建立及初步应用

目的 应用生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附法(BSA-ELISA)建立血浆心肌营养素-1(CT-1)测定法,并初步应用于冠心病患者血浆CT-1水平的检测。方法 用鼠抗重组人CT-1单抗包被酶标板,加入待测抗原,并依次加入生物素化羊抗重组人CT-1多克隆抗体、辣根过氧化物酶标记链霉亲合素,用H2O2-邻苯二胺显色。检测35名冠心病患者及对照组血浆CT-1含量的变化。结果 方法的线性范围为10～2000pg／ml,检测下限为10pg／ml,批内变异系数为1．76％～7．64％,批间变异系数为5．96％～9．04％。结论 该方法简便、快速,特异性、敏感性、重复性均在临床检测可接受范围内,标准曲线线性良好,适用于基础研究与临床检验。     

液相芯片法验证蛋白质免疫印迹试验检测HIV-1结果的敏感性和特异性

目的初步分析采用液相芯片法研制人类免疫缺陷病毒(HIV)-1检测试剂的可行性。方法采用液相芯片技术用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测HIV-1阳性和阴性的标本;用HIV-1的gp120、gp41、p24抗原分别包被不同编号的免疫磁珠,与生物素化二抗、亲和素化荧光染料PE组成液相芯片检测系统,对标本进行检测分析。结果 55份标本经Western Blot法确认阳性样本检测符合率为100%;76份经酶联免疫吸附试验(ELISA)初检和复检阴性的标本检测HIV-1gp120、HIV-1gp41、HIV-1p24抗原均为阴性;86份经ELISA法检测初检和复检为阳性而Western Blot法确认为阴性的样本,其HIV-1gp120、HIV-1gp41、HIV-1p24单片段检测均为阴性。液相芯片法检测HIV-1抗体的敏感度和特异度均为100%。结论采用液相芯片技术组成的HIV-1抗体检测系统,其敏感度和特异度均优于ELISA法检测。     

纳米金标记银染增强法快速检测痰液结核分枝杆菌

目的建立快速检测结核分枝杆菌(MTB)的纳米金标记银染增强法(金标记银染法)。方法以MTB的IS6110基因为靶基因,分别与互补的纳米金探针、生物素探针杂交,形成三明治杂交结构,然后借链霉亲合素将靶序列锚定在酶标孔内,通过纳米金催化的银染放大效应产生高灵敏的识别信号,在酶联仪上检测其吸光度(A)值。用本法、传统固体培养法、PCR法检测90例可疑患者痰标本并进行比对。结果金标记银染法检测限达1 pmol/L,90例临床标本的MTB检出率与PCR法均为42.2%(38/90);培养法MTB检出率为36.7%(33/90),金标记银染法与其检测结果差异无统计学意义(P0.05)。结论成功构建了金标记银染法,可直接应用于临床疑似肺结核患者痰标本的快速检测,具有简便快速、灵敏度高、特异性强等优点。