布鲁氏菌血清 IgM,IgG 抗体胶体金免疫层析检测方法的建立及初步临床应用

目的　应用胶体金免疫层析技术建立一种快速检测布鲁氏菌 IgM,IgG 抗体的方法,并进行初步的性能验证。方法　采用枸椽酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗重组布鲁氏菌抗原,将鼠抗人 IgG 抗体、鼠抗人 IgM 抗体和兔抗布鲁氏菌抗体喷在硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,对 pH 值和抗体浓度等条件优化;评估试剂盒灵敏度、特异度、交叉反应、准确度、精密度和干扰实验;用该方法对临床的 400 份血清进行检测,试管凝集试验验证其准确性。结果　该试纸条最佳胶体金标记的 pH 值为 7.5,标记重组抗原质量浓度为 30?g/ml。方法的灵敏度和稳定性较好且与其他病原菌无交叉反应。血清总胆红素、血脂和血红蛋白浓度的增高会使试纸条显色结果减弱。对400份临床样本进行检测,其结果与试管凝集试验的符合率为 93.75%。结论　该试验建立的布鲁氏菌 IgM/IgG 抗体的胶体金免疫层析检测方法具有较好的特异度和稳定性,整个检测过程可在 15min 内完成,能够快速检测样品血清,适用于现场快速检测。     

免疫胶体金渗透技术检测抗卵巢抗体的试验研究

目的建立免疫胶体金渗透技术检测抗卵巢抗体(AOAb)的新方法。方法采用人源卵巢抗原,以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG为标记抗体,根据免疫胶体金技术原理,建立免疫胶体金渗透技术法检测人血清抗卵巢抗体。分别检测72份抗卵巢抗体阳性血清和88份健康体检女性血清,并与酶联吸附试验的结果进行对比分析。结果与酶联免疫吸附试验的结果对比,其符合率为88.75%,特异性为90.91%,敏感度为86.11%。交叉试验与重复试验结果显示,免疫胶体金渗透技术测定抗卵巢抗体具有稳定性和特异性。结论免疫胶体金渗透技术可以快速准确地测定血清抗卵巢抗体,便于推广普及。     

幽门螺杆菌IgG抗体免疫层析分型方法的建立

目的建立1种检测血清中抗幽门螺杆菌(Hp)抗体的胶体金免疫层析(GICA)方法。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记SPA,将Hp重组抗原VacA、CagA和UreaA、UreaB抗原包被于硝酸纤维素膜NC上,制成免疫层析检测试纸条.血清中的抗Hp抗体与测试条上金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上的固相抗原结合形成肉眼可见的酒红色线条。结果用GICA与免疫印迹试剂盒对比检测了180份血清标本中抗Hp抗体,显示本方法检测敏感度、特异度分别为95.4%和96.3%,两法总符合率为96.1%。结论用这种免疫层析GICA分型方法检测血清中抗Hp抗体,灵敏度高、特异性强、简便快速,有着广泛临床应用前景。     

软海绵酸胶体金免疫检测法的建立与应用

目的 建立并应用软海绵酸(OA)胶体金免疫层析检测法.方法 通过纯化抗OA单抗、制备胶体金、标记单抗、制备胶体金试剂条、样品模拟提取与加标回收检测、贝类染毒提取及检测,建立和优化金标免疫层析法.结果 选择30 nm胶体金颗粒用于单抗标记,金标单抗浓度为200 μg/mL,金标单抗包被量为2.5 μL/cm,二抗包被浓度为1.0 mg/mL,反应时间为3～5 min,对加标贝肉和染毒贝类的检测灵敏度为25 ng/mL.结论 建立了可用于OA检测的胶体金免疫层析检测法,满足规定的贝类OA含量安全阈值,为腹泻性贝毒检测与食品安全检验提供了新的技术方法.     

胶体金渗滤法检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗体

目的 建立一种快速、简易的检测血清中抗幽门螺杆菌(HP)细胞毒素相关蛋白A(CasA)抗体的胶体金免疫渗滤法(DIGFA)。方法 采用枸橼酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记葡萄球菌A蛋白(SPA),将重组的CagA抗原固定于硝酸纤维素膜上。血清中抗CagAIgG与金标记SPA及硝酸纤维素膜上的固相抗原结合后,形成肉眼可见的红色斑点。结果 用DIGFA与酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒对比检测了326份血清标本中抗CagA抗体,两法符合率为96．6％。结论 DIGFA检测血清中的抗CasA抗体特异性强,简便快速,无需特殊仪器设备,有实用价值。     

早期快速诊断肾综合征出血热胶体金试纸条的研制

目的 建立一种可早期、快速检测肾综合征出血热(HFRS)患者血清中抗汉坦病毒IgM抗体的胶体金试纸条方法.方法 用胶体金标记纯化的汉坦病毒重组核蛋白(rNP),将羊抗人μ链抗体固定于硝酸纤维素膜上作为检测区,以鼠抗汉坦病毒抗体作为质控区,组装成免疫层析试纸条检测HFRS确诊患者以及健康人血清,并与ELISA对照,评价其特异度和敏感度.结果 在试纸条加入待检血清后10～15 min内即可获得结果,经临床ELISA确诊的50份HFRS患者血清均呈阳性,健康人血清标本均为阴性.结论 该胶体金免疫层析快检纸条与ELISA法的检测结果具有很高符合率,可用于HFRS患者的早期诊断,该法操作简便、反应迅速、无需特殊仪器设备,适于在基层医疗单位推广使用.     

胱抑素C抗体的质量评价及应用分析

目的将日本进口的胱抑素C（Cys C）抗体与某公司制备的兔抗Cys C抗体、羊抗Cys C抗体进行质量检测,初步应用试验评估这3种抗体能否用于定量检测血清Cys C （胶体金免疫比浊法）试剂盒的研发。方法分别用紫外分光光度法、二喹啉甲酸（BCA ）法检测3种Cys C抗体浓度;以聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其纯度;采用酶联免疫吸附法（ELISA）测效价;然后将这3种Cys C抗体分别标记胶体金颗粒,以胶体金免疫比浊法测定血清Cys C ,比较其初步应用性。结果日本进口Cys C抗体浓度高达15．0～16．0 mg/mL ,某公司自制兔抗Cys C抗体、羊抗Cys C抗体浓度范围在3．0～4．0 mg/mL之间;聚丙烯酰胺凝胶电泳显示3种抗体纯度相近,结果为85％。其抗体效价大于或等于1∶104;胶体金免疫比浊法测定Cys C的临床比对结果证实公司自制抗体与日本进口Cys C抗体有较好的可比性。结论某公司的兔抗Cys C、羊抗Cys C抗体与日本进口Cys C抗体虽浓度不同,但均具有高纯度和高效价的特点,可用于定量检测血清Cys C（胶体金免疫比浊法）试剂盒的研发。     

胶体金免疫层析法检测乙型肝炎病毒表面抗原

目的建立一种简易快速、自测式胶体金免疫层析法（ＧＩＣＡ）用于检测血清中乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒、标记乙型肝炎病毒表面抗体（抗ＨＢｓ），制成免疫层析检测试条。血清中ＨＢｓＡｇ与测试条上金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动，与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条。结果ＧＩＣＡ试条只与ＨＢｓＡｇ有特异性反应，与乙型肝炎病毒核心抗原、ｅ抗原等无交叉反应。检测中国药品生物制品检定所ＨＢｓＡｇ标准品，灵敏度可达１ｎｇ／ｍｌ。用ＧＩＣＡ与酶免疫法比较检测了３９５份不同血清标本中ＨＢｓＡｇ，两法符合率为９９．０％。结论ＧＩＣＡ检测血清中的ＨＢｓＡｇ特异性强、灵敏度高、简便快速，无需特殊仪器设备，有广泛应用价值。     

胶体金免疫层析法检测乙型肝炎病毒表面抗原

目的 建立一种简易快速，自测式胶体金免疫层析法（ＧＩＣＡ）用于检测血清中乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）。方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记乙型肝炎病毒表面抗体（抗ＨＢｓ）制成免疫层析检测试条，血清中ＨＢｓＡｇ与测试条件上金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动，与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条。结果 ＧＩＣＡ试条只有ＨＢｓＡｇ有特异性反应，与乙型肝炎病毒核心抗原，ｅ抗原等无交     

胶体金免疫斑点法检测人巨细胞病毒pp150抗体

目的：建立一种简便、快速的检测血清中人巨细胞病毒（HCMV）抗pp150抗体的胶体金免疫斑点法。方法：采用Frens法制备胶体金颗粒，标记葡萄球菌A蛋白（SPA），将本所利用基因工程技术生产的pp150抗原固定于0．45μm孔径的硝酸纤维素膜上，制成免疫斑点检测装置。血清中抗pp150 IgG与硝酸纤维素膜上的抗原结合，然后滴加胶体金标记的SPA，在膜上可形成肉眼可见的红色斑点。结果：胶体金免疫斑点法与ELISA试剂盒对比检测了200份临床确诊血清标本中抗pp150 IgG抗体，胶体金法的特异性和敏感性分别为92％和90％。结论：胶体金免疫斑点法检测血清中的抗pp150抗体特异性、灵敏度较高，简便快速，不需要昂贵的仪器。     

胶体金标记单克隆抗体测定单增李斯特菌试剂盒制备

目的制备单增李斯特菌54001、54002型的单克隆抗体（McAb）,制备胶体金标记单增李斯特菌抗体免疫层析检测试剂板。方法以纯化单增李斯特菌为抗原,免疫Balb／c小鼠,制备单克隆抗体,鉴定其特性,建立并验证胶体金标记单增李斯特菌抗体免疫层析试剂板的检测方法。结果筛选出2株单抗杂交瘤细胞株F5、F9,免疫球蛋白亚类均为IgM。通过选用柠檬酸钠法制备胶体金,测定其最适结合蛋白浓度为28g/ml,制备胶体金标记单增李斯特菌抗体免疫层析检测板。结论为产单核李斯特菌提供了一个方便、快捷、切实有效的检测技术。     

胶体金免疫层析技术同步检测甲、戊型肝炎病毒IgG抗体的研究

[目的]探索并建立胶体金免疫层析(GICA)同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒的IgG抗体的方法。[方法]采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记鼠抗人IgG单克隆抗体，制成免疫层析测试条。血清中甲、戊型肝炎的特异性IgG抗体与测试条上金标抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动与膜上固相包被的抗原(HAAg、HEAg)、抗体(羊抗鼠IgG)结合形成肉眼可见的红色线条。[结果]自制的GICA试条与EIA对比检测血清标本188份，各单项指标抗-HAV IgG、抗-HEV IgG两法总符合率分别为98．9％、98．9％，检测灵敏度可达1ng／ml。[结论]用于同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒特异性IgG抗体的GICA试条的制备条件已基本建立；其检测结果特异性强、灵敏度高、操作方法简便、快捷，无需特殊仪器设备，有广泛的应用价值。     

胶体金免疫层析技术同步检测甲、戊型肝炎病毒IgM抗体的研究

目的 建立胶体金免疫层析(GICA)同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒的IgM抗体的方法。方法 采用胶体金标记鼠抗人IgM单克隆抗体，制成免疫层析测试条。血清中甲、戊型肝炎的特异性抗体与测试条上金标抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动与膜上固相包被的抗原(HAAg、HEAg)、抗体(羊抗鼠IgM)结合形成肉眼可见的红色线条。结果 自制的GICA试条与EIA对比检测血清标本188份，各单项指标IgM—抗HAV、IgM-抗HEV两法总符合率依次为97．9％、98．4％，检测灵敏度可达2ng／ml。结论 用于同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒特异性抗体的GICA试条的制备条件已基本建立；其检测结果特异性强、灵敏度高、操作方法简便快捷且无需特殊仪器设备。     

血清和尿液中黄醇结合蛋白胶乳增强免疫比浊试剂盒的制备及性能评价

目的利用胶乳增强免疫比浊原理,建立一种血清及尿视黄醇结合蛋白(RBP)的检测方法。方法通过共价交联将抗人RBP多克隆抗体标记到胶乳微球表面,利用抗体与RBP产生的特异性反应,促使胶乳颗粒产生凝集,从而建立RBP胶乳增强免疫比浊的检测方法,并对该方法进行了精密度、准确度、线性和相关性实验。结果该检测方法诊断界值为0.2mg/L,重复测定2个浓度的质控品各20次,其批内、日间精密度变异系数(CV)5%;线性范围为0.2~200.0mg/L,平均回收率为100.1%,尿液及血清与商品化试剂盒决定系数分别为0.983 3和0.991 3。结论该研究建立了血清及尿液RBP胶乳增强免疫比浊检测方法,各项性能指标均达到临床检测要求,可用于临床血清及尿液RBP浓度的检测。     

胶体金免疫结合试验在检验医学中的应用

胶体金免疫结合试验是在酶免疫结合试验的基础上发展起来的一种固相标记免疫测定新技术。其特点是单份测定、简单、快速、除商品试剂外不需任何仪器设备 ,几分钟即可用肉眼观察结果。目前已在临床检测中获得广泛应用。现就其检测原理、试剂制作及应用现状和展望作一介绍。一、胶体金免疫结合试验的检测原理胶体金免疫结合试验的检测原理是以微孔滤膜为载体 ,包被已知抗原或抗体 ,加入待检标本后 ,经滤膜的毛细管作用使标本中的抗体或抗原与膜上包被的抗原或抗体结合 ,再通过胶体金结合物达到检测目的。根据检测装置的不同可分为金免疫渗滤试…     

斑点金免疫渗滤试验检测不育者血清抗精子抗体

目的研究一种快速鉴定抗精子抗体的新方法的临床意义。方法用化学试剂提纯精子抗原,将其结合于硝酸纤维素膜上;以胶体金颗粒结合的羊抗人lgG作为标记抗体,以斑点金免疫渗滤试验(Dot-immunogoldfiltrationassay,DIGFA)检测人血清抗精子抗体。结果抗原抗体通过渗滤在膜上进行反应,10min内即可用肉眼观察结果,在289例临床血清标本的检测中,阳性率为21%,与酶联免疫吸附试验(ELISA)的结果基本相符。结论斑点金免疫渗滤试验可快速测定抗精子抗体,具有推广使用的价值。     

胶体金免疫层析法检测大肠杆菌O157:H7的实验研究

目的:建立一种简单实用的胶体金免疫层析法用于食品样品中大肠杆菌O157:H7的快速筛查.方法:采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒.标记抗E.coli O157:H7单克隆抗体,制备免疫胶体金复合物,组装胶体金免疫层析快速检测试纸条,并对其特异性、灵敏度和稳定性进行了测试和评价.结果:该试纸条特异性较好,不与其他受试菌株发生交叉反应,检测灵敏度为105 CFU/mL.120份人工污染E.coli O157:H7模拟食品样本增菌后检测,该法检测阳性118份,灵敏度高达98.3%.结论:本实验成功研制了E.coliO157:H7胶体金免疫层析试纸条,该试纸条具有灵敏度高、特异性好、检测速度快、操作简便等优点,可用于现场大量样品的初筛.     

免疫胶体金检测不孕症患者血清EMAb

目的建立快速测定抗子宫内膜抗体(EMAb)的新方法.方法采用经Sepharose4B免疫吸附柱亲和层析纯化的人子宫内膜抗原(EMAg),以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG为标记抗体,根据免疫胶体金技术原理,建立斑点金免疫渗滤法(DIGFA)检测人血清EMAb.共检测500份不孕者血清并与酶联免疫吸附试验(ELISA)作对比研究.结果纯化的人子宫内膜抗原与患者血清中特异性EMAb通过渗滤在硝酸纤维素膜上反应,6 min内即可直接观察结果.在500份血清检测中,阳性率为41.2%,与ELISA的结果基本一致(X2=3.66,P＞0.05),符合率96.1%.特异性为95.4%,敏感性为96.3%.交叉试验与重复试验结果显示DIGFA具有较好的特异性及稳定性.结论 DIGFA可快速测定EMAb,具有推广使用的价值.     

应用FITC系统建立非均衡竞争总甲状腺素(TT4)化学发光法

目的 建立可广泛应用于总甲状腺素(TT4)检测的方法.方法 制备辣根过氧化物酶(HRP)标记兔抗人甲状腺素(T4)多克隆抗体及异硫氰酸荧光素(FITC)标记T4类似物.以抗FITC抗体包被发光板,FITC-T4类似物与抗FITC抗体结合形成固相抗原,血清标本经处理后使T4均呈游离状态,固相抗原与血清T4竞争结合抗T4抗体-HRP,建立化学发光法(CLIA)血清TT4检测系统(FITC系统),进行方法 学评价,并与T4-牛血清γ球蛋白直接包被系统(非FITC系统)和罗氏公司Elecsys2010系统进行比较.结果 FITC系统检测线性范围为0.1~320 ng/mL,灵敏度为0.1 ng/mL;批内变异系数小于5%,优于非FITC系统;与Elecsys2010系统检测结果 具有良好的相关性(r=0.916 9).结论 应用FITC系统建立的非均衡竞争TT4 CLIA分析系统灵敏度高、特异性,可用于临床标本的检测.     

斑点金免疫渗滤试验检测不育者血清抗精子抗体

目的：研究一种快速鉴定抗精子抗体的新方法的临床意义。方法：用化学试剂提纯精子抗原,将其结合于硝酸纤维素膜上;以胶体金颗粒结合的羊抗人lgG作为标记抗体,以斑点金免疫汉滤试验（Dot-immunogold filtration assay,DIGFA)检测人血清抗精子抗体。结果：抗原抗体通过渗滤在膜上进行反应,10min内即可用肉眼观察结果,在289例临床血清标本的检测中,阳性率为21％,与酶联免疫吸附试验（ELISA）的结果基本相符。结论：斑点金免疫渗滤试验可快速测定抗精子抗体,具有推广使用的价值。