三七总皂甙对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究三七总皂甙（PNS）对大鼠移植肝缺血再灌注损伤中保护作用。方法改良Kamada法建立同种大鼠原位肝脏移植模型，将动物模型随机分为3组：生理盐水对照组（N组）、三七总皂甙预处理组（P组）和假手术组（S组）。3组分别于供肝再灌注后2、6、24h时相点，用免疫组化检测NF—κB及ICAM—1的表达；用髓过氧化酶法（MPO）定量测定肝组织中中性粒细胞浸润，并抽血检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）水平。结果N组供肝再灌注后2h NF—κB的活性显著升高，之后逐渐下降；肝组织ICAM—1的表达在再灌注后2h开始增高，6h达到高峰，与中性粒细胞的浸润增加和肝损伤有相关性。但P组明显低于N组（P〈0．05）。结论大鼠移植肝缺血再灌注时刺激NF—κB的活化，启动ICAM—1的表达参与肝脏缺血-再灌注损伤的发生过程，三七总皂甙能显著降低再灌注时供肝组织中炎症介质的转录表达，并有效改善供肝的再灌注损伤。     

急性胆道感染SD大鼠肝细胞凋亡和相关Bcl-2/Bax蛋白表达的分析

目的探究急性胆道感染对SD大鼠肝细胞细胞凋亡及其Bcl-2/Bax蛋白阳性表达的影响。方法将110只SD大鼠进行为期1周的喂养后随机分为5组,每组22只,随机选取一组为对照组,注入生理盐水,其余四组均为实验组,实验组SD大鼠胆总管注入大肠埃希菌建立急性胆道感染模型。并分别于6 h、12 h、24 h及48 h后处死一组SD大鼠,按照其感染时长分为实验组-6 h、实验组-12 h、实验组-24 h和实验组-48 h,对照组大鼠于6 h后处死,观察大鼠肝组织的病理变化,使用免疫组织化学法对Bcl-2、Bax阳性表达率进行计算,对大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)变化进行分析。结果随着感染时间的增加,大鼠肝组织细胞出现明显的变形和坏死,且坏死面积和细胞数量逐渐增加;对照组细胞凋亡数量较少,实验组随着感染时间增加,AI指数逐渐增加(P<0.05);实验组随着感染时间增加,Bcl-2阳性表达率逐渐降低(P<0.05),但实验组-6 h Bcl-2阳性表达率与对照组比较差异无统计学意义(t=1.717,P=0.093);实验组Bax阳性表达率随感染时间增加逐渐升高(P<0.05),48 h呈现下降趋势;与对照组比较,模型建立后实验组大鼠各时段ALT、AST和TNF-α均显著升高(P<0.05),随着感染时间推移ALT、AST的活性表达持续升高,AST在感染组12 h时与实验组-6 h比较差异不显著(t=0.744,P=0.461),TNF-α于感染48 h后有所下降。结论急性胆道感染过程中伴随明显的细胞凋亡现象,在持续感染的整个过程中都有表现,这与Bcl-2和Bax蛋白的阳性表达之间存在明显关系。     

血塞通对全脑缺血/再灌注后大鼠海马回中Bcl-2及Bax的影响

目的探讨中成药血塞通(Xuesaitong,XST)对全脑缺血/再灌注后大鼠海马回中凋亡基因Bcl-2及Bax的表达影响,以及可能对全脑缺血/再灌注损伤的保护作用。方法 1采用Pulsinelli等的方法建立大鼠急性全脑缺血/再灌注型;2分别于再灌注后3、6、12、24和48 h 5个时间点处死大鼠取出脑组织,固定切片,采用免疫组化法检测海马CA1区Bcl-2和Bax的表达,TUNEL染色检测凋亡细胞;3对90只健康实验大鼠分为三组即假手术(SO)组;脑缺血/再灌注(I/R)组;血塞通(XST)组,对三组进行比较分析,研究血塞通对Bcl-2和Bax表达的影响。结果脑缺血/再灌注期间,I/R组锥体细胞Bcl-2和Bax均比SO组的表达平均灰度值低。各时间点平均灰度值比较,差异有显著性(P<0.01),体内锥体细胞凋亡率增高(P<0.01);XST组与I/R组相比较,Bcl-2表达平均灰度降低,Bax表达平均灰度增高,各时间点表达平均灰度值比较均有统计学意义(其中第3 h时间点P<0.05,余各时间点P<0.01),体内锥体细胞凋亡率降低(P<0.01)。结论大鼠全脑缺血/再灌注损伤后,血塞通通过上调Bcl-2蛋白的表达,下调Bax蛋白的表达,抑制细胞凋亡发挥神经保护作用。     

脓毒症大鼠脾细胞凋亡、凋亡相关蛋白表达及中药血必净的影响

目的观察血必净对脓毒症大鼠脾脏淋巴细胞凋亡、凋亡相关蛋白表达以及半胱天冬酶(caspase)3活性的影响。方法96只Wistar大鼠随机分为正常对照组(8只)、假手术组(8只)、模型组(40只)和血必净治疗组(40只),以盲肠结扎穿孔法(CLP)制备脓毒症模型;TUNEL法检测脾细胞凋亡情况、分光光度法测定脾组织半胱天冬酶3活性、流式细胞仪检测脾脏淋巴细胞中CD3+细胞比例以及免疫组化法检测脾脏FasL、Bcl-2蛋白表达水平。结果假手术组大鼠脾脏FasL表达的IOD值为4.54±1.41,模型组较之明显增多,至48 h达757.96±188.10,假手术组大鼠脾脏Bcl-2表达的IOD值为594.05±183.32,模型组表达下降,于48 h仅为22.71±9.22,假手术组仅有少量细胞凋亡(0.87±0.51),半胱天冬酶3活性较低(4.34±1.34),CD3+细胞比例为63.49%;模型组于造模后4 h起脾组织细胞凋亡数增多达8.88±3.68,半胱天冬酶3活性升高至12.22±3.15,而脾细胞中CD3+细胞比例明显下降为52.09%;血必净干预后可明显降低脾脏FasL表达、促进Bcl-2表达,减轻脾组织半胱天冬酶3活化程度,减少脾细胞凋亡,并使CD3+细胞比例恢复正常。结论脓毒症时凋亡途径的活化使脾细胞过度凋亡,引起了免疫失衡的发生,血必净可以通过调节凋亡相关蛋白的表达,减轻脾细胞凋亡,恢复脓毒症的免疫平衡。     

大鼠肝脏癌前病变与bcl-2和bax表达关系

目的 探讨大鼠肝脏癌前病变过程中肝细胞bcl-2和bax表达变化.方法 采用腹腔注射二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)诱导大鼠建立肝脏癌前病变模型,观察肝脏组织病理学改变,生化检查血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、α-L-岩藻糖苷酶(AFU)、甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA);应用免疫组化和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测bcl-2和bax的表达变化.结果 与对照组比较,DEN组大鼠血清ALT、AST、γ -GT、AFU活性均升高(P＜0.01),AFP、CEA含量未见明显变化;DEN组造模4、12周大鼠肝脏细胞bcl-2的表达分别为(121.45±6.53)和(120.24±9.63),低于对照组(P＞0.05),Bax的表达分别为(49.58±5.23)和(64.28±2.86),高于对照组(P＜0.05),Bcl-2/bax比值分别为2.45和1.87,低于对照组的3.83(P ＜0.05).结论 Bcl-2和bax的表达参与肝癌前病变的发生和发展,Bcl-2和bax可作为诊断肝癌前病变的辅助指标.     

双重血流同时开放对大鼠肝移植胆管TNF-α表达的影响

目的探讨门静脉、肝动脉双重血流同时开放对大鼠肝移植胆道缺血／再灌注（I／R）损伤中的TNF-α表达的影响。方法选用雄性SD大鼠建立大鼠自体原位肝移植模型，随机分为双重血流同时开放组（P组）、门静脉先开放组（N组）和假手术对照组（S组）。供肝再灌注后检测血清ALT、AST、GGT、AKP、TBiL及DBiL水平，比色法测定髓过氧化物酶（MPO）含量，RT-PCR法检测胆管组织TNF-α mRNA表达。结果肝脏再灌注后6h及24h两个时点P组的GGT水平明显低于N组水平（P〈0.05）；肝脏再灌注后24h，P组的AKP、TBiL、DBiL水平及胆管损伤病理学评分明显低于N组水平（P〈0．05）；再灌注后6h，N组大鼠肝组织的MPO含量明显高于P组（P〈0．05）；供肝再灌注后2h、6h，P组大鼠肝组织TNF-α mRNA的相对表达水平明显低于N组（P〈0．05）。结论门静脉、肝动脉双重血流同时开放，有利于减轻肝移植物胆管组织的I／R损伤；其机制可能与TNF-α表达水平的降低以及中性粒细胞（PMN）浸润的减少有关。     

丁基苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤后Bcl-2表达的影响

[目的]探讨丁基苯酞(NBP)对大鼠脑缺血再灌注损伤后Bcl-2蛋白和mRNA表达的影响。[方法]利用大脑中动脉线栓法将♂SD大鼠建立局灶性缺血再灌注模型,随机分为假手术组(不阻断大脑中动脉)、脑缺血再灌注组(I/R组)和NBP治疗组(NBP组),每组20只大鼠;脑缺血2h后开始再灌注。NBP组每天2次灌胃NBP,每次25mg/kg,I/R组及假手术组灌胃相同剂量食用植物油。再灌注72h后行神经功能缺损评分,然后断头取脑,TTC染色观察脑梗死体积,免疫组织化学(SP)方法检测梗死核心区、梗死周围区、海马区Bcl-2蛋白的表达,原位杂交方法(POD法)检测Bcl-2mRNA的表达。[结果]NBP组较I/R组大鼠脑梗死体积小(P﹤0.05),神经功能缺损改善(P﹤0.05);梗死核心区NBP组和I/R组Bcl-2蛋白和mRNA表达差异无统计学意义(P﹥0.05),梗死周围区和海马区NBP组Bcl-2蛋白和mRNA表达均高于I/R组和假手术组(P﹤0.05)。[结论]NBP减少脑缺血再灌注后大鼠脑梗死体积,改善神经功能,促进大鼠脑梗死周围区和海马区Bcl-2蛋白和mRNA的表达,可能为NBP抗凋亡和保护缺血脑组织的机制之一。     

丹参酮ⅡA对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响研究

[目的]探讨丹参酮ⅡA对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响。[方法]选取50只Wistar大鼠,随机分为5组:假手术组、缺血再灌注组和丹参酮ⅡA高中低剂量组。采用结扎大鼠左冠状动脉前降支方法制备心肌缺血再灌注模型,在缺血前10min分别向5组大鼠注射生理盐水4ml、生理盐水4ml、丹参酮ⅡA(16mg/kg、8mg/kg、4mg/kg)加入生理盐水共4ml。观察大鼠缺血45min再灌注2h时心电图改变情况;采用免疫组化方法对心肌组织中Bcl-2和Bax蛋白的表达。[结果]①缺血再灌注组缺血再灌注T波变化幅度与假手术组相比明显升高(P﹤0.01);不同剂量组缺血再灌注T波变化幅度比缺血再灌注组有不同程度的降低(P﹤0.05)。②缺血再灌注组缺血再灌注2h心律失常发生率与假手术组相比明显升高(P﹤0.01);不同剂量组缺血再灌注2h时心律失常发生率比缺血再灌注组有不同程度的降低(P﹤0.05)。③缺血再灌注组Bcl-2OD值、Bcl-2/Bax与假手术组相比明显降低(P﹤0.01);不同剂量组Bcl-2OD值、Bcl-2/Bax比缺血再灌注组有不同程度的升高(P﹤0.05)。缺血再灌注组BsxOD值与假手术组相比明显升高(P﹤0.01);不同剂量组BsxOD值比缺血再灌注组有不同程度的降低(P﹤0.05)。[结论]丹参酮ⅡA对大鼠缺血再灌注心肌有显著保护作用,其保护机制可能与上调Bcl-2及下调Bax蛋白表达,从而抑制缺血再灌注心肌细胞凋亡有关系。     

竹节参总皂苷对肢体缺血再灌注大鼠肝的影响

目的 探讨竹节参总皂苷(total rhizome panacis japonica saponins,tRPJS)预处理是否影响肢体缺血再灌注(I/R)大鼠肝脏自由基的变化,及是否对肝脏具有保护作用.方法 40只雄性健康成年SD大鼠,体重260～300 g,随机分为5组,每组8只:假手术组、I/R组、tRPJS不同剂量组(50,100,200 mg/kg).再灌注3h后经心室抽取血液2ml,进行丙氨酸转氨酶(ALT)、门冬氨酸转氨酶(AST)及乳酸脱氢酶(LDH)检测;取右肝叶进行一氧化氮(N0)、丙二醛(MDA)含量及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、超氧化物歧化酶(SOD)活性检测,光镜下观察肝组织形态学的变化.结果 与假手术组比较,I/R组NO、MDA含量和iNOS活力显著性增高,SOD活力则显著下降,血清ALT、AST、LDH明显升高(P＜ 0.05或0.01),光镜下肝细胞严重肿胀,甚至水变性.tRPJS组的NO、MDA含量和iNOS活力则明显下降,SOD活力增加,血清ALT、AST、LDH也明显下降(P＜ 0.05或0.01);肝细胞肿胀明显减轻.结论 肢体I/R能够导致急性肝损伤,竹节参总皂苷预处理可以明显减少肝脏组织中自由基的产生,降低NO、MDA含量,提高SOD活力,减轻再灌注肝损伤.     

bFGF对脑缺血大鼠海马及顶叶皮质c-Myc蛋白影响

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对脑组织缺血再灌注神经元c-Myc蛋白表达影响及机制.方法 30只大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、bFGF组,每组10只;应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大脑中动脉阻塞2 h再灌注损伤24 h,采用原位末端标记法(TUNEL)、免疫组织化学法检测海马及顶叶皮质内神经元凋亡和c-Myc蛋白表达.结果 假手术组大鼠海马及顶叶皮质偶见凋亡细胞,神经元内少见c-Myc蛋白阳性细胞;缺血再灌注组海马及顶叶皮质神经元凋亡增加,顶叶皮质及海马神经元内c-Myc蛋白表达灰度值为(88.16±2.43),(86.72±1.23),bFGF组神经元凋亡减少,神经元内c-Myc蛋白表达灰度值为(97.61±1.78),(95.35±2.34).结论 bFGF可减少缺血神经元凋亡,抑制脑缺血诱导的c-Myc蛋白的表达,对脑缺血再灌注海马及顶叶皮质神经元具有保护作用.