186例儿童急性淋巴细胞白血病免疫表型特征

目的回顾分析186例儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)免疫表型结果,以期了解儿童ALL免疫表型的特征,为临床诊断、微小残留病(minimal residual disease,MRD)的监测提供依据。方法采用多参数流式细胞术(multiparameter flow cytometry,MFC),利用CD45PE-cy5/SS设门,完成186例儿童ALL病人的免疫分型。结果在186例ALL中,B系ALL78．5％(146/186),T系ALLl9．3％(36/186),T/M混合型ALL1．1％(2/186),B/M混合型ALL1．1％(2/186)。白血病相关免疫表型(characterization of leukemia-associated immunotyping,LAIP)的出现频率为:B-ALL CD19 /CD10 /CD117 1．4％; CD19 /CD10 /CD13 25．3％;CD19 /CD10 /CD33 21．3％;CD19 /CD10 /CD2 5．5％;CD10 /CD34 /CD45±86．9％;CD19 / CD34 /CD20 24．7％;CD19 /CD10 /CD45±67．1％;CD19 /CD10-/CD20-4．1％。T-ALL CD7 /CD13 /CD45±5．6％;CD7 / CD33 /CD45±2．8％;TdT /CD3 /CD45±100％;CDT /CD2±/CD45±77．8％;CD7 /CD4 /CD3-16．7％;CD7 /CD8 /CD3- 16．7％。结论儿童B-ALL比率高于T-ALL,约为T-ALL的4倍,混合细胞白血病在儿童很少见。而且儿童ALL均具有独特的LAIP特征,因此免疫表型分析对于白血病的诊断和MR监测可提供非常客观的依据。     

急性淋巴细胞白血病患者免疫表型分析

目的:探讨急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)的免疫表型特点.方法:运用流式细胞术及特异性单克隆抗体CD2,CD3,CD4,CD5,CD7,CD8,CD10,CD13,CD19,CD20,CD22,CD33,CD34,CD38,CD45,CD56,CD117,HLA-DR,sIgM,cyIg,cyCD79a,MPO和TdT对58例形态学诊断ALL患者进行免疫表型检测.结果:通过CD3、CD19、CD33和MPO的表达情况分出T-ALL 8例(13.79%),B-ALL 49例(84.48%),混合细胞白血病1例(1.72%).B-ALL进一步根据CD10,CD20,cyIg,sIgM的表达情况分为早前B型5例(8.62%),普通B型34例(58.62%),前B型9例(15.52%),成熟B型1例(1.72%).B-ALL异常细胞存在抗原跨系列表达、跨阶段表达、缺失表达.儿童ALL免疫分型及白血痛相关免疫表型与成人ALL差异无统计学意义.结论:ALL的异常骨髓细胞有明显本系列特征、原始细胞标记和跨系表达,在此基础上应用多参数流式细胞仪可有效检测微小残留病变.     

126例急性白血病异常免疫表型分析

白血病细胞异常免疫表型是区别于正常造血细胞的重要特征之一,也是流式细胞术检测微小残留病的基础。为了了解急性白血病的异常免疫表型特征,本研究采用四色流式细胞术CD45/SSC双参数散点图设门技术对126例急性白血病患者的异常免疫表型进行分析,并初步探讨其在微小残留病检测中的意义。结果显示:约76%的患者可以检测到明确的异常抗原表达,白血病异常免疫表型可分为以下四类:抗原跨系列表达、跨阶段表达、过度表达及缺失表达,其阳性率分别为39%、46%、21%和29%。约11%的患者仅发生了单一的表型异常,其余患者则可以检测到两类或更多的表型异常。结论:在大多数急性白血病患者中可以检测到明确的白血病异常免疫表型,在此基础上应用多参数流式细胞仪可以有效检测微小残留病变。     

610例急性髓系白血病免疫表型和白血病相关免疫表型分析

目的探讨急性髓系白血病（AML）患者免疫表型和白血病相关的免疫表型（LAIP）特征及在微量残留病（MRD）检测中的意义。方法采用CD45／SSC设门四色流式细胞术，检测610例AML患者和20名健康志愿者下列抗原的表达：CD7、CDll7、CD33、CD34、CDl0、CDl9、CD56、CD38、CDl3、CDl4、CD64、CD9、CDl6、CD2、CD5、CDllb、CDl23、HIA-DR。结果正常骨髓中CD34^＋和CDll7^＋SSC值低（SSC^low）的细胞比例分别为（0．35±0，15）％和（0．76±0．31）％。CD34^＋SSC^low细胞中绝大多数细胞共表达CDl3、CD33、CD38、CDll7、HLA-DR（84％～94％）。CD9和CDl5的相对比例为20％和33％，而CDllb、CD56、CDl9和CD64的相对比例均低于10％，CD7为12％。CDll7^＋SSC^low细胞中，CDl9^＋、CD11b^＋、CD56^＋和CD7^＋细胞相对比例低于10％，CD9^＋细胞为14％，CD38^＋和HIA-DR^＋细胞的相对比例为87％和91％，其余抗原（CDl5、CDl3、CD33、CD34）均在30％～50％。AML患者中CDll7、CD38表达率约为95％，CD33、CD9表达率约为84％。HLA-DR和CDl3表达率分别为77．23％和75．25％。CD64和CD34的表达率分别为64．41％和59．51％。CDl5表达率为43．06％，CDllb表达率为22，07％。86．39％的AML患者LAIP阳性，以AML-M1和M3最高，AML-M4E0最低。LAIP主要表现为交叉系列抗原表达和非同期共抗原表达，前者以CD34与CD7、CDl9、CD56同时阳性为主。在非同期抗原表达中，CD34^＋CD64^＋、CDll7^＋CDllb^＋、CDll7^＋CD38^-/dim、CDll7^＋HLA-DR-／^dim正常值在0．01％左右，与AML之间的对数差大于3，为灵敏度较高的LAIP。结论多参数流式细胞术适于80％以上AML患者MRD检测。     

初治与复发B细胞急性淋巴细胞白血病患者白血病相关免疫表型的比较

目的比较初治和复发时B细胞急性淋巴细胞白血病（B-ALL）的白血病相关免疫表型（LAIP）特点,探讨其对微量残留病（MRD）监测的影响.方法标记4～6组四色抗体组合,利用多参数流式细胞术（FCM）以CD45/SSC设门对410例初治和6例复发的B-ALL患者进行免疫分型检测.并采用CD34/CD10/CD45/CD19为主的2种四色荧光标记抗体组合,对98例B-ALL患者进行多参数FCM MRD检测.结果与初治B-ALL患者相比,复发患者中CD45异常表达者明显增多,分别为37.8%和69.2%（P=0.000）.通过对15例初治和复发患者的配对样本分析,9例患者（包括8例骨髓复发,1例中枢神经系统复发）出现免疫标志变化,其中4例患者CD45表达减弱,2例增强;4例患者CD34表达减弱;2例患者CD10表达增强,而CD19较稳定.对7例骨髓复发患者进行了MRD随访检测,均在复发前的2～4个月发现MRD,并且表型与复发后一致.结论较高比例的复发患者出现免疫表型变化,这种改变在复发前的MRD状态时已经出现,但不影响MRD监测的准确性.     

急性白血病免疫表型的预后意义

免疫表型对白血病的预后判断有重要意义。目前临床宜选用一些与细胞分化阶段有明确关系的、代表某些形态学特征的抗原进行免疫分型,可补充FAB分型的不足,还可确定形态学不能或很难区分的白血病类型。通过免疫表型检测和计分可明确双表型白血病和未分化白血病的诊断。某些特异的抗原与特异的细胞遗传学以及分子水平异常有关,决定了白血病的恶性行为及对治疗的反应。用多参数流式细胞术可同时检测2个或更多的抗原,数种抗原组合可用来检测微小残留病,提高检测的准确性,在患者初诊时即对其各白血病细胞亚群进行表型分析,为以后的微小残留病监测提供依据,才具有预测复发的价值。     

18例慢性淋巴细胞白血病免疫表型分析

１８例慢性淋巴细胞白血病免疫表型分析华东①李建勇夏学鸣（苏州医学院附属第一医院血液科，苏州２１５００６）王爱青耿美菊（苏州医学院重点实验室，苏州２１５００７）关键词慢性淋巴细胞白血病免疫表型慢性淋巴细胞白血病（慢淋，ＣＬＬ）在我国较少见，仅占全部白血...     

慢性淋巴细胞白血病免疫表型分析

目的探讨慢性淋巴细胞白血病（CLL）细胞免疫表型。方法应用流式细胞仪,选用一系列的淋巴细胞和髓系相关抗原的单抗对42例CLL患者进行淋巴细胞表面抗原检测。结果CLL患者CD5＋／CD19＋的单克隆B细胞表达占92．9％,CD5-／CD19＋的占7．1％,CD19＋／CD20＋／HLA—DR＋的占100．0％。髓系相关抗原中CD13表达率为23．8％,CD33表达率为21．4％。结论对慢性淋巴细胞白血病患者进行免疫表型分析,对于诊断和鉴别诊断有重要意义,并为临床治疗和预后评估提供依据。     

成人Ph染色体阳性急性淋巴细胞白血病免疫表型特征分析

本研究旨在了解成人Ph染色体阳性（Ph^＋）的急性淋巴细胞白血病（ALL）免疫表型特征,并初步探讨其在预测疾病预后和指导临床治疗中的价值。应用多参数流式细胞仪（MFC）技术对35例Ph^＋ALL和59例Ph—ALL患者的标本（骨髓或外周血）进行细胞免疫表型检测,并分析其异常表达。结果显示：所有Ph^＋ALL均为B淋系表达;Ph^＋B—ALL患者CD34和CD13表达较Ph—B—ALL显著增高（P〈0．05）,而CD38表达较Ph—B—ALL明显减低（p〈0．05）;两组患者伴髓系表达比例分别为85．7％和61．O％,Ph^＋B—ALL组显著增高（P〈0．05）,表达的髓系抗原主要为CD13和／或CD33。结论：Ph^＋ALL存在较为特征性的免疫表型,在成人B—ALL中CD34、CD13和CD38的免疫表型分析有助于提示存在Ph染色体的可能,对于存在上述特征性免疫表型的成人ALL患者应进行bcr／abl融合基因检测。以上特征性免疫表型将有助于临床上对这组疾病进展迅速、预后差的亚型患者进行预测,并指导一临床个体化治疗。     

急慢性淋巴细胞白血病免疫表型分析

目的 探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)和慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞免疫表型差异。方法 应用ABCAP免疫组织化学方法，选用一系列的淋巴细胞相关抗原的单抗对169例初发ALL与38例CLL患者进行淋巴细胞表面抗原检测。结果 B-ALL患者白血病细胞的CDl9、HLA-DR阳性率较高，T-ALL患者的白血病细胞以CD7、CD5与CD3阳性率较高，CLL患者的白血病细胞除了以CDl9、CD20、CD22阳性率较高外，CD5也有明显表达。结论 对淋巴细胞白血病患者进行免疫表型分析，对于区别细胞类型，鉴别诊断有重要意义，为临床治疗提供依据。     

异常免疫表型模式在急性髓系白血病微小残留检测中的应用

目的用多参数流式细胞术区分急性髓性白血病细胞与正常骨髓原始细胞免疫表型,建立急性髓系白血病细胞异常免疫表型模式和流式细胞术检测急性白血病微小残留病的方法。方法选择正常骨髓标本和急性髓性白血病患者骨髓标本,用流式细胞术分析髓系原始细胞免疫表型特征。并将标记抗原用于分析初发白血病细胞免疫表型,以寻找急性髓系白血病细胞异常免疫表型模式和确定用于微小残留病检测的抗体组合,更好地提示患者复发情况。并将流式细胞术结果、骨髓细胞形态学结果和PCR融合基因检测结果进行比较。结果分析20例非恶性血液系统恶性疾病患者的骨髓标本中髓系原始细胞的免疫表型,CD117阳性髓系原始细胞占2.51%±0.84%,CD34阳性髓系原始细胞占1.21%±0.83%,均有特定免疫表型特征。检测346例非早幼粒细胞白血病的急性髓性白血病患者免疫表型特征,异常免疫表型有314例,占90.80%,其中跨系表达抗原主要包括CD7(31.21%)、CD56(23.70%)、CD19(13.87%),跨阶段共表达的抗原包括CD34/CD64(2.89%)、CD14/CD117(1.16%),抗原表达强度变化或抗原缺失主要包括原始粒细胞不表达HLA-DR(4.62%)、CD13(7.51%)或CD33(12.14%),以及单核细胞不表达CD14(5.20%)。早幼粒细胞白血病患者31例,有异常免疫表型的仅占16.7%,低于非早幼粒细胞白血病的急性髓性白血病。根据白血病异常免疫表型模式,与PCR结果符合度高,能很好地提示白血病进展。结论急性髓性白血病细胞具有明显不同于正常来源原始细胞的异常免疫表型特征,适合采用流式细胞术进行微小残留病检测,并能反映体内白血病细胞负荷和病情变化。     

95例初治急性T淋巴细胞白血病患者免疫表型特点

本研究分析我国急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)的免疫表型特点及其临床意义。利用4色多参数流式细胞术检测95例T-ALL患者免疫表型,回顾性分析患者的临床及实验室指标。结果表明:①T-ALL患者以年轻男性(<30岁)为主,发病时常伴有外周血高WBC和髓外浸润;发病时年龄<30岁的患者CR1率明显高于≥30岁的患者(p=0.049);②据WHO(2008)造血和淋巴组织肿瘤分类标准,本组患者Pro-T-ALL占31.0%,Pre-T-ALL占35.6%,皮质T-ALL占26.4%,髓质T-ALL占6.9%;CD34在Pre-T-ALL中的表达率显著低于Pro-T-ALL(p=0.001);Pre-T-ALL的CR1率显著高于Pro-T-ALL(p=0.001);不成熟T-ALL(包括Pro-T-ALL和Pre-T-ALL)的CR1率显著低于成熟T-ALL(皮质-T-ALL和髓质T-ALL)(p=0.029);③髓系抗原CD13、CD33在与T-ALL亚型及治疗效果的关系方面存在差异。66.7%的CD13+患者属于Pre-T-ALL,而大多数CD33+患者归为Pro-T-ALL;CD13+与CD13-患者的CR1率差别无统计学意义,而CD33+患者的CR1率显著低于CD33-组(p=0.001);④以≥20%为阳性界线,CD117在本组T-ALL的表达率高达26.7%,且阳性患者集中分布(95.0%)于Pro-T-ALL和Pre-T-ALL中;⑤CD34-患者的CD117表达较均一,73.2%患者CD117表达水平<10%;而CD34+组中CD117的表达不一,CD117表达水平<10%、10%-20%、>20%的患者分别占44.2%、17.3%、38.5%,与CD34-组相比,CD117表达水平<10%、>20%的患者在CD34+组中的比例均较高,两组差别显著(p值分别为0.006和0.019)。结论:T-ALL的抗原表达情况与疾病的免疫分型、亚型判断以及临床治疗效果密切相关,利用流式细胞术有助于发现在T-ALL临床及生物学研究方面有潜在价值的免疫标记。     

慢性淋巴细胞系统白血病免疫表型分析

目的：研究国内慢性淋巴细胞系统折血病的免疫表型特点。方法：采用单参数和多参数流式细胞术分析了163例慢性淋巴细胞系统白血病的免疫表型。结果：71.8％（117/163）患者共表达CD5和B细胞标志。采用WHO引用的计分系统，将病例分为B-慢性淋巴细胞白血病（B-CLL），毛细胞白血病（HCL）和其他B淋巴细胞增殖性疾病。典型的B-CLL表达CD5、CD23、CD20、CD19、HLA-DR，但仍有部分患者表达CD22、CD11c、CD25和FMC7。CD103似为HCL最特异的标志。但仅仅依靠免疫表型难以鉴别非典型B-CLL、B细胞-幼淋巴细胞白血病（B-PLL）和外套细胞淋巴瘤（MCL），细胞遗传学或分子生物学检查将有助于鉴别诊断。以同一标本中残存的正常淋巴细胞为内参照，计算前向角光散射（FSC）指数和抗原表达指数，可定量地表示细胞的大小和抗原表达的强度，使不同的标本具有可比性。结论：免疫表型分析是诊断慢性淋巴细胞系统白血病非常有用的依据。     

急性淋巴系白血病微小残留病的动态监测

本研究旨在建立免疫球蛋白重链基因重排的实时定量PCR(RQ-PCR)检测方法,并探讨其在急性淋巴系白血病(ALL)微小残留病(MRD)动态监测中的应用价值。采用多重PCR筛选初诊ALL患者的IgH基因单克隆重排,PCR产物测序并进行序列比对,据其连接区序列设计等位基因特异性寡核苷酸(ASO)前向引物,联合下游保守JH引物和保守JH探针,用Taqman探针法RQ-PCR监测ALL患者治疗过程中各时间点的MRD水平,分析其敏感性和特异性。结果表明,在51例ALL患者中鉴定出21例单克隆IgH重排,其中有条件定量的为15例,标准曲线的斜率在-3.1～-3.9,相关系数均>0.98,敏感性在10-4-10-5,仅1例敏感性为10-3,定量范围多在10-4以下,背景的非特异性扩增均在低水平,不影响定量。7例MRD水平在10-3以下的患者一直持续缓解,8例MRD水平>10-3,复发率较高。结论:RQ-PCR方法定量IgH基因单克隆重排用于监测ALL患者的MRD水平,具有敏感性高、特异性强、定量结果可靠的优点。IgH重排水平与ALL患者预后高度相关。     

多参数流式细胞术在慢性粒单核细胞白血病、骨髓增生异常综合症及急性单核细胞白血病免疫表型鉴别中的应用及其意义

本研究应用多参数流式细胞术分析慢性粒单核细胞白血病(CMML),骨髓增生异常综合症(DMS)以及急性单核细胞白血病(AML-M5b)的免疫表型特点,探究其在诊断及鉴别诊断上述疾病中的意义和价值。应用多参数流式细胞术比较分析14例CMML患者、48例MDS患者、46例AML-M5b患者及18例正常人骨髓标本的免疫分型特点。结果表明,CMML患者单核细胞比例明显高于MDS、AML-M5b患者及正常人骨髓(P<0.05),后3者之间无显著差别。MDS患者骨髓原始细胞比例明显高于正常骨髓标本(P<0.05),但与CMML患者无明显差别。AML-M5b患者骨髓成熟粒细胞比例较CMML、MDS患者及正常骨髓标本明显减低(P<0.05)。MDS、AML-M5b及CMML患者骨髓CD45/SSC特点与正常骨髓标本均存在一定差异。CMML患者骨髓具有CD2、CD56异常表达及CD14拖尾现象,与MDS、AML-M5b及正常骨髓标本相比差异显著(P<0.05)。MDS与CMML患者骨髓单核细胞CD15表达缺失或减低现象较正常骨髓标本及AML-M 5b患者显著,且CMML患者异常率高于MDS患者(P<0.05),两者粒细胞群均有显著CD13/CD11b/CD16表达规律异常现象,但两者间无显著差异。其他抗原表达呈不同程度异常,无统计学差异。结论 MDS、CMML及AML-M5b骨髓细胞免疫表型均具有各自的特点及不同程度的相似处。多参数流式细胞术综合分析其免疫表型,对于区分CMML、MDS以及AML-M5b具有重要鉴别意义。其中单核细胞比例增高,伴有CD2、CD56异常表达,CD14拖尾现象,CD15缺失或减低及成熟粒细胞CD13-CD11b-CD16表达规律异常,对CMML诊断具有重要意义。     

93例急性白血病免疫表型分析

目的探讨流式细胞术免疫分型在急性白血病诊断及治疗中的意义。方法采用CD45侧向角光散射(SSC)双参数散点图设门四色流式细胞术,对93例急性白血病患者进行免疫表型分析。结果 69例急性髓性白血病患者主要表达CD13、CD33、人类白细胞抗原(HLA)-DR、CD117;20.2%的患者伴有淋巴细胞系抗原CD7表达;CD7+与CD7-的完全缓解率(CR)比较差异有统计学意义(P<0.05)。13例急性B淋巴细胞白血病患者主要表达CD19、CD34、HLA-DR、CD20、CD22。31%的患者伴有髓细胞系抗原CD13表达;CD13+与CD13-的CR比较差异无统计学意义(P>0.05)。7例急性T淋巴细胞白血病患者主要表达CD5、CD3、CD7、CD34。结论采用流式细胞术对急性白血病进行免疫分型,对白血病诊断的准确性及分型、选择治疗方案及判断预后具有重要临床意义。     

慢性B淋巴细胞白血病患者免疫表型及其淋巴细胞亚群和NK细胞的分析

本研究评价慢性B淋巴细胞白血病（B—CLL）患者骨髓（BM）或外周血（PB）白血病细胞的免疫表型及外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞在B-CLL诊断、治疗和预后中的应用价值。收集67例B—CLL患者外周血或骨髓标本,应用多参数流式细胞术进行测定。结果表明：67例B—CLL患者外周血淋巴细胞比例明显增加,CD3、CD4、cD8和NK细胞各项指标均极度减低,与正常人相比有显著差异（P〈0．01）,而CD4／CD8比值与正常人相比无显著差异（P〉0．05）。在这些患者中CD19阳性率最高（91．04％）,其他抗原表达阳性率依次为CD5（80．60％）,CD20（76．12）．cyCD79a（74．63％）,CD38（43．28％）,CD11c（42．86％）,CD7（41．94％）,ZAP-70（39．29％）,CD25（0．00％）,CD5和CD19双阳性者占72．73％,CD38与ZAP-70表达有相关性（P〈0．05）。结论：测定B-CLL患者外周血或骨髓白血病细胞的免疫表型、外周血淋巴细胞亚群及NK细胞对于B—CLL的诊断有重要意义。