骨髓增生异常综合征中SDF-1/CXCR4与细胞凋亡关系的研究

目的:探讨骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)无效造血和高风险MDS向白血病转化的可能影响因素。方法:选取22例初发MDS患者(15例低危,7例高危)以及7例初发急性白血病患者,通过流式细胞仪检测其骨髓CD34+细胞的凋亡情况,同时以8例增生性贫血患者作为对照组。结果:发现在低危MDS组[国际预后评分系统(IPSS)评分≤1.0]骨髓内CD34+细胞的凋亡率明显高于高危MDS组(IPSS评分≥1.5)(21.33%比7.27%,P<0.01),同样低危MDS组骨髓内CD34+细胞的凋亡率明显高于白血病组(21.33%比7.53%,P     

再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征及急性髓系白血病患者骨髓基质细胞衍生因子-1及其受体CXCR4的表达水平和意义

目的:探讨基质细胞衍生因子-1及其受体CXCR4(SDF-1/CXCR4)在再生障碍性贫血(AA)、骨髓增生异常综合征(MDS)、急性髓系白血病(AML)发病中的作用。方法:应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测MDS、AA、AML患者及对照组患者(缺铁性贫血3例,营养性贫血3例)骨髓上清液中SDF-1水平,应用流式细胞仪检测MDS、AA、AML患者及对照组骨髓CD34+细胞表面表达CXCR4的情况。结果:AML、AA、MDS患者和对照组骨髓上清液中SDF-1含量分别为8125.0、6429.5、10816.2和8846.5pg/mL,AA患者的SDF-1水平分别与MDS、MDS低危组有统计学差异(P=0.001,P=0.001),AML、AA、MDS患者的SDF-1水平与对照组均无统计学差异(P>0.05)。AML、AA及对照组骨髓CD34+细胞上表达CXCR4的百分率分别为(11+16)%、(70+26)%和(20+11)%,MDS为(32+31)%。MDS按IPSS评分分为低危组及高危组,CD34+细胞CXCR4表达百分率分别为(37+33)%、(15+17)%(P=0.025)。结论:骨髓造血微环境可能通过调节AA、AML及MDS患者骨髓CD34+细胞表达CXCR4水平,对疾病产生负反馈调节,从而抑制以上3种疾病的进展。     

骨髓增生异常综合征中基质细胞衍生因子1与血管新生及细胞凋亡的相关性研究

本研究探讨骨髓增生异常综合征(MDS)中骨髓基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)的表达,及其与骨髓CD34+细胞的凋亡和骨髓血管新生的关系。搜集40例MDS病例,根据IPSS积分分为低危和高危2组,采集患者的骨髓穿刺物和活检标本。检测骨髓血浆中SDF-1的含量,骨髓CD34+细胞的凋亡率,骨髓活检标本的微血管密度(MVD)。结果显示:SDF-1α在低危组和高危组的表达量分别为(2313±417)pg/ml,(1241±501)pg/ml,前者显著高于后者(p<0.05);且2组的表达率均显著高于健康正常者(710±153)pg/ml(p<0.05);Annexin-Ⅴ/PI双染色显示,低危MDS患者CD34+细胞的凋亡率为(54.75±14.15)%,显著高于对照组的(18.51±8.66)%和高危组的(23.96±12.20)%(p<0.05),后两者相比差异无显著性(p>0.05);相关分析显示:低危组中骨髓SDF-1含量与CD34+细胞凋亡率呈正相关(p<0.05);在高危组中骨髓SDF-1含量与MVD呈现正相关(p<0.05)。结论:骨髓SDF-1含量、CD34+细胞凋亡和MVD在MDS中存在显著异常,在不同风险度的病例中也有明显的不同,且SDF-1水平与骨髓细胞的凋亡和血管新生具有相关性。     

MDS-RA/RARS/RCMD患者外周血循环CD34~+细胞计数的临床价值

目的探讨骨髓增生异常综合征(MDS)-难治性贫血(RA)/难治性贫血伴环形铁粒幼细胞增多(RARS)/难治性贫血伴多系异常(RCMD)患者外周血循环CD34~+细胞计数的临床价值。方法采用流式细胞仪检测19名造血干细胞供者(正常对照者)、52例MDS-RA/RARS/RCMD患者外周血循环CD34~+细胞百分比和计数。根据国际预后积分系统(IPSS)及世界卫生组织(WHO)分型预后积分系统(WPSS),将MDSRA/RARS/RCMD患者分为低危、中危Ⅰ、中危Ⅱ、高危及极低危、低危、中危、高危、极高危。评价外周血循环CD34~+细胞计数与MDS-RA/RARS/RCMD患者临床特点的相关性。结果 MDS-RA/RARS/RCMD患者外周血循环CD34~+细胞百分比和计数均高于正常对照者(P0.01),外周血循环CD34~+细胞计数与患者性别、年龄、外周血血细胞减少程度、白细胞计数下降、幼稚前体细胞异常定位(ALIP)现象均无相关性(r0.625,P0.05),而与染色体核型异常、IPSS预后积分、WPSS预后积分、骨髓纤维化相关(r0.995,P0.01)。外周血循环CD34~+细胞计数10.00×10~6/L的16例MDS-RA/RARS/RCMD患者中,有12例伴有复杂染色体核型异常,其中10例伴有7号染色体核型异常;有12例IPSS预后积分为中危Ⅱ;有13例WPSS预后积分为高危;9例伴有骨髓纤维化。36例外周血循环CD34~+细胞计数10.00×10~6/L的患者均不伴有复杂染色体核型异常及7号染色体核型异常;所有患者IPSS预后积分均为低危或中危Ⅰ;除1例患者WPSS预后积分为高危外,其余患者的WPSS预后积分均为极低危、低危或中危;除1例患者伴有骨髓纤维化外,其余患者均不伴有骨髓纤维化。结论MDS-RA/RARS/RCMD患者外周血循环CD34~+细胞计数可出现异常增加,外周血循环CD34~+细胞计数检测有助于对MDS患者疾病危险度的进一步分层。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓CD34-和CD34+细胞凋亡与增殖的意义及对生存的影响

本研究分析骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓CD34^＋和CD34-细胞凋亡和增殖情况,探讨MDS的发病机制,并判断其与疾病预后的关系。流式细胞术分析20例高危MDS、20例低危MDS患者及10例正常对照者骨髓CD34^＋细胞的比例、CD34^＋细胞和CD34-细胞凋亡、增殖的百分率,计算各组中的凋亡／增殖（A／P）比。并用单变量和多变量生存分析法分析CD34^＋细胞和CD34-细胞增殖和凋亡对预后的影响。结果表明：①MDS高危组患者骨髓CD34^＋细胞的比例明显高于低危组（P〈0．05）,而低危组与对照组比较无显著差异;②CD34^＋,CD34-细胞的凋亡率在MDS低危组中均为最高,明显高于MDS高危组和对照组。在低危组中,CD34-细胞的凋亡率为（80．36±1．82）％,明显高于CD34^＋细胞的（54．75±2．18）％（P〈0．05）,而在高危组中,CD34^＋,CD34-细胞的凋亡率无显著差异;③CD34^＋细胞的增殖率在MDS高危组中最高,明显高于低危组和对照组,而CD34-细胞的增殖率在MDS高危和低危组间无显著差异。高危组CD34^＋细胞的增殖率为（50．67±3．37）％,明显高于CD34-细胞的（30．99±1．96）％（P〈0．05）;④CD34^＋、CD34-细胞的A／P值在MDS低危组均明显高于高危组和正常对照组,而CD34-细胞的A／P值在MDS高、低危组均明显高于CD34^＋细胞的A／P值（P〈0．05）。此外,CD34^＋细胞的凋亡率与生存及预后明显相关。结论：CD34^＋细胞百分率随MDS危险度增加而逐渐增加,在低危组中以CD34-细胞的凋亡占主导,随着病情进展,在高危组中则以CD34^＋细胞的增殖占主导,提示异常的凋亡和增殖在MDS的发生和发展中起重要作用。此外,CD34^＋细胞的凋亡率可能是独立的预后不良因素,抑制凋亡可能诱导MDS向白血病的转化。     

p57kip2在初发MDS患者的表达及与SDF-1/CXCR4信号的关系

本研究旨在探讨初发骨髓增生异常综合征(MDS)患者抑癌基因p57kip2的表达及其与SDF-1/CXCR4信号的关系在MDS发病中的作用。应用实时荧光定量PCR检测67例初发MDS患者骨髓单个核细胞中p57kip2及CXCR4的表达,流式细胞术检测MDS患者骨髓CD34+细胞百分比,并选择18例正常人骨髓作为对照。在体外实验中探讨SDF-1/CXCR4信号对p57kip2表达的影响,比较其作用在正常及MDS患者中的差异。结果表明,MDS患者p57kip2表达均显著低于正常对照组(P<0.001),且与骨髓CD34+细胞百分比呈负相关(r=-0.458,P<0.001),染色体核型异常MDS患者p57kip2表达低于正常核型者(P=0.045);CXCR4的表达在MDS患者及对照组间无统计学差异,但与p57kip2表达呈正相关(r=0.652,P<0.001)。正常人中,SDF-1剂量依赖性地促进骨髓单个核细胞中p57kip2的表达,该作用能被AMD3100阻断;而在MDS患者BMMNC中,SDF-1不能诱导p57kip2表达增加。结论:抑癌基因p57kip2在初发MDS患者中低表达,可能与MDS发病相关。     

CD96和CD123表达与骨髓增生异常综合征患者预后的关系

目的:探讨骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)中CD96和CD123的表达及其与预后的关系。方法:选取经骨髓穿刺和外周血检查确诊为MDS的患者89例作为MDS组,另选取无血液系统疾病者20例作为对照组,对所有受试者进行骨髓穿刺,并提取骨髓中的单个核细胞,对CD34~+CD38~-CD123~+细胞和CD34~+CD38~-CD96~+细胞进行计数。将MDS组患者按照危险度分组,并给予相应治疗措施,观察治疗效果。结果:MDS组患者骨髓单个核细胞中CD34~+细胞和CD34~+CD38~-细胞所占比例显著高于对照组(P0.05),CD34~+CD38~-CD123~+细胞和CD34~+CD38~-CD96~+细胞在CD34~+CD38~-中所占比例显著高于对照组(P0.05),且危险度越高,比例越高;低危-中危1亚组中,CD123~-和CD96~-患者的完全缓解(CR)和缓解率(RR)均显著高于CD123~+和CD96~+患者;中危2-高危亚组中,CD123~-患者的RR显著高于CD123~+患者(P0.05),CD96~-患者的CR显著高于CD96~+患者。结论:MDS患者骨髓单个核细胞内CD34~+细胞分化存在异常,且存在有CD123和CD96高表达的情况,这可能是MDS患者出现造血干细胞恶性克隆的原因。     

骨髓增生异常综合征中CD34(+)细胞自噬活性及临床意义

目的:研究骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓中CD34(+)细胞自噬活性,并探讨其临床意义。方法:收集2012年10月至2014年3月我院收治的20例MDS、20例非恶性病贫血和5例急性髓系白血病(AML)患者骨髓液单个核细胞(BMMNC),采用流式细胞术检测这些标本中CD34(+)细胞自噬活性。结果:低危组MDS及非恶性病贫血组CD34(+)细胞自噬活性高于高危组MDS及AML组(P0.05),且MDS患者中CD34(+)细胞自噬活性与WHO分型预后积分系统(WPSS)呈负相关(r=-0.887)。结论:MDS患者CD34(+)细胞自噬活性较AM L患者明显增高,同时M DS患者骨髓CD34(+)细胞自噬活性与M DS患者WPSS评分呈负相关,提示自噬活性的降低有可能促进MDS疾病的演进,同时与MDS的预后相关。     

SDF-1/CXCR4轴活化对BMSCs迁移能力的影响与关键分子机制研究

目的:探讨基质细胞衍生因子-1(SDF-1)及其受体-趋化因子受体4(CXCR4)活化对骨髓间充质干细胞(BMSCs)迁移能力的影响及其中的关键信号机制。方法:(1)采用Transwell小室法,分别于常氧(20%O_2)和低氧(5%O_2)条件下,检测CXCR4在BMSCs的表达情况;BMSCs的迁移能力;CXCR4阻断剂预处理对BMSCs迁移能力的影响。(2)将BMSCs分别置于常氧(20%O_2)和低氧(5%O_2)条件培养3d,检测两组BMSCs中CXCR4下游Jak2、PI3K和(或)Erk1/2三条信号通路标志分子的磷酸化水平,筛选SDF-1/CXCR4轴活化的关键信号通路。结果:(1)与常氧细胞培养组相比,低氧条件下CXCR4表达水平极高,已不再需要过表达CXCR4(慢病毒包装);低氧条件下培养的BMSCs的迁移能力明显提高,且与SDF-1的剂量成正比关系。(2)在有或无SDF-1刺激的条件下,特异性阻断SDF-1/CXCR4,低氧组BMSCs的迁移能力与对照组相比均差异无统计学意义。(3)与常氧细胞培养组相比,低氧组BMSCs的PI3K和Erk1/2磷酸化水平显著上升,而Jak2磷酸化水平有所下降。(4)与无SDF-1组相比,单独应用PI3K或Erk1/2抑制剂组SDF-1刺激BMSCs的迁移作用较强(P0.05);与无SDF-1组相比,PI3K和Erk1/2抑制剂联合应用组SDF-1刺激BMSCs的迁移作用差异无统计学意义。(5)特异性阻断SDF-1/CXCR4,PI3K和Erk1/2磷酸化水平均显著降低。结论:SDF-1/CXCR4主要通过PI3K和Erk通路促进BMSCs迁移。     

基质细胞衍生因子在不同的急性髓系白血病细胞系的迁移、黏附和细胞凋亡中的生物学作用

本研究探讨基质细胞衍生因子（stromal cell derived factor 1，SDF-1）在急性髓系白血病（AML）细胞的迁移、黏附和细胞凋亡中的生物学作用及有关的信号转导。采用流式细胞术检测AML的细胞系KG1a、ML1、U937细胞表面标记物的表达；以免疫荧光技术检测SDF-1对肿瘤细胞膜表面分子的影响；通过微孔细胞转移实验检测SDF-1对AML细胞的趋化作用及磷脂酰肌醇3激酶（P13K）在趋化过程中的作用；用蛋白免疫印记技术检测P13K信号途径有关的细胞凋亡分子BCL—XL在SDF-1活化此途径后的变化。结果表明：3种AML细胞系不同程度表达CD34（KG1a=95．6％、ML1=4．6％、U937=4．8％）、CD45（KG1a=98．3％、U937=97．5％、NIL1=17．8％）、CXCR4（ML1=85．4％、U937=43.6％、KG1a=3．8％）、ICAM（KG1a=75．8％、U937=41．8％、ML1：46.3％）。SDF-1能促进CXCR4高表达的ML1和U937细胞在基质细胞的黏附并能够诱导此类细胞的迁移，上述作用被G蛋白抑制剂pertussistoxin（PTX）、P13K抑制剂渥曼青霉素（wortmannin）明显抑制；而对CXCR4低表达的KG1a细胞则无上述作用。SDF通过此途径还促进肿瘤细胞存活；此作用同样可被P13K抑制剂明显抑制，加用wortman—nin后促肿瘤细胞调亡显著增加。蛋白免疫印记检测phospho—AKT、BCL—XL显示，在SDF组明显增强，加用PTX、wortmannin组则减弱。结论：SDF-1能触发CXCR4高表达的ML1和U937细胞的极化形态的建立及诱导黏附分子的重新分布，从而通过P13K信号途径促进此类AML细胞的迁移，减少肿瘤细胞的调亡，而对CXCR4低表达的KG1a细胞则无上述作用。上述作用可以被P13K信号途径阻断剂和G蛋白抑制剂所阻断。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓CD34+细胞 Fas,FasL及Bcl-2的表达和凋亡

为了观察骨髓增生异常综合征 (MDS)患者骨髓CD34+ 细胞Fas ,FasL和Bcl 2的表达和凋亡情况并探讨这些抗原的表达和细胞凋亡的关系。采用流式细胞术测定了 2 6例MDS和 10例急性髓系白血病 (AML)患者及 6例非血液病患者 (对照 )骨髓CD34+ 细胞的Fas,FasL和Bcl 2表达率和细胞凋亡率。结果显示 ,各型MDS患者CD34+ 细胞Fas和FasL表达率较对照组明显增加 (P <0 .0 1) ,Bcl 2的表达率除难治性贫血 /环形铁粒幼细胞性难治性贫血 (RA/RAS)与对照组无显著差异 (P >0 .0 5 )外 ,难治性贫血伴有原始细胞增多 (RAEB)和转变中的难治性贫血伴原始细胞增多 (RAEB t)患者均明显高于对照组 (P <0 .0 1) ;各型MDS间CD34+ 细胞Fas的表达率相近 ,而Bcl 2的表达率却存在非常显著性差异 ,即RA/RAS 相似文献   

Increased immature hematopoietic progenitor cells CD34+/CD38dim in myelodysplasia

BACKGROUND: Myelodysplastic syndromes (MDS) are clonal disorders affecting hematopoietic progenitor cells (HPC). Despite the relevance of clonal CD34+ cells in developing MDS, only few studies analyze the phenotype of this cell population. The aim of this study was to evaluate phenotypic changes on HPC in MDS that could reflect abnormalities in the differentiation process of stem cells. METHODS: We analyzed the expression of CD38 and HLA-DR on CD34+ cells by flow cytometry in 36 patients with MDS, as well as in healthy donors (n = 12) and patients with other hematological disorders: non-Hodgkin lymphomas and multiple myeloma, both in complete remission (CR) (n = 32); acute lymphoblastic leukemia in CR (n = 17); de novo acute myeloblastic leukemia (AML) at diagnosis (n = 22) and in CR (n = 37); and AML secondary to MDS at diagnosis (n = 19). Cases with available karyotype were grouped according to the International Prognostic Scoring System (IPSS). RESULTS: Compared to normal BM, the fraction of immature HPC, characterized as CD34+bright, intermediate FSC/SSC, and CD38dim, was significantly increased in high risk MDS and secondary AML, but not in low risk MDS, (P < or = 0.001, P = 0.03, and P = 0.7). De novo AML showed decreased immature HPC. High numbers of immature HPC correlated with higher IPSS risk groups (P = 0.05) and showed significant impact on disease progression (P = 0.03). CONCLUSION: Our study confirms that evaluation of CD38 expression pattern on HPC is an easy and reproducible test that allows evaluating the immature subset of progenitor cells. Increased immature HPC in high risk MDS and secondary AML may reflect blocked differentiation of CD34+ cells in these diseases.     

骨髓增生异常综合征患者骨髓细胞周期及CD34+细胞增殖特征的研究

目的　探讨骨髓增生异常综合征 (MDS)患者骨髓细胞周期分布及CD34 细胞增殖特征。方法　碘化丙锭细胞核染色分析MDS、MDS转化的急性髓系白血病 (MDS AML)和原发性AML患者骨髓G0 /G1期、S期和G2 /M期细胞比例 ;免疫荧光双标法分析 3组患者骨髓CD34 细胞中增殖性抗原Ki6 7的表达。结果　与正常组相比 ,MDS患者和原发性AML患者骨髓单个核细胞 (BMM NC)G0 /G1期细胞比例呈明显增高趋势 [(92 .4 8± 4 .4 8) %、(96 .71± 2 .75 ) %对 (86 .94± 6 .77) % ](P<0 .0 5 ) ,而MDS组与正常组相比 ,S期和G2 /M期比例呈明显降低趋势 [(6 .79± 3.98) %、(0 .86±0 .82 ) %对 (11.97± 7.0 0 ) %、(1.10± 0 .98) % ](P值均 <0 .0 5 )。MDS AML患者与原发性AML相比 ,G0 /G1期细胞为 (91.16± 7.0 9) %对 (96 .71± 2 .75 ) % ,S期为 (7.90± 6 .70 ) %对 (2 .87± 2 .4 9) %、G2 /M期为 (0 .96± 0 .99) %对 (0 .4 3± 0 .4 2 ) % ,S G2 /M期为 (8.84± 7.0 9) %对 (3.34± 2 .83) % (P值均 <0 .0 5 )。MDS患者骨髓CD34 Ki6 7 细胞明显高于正常组 [(1.13± 1.10 ) %对 (0 .2 4±0 .2 2 ) % ](P <0 .0 1) ,MDS低危组患者CD34 Ki6 7 细胞为 (0 .5 4± 0 .4 9) % ,明显低于高危组 [(1.6 9± 1.6 6 ) % ](P <0 .0     

骨髓增生异常综合征富集造血祖细胞半胱天冬酶活性检测及意义

目的　了解骨髓增生异常综合征 (MDS)患者不同阶段骨髓造血祖细胞凋亡的变化及半胱天冬酶caspase3、caspase9的作用。方法　应用负筛选法纯化MDS患者骨髓造血祖细胞 (包括CD3 4 +和CD3 4 -细胞 ) ,通过AnnexinⅤ方法检测其凋亡 ,同时应用分光光度法测定细胞内caspase3、caspase9的活性。结果　①MDS RA组 12例 ,凋亡率为 39.5 % ;RAEB组 10例 ,凋亡率为 31.0 % ,两组凋亡率均明显高于对照组 (P <0 .0 1)。RAEB t/AML组 12例 ,凋亡率为 18.8% ,与对照组相比 ,差异无显著性。②MDS RA组caspase3活性较正常对照升高约 4 5倍 (P <0 .0 1) ,caspase9的活性较正常对照升高约 2 0倍(P <0 .0 1)。RAEB组 ,caspase3活性较正常对照升高约 14倍 (P <0 .0 1) ,caspase9的活性较正常对照升高 2倍余 (P <0 .0 1)。RAEB t/AML组 ,caspase3活性稍高于正常对照 (无统计学意义 ) ,caspase9的活性与正常对照相比 ,差异无显著性。③RAEB组中有 3例最终转为急性髓系白血病 (AML) ,其凋亡率、caspase3和caspase9的平均吸光度值均相应下降。结论　MDS患者骨髓造血祖细胞在疾病不同阶段凋亡率是不同的 ,caspase3、caspase9活性升高 ,可能是造成MDS骨髓造血祖细胞过度凋亡的重要原因 ,caspase9活性下降可能是MDS发展过程中骨髓造     

骨髓增生异常综合征患者CD34+细胞凋亡特征

目的　调查骨髓增生异常综合征 (MDS)造血细胞CD34 抗原表达及CD34 阳性细胞凋亡状况。方法　用免疫酶标记 (碱性磷酸酶 抗碱性磷酸酶系统 ,APAAP)检测 36例MDS患者骨髓冷包埋切片中CD34 阳性细胞数量及分布特征 ,结合DNA原位末端标记技术 (ISEL)研究此类细胞的凋亡状况。14例缺铁性贫血 (IDA)患者作对照。结果　①MDS组CD34 阳性细胞较对照组明显增多 [分别为 (4 9.2± 38.5 ) mm2 和 (10 .2± 9.7) mm2 ,P <0 .0 1]。MDS组凋亡细胞数与对照组比较也增多 [分别为 (6 9.1±2 8.2 ) mm2 和 (17.8± 11.2 ) mm2 ,P <0 .0 1]。②CD34+ 细胞在MDS RAEB组最高 ,与MDS RA RAS和MDS RAEB t组比较 ,差异有显著性 (P值均 <0 .0 5 ) ,而在后两组间无明显差异 ;MDS RA RAS、RAEB组的细胞凋亡数均明显高于RAEB t组 (P值分别 <0 .0 2和 0 .0 5 )。③ 36例MDS患者中未见CD34 阳性细胞发生凋亡。④CD34 阳性细胞及凋亡细胞均多见于骨小梁间区 ,均有成簇成片状分布的趋势 ,但两类细胞很少分布于同一区域。结论　MDS造血细胞过度表达CD34 抗原 ,MDS转化过程中同时存在CD34阳性细胞和凋亡细胞增加。CD34 阳性细胞的凋亡抵抗现象提示其来自恶性造血克隆。     

DCC protein expression in hematopoietic cell populations and its relation to leukemogenesis.

Using flow cytometry and immunoprecipitation (IP), we have investigated the deleted in colon cancer (DCC) protein expression on the bone marrow (BM) and peripheral blood (PB) cells of 16 normal subjects, 17 myelodysplastic syndrome (MDS) patients, and 10 acute myelogenous leukemia (AML) patients. With regard to the BM mononuclear cells (BM-MNCs) of normal subjects, the DCC protein expression ranged from 6.6 to 57.0%. Two-color flow cytometry revealed that among the IBM-MNCs the DCC protein was clearly expressed on the CD14+, CD13+, and factor 8+ cells, whereas it was low on the CD19+ and CD7+ cells and did not express on the CD34+, CD8+, and the glycophorin A+ cells. Further, the DCC protein expression was not seen on the PB CD11b+ and CD13+ cells. The IP results revealed that the 180-kD DCC protein was detected on the MNCs of both the BM and PB cells by the antibodies AF5, specific for the DCC extracellular domain, and G97-449, specific for the cytoplasmic domain. In contrast, flow cytometry did not detect the DCC protein on any BM-MNC MDS lineages (0.1-1.5%) or on AML leukemic cells (0.1-0.9%). The IP results indicated that the AF5 antibody did not detect the DCC protein on BM-MNCs of three of five MDS patients and four of five AML patients; however, the G97-449 antibody detected the 180-kD DCC protein in two MDS patients in whom AF5 had detected greatly reduced DCC band. These findings suggest that the DCC protein presence appears to be associated with normal hematopoiesis, and that its absence on the surfaces of the BM-MNCs and AML cells may contribute to the MDS and AML pathogenesis.     

骨髓增生异常综合征患者骨髓异常克隆细胞起源的初步研究

本研究旨在探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓异常克隆细胞的起源,即MDS患者骨髓CD34+CD38-造血干细胞和CD34+CD38+祖细胞中是否存在恶性克隆细胞及其比例。用免疫磁珠分选技术(MACS)分选9例染色体异常的MDS患者(8三体4例,含有8三体的复杂核型1例,5q-2例,含有5q-的复杂核型1例,5q-合并8三体1例)的骨髓单个核细胞(BMMNC)中的CD34+CD38-细胞和CD34+CD38+细胞,分别涂片;然后在上述涂片上通过荧光原位杂交(FISH)方法比较CD34+CD38-和CD34+CD38+两群细胞中异常克隆细胞的百分比。结果发现,这两群细胞均有异常克隆累及,但CD34+CD38-干细胞中异常克隆的比例(41.8±8.4)%低于CD34+CD38+祖细胞(72.4±7.7)%(p<0.001),而在有核细胞检测的异常克隆细胞比例为(70.8±9.2)%。结论:提示MDS患者中5q-和+8异常克隆均可能起源于造血干细胞阶段,而在祖细胞阶段异常克隆占优势。     

CD133抗原在白血病及MDS骨髓细胞中的表达

为了探讨CD133抗原与白血病和骨髓增生异常综合症(MDS)发病的关系,采用免疫细胞化学方法检测CD133抗原在白血病和MDS中的表达。结果显示,43例急性白血病患者CD133表达的阳性率为51.2%,急性髓系白血病(AML)组(16/29,55.2%)CD133的表达与对照组(2/15,13.3%)间的差别有统计学意义(P<0.05),慢性髓系白血病(CML)的CD133表达阳性率(2/6)与对照组间的差别无统计学意义(P>0.05)。9例MDS患者中有5例呈CD133表达阳性,阳性率为55.6%,与对照组相比无显著差异(P>0.05)。在所有白血病患者中CD34 患者的CD133表达率高于CD34-患者,且差异有统计学意义(P<0.05)。CD133表达与性别、年龄、骨髓白血病细胞比例、外周血原幼细胞比例、外周血白细胞数、血红蛋白、血小板数及乳酸脱氢酶水平无显著相关性。结论:AML患者骨髓细胞CD133表达高于正常对照,CD133表达与CD34表达有相关性。CD133高表达可能是急性白血病不良预后的一个因素。