近红外光谱技术快速鉴别前胡药材及其伪品

目的 应用近红外光谱技术结合化学计量学方法建立前胡及其伪品的快速鉴别模型。方法 收集6个主产地前胡（54批）和7种常见伪品（35批）共89批样品,采集近红外光谱图,采用化学计量学方法建立前胡及其伪品的鉴别模型。结果 优选的模型参数：光谱预处理方法为多元散射校正+一阶求导+Norri导数平滑滤波,光谱波段为6 800~5 700 cm^-1,偏最小二乘-判别分析方法的主成分数为14。验证集的鉴别结果表明真伪鉴别模型的正确识别率为100%。结论 近红外光谱法简便、快速,能够正确鉴别前胡药材及其伪品,为前胡药材的快速定性评价提供了一种新方法。     

基于UPLC指纹图谱和化学计量学对华山参及其混伪品的鉴别研究

目的 建立华山参的UPLC指纹图谱,鉴别其正品和混伪品。方法 建立华山参的UPLC指纹图谱,对相似度进行分析,采用聚类分析、主成分分析、偏最小二乘-判别分析法对共有峰进行分析。结果 建立的指纹图谱共标定出15个共有峰。华山参正品的相似度均在0.867以上,混伪品的相似度均低于0.555。30批华山参样品聚为3类,正品与伪品、主产地与非主产地华山参药材被显著区分,并筛选出4个差异性成分。结论 建立的UPLC指纹图谱能有效鉴别华山参及其混伪品,为华山参药材的质量评价和真伪鉴别提供参考。     

基于ITS2序列的三棱及其混伪品的分子鉴定

摘 要 目的：通过分析三棱及其混伪品的ITS2条形码序列,探索鉴定三棱及其混伪品的新方法。方法: 采集三棱及其混伪品共5个物种8个样本,并从Genbank网上下载三棱及其混伪品共6个物种23条ITS2序列,用MEGA5.0软件计算上述ITS2序列的种间、种内遗传距离,并构建系统发育树。结果: 三棱种内最大K2P距离为0.038,与混伪品种间最小K2P距离为0.697。由所构建的系统发育树可以看出,正品三棱的不同样品聚在一支,并能很好地与混伪品区分开。结论:ITS2条形码序列能够成功鉴定三棱与其混伪品,为三棱及其混伪品的鉴别提供了新的方法。     

道地药材天麻DNA真伪鉴定试剂盒的研制与评价

目的 建立一种将DNA提取技术与PCR技术相结合的天麻DNA真伪鉴定试剂盒,并对试剂盒性能进行方法学评价。方法 通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)查找天麻及其常见伪品紫茉莉根、大丽菊块茎、马铃薯的ITS2序列,应用DNAMAN进行多序列比对,NCBI-Primer-Blast设计天麻特异性引物。改良植物常用DNA提取的CTAB法,确保提取出高效的正品天麻及其常见伪品的基因组DNA,应用紫外分光光度法测其浓度及纯度。优化PCR反应体系,确定试剂盒的组成与反应条件,随机抽样检测市售天麻样品。结果 应用所研制的试剂盒提取样品DNA,纯度OD260 /OD280值为(1.87±0.13),灵敏度为10 ng·μL^-1,3次重复性检测结果相同,反复冻融 5、10、15、20次对检测效果无影响,于-20 ℃可保存1年,检测10个市售天麻样品,其中7个是正品,3个是伪品。结论 道地药材天麻DNA真伪鉴定试剂盒特异性强,灵敏度高,重复性和稳定性均良好,检测结果准确,适用于天麻及其常见伪品的快速鉴别。     

利用近红外光谱法建立大黄药材一致性检验模型

摘 要 目的：建立大黄药材的一致性检验模型,准确快速地对伪品进行鉴别。方法: 收集不同来源的大黄及其伪品23批,利用近红外光谱仪采集其近红外光谱,结合OPUS软件,建立一致性鉴别模型。结果:16批次的大黄均在模型设定CI限度范围内,而7批次的伪品均在模型设定CI限度范围外。结论:建立的一致性检验模型能快速、准确地鉴别大黄,并可以有效地应用于药品快检车筛查。     

不同产地大黄红外指纹图谱及相似度分析

摘 要 目的：建立红外指纹光谱鉴定大黄药材的方法。方法: 收集不同产地的大黄药材样品10批,对不同产地大黄药材进行红外光谱指纹测定,并进行相似度计算及化学模式识别。结果: 获得10批不同产地大黄药材红外指纹图谱,图谱相似度均大于0.96。结论: 红外指纹图谱鉴定法可用于大黄药材的鉴别。     

鹿类中药材的位点特异性PCR鉴定研究

目的　建立一种简便、准确的鹿类中药材鹿茸、鹿鞭、鹿筋、鹿胎的DNA分子标记鉴定方法。方法　在对鹿类中药材的正品原动物梅花鹿、马鹿及其混伪品原动物的Cyt b 基因全序列分析的基础上,设计了一对专用于鉴定正品鹿类药材的位点特异性鉴别引物ILu01-L和ILu01-H。结果　在6 4℃的复性温度下,用鉴别引物对原动物样品进行鉴别PCR ,仅正品能得到约365bp阳性扩增带;对鹿茸、鹿鞭及鹿筋正、伪品药材进行PCR鉴定,结果表明:3批鹿茸仅一批为正品,2批鹿鞭皆为伪品,鹿筋正、伪品药材PCR鉴定与形态鉴定结果一致。随机选取2枚鹿茸及一个原动物做Cyt b 基因片段序列分析,其结果与PCR鉴定完全一致。结论　对市售鹿类商品药材需加强质量监督和管理。所设计的鉴别引物对梅花鹿、马鹿有高度特异性,可应用于以其为原动物的鹿类中药材的鉴定。     

人参等10种中药材及饮片中重金属及有害元素测定

目的：采用微波消解-电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）法测定人参、白茅根、白头翁、苍术、大黄、骨碎补、苦参、龙胆、红参、肉苁蓉10种中药材及饮片中重金属及有害元素的含量。方法：采用微波消解法对样品进行前处理,电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）法对500批中药材及饮片中铅、镉、砷、汞、铜5种重金属及有害元素进行含量测定,并对样品中镍、铬、钡3种金属元素含量进行考察,应用SPSS19.0软件对数据结果进行统计学分析。结果：同一品种8种元素测定值与来源（野外采集、基地种植与市售饮片）及产地无明显相关性。500批样本测定结果显示：铅、镉、砷、汞、铜元素总超标率分别为6.60%、25.20%、1.00%、0.00%、0.40%;元素残留量与药材品种存在一定的相关性,镉元素在白头翁、苍术、骨碎补、龙胆药材中容易蓄积,而铅元素易在白头翁药材中蓄积残留,导致残留量较高。大黄、白头翁、龙胆中钡元素、镍元素、铬元素含量均明显高于其他品种。汞均未超出0.2 mg·kg^-1;除5批样本外,砷均未超出2 mg·kg^-1;除2批样本外,铜均未超出20 mg·kg^-1,表明上述10种中药材及饮片中砷、汞、铜元素残留方面的安全隐患较低。结论：有必要对中药材及饮片中部分重金属元素的含量加以监管,以保证中药的品质和临床用药安全。该方法准确、简便、灵敏,可为中药材及饮片中重金属及有害元素的检测与控制提供参考。     

基于HPLC特征图谱和主要成分含量测定的龙胆药材干燥方法研究

目的 通过测定龙胆药材不同干燥方法所得样品的HPLC特征图谱及3种主要成分的含量,确定龙胆药材的最佳干燥方法。方法 采用Welchrom C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）;流动相：甲醇-水,梯度洗脱;流速：1.0 mL·min^-1;进样量：10 μL;检测波长：240 nm;柱温：25℃。结果 建立了龙胆药材鲜品及不同方法干燥后样品的HPLC特征图谱,同时测定了样品中3种主要成分的含量。结论 龙胆药材的最佳干燥方法为阴干法。     

乌梢蛇实时荧光定量PCR法的建立及与普通PCR鉴别方法的比较研究

目的 为了进一步优化乌梢蛇药材鉴别的准确性,提高鉴别速度。方法 基于CO1片段序列特征,该研究设计了乌梢蛇的特异性引物、探针,通过条件的优化建立了乌梢蛇的实时荧光定量PCR 快速鉴别方法。结果 利用该方法对正品及伪品15个物种30份样本进行了验证,结果全部8 份乌梢蛇正品均能从30 个药材样本中准确地鉴别出来。结论  该方法与药典方法比较,准确性一致,但所用设备少、检测所需要时间短,仅需40 min至1 h即可得出结果,而药典方法需要4 h左右;灵敏度高,检测限可达到1×10-3ng/反应,检测结果在0.001%~100%范围内具有良好的线性关系,相关系数R²=1,而药典方法仅为1×10-2ng/反应。该方法具有特异性强、检测速度快、灵敏度高、所需设备少的特点,适用于乌梢蛇中药材及其饮片真伪快速检测。     

纯种发酵淡豆豉的抗抑郁作用研究

目的 初步研究纯种发酵淡豆豉的抗抑郁作用及其活性成分。方法 制备自然发酵淡豆豉和枯草芽孢杆菌纯种发酵淡豆豉,采用显色鉴别、薄层鉴别、异黄酮和 γ-氨基丁酸（GABA）的含量测定对纯种发酵淡豆豉进行质量评价;昆明小鼠按体质量随机分为 8 组,每组 10 只,雌雄各半,分别为对照组、模型组、盐酸氟西汀（阳性对照,0.01 g·kg^-1）组、γ-氨基丁酸（GABA,0.014 45 g·kg^-1）组、异黄酮（0.003 05 g·kg^-1）组、自然发酵淡豆豉 醇 提 水 洗 脱 物（水 洗 脱 物 ,1.82 g·kg^-1）组 、自 然 发 酵 淡 豆豉 总 提 物（自 然 发 酵 ,1.82 g·kg^-1）组、纯种发酵淡豆豉总提物（纯种发酵,1.82 g·kg^-1）组,除对照组外,建立慢性温和不可预知应激（CUMS）小鼠抑郁模型,边造模边给药,每日应激前 1 h ig 给药,连续给药 28 d。实验第 0、7、14、21、28 天分别测定各组小鼠体质量,第 28 天给药 1 h 后,进行悬尾、强迫游泳、糖水偏好、敞箱实验各行为学指标检测;HE 染色后观察海马 CA1 区病理学变化;超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）鉴定水洗脱物组、纯种发酵组的主要化学成分。结果 纯种发酵淡豆豉与自然发酵淡豆豉有相同的显色反应、显色斑点和 GABA 含量。与模型组相比,各给药组在应激第 14、21、28 天时体质量增加明显（P＜0.01）,悬尾及强迫游泳不动时间显著降低（P＜0.01）;GABA 组、异黄酮组、纯种发酵组、自然发酵水洗脱物组小鼠糖水偏好指数均显著增加（P＜0.05、0.01）;盐酸氟西汀组、水洗脱物组、GABA 组、纯种发酵组小鼠敞箱实验跨格数和直立数均显著增加（P＜0.05、0.01）;各给药组海马 CA1 区细胞排列紧密有序,边缘圆润,细胞间隙正常。纯种发酵组与自然发酵总提物组、水洗脱物组小鼠的各项行为学指标均无显著差异。自然发酵醇提水洗脱物组、纯种发酵总提物组都含有大豆苷元、染料木素、GABA 和各种氨基酸。结论 纯种发酵淡豆豉具有与自然发酵淡豆豉相似的抗抑郁作用,抗抑郁作用的主要成分可能是 GABA 和异黄酮。     

苦杏仁的炮制历史沿革考据

苦杏仁临床应用历史悠久,炮制方法繁多,作者通过查阅历代本草、医书古籍及文献资料,对苦杏仁的古代炮制历史沿革进行总结,并整理了历版《中国药典》以及全国各省市中药饮片炮制规范中苦杏仁的炮制品规及炮制方法,全面总结了苦杏仁的炮制历史。经考证,历代医书古籍记载苦杏仁的炮制方法主要有汤浸、研、清炒、麸炒、面炒、焙制、蒸法、药汁制、煨制、酒制、盐制、制霜等,历版《中国药典》收载主要有燀法、炒法,各省市中药饮片炮制规范中主要收载有燀法、炒法、蒸法、制霜等。古代苦杏仁“汤浸去皮尖”“得火良”理论基本与现在的“燀法”“杀酶保苷”研究一致,为苦杏仁饮片炮制工艺和质量标准进一步研究提供参考和历史依据。     

基于UPLC-Q-Exactive Focus-MS/MS技术的酸枣仁化学成分分析及其抗阿尔茨海默病机制的网络药理学研究

目的 通过超高效液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱（UPLC-Q-Exactive-Focus-MS/MS）分析酸枣仁中的化学成分,依据解析的化学成分及中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）、本草组鉴数据库（HERB）获取的酸枣仁主要成分结合网络药理学和分子对接技术初步预测其抗阿尔茨海默病（AD）的药效物质基础,筛选出潜在功效成分,预测作用机制。方法 采用UPLC-Q-Exactive Focus-MS/MS对酸枣仁进行化学成分分析,分别在正、负离子模式下扫描,结合对照品、文献中的碎片离子信息、保留时间进行匹配,确认化学成分。利用TCMSP、HERB数据库获取酸枣仁的主要成分及其对应作用靶点信息;通过GeneCards、OMIM数据库获得AD相关疾病靶点;将酸枣仁主要成分对应靶点与AD靶点取交集,借助String 11.5平台和Cytoscape 3.7.2软件绘制交集基因蛋白质相互作用（PPI）网络;利用DAVID 6.8对核心靶点进行基因本体（GO）功能与京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析,通过微生信云平台对富集结果可视化;借助AutoDock Tools软件对核心成分及关键靶点基因进行分子对接。结果 酸枣仁定性分析中共鉴定出40个化合物,主要包括3个有机酸类、28个黄酮类、8个生物碱类、1个皂苷类;筛选出发挥改善AD作用的核心成分5个,包括拟雌内酯、油酸、山柰酚、乌药碱、酸李碱;酸枣仁改善AD的核心靶点有JUN、AKT1、STAT3、MAPK14、ESR1、IL16等;KEGG通路分析共得到157条通路,其中PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、HIF-1信号通路排名靠前;GO富集分析得到生物过程（BP）条目336个、细胞组分（CC）条目45个、分子功能（MF）42个。分子对接结果显示,酸枣仁的4个核心成分与关键靶点间存在分子结合位点且结合能较强,均小于-20.93 kJ·mol^-1。结论 通过UPLC-Q-Exactive-Focus-MS/MS解析的化学成分结合网络药理学、分子对接预测了酸枣仁是通过多成分、多靶点、多途径来发挥抗AD作用的。     

木蝴蝶挥发性成分体外抗肿瘤活性评价及化学成分研究

目的 开展中药木蝴蝶挥发性成分的体外抗肝肿瘤作用研究,并在此基础上对其发挥抗肿瘤作用的木蝴蝶挥发性成分进行结构表征,该研究为探讨木蝴蝶挥发性成分抗肿瘤作用及物质基础提供实验依据。方法 采用体外药效评价法,开展木蝴蝶挥发性成分对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用研究;对有效成分采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用分析方法,开展木蝴蝶抗肝肿瘤有效组分挥发性成分的结构表征研究。结果 木蝴蝶挥发性成分对人肝癌SMMC-7721细胞具有明显的抑制作用;对其挥发性成分进行GC-MS分析,推断出19种化合物,其中甾醇类、酮类化合物含量最高。结论 木蝴蝶挥发性成分是中药木蝴蝶发挥抗肿瘤作用的有效组分,其发挥药效的物质可能为烃类、苯类、甾醇类、酸类、酯类、酮类等化合物。本研究使木蝴蝶挥发性成分发挥抗肿瘤作用的物质基础更加明确,为木蝴蝶的进一步研究奠定基础。     

基于网络药理学及分子对接探讨淡豆豉抗抑郁的作用机制

目的 采用网络药理学和分子对接技术预测淡豆豉抗抑郁活性成分、作用靶点及通路，探讨其潜在作用机制。方法 利用CNKI、TCMSP、TCMIP检索并筛选淡豆豉抗抑郁潜在活性成分；运用PharmMapper服务器预测活性成分的作用靶点；利用UniProt数据库查询靶点蛋白对应的基因名；运用DrugBank、GeneCards和DisGeNET数据库检索抗抑郁作用靶基因，并将活性成分靶点相互映射获得淡豆豉活性成分抗抑郁靶点；通过String数据库下载靶蛋白相互作用数据，与获取的潜在作用靶点利用Cytoscape 3.7.2.软件构建淡豆豉–活性成分–潜在靶点相互作用网络图。运用DAVID数据库分析潜在靶点的基因本体（GO）分子功能和京都基因与基因组百科全书（KEGG）信号通路，最后利用Autodock Vina和Pymol软件对药物有效活性成分和关键靶点进行分子对接验证。结果 预测获得淡豆豉主要活性成分8个，作用靶点396个，与抑郁症交集潜在靶点334个，GO分子功能和KEGG通路涉及多种生物学过程以及脂质和动脉粥样硬化通路、磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B（PI3K-Akt）信号通路、小分子量G蛋白（Ras）信号通路、叉头框蛋白（FoxO）信号通路等多个信号通路。将关键活性成分和靶点进行对接，其中丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶1（AKT1）与大豆苷元结合能力较好；磷酸肌醇3-激酶调节亚基1（PIK3R1）与木犀草素、槲皮素结合能力较好；HSP90-α热休克蛋白（HSP90AA1）与黄豆黄素结合能力较好。结论 淡豆豉以多种活性成分、多个作用靶点和途径发挥其抗抑郁作用，为淡豆豉在临床上用于抑郁症的干预和治疗提供依据。     

基于网络药理学的大黄-桃仁药对治疗肝硬化作用机制初探

目的 通过网络药理学方法探讨大黄-桃仁药对治疗肝硬化的潜在作用机制。方法 从中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）中筛选大黄-桃仁药对的活性成分,通过蛋白质数据库（Uniprot）获得各活性成分的潜在靶点,利用TTD、GeneCards、PharmGkb、DrugBank及OMIM数据库获得肝硬化作用靶点。采用Cytoscape 3.7.2软件构建大黄-桃仁药对活性成分-肝硬化-靶点网络模型,利用String平台绘制蛋白相互作用（PPI）网络。通过R studio软件、Bioconductor软件等平台分析筛选出的靶蛋白,获得基因本体论（gene ontology,GO）富集分析和京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）富集分析结果,取前30条大黄-桃仁药对治疗肝硬化的信号通路。结果 得到符合条件的大黄-桃仁药对药对活性成分29个,β-谷甾醇、常春藤皂苷、芦荟大黄素与泽兰黄醇素等为主要有效成分,作用于肝硬化的22个潜在靶点,从PPI网络得到TP53、MAPK3、HSP90等9个关键靶点,富集分析结果发现大黄-桃仁药对治疗肝硬化的相关生物过程主要包括干预调控血管系统的生成发育、上皮细胞增殖、脂质代谢、氧化应激等,通过影响癌症中的microRNAs（miRNAs）表达、PI3K-Akt信号通路、肝细胞癌以及乙型肝炎进程等发挥治疗肝硬化的作用。结论 大黄-桃仁药对通过调控血管系统生成发育、上皮细胞增殖、脂质代谢等对肝硬化起到直接或间接的治疗作用,其可能作用机制包括癌症中的miRNAs表达、PI3K-Akt信号通路等。     

Chemical comparison of Semen Euphorbiae and Semen Euphorbiae Pulveratum by UPLC-Q-TOF/MS coupled with multivariate statistical techniques

In the present study, we aimed to assess the chemical composition changes of Semen Euphorbiae (SE) and Semen Euphorbiae Pulveratum (SEP) by UPLC-Q-TOF/MS and multivariate statistical methods. The UPLC-Q-TOF/MS method and SIMCA-P software were used to analyze the changes of chemical components of SE and SEP based on PCA and PLS-DA multivariate statistical methods. A “component-target-disease” network model was constructed by Intelligent Platform for Life Sciences of traditional Chinese medicine (TCM) to predict potential related diseases. The differences of chemical composition were significant between SE and SEP. Under positive ion mode, the amounts of Euphorbia factor L₂, L₃, L_7a, L₈, L₉ and lathyrol were obviously decreased after processing. Under negative ion mode, the amounts of aesculetin, bisaesculetin, ingenol and cetylic acid were increasedobviously, while Euphorbia factor L₁, L₄ and L₅ were decreased obviously after processing, and the components of euphobiasteroid, aesculetin, lathyrol and linoleic acid among the 14 differentiated compounds were closely related to the SE-related diseases through the “component-target-disease” network model. UPLC-Q-TOF/MS technology in combination with multivariate statisticalmethods had certain advantages in studying the complex changes of chemical composition before and after manufacturing pulveratumof SE. It provided a basis for clarifying the toxicity-attenuated mechanisms of SE manufacturing pulveratum, and laid the foundation for its further development and utilization.     

大黄、枳实、厚朴不同炮制品对小承气汤中药效组分的影响

目的研究大黄、枳实、厚朴饮片变化对小承气汤药效组分的影响,以期为临床的合理应用和饮片的质量标准提供参考。方法采用HPLC法分别测定各类成分。大黄游离蒽醌类(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚):Syncronis C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇–0.1%磷酸;梯度洗脱;体积流量0.8 m L/min;柱温30℃;进样量10μL;检测波长254 nm。大黄结合蒽醌类(番泻苷B、番泻苷A):Syncronis C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈–0.05%磷酸;梯度洗脱;柱温30℃;进样量10μL;检测波长340 nm。枳实黄酮苷类(芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷):Syncronis C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈–水;梯度洗脱;体积流量0.7 m L/min;柱温40℃;进样量10μL;检测波长283 nm。厚朴木脂素类成分(和厚朴酚、厚朴酚):Syncronis C_(18)色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈–0.05%磷酸;梯度洗脱;体积流量0.7 m L/min;柱温30℃;进样量10μL;检测波长294 nm。结果小承气汤配伍剂量(大黄12 g–炒枳实9 g–姜厚朴6 g)不变,大黄、枳实、厚朴饮片改变时,小承气汤药效组分总量变化规律为:大黄–枳实–姜厚朴酒大黄–炒枳实–姜厚朴熟大黄–炒枳实–姜厚朴大黄炭–炒枳实–姜厚朴≈小承气汤大黄–炒枳实–厚朴,变化率分别为酒大黄组(6.561%)、熟大黄组(4.222%)、大黄炭组(0.118%)、枳实组(30.186%)、厚朴组(-11.218%)。除大黄炭组外,其余组的药效组分总量皆明显变化,其中枳实组变化最明显。结论同一味药材的不同炮制品在小承气汤处方中药效组分不同,对其他药味的影响亦不同,在小承气汤处方配伍中不可随意替代。     

Analysis of the constituents in Semen Descurainiae by UPLC/Q-TOF-MS/MS

A UPLC/Q-TOF-MS/MS method was developed for identifying the constituents in the Chinese herb Semen Descurainiae. A total of 14 compounds were identified or tentatively characterized based on their mass spectra, including 9 flavonoids, 4 fatty acids and 1 cardiac glycoside. Among them, quercetin-3-O-β-D-[6-O-sinnapoyl-2-O-β-D-glucopyranosyl]-glucopyranoside was identified in Semen Descurainiae for the first time.