胰腺癌细胞系ASPC-1凋亡过程中bcl-2和bcl-xL的表达

本研究旨在探讨ｂｃｌ 2和ｂｃｌ ｘＬ 在干扰素 (ＩＦＮ) γ诱导的胰腺癌细胞系ＡＳＰＣ 1细胞凋亡过程中的表达情况。一、材料与方法ＡＳＰＣ 1细胞系于含体积分数为10 %胎牛血清ＤＭＥＭ培养基中传代培养。将细胞浓度调整至 1× 10 9个 /Ｌ ,无血清培养 2 4ｈ。向培养基内加入ＩＦＮ γ(终浓度 1× 10 6Ｕ/Ｌ)。继续培养 ,分别于 6、12和 2 4ｈ收集细胞进行检测。以不加ＩＦＮ γ的培养皿为对照组。收集的细胞洗涤后用荧光染料碘化丙啶 (ＰＩ)染色 ,然后进行流式细胞分析。细胞凋亡数量以凋亡细胞的百分数表示。ｂｃｌ 2和ｂｃｌ ｘＬ …     

环杷明抑制胰腺癌细胞系ASPC-1增殖和促凋亡作用

目的 探讨环杷明(Cyclopamine)对胰腺癌细胞系ASPC-l增殖和凋亡的作用机制.方法 不同浓度环杷明处理胰腺癌细胞系ASPC-l后,通过噻唑蓝(MTT)比色法试验检测癌细胞增殖状况,并计算不同浓度和作用时间的抑制率;用流式细胞仪检测各组的细胞周期,计算增殖指数(PI)和凋亡指数(AI);用裸鼠移植瘤模型验证环杷明的体内抑制作用.结果 随着环杷明作用浓度增加和时间延长,对ASPC-l细胞增殖的抑制作用逐渐增强,当环杷明浓度达到10 mol/L时,24h抑制率达到近90%.环杷明使细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞凋亡率增加.环杷明浓度为10mol/L时,AI达到25%左右,而PI下降至24%左右.在裸鼠移植瘤模型中,环杷明同期给药组肿瘤生长缓慢,而延期给药组开始生长速度与对照组相似,给药后生长逐渐受抑制,3组肿瘤均值间差异均有统计学有意义(P＜0.05).结论 环杷明通过细胞周期阻滞和促进细胞凋亡,发挥对胰腺癌细胞增殖的抑制效应,并且这种效应呈剂量和时间依赖性.     

胰腺癌组织中细胞凋亡及相关基因bcl-2和bax表达的研究

为了探讨细胞凋亡及相关基因ｂａｘ和ｂｃｌ 2表达在胰腺癌形成和发展中的作用 ,我们对 31例胰腺癌和 14例慢性胰腺炎组织中细胞凋亡情况及ｂａｘ和ｂｃｌ 2基因表达产物进行检测 ,现报告如下。资料与方法1.一般资料 :收集 1990年 1月至 1998年 7月手术切除的胰腺癌标本 31例 ,其中男 2 1例 ,女 10例 ,平均年龄 5 4岁。其中高分化腺癌 15例 ,中度分化腺癌 6例 ,低分化腺癌 9例 ,未分化腺癌 1例。按ＴＮＭ进行临床分期 ,Ⅰ期 5例 ,Ⅱ期6例 ,Ⅲ期 11例 ,Ⅳ期 9例。选取同期 14例慢性胰腺炎标本作对照研究。2 .染色方法 :检测细胞凋亡采用ＩＳ…     

胰腺癌中bcl-2的表达与细胞凋亡及癌基因c-myc表达的关系

目的：探讨人胰腺癌中bcl-2的变化情况与细胞凋亡及c-myc表达的关系。方法：采用免疫组织化学（SP法）和分子原位杂交法检测bcl-2及c-myc在胰腺癌病人癌组织（50例）和胰腺癌转移灶组织（15例）中的表达。采用TUNEL法检测细胞凋亡。结果：细胞凋亡的变化规律与胰腺癌的发生发展和临床病理特征有着内在联系。在mRNA和蛋白水平上bcl-2基因和c-myc基因分布一致。bcl-2蛋白的表达影响胰腺癌中细胞凋亡,并与c-myc蛋白在胰腺癌和胰腺癌转移灶组中的表达协同关系。结论：bcl-2和c-myc基因在胰腺癌发生和发展过程中发挥着重要作用。     

胰腺癌细胞凋亡与bcl-2,bax基因的表达

目的探讨胰腺癌组织中的bcl-2和bax的表达及bcl-2/bax比值与胰腺癌细胞凋亡的关系.方法对30例胰腺癌标本应用免疫组化SP方法测定胰腺癌切片中的凋亡抑制基因bcl-2和凋亡促进基因bax的表达;同时应用TUNEL法测定胰腺癌细胞原位凋亡情况.结果高分化腺癌的凋亡指数(AI)为(5.70±1.21)%;中低分化腺癌为(6.80±2.01)%.AI与bcl-2/bax比值呈负相关关系(r=- 0.5583,P<0.05 ).结论 bcl-2和bax在胰腺癌细胞凋亡调节过程中起着重要作用.     

芦竹素对人前列腺癌细胞系细胞凋亡及bcl-2/bax表达的影响

目的:研究芦竹素对人前列腺癌细胞系LNCap细胞凋亡的影响及其作用机理。方法:取对数生长期的LNCap细胞,分别用不同浓度的芦竹素处理48 h后,用MTT细胞增殖法检测细胞活力,Hoechst染色观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,并用Western blot检测LNCap细胞中Bcl-2和casepase家族蛋白表达情况。结果:芦竹素能以剂量依赖性方式降低LNCap细胞的活力,浓度为20、40、80μg/m L的芦竹素作用LNCap细胞48 h后,细胞凋亡率分别增加至11.3%、25.2%、57.1%,明显高于对照组(0.5%);不同浓度的芦竹素处理LNCa P细胞48 h后,G0/G1期细胞的比例增加,而G2/M期和S期的比例减少;芦竹素处理组LNCap细胞Cleaved-caspase 3及Cleaved-caspase 9表达量增加,同时促凋亡蛋白Bax表达量增加,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达量降低,且呈剂量依赖性。结论:芦竹素能抑制LNCap细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制与上调Cleaved-Csepase 3,Cleaved-Casepase 9和Bax表达、下调Bcl-2的表达有关。     

胰岛素调节人胰腺癌细胞ASPC-1中HIF-1α的表达研究

目的 探讨胰岛素对胰腺癌细胞株ASPC-1中缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)表达的影响.方法 将ASPC-1细胞分为5组:常氧组,常氧加胰岛素组,缺氧组,同一缺氧时间不同胰岛素浓度组以及相同胰岛素浓度不同缺氧时间组,实时定量PCR检测HIF-1α基因表达,免疫细胞化学与Western blot检测HIF-1α蛋白表达水平的变化.Transwell实验检测加入胰岛素后肿瘤细胞侵袭能力的变化.结果 常氧下ASPC-1细胞即有一定水平HIF-1α表达,加入胰岛素刺激后HIF-1α蛋白表达随着胰岛素浓度的升高和作用时间的延长而逐渐升高,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05);缺氧条件下HIF-1α表达较常氧时升高(P＜0.05);相同缺氧时间使用不同浓度胰岛素刺激时,高浓度胰岛素刺激下HIF-1α的表达较单纯缺氧更高(P＜0.05),低浓度胰岛素对HIF-1α无明显作用(P＞0.05);使用相同胰岛素处理后再进行缺氧处理,随着时间延长HIF-1α的表达先升高后下降,但各处理组较对照组差异均有统计学意义(P＜0.05).Transwell实验显示胰岛素可增强胰腺癌细胞的侵袭能力(P＜0.05).结论 胰岛素可上调胰腺癌细胞ASPC-1中HIF-1蛋白表达,并且这种作用具有一定的剂量依赖性和时间依赖性.胰岛素还可以增加ASPC-1的侵袭能力.

Abstract：

Objective To investigate the effect of insulin on the expression of hypoxia-inducible factor-1α in human pancreatic cancer cell line ASPC-1. Methods We divided ASPC-1 cells into five groups: normoxia; normoxia stimulated with insulin; hypoxia; hypoxia pretreated with different concentration of insulin; hypoxia of different time points pretreated with same concentration of insulin. Real-time PCR was used to test the expression of HIF-1α mRNA. Immunohistochemistry was used to examine the expression of HIF-1α in ASPC-1 of insulin treated cancer cells. Western blot was used to determine the expression of HIF-1 α protein in those cells. Transwell was used to test whether insulin could enhance the invasion ability of ASPC-1 pancreatic cancer cells. Results Insulin promotes HIF-1α protein expression. ASPC-1 cells expressed low levels of HIF-1α protein under normoxic condition. After stimulated with insulin, the expression of HIF-1 α protein significantly increased (P ＜ 0. 05 ). After treated with hypoxia, the expression of HIF-1α protein also increased(P ＜ 0. 05 ). Low concentrations of insulin didn't increase the expression of HIF-1α under hypoxic environment ( P ＞ 0. 05 ), while high concentration of insulin could increase its expression(P ＜ 0. 05). When ASPC-1 cells pretreated with insulin suffered from hypoxia, the expression of HIF-1α first increased then decreased moderately( P ＜0. 05). Insulin could enhance the invasion ability of pancreatic cancer cells( P ＜ 0. 05 ). Conclusions Insulin mediates the expression of HIF-1α protein in human pancreatic cancer ASPC-1 cells with the characteristics of dose and time dependency. Insulin could enhance the invasion ability of ASPC-1 cells.     

胃液对膀胱癌细胞系生长抑制、细胞凋亡及bcl-2/bax表达的影响

目的 探讨胃液对膀胱癌生长抑制、细胞凋亡及bcl-2/bax表达的影响。方法 采用细胞培养、四唑盐比色试验（MTT）、DNA提取及电泳、流式细胞仪和免疫组织化学等方法,观察胃细胞培养、四唑盐比色试验（MTT）、DNA提取及电泳、流式细胞仪和免疫组织化学等方法,观察胃液对膀胱癌细胞系生长抑制、细胞凋亡及bcl-2/bax表达的影响。结果 高浓度胃液（19-38mmol/L）抑制膀胱癌细胞系的生长繁殖,低浓度胃液（0.594-9.500mmol/L)则促进膀胱癌细胞系的生长繁殖,胃液能诱导体外培养的膀胱癌细胞凋亡,膀胱癌细胞系BIU-87中bcl-2、bax均有表达（分别为63.5%和41.4%),经胃液、稀盐酸或阿霉素处理后,bcl-2表达下降（分别为34.8%、37.3%和29.6%),bax表达上升（分别为49.3%、47.1%和52.2%),bcl-2/bax比值小于1。结论 胃液能抑制膀胱癌的生长,诱导其凋亡。     

LDH-A shRNA对人胰腺癌细胞系PANC-1增殖凋亡和LDH-A表达的影响

目的 通过构建乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase,LDH-A)shRNA并转染PANC-1细胞,分析其对胰腺癌细胞生物学特性的影响.方法 构建3条LDH-A shRNA质粒,脂质体转染质粒至PANC-1细胞中,实时荧光定量PCR法检测不同质粒转染后LDH-A mRNA的表达变化.将抑制效率最高的shRNA质粒-3转染PANC-1细胞,MTT法检测转染前后细胞增殖的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化.RT-PCR检测LDH-A表达以及酶化学染色检测转染前后LDH活性的变化.结果 3种LDH-A shRNA质粒转染胰腺癌细胞后,LDH-A shRNA质粒.3的2-△△Ct值为(0.47±0.02),较正常细胞(0.71±0.01)小,存在抑制作用,且抑制效率较高.PANC-1细胞在转染shRNA质粒-3后12 h转染组吸光度值显著低于对照组,细胞出现增殖抑制,24、36、48和72 h,转染组的吸光度值均显著低于对照组(P<0.01).转染质粒组细胞凋亡也明显增高,其凋亡率达到61.74%;转染shRNA质粒-3的胰腺癌细胞株,其LDH-A mRNA的表达明显抑制,酶化学染色显示LDH活性明显减弱.结论 LDH-A shRNA通过抑制胰腺癌细胞LDH-A mRNA的表达抑制其增殖及诱导细胞凋亡.     

胰腺癌组织中bcl-2、NDPK/nm23和p16蛋白表达的意义

目的 探讨ｂｃｌ－２、ＮＤＰＫ／ｎｍ２３和ｐ１６蛋白在胰腺癌组织中的表达及其意义。方法 应用免疫组织化学方法检测ｂｃｌ－２、ＮＤＰＫ／ｎｍ２３和ｐ１６蛋白在３４例胰腺癌组织中的表达。结果 本组３４例胰腺癌组织中ｂｃｌ－２、ＮＤＰＫ／ｎｍ２３和ｐ１６蛋白阳性表达率分别为６５％、６１％和５０％,其表达与肿瘤的临床分期及病理分化程度有较好的对应关系。淋巴结转移组ｂｃｌ－２、ＮＤＰＫ／ｎｍ２３和ｐ１６蛋白     

生长抑素类似物诱导胆管癌细胞凋亡和bcl-2/bax表达的研究

目的探讨生长抑素类似物SMS2 0 1 995 (SMS)对人胆管癌SK ChA 1细胞凋亡和凋亡调控基因bcl 2和bax的影响。方法用DNA凝胶电泳、流式细胞仪检测AnnexinV标记凋亡细胞、免疫组化和原位杂交方法研究SMS(10 0ng/ml)处理 6、12和 2 4h后人胆管癌SK ChA 1细胞凋亡和bcl 2 /bax表达的变化。结果SMS作用SK ChA 1细胞 6h对DNA无明显影响 ,作用 12和 2 4h后DNA凝胶电泳出现呈典型梯状条带。SMS作用 6、12和 2 4h后 ,AnnexinV标记的凋亡细胞分别为 (2 2±5 ) % ,(39± 7) %和 (5 8± 10 ) %。同时 ,SMS可使细胞bcl 2蛋白表达下降 ,使bax蛋白和mRNA表达升高。结论SMS能诱导SK ChA 1细胞发生凋亡 ,bax和bcl 2凋亡基因介导了SMS对SK ChA 1细胞凋亡的发生     

凋亡相关基因bcl-2和bax在胆管癌组织中表达的意义

目的　探讨细胞凋亡抑制基因ｂｃｌ－ ２ 和凋亡促进基因ｂａｘ 在胆管癌组织中的表达。方法　应用免疫组化方法对２０ 例胆管癌（ＣＨＣ）和７例先天性胆总管囊肿（ＣＣＣ）组织中ｂｃｌ－ ２和ｂａｘ 蛋白进行检测。结果　２０例ＣＨＣ中有１例ｂｃｌ－ ２ 蛋白表达阳性（５％ ）,７例ＣＣＣ中ｂｃｌ－ ２均表达阴性。２０例ＣＨＣ中有１１ 例ｂａｘ 蛋白表达阳性（５５％ ）,７例ＣＣＣ中仅１ 例表达阳性（１４．２９％ ）,两组间差异有显著意义（Ｐ＜ ０．０１）。结论　ｂｃｌ－ ２ 和ｂａｘ 蛋白的改变在胆管癌发生发展过程中不起重要作用。     

胆囊癌中抑癌基因PTEN、凋亡调控基因Fas/APO-1和bcl-2的表达及其意义

肿瘤的发生、发展必有癌基因的激活与抑癌基因的失活。1997年，研究人员从10q23．3染色体上克隆到了PTEN基因（磷酸酶张力蛋白基因，phosphatase and tensin homology deleted on chromosometen，PTEN）并证实为肿瘤抑制基因。PTEN基因在胆囊癌中的表达及与生物学特性关系的研究罕见报道。细胞凋亡（apoptosis）与肿瘤的发生、发展有密切关系，大肠癌中的Fas／APO-1和bcl-2为凋亡调控作用相反的基因。我们检测了上述基因在胆囊癌和非癌组织中的表达，以期了解它们在胆囊癌发生发展中的作用。     

抗凋亡基因bag-1和bcl-2在结肠癌组织中的表达及其相互关系

目的研究抗7岗亡基因bag-l和bcl-2在结肠癌组织中的表达及其意义，并探讨两者间的关系。方法应用免疫组织化学链霉亲合素一生物素一过氧化物酶复合物法(SABc法)对64例结肠癌组织及10例正常结肠组织中bag-l和bcl-2基因的表达进行检测。结果bag-l和bcl-2在结肠癌中的表达与结肠癌病理类型、肿瘤直径、浸润深度及有无淋巴结转移无关，但bag-l与病理分级、远处转移、Dukes分期及预后密切相关(P＜0．05)，而bcl-2与这几项临床病理因素无明显相关性(P＞O．05)；bag-l和bcl，2在结肠癌的发生发展过程中呈正相关(r=O．475)。结论结肠癌组织中有不同水平bag-l和bcl-2蛋白的高表达，它们可作为结肠癌早期筛选的一项指标，并对疾病的预后有着重要意义。     

肾癌组织中细胞凋亡及相关基因bcl-2和bax表达的研究

目的探讨肾癌的发病机制。方法采用原位ＤＮＡ片断末端标记和免疫组织化学方法,检测４８例肾癌组织细胞凋亡状态及凋亡相关基因ｂｃｌ２和ｂａｘ蛋白的表达。结果４８例肾癌组织中ｂｃｌ２蛋白低表达２２例,凋亡指数（ＡＩ）均值为１３５;高表达２６例,ＡＩ均值为１０４。两组ＡＩ均值间统计学分析差异有显著意义（Ｐ＜００５）。ｂａｘ蛋白低表达３４例,ＡＩ均值为１０３;高表达１４例,ＡＩ均值为１６３。两组ＡＩ均值间统计学分析差异有非常显著意义（Ｐ＜００１）。ｂｃｌ２蛋白表达越强,ｂａｘ蛋白表达越弱,凋亡细胞数就越少。结论ｂｃｌ２和ｂａｘ蛋白均参与了肾癌组织中细胞凋亡的调节,并在肾癌的发生和发展中发挥着重要作用     

凋亡相关基因产物Fas/APO-1和bcl-2蛋白在肾癌组织中的表达及意义

目的研究凋亡相关基因Ｆａｓ／ＡＰＯ－１和ｂｃｌ－２在肾癌发生发展中的作用。方法采用免疫组织化学法对３５例肾癌组织和２６例远离肾癌的正常肾组织Ｆａｓ／ＡＰＯ－１和ｂｃｌ－２蛋白的表达进行检测。结果肾癌组织Ｆａｓ／ＡＰＯ－１蛋白表达率为５７．１４％，明显低于正常肾组织中的表达率（８４．６２％，Ｐ＜０．０５），且表达强度也明显低下；而ｂｃｌ－２蛋白表达率为８０．００％，明显高于正常肾组织中的表达率（５３．８５％，Ｐ＜０．０５）。结论Ｆａｓ／ＡＰＯ－１与ｂｃｌ－２基因共同参与了肾癌的发生和发展。     

特异性阻断Shh信号通路对胰腺癌细胞系SUIT-2增殖和凋亡的影响

目的： 研究组抑胚胎发育相关信号通路Sonic hedgehog (Shh)对人胰腺癌细胞系SUIT-2增殖和凋亡的影响。方法：用四唑蓝（MTT）比色试验检测Shh信号通路特异性抑制剂cyclopamine对胰腺癌细胞系SUIT-2增殖的抑制作用；流式细胞术检测细胞增殖指数(PI)和凋亡指数(AI)；用裸鼠移植瘤模型检测cyclopamine对移植瘤生长的抑制作用。 结果：cyclopamine对SUIT-2细胞株增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖性。cyclopamine作用后使胰腺癌细胞周期阻滞在G0／G1期，细胞凋亡增加；SUIT-2的AI为14.3±0.35， PI为36.1±0.44，对照组分别为1.3±0.24和52.3±0.28（均P<0.05）。在裸鼠移植瘤模型中，cyclopamine同时给药组肿瘤生长明显受到抑制，而延期给药组对肿瘤生长的抑制作用较弱。结论：shh信号分子对胰腺癌细胞的增殖起维持作用；通过特异性阻断该信号通路，可以抑制胰腺癌细胞增殖，并促进细胞凋亡。     

凋亡抑制基因bcl-2在前列腺组织中的表达

目的　探讨前列腺组织中bcl 2基因表达的意义。　方法　采用核酸分子原位杂交技术 ,对 11例胎儿和 2 7例成人尸体前列腺组织、6 0例良性前列腺增生患者前列腺组织中bcl 2基因mRNA表达进行检测。　结果　 9例胎儿前列腺组织bcl 2阳性表达于胚芽上皮细胞 ,其中轻度阳性8例、中度 1例 ,呈弥漫分布 ,染色浅淡。 17例成人正常前列腺组织bcl 2阳性表达于腺上皮基底细胞 ,阳性率 6 3.0 %。分泌细胞阳性表达者 9例 ;高倍镜下见细胞浆染色 ,较淡。 5 0例增生前列腺组织bcl 2阳性表达于腺上皮基底细胞 ,阳性率 83.4 % ;分泌上皮细胞阳性表达 34例 (5 6 .7% ) ;高倍镜下染色均见于细胞浆。增生组前列腺基底细胞、分泌上皮细胞bcl 2阳性表达均高于正常前列腺组 (χ2=4 .36 ,χ2 =4 .0 6 ) ,差别有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;正常前列腺与增生前列腺基底上皮细胞bcl 2阳性表达均高于分泌上皮细胞 (χ2 =7.5 0 ,χ2 =10 .2 0 ) ,差别有显著性意义 (P <0 .0 5 )。　结论　bcl 2基因主要表达于前列腺基底细胞 ,可能在调节前列腺上皮细胞凋亡中有重要作用