HCC和HepG2细胞表达HCV C蛋白、p14ARF、p21WAF1的意义探讨

目的检测HCVC蛋白、p14、p21在HCC和表达野生p53HepG2中的表达，初步探讨C蛋白在HCC和HepG2中对p14-p53-p21凋亡通路的作用。方法收集42例HCC石蜡组织，采用免疫组织化学EnVision法检测HCC组织中核心蛋白、p14和p21的表达，用统计学方法及临床联系分析它们之间的关系；用细胞化学EnVision法和免疫荧光法检测核心蛋白、p53、p14和p21在HepG2细胞中的表达。结果C蛋白、p14和p21的阳性表达主要定位于细胞核膜和细胞核中；HCC组织中C蛋白、p14和p21阳性率分别为40．5％、45．24％、19．05％；3组间的Kruskal-Wallis检验P=0．03，差异显著；C蛋白与p14、p21间及p14与D21间蛋白阳性强度相关性分析显示，P值分别为0．000、0．43、-0．34，相关系数rs分别为0．64、-0．29、-0．33。HepG2细胞有较高的C蛋白和p53表达及少量的p14、p21蛋白表达。结论在C蛋白阳性的HCC中p14的表达与C蛋白有关，HCC中D21表达缺陷是十分常见的；C蛋白在HCC中可能影响p53通路，下调p21的表达，阻止其凋亡作用；HepG2细胞永生化特性可能与HCV或HCVC蛋白有关。     

顺铂对人肝癌细胞凋亡及相关基因野生型p53、p21WAF1/CIP1和c-myc表达的影响

１．材料与方法：主要试剂：人肝癌细胞株ＳＭＭＣ—７７２１引自第二军医大学,顺铂购自美国Ｓｉｇｍａ公司,生物素标记人野生型ｐ５３（ｗｔｐ５３）、ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１和ｃ－ｍｙｃ探针为北京中山公司产品,原位杂交试剂盒购自北京医科大学病理系,细胞总ＲＮＡ提取试剂盒购自华美生物工程公司。方祛：（１）细胞凋亡模型的构建：用ＭＴＴ比色法观察抗癌药顺铂对肝癌细胞生长的抑制作用并计算抑制率。收集不同药物浓度作用下的培养细胞,进行ＨＥ染色,倒置光显微镜下观察细胞凋亡及坏死的形态变化并计算凋亡率。不同作用点的细…     

p53、p21WAF1、MDM2在NK/T细胞淋巴瘤中的表达及意义

p53是一个重要的抑癌基因,在调节细胞生长、凋亡及DNA修复中有重要的作用.其突变在淋巴瘤中很少,但p53蛋白在淋巴瘤中常过表达,尤其恶性度较高者.p21WAF1是细胞周期抑制因子.     

Plk1与p21WAF1/CIP1在肝细胞癌中的表达

目的 细胞周期抑制因子p21<'WAF1/CIP1>(p21)可在转录水平抑制Polo-like kinase1(Plk1)基因的表达,本文旨在探讨Plk1和p21蛋白在肝细胞癌中的表达及相关性.方法 应用Westem Blot方法检测10对原发性肝细胞癌和癌旁组织中Plk1和p21蛋白的表达情况.通过将pFlex-21表达质粒瞬时转染人肝癌细胞系HepG2细胞,进一步检测p21过表达对Plk1mRNA和蛋白表达的影响.结果 Plk1在10例肝癌组织中的表达均高于配对癌旁组织,p21蛋白在7对肝癌组织中的表达高于配对癌旁组织.HepG2细胞瞬时表达p21质粒后,Plk1的蛋白表达和mRNA水平均无变化(P>0.05).结论 Plk1和p21在肝细胞癌组织中的表达具有一定的肿瘤特异性.肝癌组织中p21蛋白过表达可能不具有抑制Plk1表达的作用,具体机制还有待于进一步研究.     

p33ING1转染HepG2肝癌细胞对p21WAF1/ CIP1表达的影响

目的 探讨p33ING1对pcDNA3.1-p33ING1转染后的HepG2肝癌细胞p21WAF1/CIP1表达的影响.方法 实验分为对照组和转染组;将pcDNA3.1-p33ING1及空载质粒pcDNA3.1转染到HepG2细胞中,最终建立稳定转染的细胞株,RT-PCR检测p33ING1表达;RT-PCR和免疫组化检...     

p21WAF1/CIP1 基因转染对胃癌细胞生物学活性的影响

目的探讨p21^WAF1／CIP1基因(p21基因)对人胃癌细胞系(BGC)生物学活性的影响。方法应用分子克隆技术构建p21^WAF1／CIP1基因真核表达载体，然后用脂质体法将其导入到人胃癌细胞BGC中，经G418筛选获得可稳定表达p21^WAF1／CIP1的人胃癌细胞克隆，用中性红摄入法观察细胞生长速率，流式细胞仪(FcM)检测细胞周期变化。结果p21导入胃癌BGC细胞后，肿瘤细胞增值能力明显受到抑制，并出现细胞周期G1期阻滞。结论p21基因具有抑制胃癌细胞增殖的作用，可作为胃癌基因治疗的靶基因．     

p21WAF1/CIP1与大肠癌的相关性研究概况

细胞周期正常有序完成,受控于精密的分子调控机制,细胞周期蛋白激酶抑制物(cyclin kinase inhibitor,CKI)在该机制中起重要作用,细胞增殖抑制基因p21WAF1/CIP1(wide-type p53-acfivateA factor 1,WAF1/cyclin-depedent kinase interact-ing protein 1,CIP1,下述p21概指p21WAF1/CIP1)是CKI所包含的双重组特异性家族(CIP/KIP)的代表[1,2],具有广泛细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)抑制活性,在细胞周期调控中起负调节作用,表达异常可致使细胞周期调节紊乱,而导致细胞增殖失控,引起肿瘤发生,研究显示,p21基因对大肠癌的发生、发展、转归及预后密切相关.本文将p21与大肠癌临床病理学特征及预后的相关性研究作一介绍.     

p14ARF基因甲基化及蛋白表达在直肠癌中的作用

目的:研究p14ARF基因甲基化及蛋白表达在直肠癌中的作用,探讨p14ARF基因与直肠癌生物学行为的关系.方法:采用MSP方法(甲基化特异性PCR)检测30例直肠癌组织、腺瘤组织、正常黏膜组织p14ARF基因甲基化情况.采用RT-PCR方法(半定量逆转录PCR)检测P14ARF基因在大肠癌组织、腺瘤组织、正常黏膜组织中的表达情况及采用免疫组织化学法(SP法)检测p14ARF蛋白在这些组织中的表达情况,然后用t检验及卡方检验对其数据进行分析.结果:p14ARF基因在30例直肠癌组织、腺瘤组织、直肠正常黏膜组织中表达量分别为0.283±0.011,0.721±0.023,0.958±0.015.直肠癌组织中P14AR基因表达低于腺瘤组织(P<0.05),明显低于直肠正常黏膜组织(P<0.01),三者差异有统计学意义(P<0.05).P14ARF蛋白在30例直肠癌组织、腺瘤组织、正常黏膜组织中表达率分别为20.0%、56.7%、76.7%.p14ARF蛋白在正常组织中的表达高于直肠腺瘤(P<0.05),明显高于直肠癌组织(P<0.01):p14ARF甲基化在30例直肠癌组织、腺瘤组织、正常黏膜组织中表达率分别为46.6%、20.0%、0.0%.三者差异有统计学意义.p14ARF基因甲基化与直肠癌分化程度及淋巴转移密切相关(P<0.05).结论:p14ARF甲基化可能参与了直肠腺瘤-腺癌的演变过程,可能是直肠癌发生的早期事件.p14ARF甲基化状态可作为直肠癌患者早期诊断的一个生物学指标.     

原发性肝细胞癌中WAF1／CIP1基因的及其与p53基因突变的关系

目的 研究原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）组织中ＷＡＦ１基因的表达及其与ｐ５３基因突变和临床病理学指标的关系和意义。方法 应用半定量ＲＴ－ＰＣＲ、免疫组织化学及定量ＤＮＡ图像分析的方法,检测ＷＡＦ１基因在３２例ＨＣＣ及其癌旁肝组织和５例正常肝细胞中的表达,研究其与ｐ５３基因突变及临床病理学指标的关系。结果 肝癌组织中ＷＡＦ１ｍＲＮＡ表达相对值（１．０６±０．３７）Ｕ低于其相应旁旁肝组织（１．３０±０．３７     

Pokemon基因在结直肠癌组织中的表达及其与p14ARF、P53蛋白表达的相关性

Pokemon是红系髓性致癌因子(POK)家族成员之一,作为第一个被证实的ARF特异性转录阻遏物,Pokemon与肿瘤发生密切相关.已有研究证明,Pokemon作用于许多肿瘤抑制基因和原癌基因的上游[1,2],Pokemon的独特作用是以控制其他癌基因的活性,成为致癌分子通路的主要开关.     

胃癌组织mdm2、p53及p21蛋白表达与EB病毒感染的关系

应用免疫组化技术检测13例EB病毒相关胃癌（EBVaGC）（观察组）组织中mdm2、p53和p21蛋白的表达,并与45例EB病毒阴性胃癌（EBVnGC）（对照组）进行比较,发现两组mdm2、p53和p21蛋白的阳性检出率无明显差异（P均〉0．05）,但观察组p53蛋白过表达率（15．38％）明显低于对照组（57．78％）,P〈0．01。观察组核抗原基因EBNA1均为阳性,潜伏膜蛋白基因LMP1均为阴性,即刻早期基因BZLF1、早期基因BARF1和BHRF1阳性率分别为46．15％、46．15％和15．38％,三者与mdm2、p21和p53蛋白的表达均无显著相关性（P〉0．05）。提示胃癌组织中病毒感染与p53蛋白的异常表达有关,而与mdm2和p21蛋白的异常表达无相关性。     

Plkl与p21~（WAF1/CIP1）在肝细胞癌中的表达

目的细胞周期抑制因子p21WAF1/CIP1（p21）可在转录水平抑制Polo-like kinase1（Plk1）基因的表达,本文旨在探讨Plk1和p21蛋白在肝细胞癌中的表达及相关性。方法应用Western Blot方法检测10对原发性肝细胞癌和癌旁组织中Plk1和p21蛋白的表达情况。通过将pFlex-p21表达质粒瞬时转染人肝癌细胞系HepG2细胞,进一步检测p21过表达对Plk1mRNA和蛋白表达的影响。结果 Plk1在10例肝癌组织中的表达均高于配对癌旁组织,p21蛋白在7对肝癌组织中的表达高于配对癌旁组织。HepG2细胞瞬时表达p21质粒后,Plk1的蛋白表达和mRNA水平均无变化（P〉0.05）。结论 Plk1和p21在肝细胞癌组织中的表达具有一定的肿瘤特异性。肝癌组织中p21蛋白过表达可能不具有抑制Plk1表达的作用,具体机制还有待于进一步研究。     

肺鳞癌组织Mdm2蛋白表达p53基因突变相关性研究

目的探讨原发性肺鳞癌与Ｍｄｍ２蛋白表达、ｐ５３基因突变之间的相关性。方法采用ＳＰ免疫组织化学方法和银染聚合酶链式反应单链构象多态性（银染ＰＣＲＳＳＣＰ）方法检测手术切除、经病理证实的４５例原发性肺鳞癌组织及癌旁肺组织中Ｍｄｍ２蛋白表达和ｐ５３基因突变情况。结果免疫组织化学检测的４５例肺鳞癌组织Ｍｄｍ２蛋白阳性率为６２％（２８／４５）,２例癌旁肺组织中Ｍｄｍ２蛋白呈弱阳性表达,免疫组织化学方法结合银染ＰＣＲＳＳＣＰ检测４５例肺癌组织ｐ５３基因突变,阳性率为５１％（２３／４５）,４５例癌旁肺组织未检测到ｐ５３基因突变。（１）肺鳞癌与ｐ５３基因突变有明显相关性（Ｐ＜０．０５）。（２）肺鳞癌与Ｍｄｍ２基因产物过度表达有明显相关性（Ｐ＜０．０５）。（３）Ｍｄｍ２蛋白过度表达与ｐ５３基因突变复合存在和肺鳞癌淋巴转移（６６％,１０／１５）有明显相关性（Ｐ＜０．０５）。结论Ｍｄｍ２蛋白过度表达与ｐ５３基因突变是临床估计患者预后重要的分子生物学指标     

肝胆管癌丙型肝炎病毒感染与p53和p21WAFD/CIP1异常表达的关系

为探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染与Ｐ５３和Ｐ２１ＴＷＡＦ－／ＣＩＰ１基因的关系。采用 化技术对２９例原发性肝胆管癌中ＨＣＶ抗原（ＮＳ５－Ａｇ）、ｐ５３和ｐ２１＾ＷＡＦＩ＝／ＣＩＰ１蛋白表达进行研究。结果：２９例胆管癌中ＮＳ５－Ａｇ、ｐ５３及Ｐ２１ＴＷＡＦＩ／ＣＩＰＩ蛋白表达进行研究。结果：２９例胆管癌中ＮＳ５－Ａｇ、Ｐ５３display structure     

胃黏膜病变中突变型p53、Mdm2和PCNA蛋白表达及与幽门螺杆菌感染的关系

目的探讨胃黏膜病变中突变型p53、Mdm2、增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白的表达及其与幽门螺杆菌（Hp）感染的关系。方法应用免疫组化PV-9000法染色及Giemsa染色检测胃黏膜病变中突变型p53、Mdm2、PC-NA蛋白的表达和Hp感染情况。结果在慢性浅表性胃炎（csG）、慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生（CAG伴IM）、不典型增生（Bys）及胃癌（GC）中,突变型p53、Mdm2、PCNA阳性表达随病变发展而逐渐升高,突变型p53在CSG组高于GC组,GC组高于CAG伴IM组（P均〈0．05）。不同胃黏膜病变之间Mdm2比较均有统计学差异（P〈0．05）。在同一病变中Hp阳性者突变型p53、Mdm2、PCNA阳性表达一般高于Hp阴性者,突变型p53在CAG伴IM组Hp阳性与阴性者间有统计学差异（P〈0．05）,PCNA和Mdm2在Dys组Hp阳性与阴性者有统计学差异（P〈0．05）。GC组中突变型p53、Mdm2、PCNA蛋白表达无相关关系。结论突变型p53、Mdm2和PCNA蛋白的表达及Hp感染共同参与胃黏膜病变的发生、发展。     

吲哚美辛对结肠癌细胞CDK2、CDK4、P21WAF1/CIP1、Bcl-2及Bax蛋白表达的影响

目的：非甾体类抗类药通过环氧合酶途径是抑制肿瘤的机制之一，是否还有其他途径抑制细胞增殖及诱导凋亡。探讨吲哚美辛抗肿瘤的作用机制。为其临床应用实验依据。方法：不同浓度的吲哚美辛作用于结肠癌细胞株HCT116细胞24h，通过Western蛋白印迹技术检测CDK2、CDK4、p21s^WAF1/CIP1、Bcl-2及Bax蛋白表达。结果：吲哚美辛降低细胞周期素依赖蛋白激酶CDK2、CDK4及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达上，上调细胞周期依赖蛋白激酶抑制剂p21s^WAF1/CIP1蛋白，而对促凋亡蛋白Bax的表达无影响。结论：吲哚美辛通过降低CDK2、CDK4、Bcl-2蛋白，上调p21s^WAF1/CIP1的表达来抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡。