hCG对绒癌细胞系MT-MMP和TIMP mRNA表达的影响

目的　探讨人类绒毛膜促性腺激素 (hCG)对绒癌细胞表达侵袭性相关基因的影响。方法　以绒癌组织来源的JEG 3细胞系为研究对象 ,采用逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)方法 ,观察了hCG对JEG 3细胞膜型金属蛋白酶 (MT MMP)和金属蛋白酶组织抑制因子 (TIMP)mRNA表达的影响。结果　在所有 6型MT MMP中JEG 3细胞仅表达MT2 MMP ,且其表达量可被 2 5IU/mlhCG处理 5 0h而降低。而在TIMP的 4种亚型中 ,JEG 3细胞表达其中的TIMP 1和TIMP 2两型 ,在受hCG处理后JEG 3细胞中TIMP 1的表达量下降 ,TIMP 2则被诱导增加。结论　高浓度长时间的hCG作用可通过改变MT MMP和TIMP转录表达的变化影响绒癌细胞 /滋养细胞的侵袭性。     

hCG抑制JEG-3绒癌细胞系基质金属蛋白酶的表达

 目的　揭示人类绒毛膜促性腺激素 (hCG)对绒癌细胞侵袭力的影响。方法　采用逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)检测方法 ,考察了hCG对JEG 3绒癌细胞系基质金属蛋白酶转录表达的影响。结果　绒癌细胞系JEG 3表达MMP 8、 10、 12、 19,而其它亚型MMP的表达在本研究中未检测到。将JEG 3细胞在 2 5IU/mlhCG中温育 5 0h后 ,细胞中MMP 8、 10、 12、 19的表达量均降低。结论　JEG 3绒癌细胞系的侵袭性与MMP 8、 10、 12、 19的表达有关 ,高浓度的hCG长时间温育可能通过降低MMP的表达而抑制绒癌细胞的浸润转移。     

人绒毛膜促性腺激素抑制绒癌细胞系表达PAI-1

目的 :为探讨人绒毛膜促性腺激素 (hCG)对绒癌细胞侵袭性的影响。方法 :采用半定量逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)检测方法 ,观察了不同浓度hCG不同处理时间对JEG 3绒癌细胞系表达PAI 1的影响。结果 :分别用 0、5 0、5 0 0 0、2 5 0 0 0mIU mLhCG处理 4 8h后 ,JEG 3细胞中PAI 1mRNA的含量逐渐降低 ,并随hCG作用浓度增高而显著。此外还发现 ,在 2 5 0 0 0mIU mLhCG的作用下 ,JEG 3细胞中PAI 1的表达随处理时间的延长逐渐减低。结论 :推测hCG可能通过抑制细胞中PAI 1的表达而影响绒癌细胞的侵袭行为     

hCG对JEG-3细胞系IGF-II表达的影响

目的 :揭示人绒毛膜促性腺激素 (hCG)是否通过影响细胞因子的生成而改变滋养层细胞或滋养层细胞来源的绒癌细胞的侵袭性。方法 :以JEG 3绒癌细胞系为研究对象 ,采用半定量逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)方法 ,观察了hCG对JEG 3细胞表达胰岛素样生长因子 II(IGF II)的影响。结果 :分别用 0、5 0、5 0 0、5 0 0 0、2 5 0 0 0mIU/mLhCG处理 4 8h后 ,JEG 3细胞中IGF IImRNA的含量逐渐降低 ,并表现出一定的浓度效应———随hCG作用浓度增高而显著 ;另外 ,观察受 2 5 0 0 0mIU/mLhCG处理0、6、12、2 4、30、36、4 8h后JEG 3细胞中IGF II表达的变化情况 ,发现IGF II的表达并非一直受到抑制 ,而是在经过短暂的诱导后再降低。结论 :hCG可能通过调节IGF II在滋养层细胞或滋养层细胞来源的绒癌细胞中的表达 ,进而影响细胞的侵入或浸润转移     

RU486对前列腺癌细胞增殖相关基因表达的影响

目的:探讨米非司酮(RU486)对人前列腺癌PC-3和LNCap细胞增殖及相关基因Cyclin E、CDK2、p21和p27表达的影响.方法:体外培养前列腺癌PC-3和LNCap细胞,用RU486处理PC-3和LNCap细胞,CCK-8检测对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测对细胞周期的影响;RT-PCR法检测细胞增殖相关基因Cyclin E、CDK2,p21和p27mRNA的表达,蛋白质印迹法检测细胞增殖相关蛋白CDK2、pCDK2的表达.结果:RU486对PC-3和LNCap细胞体外增殖均有明显的抑制作用,且呈时间-剂量依赖性;25 μmol/L RU486处理PC-3和LNCap细胞24 h后,2种细胞均被阻滞在G1/S期;不同浓度的RU486处理PC-3和LNCap细胞24 h后,随着RU486浓度的增加,Cyclin E mRNA表达下降,p21和p27 mRNA表达增加,CDK2 mRNA表达无明显变化,但pCDK2表达呈下降趋势.结论:RU486能使前列腺癌LNCap和PC-3细胞周期阻滞在G1/S期,并能通过上调p21和p27 mRNA的表达,下调Cyclin E mRNA及磷酸化的CDK2蛋白而抑制细胞增殖.     

雌二醇对胃癌细胞周期的影响

目的:初步探讨雌二醇（E2）对胃癌细胞SGC-7901增殖的影响。方法:SGC-7901细胞分为E2干预组和对照组,E2干预组加入不同浓度E2（0.1μmol/L、1.0μmol/L）干预24小时,对照组加入等体积含无水乙醇的培养基。CCK8检测E2对胃癌细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测细胞周期的分布,PCR检测E2对胃癌细胞雌激素受体ERα和ERβ mRNA表达水平的影响,Oncomine公共数据库查询ERα的表达情况。结果:E2对胃癌细胞的增殖抑制率具有浓度依赖性。E2处理组SGC-7901细胞G0/G1期细胞比例［(68.866±3.336)%］较对照［(59.333±0.294)%］显著增加,G2期和S期细胞总比例下降,1.0μmol/L E2作用可使胃癌细胞SGC-7901发生G1期阻滞（P<0.01）。两种雌激素受体（ERα和ERβ）均表达于胃癌细胞SGC-7901,且其相关基因ERα和ERβ mRNA表达水平不随E2浓度的增加而改变。利用Oncomine公共数据库查询发现ERα在胃癌中的表达高于癌旁。结论:E2直接作用可抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖,引起G1期阻滞。     

维生素C对A549细胞增殖、凋亡及Caspase-3、Survivin表达的影响

背景与目的维生素C作为一种抗氧化剂,对多种肿瘤均有抑制作用,本研究旨在探讨维生素C对肺癌细胞株A549的增殖、凋亡的影响及其诱导A549细胞凋亡的可能机制。方法在体外培养的肺癌A549细胞株中加入不同浓度的维生素C,采用细胞生长曲线及克隆形成实验检测细胞生长情况;用流式细胞仪检测细胞周期的影响及凋亡率;用RT-PCR方法检测肺癌细胞株A549中Caspase-3、Survivin的表达差异。结果400μg/mL、4mg/mL浓度组维生素C明显抑制A549细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞被阻止在G0/G1期及S期,且随着时间的延长细胞凋亡逐渐增多,RT-PCR检测维生素C可以上调Caspase-3mRNA的表达,并且随着时间的延长Caspase-3mRNA的表达逐渐增强,对Survivin mRNA的表达无确切作用。结论维生素C呈时间和剂量依赖性抑制A549细胞的增殖,并使A549细胞阻止在G0/G1期及S期,并呈时间依赖性诱导A549细胞凋亡,其机制可能是通过上调Caspase-3的表达。     

红景天苷对胃癌细胞NU-GC-3凋亡及TGFβ1蛋白表达的影响

[目的]研究红景天苷对胃癌细胞NU-GC-3增殖的影响。[方法]细胞计数法、MTT法、流式细胞术检测分析不同浓度红景天苷对胃癌细胞NU-GC-3增殖的抑制作用,相差显微镜下观察形态学改变。RT-PCR、WesternBlot法分别检测加药组(20μg/ml红景天苷)和不加药组TGFβ1mRNA以及蛋白的表达水平。[结果]加药组细胞S期、G2/M期细胞数、增殖指数PI显著低于对照组,而细胞凋亡百分比、G0/G1期细胞数则显著高于不加药组。加药组TGFβ1mRNA以及TGFβ1蛋白的表达水平均高于不加药组。[结论]红景天苷对胃癌细胞NU-GC-3具有抑制其增殖并诱导其凋亡的作用。红景天苷作用于NU-GC-3细胞后明显促进了TGFβ1mRNA以及TGFβ1蛋白的表达。     

米非司酮对子宫内膜癌细胞周期时相调控的研究

 目的 探讨抗孕激素米非司酮对子宫内膜癌细胞周期时相的调控作用. 方法 体外培养子宫内膜癌HHUA细胞,不同浓度米非司酮处理细胞24～96小时,流式细胞术（FCM）测定癌细胞周期分布的变化;免疫组化法观察细胞周期调控蛋白的表达变化. 结果 当抗孕激素米非司酮浓度≥5μmol/L作用癌细胞36小时,G1期细胞比率明显上升,S期细胞比率（SPF）降低（P〈0.05）;细胞周期调控蛋白p21和p16表达明显上调（P〈0.05）. 结论 抗孕激素米非司酮通过调节细胞周期相关蛋白表达使HHUA细胞阻滞于G1期,抑制癌细胞增殖.     

siRNA抑制人高迁移率族蛋白1表达对前列腺癌PC-3增殖的影响

目的：研究小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）抑制高迁移率族蛋白1（HMGB1）基因的表达对人前列腺癌细胞PC-3增殖的影响。方法：构建真核表达载体Pgenesil-1／HMGB1 siRNA，在脂质体Lipofectamina 2000的介导下转染前列腺癌PC-3细胞株，通过RT—PCR和Westerll Blot检测HMGB1的mRNA及蛋白质的变化；流式细胞仪检测细胞周期；噻唑蓝（MTT）检测细胞生长曲线观察转染后PC-3细胞HMGB1基因表达和体外增殖活性的变化。结果：成功构建siRNA表达载体Pgenesil-1／HMGB1 siRNA，所获表达载体转染可使PC-3细胞HMGB1 mRNA和蛋白表达水平显著降低（P〈0．05），并能有效抑制PC-3增殖活性（P〈0．05）。结论：应用siRNA干扰技术能有效的抑制HMGB1基因的表达，同时也可有效抑制癌细胞的体外增殖活性，为肿瘤的生物学治疗提供新思路。     

核心蛋白聚糖对肺腺癌细胞生长作用及其机制初探

背景与目的核心蛋白聚糖（decorin）是在微环境肿瘤外基质中存在的一些小分子蛋白聚糖,与肿瘤的发生、发展、生长密切相关。本研究初步探讨decorin对肺腺癌细胞生长的影响及机制。方法以人肺腺癌细胞株A549为研究对象,利用MTT法检测不同浓度不同时间decorin对A549细胞的杀伤活性,流式细胞仪检测分析decorin对A549细胞周期及凋亡的影响,RT-PCR检测decorin干预后对自身肿瘤细胞的decorin mRNA表达的影响,Westernblot法检测decorin干预对P21蛋白表达的影响,ELISA法检测decorin对TGF-β蛋白表达的调节作用。结果Decorin在体外能明显抑制A549肿瘤细胞增殖,且这种增殖抑制作用呈剂量和时间依赖性。decorin在体外能明显诱导A549肿瘤细胞凋亡,该作用与剂量和时间有关。decorin在体外能明显上调自身decorin mRNA,下调TGF-β表达,上调P21表达,阻滞细胞周期于G1期。结论decorin在体外能够抑制肺腺癌A549肿瘤细胞生长,诱导其凋亡。其作用机制可能为通过上调自身decorin mRNA,下调TGF-β表达,上调P21表达,阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡等途径抑制A549肿瘤细胞生长。     

左旋棉酚体外诱导人前列腺PC-3细胞凋亡的研究

目的:研究左旋棉酚对人前列腺癌PC-3细胞体外增殖和凋亡的影响。方法:MTT法检测左旋棉酚对PC-3细胞增殖的影响,透射电镜观察细胞超微结构的改变,TUNEL染色观察细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期的改变,半定量RT-PCR检测Bcl-2及Bak mRNA的表达水平。结果:左旋棉酚能显著抑制PC-3细胞的体外增殖,并呈浓度-时间依赖性。左旋棉酚可以诱导PC-3细胞发生典型的凋亡形态学改变和G0/G1期阻滞,RT-PCR显示Bcl-2 mRNA表达水平降低,Bak mRNA表达水平升高。结论:左旋棉酚能诱导前列腺癌细胞的体外凋亡,主要可能与Bak mRNA的表达升高及Bcl-2 mRNA的表达下调有关。     

转录因子E2F-1 siRNA对胃癌MGC803细胞体外侵袭及增殖能力的影响

背景与目的:转录因子E2F-1作为细胞周期进程中重要的调控因子,与肿瘤的发生有着密切的关系.本研究通过转染人E2F-1基因的小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)表达质粒,探讨其对胃癌MGC803细胞中E2F-1表达及侵袭和增殖能力的影响.方法:用脂质体LipofectamineTM 2000将具有短发夹结构的人E2F-1 siRNA表达质粒转染至MGC803细胞,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印迹(Western blot)技术分别检测E2F-1 mRNA及蛋白的表达;应用体外侵袭实验及克隆实验分别检测E2F-1 siRNA表达质粒对MGC803细胞侵袭力和增殖能力的影响.结果:成功转染E2F-1 siRNA表达质粒48 h后.MGC803细胞中E2F-1基凶mRNA表达的抑制率超过90%;与未转染组及阴性对照组细胞比较,E2F-1蛋白的表达分别降低81.5%和79.6%.转染pSilencer4.1-E2F-1质粒组的穿膜细胞数(18.0±2.6)与阴性对照组(48.0±4.6)和空白对照组(54.0±5.6)比较差异有统计学意义(P<0.05),其细胞集落形成数(46.0±2.0)与阴性对照组(122.3±1.5)和空白对照组(128.7±2.1)比较差异也有统计学意义(P<0.05).结论:E2F-1 siRNA表达质粒可显著下调E2F-1基因在胃癌MGC803细胞中的表达,在一定程度上抑制胃癌细胞的侵袭和增殖.     

米非司酮对人宫颈癌Hela细胞增殖及细胞周期的影响

目的探讨米非司酮对人子宫颈癌Hela细胞增殖及细胞周期分布的影响。方法采用MTT测定，观察不同浓度米非司酮(10、5、2.5、1μmol/L)对Hela细胞增殖的抑制作用；通过ABC免疫组化染色及流式细胞仪分析，检测用药后Ki-67抗原、细胞周期分布及增殖指数的变化。结果4个浓度的米非司酮对Hela细胞增殖均有抑制作用，并呈剂量依赖性，以10μmol/L浓度抑制作用最强，抑制率达54%；2.5μmol/L米非司酮可使Ki-67抗原表达明显减少，米非司酮(5μmol/L)使Hela细胞阻滞于G0/G1期，不能进入S期及G2/M期，抑制DNA的合成，使细胞增殖指数明显下降。结论米非司酮体外对PR阳性的人宫颈癌细胞有明显的抑制作用，使细胞周期分布阻滞于G0/G1期。     

血管内皮生长因子反义RNA对裸鼠食管癌细胞增殖和凋亡的影响意义

目的：研究血管内皮生长因子（VEGF）反义RNA对裸鼠食管癌移植瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法：将转染VEGF反义eDNA和空载体peDNA3．1的食管癌细胞株TE-1分别接种在裸鼠体内；应用免疫组化法、RT-PCR法检测移植瘤组织中VEGF蛋白和mRNA表达情况；流式细胞仪和透射电镜检测肿瘤细胞增殖及凋亡情况。结果：反义组肿瘤组织中VEGF蛋白和mRNA的表达降低，肿瘤细胞的细胞器发生扩张和肿胀、核染色质边集、凝集成块等凋亡形态学改变；Go／G，期细胞明显增多，S期细胞明显减少，细胞增殖指数降低；对照组和空载体组细胞凋亡较少。结论：VEGF反义RNA能抑制裸鼠食管癌细胞的增殖，诱导细胞凋亡，为食管癌基因治疗基础研究提供依据。     

肿瘤相关巨噬细胞对膀胱癌细胞增殖和血管生成的影响

目的:探讨肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）对膀胱癌细胞增殖和血管生成的影响。方法:采用巨噬细胞U937的上清液培养膀胱癌细胞系T24,CCK-8法检测膀胱癌细胞的增殖能力;流式细胞术检测其对细胞周期的影响;通过实时荧光定量PCR和Western blot检测膀胱癌细胞中血管内皮生长因子（VEGF）的mRNA和蛋白表达以及AKT磷酸化水平。结果:CCK-8结果表明TAMs促进膀胱癌细胞的增殖;流式结果显示TAMs能促进细胞周期G1-S期转换;实时荧光定量PCR和Western blot 结果显示TAMs促进膀胱癌细胞内VEGF的mRNA和蛋白表达,并促进AKT磷酸化。结论:TAMs促进细胞周期G1-S期转换,促进AKT磷酸化和VEGF的表达,且TAMs有望成为膀胱癌治疗和预后判断新的靶点。     

吉西他滨对膀胱癌细胞系增殖、细胞周期、凋亡的影响

背景与目的：吉西他滨（gemcitabine，GEM）单药或与顺铂合用在晚期膀胱癌治疗中显示了较高的反应率，已成为晚期膀胱癌化疗的一线药物，然而其在膀胱癌效应机制方面的研究却不多见。本研究探讨占西他滨体外对人膀胱移行上皮癌细胞系增殖、细胞凋亡以及p53、Bax、Bcl-2和Caspase3基因表达的影响。方法：体外培养膀胱移行细胞癌细胞系BIU-87、5637、T24、EJ细胞，用MTT法检测吉西他滨对各类癌细胞生长抑制的影响，用流式细胞技术（碘化丙啶）检测吉西他滨对癌细胞周期影响，流式细胞仪Annexin—V法测定细胞凋亡率，流式免疫荧光检测用药前后p53、Bax、Bcl-2、和Caspase3基因表达变化。结果：吉西他滨对体外培养的膀胱移行细胞癌细胞系均有抑制作用，具有时间和浓度依赖性，低分化肿瘤和倍增时间短的细胞系对吉西他滨敏感性高。吉西他滨1μg/ml作用5637和EJ细胞24h，导致细胞G1期83．94％与85．46％的阻滞；作用于5637细胞12、24和48h，凋亡率分别为4．8％、11．7％及23．3％。免疫荧光显示p53、Bcl-2表达没有显著性变化，而Bax、Caspase3却随吉西他滨作用时间延长表达升高。结论：吉西他滨对膀胱移行细胞癌具有抑制作用，细胞分化低、倍增时间短的癌细胞系对吉西他滨更敏感。吉西他滨阻滞细胞于G1，诱导Bax表达上调可能是产生膀胱癌细胞凋亡的原因之一。     

人绒毛膜促性腺激素抑制绒癌细胞系表达PAI—1

目的：为探讨人绒毛膜促性腺激素（hCG)对绒癌细胞侵袭性的影响。方法：采用半定量逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测方法，观察了不同浓度hCG不同处理时间对JEG-3绒癌细胞系表达PAI-1的影响。结果：分别用0、50、5000、25000mIU/mLhCG处理48h后，JEG-3细胞中PAI-1mRNA的含量逐渐降低。并随hCG作用浓度增高而显著。此外还发现，在25000mIU/mLhCG的作用下，JEG-3细胞中PAI-1的表达随处理时间的延长逐渐减低。结论：推测hCG可能通过抑制细胞中PAI-1的表达而影响绒癌细胞的侵袭行为。     

DcR3在消化系统肿瘤细胞中的表达

目的：研究诱骗受体3（decoy receptor3，DcR3）在消化系统肿瘤细胞中的表达差异，阐明其与消化系统肿瘤的相关性。方法：体外培养结肠癌细胞（sw480）、胃癌细胞（SGC7901）、肝癌细胞（HepG2）和人成纤维细胞（3T3），采用RT-PCR法检测DcR3 mRNA的表达水平；应用Western印迹法检测DcR3蛋白的表达水平。结果：SW480细胞的DcR3mRNA和蛋白表达水平均高于SGC7901、HepG2和3T3细胞的表达水平，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：DcR3在结肠癌细胞中的高表达可能与结肠癌的发生、发展有关。     

γ分泌酶抑制剂对人卵巢癌细胞生长的抑制作用及其机制

目的：研究γ分泌酶抑制剂对人卵巢癌细胞生长的影响,并探讨其作用机制。方法：采用实时RT-PCR检测人卵巢癌细胞株SKOV3、3AO、HO8910、HO-8910PM、A2780中Notch1mRNA的表达及γ分泌酶抑制剂处理前后A2780细胞中Notch1和HES1mRNA的表达情况;MTT比色法分析γ分泌酶抑制剂对高表达Notch1的A2780细胞生长的影响;流式细胞仪检测其细胞周期分布。结果：经γ分泌酶抑制剂处理后A2780中Notch1mRNA表达明显降低,细胞生长被抑制,细胞周期主要停滞在G1期,并且HES1的表达下降。结论：γ分泌酶抑制剂可阻断Notch1信号通路,下调Notch1及HES1的表达,从而影响卵巢癌细胞周期分布及抑制其增殖。