心肌细胞内的Cl-/HCO3-交换蛋白及其在实验性心肌缺血损伤中的作用

心肌细胞中存在阴离子交换蛋白(AE),其主要作用是转运Cl-/HCO3-,调节细胞内PH和细胞内[Cl-].文献表明AE1、AE2、AE3在心肌细胞mRNA水平均有表达,但在蛋白水平上表达的主要有nAE1和cAE3.缺血条件下,心肌细胞膜上Cl-/HCO3-交换蛋白可激活,导致[Cl-]i增加与酸中毒,造成心肌细胞损伤.除去细胞外Cl-或运用Cl-阻断剂,多种原因诱导的再灌注性心律失常发生率显著降低,表现出较好的抗心律失常作用.     

来曲唑治疗大鼠子宫内膜异位症模型异位病灶的作用机制

目的 研究来曲唑治疗大鼠子宫内膜异位症的作用机制.方法 采用子宫内膜自体移植法进行子宫内膜异位症建模,2015年3月,选择30只建模成功的大鼠,根据随机数字表法分为来曲唑组和对照组,各15只.曲唑组大鼠每日给药来曲唑灌胃,给药剂量为0.26 mg/kg,1次/d;对照组灌胃等体积的0.9%NaCl注射液.采用免疫组织化学法对异位病灶组织中细胞间黏附因子(ICAM-1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况.逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测病灶中白细胞介素6(IL-6)mRNA、肿瘤因子(TNF)αmRNA,NF-κB mRNA,细胞色素芳香化酶(P450 arom)mRNA,环加氧酶2(COX-2)mRNA的表达.结果 治疗后来曲唑组子宫异位内膜体积较对照组显著降低[(158±23)mm3 vs(28±3)mm3],差异有统计学意义(P<0.05).来曲唑组雌二醇、孕酮水平均显著低于对照组[(30.5±1.6)ng/L vs(38.6±1.9)ng/L,(60±6)μg/L VS(37±3)μg/L],差异有统计学意义(P<0.05);来曲唑组大鼠睾酮、促卵泡生成素和促黄体生成素水平均显著高于对照组[(523±65)ng/L vs(1982±271)ng/L,(5.13±0.18)U/L vs(6.42±0.23)U/L,(4.71±0.28)U/L vs(5.91±0.31)U/L],差异有统计学意义(P<0.05).来曲唑组大鼠异位子宫内膜组织中的ICAM-1、MMP-9和VEGF的表达水平均显著低于对照组[(23.6±2.3)vs(40.8±2.9),(22.7±1.8)vs(39.6±2.8),(28.4±1.8)vs(45.3±1.9)],差异有统计学意义(P<0.05).来曲唑组IL-6 mRNA,TNF-αmRNA和NF-κB mRNA表达水平均显著低于对照组[(0.281±0.021)vs(0.805±0.012),(0.434±0.011)vs(0.981±0.013),(0.403±0.014)vs(0.972±0.015)],差异有统计学意义(P<0.05).来曲唑组大鼠异位病灶中P450arom mRNA和COX-2 mRNA表达量显著低于对照组[(0.257±0.024)VS(0.465±0.022),(0.364±0.024)vs(0.471±0.031)],差异有统计学意义(P<0.05).结论 来曲唑对子宫内膜异位症模型大鼠异位病灶具有明显的抑制作用,其作用机制可能是来曲唑能够降低ICAM-1、MMP-9、VEGF、IL-6 mRNA、TNF-αmRNA和NF-κB mRNA等细胞因子的转录水平以及降低P450arom和COX-2等催化酶水平抑制雌激素合成有关.     

心肌细胞内的Cl~-/HCO_3~-交换蛋白及其在实验性心肌缺血损伤中的作用

心肌细胞中存在阴离子交换蛋白(AE),其主要作用是转运Cl-/HCO3-,调节细胞内PH和细胞内[Cl-]。文献表明AE1、AE2、AE3在心肌细胞mRNA水平均有表达,但在蛋白水平上表达的主要有nAE1和cAE3。缺血条件下,心肌细胞膜上Cl-/HCO3-交换蛋白可激活,导致[Cl-]i增加与酸中毒,造成心肌细胞     

IL-17A抑制Th2细胞分化减轻哮喘小鼠气道嗜酸性粒细胞炎症

目的 研究IL-17A对哮喘小鼠Th2细胞分化及其相关炎症的作用.方法 24只C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为对照组、哮喘组和IL-17A处理组(n=8).哮喘组和IL-17A处理组予以卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏及激发.每次雾化激发前1h,IL-17A处理组给予重组小鼠IL-17A气道滴入.各步对照均予以生理盐水.末次激发后24h处死小鼠,收集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)行细胞总数及分类计数.ELISA检测BALF中IL-4、IL-5、IFN-γ、IL-17A的浓度.HE和PAS染色及半定量评分评估小鼠肺部病理变化.流式细胞术检测脾脏和支气管淋巴结Th细胞分化.免疫磁珠分选健康小鼠幼稚CD4+T细胞,用Th2极化培养基体外培养,并给予IL-17A或等量PBS干预,检测Th2细胞的增殖、凋亡和分化.结果 哮喘组较对照组,BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞数及其比例(P＜0.05)、IL-4、IL-5、IL-17A浓度均显著增高(P＜0.05),IFN-γ浓度显著下降(P＜0.05);支气管、血管周围炎症细胞浸润和杯状细胞化生明显加重(P＜0.01);脾脏和淋巴结Th2细胞分化比例显著增高(P＜0.05).IL-17A处理组较哮喘组,BALF中的细胞总数[(26.00±5.43)×104/mLvs(58.40 ±26.93)×104/mL,P＜0.05]、嗜酸性粒细胞数[(8.04±1.98)×104/mL vs(31.95±12.28)×104/mL,P＜0.05]及其比例[(29.93 ±3.03)％ vs(53.47 ±6.62)％,P＜0.01]显著降低,而中性粒细胞数及其比例无明显变化;BALF中Th2相关因子IL-4浓度[(9.86 ±2.77) pg/mL vs(28.13 ±4.62) pg/mL,P＜0.01]、IL-5浓度[(7.30 ±0.50) pg/mL vs(10.50±1.10) pg/mL,P＜0.01]均显著降低;支气管、血管周围炎症细胞浸润减轻,HE染色半定量评分降低[(2.00 ±0.51)vs(3.12 ±0.64),P＜0.05],杯状细胞化生减少[(0.80 ±0.45)vs(2.40 ±0.55),P＜0.01];脾脏[(2.24±0.44)％vs(4.82±1.83)％,P＜0.01]和淋巴结[(7.05±0.58)％vs(10.57±1.35)％,P＜0.05]中Th2细胞分化比例显著减少.极化培养的幼稚CD4+T细胞,予IL-17A干预后,诱导分化的Th2细胞比例显著减少(P＜0.05),而增殖和凋亡无显著变化.结论 IL-17A有抑制Th2细胞分化,减轻哮喘小鼠气道嗜酸性粒细胞炎症的作用.     

C57BL/6哮喘小鼠肾组织瞬时感受器电位M6离子通道mRNA表达

 【目的】 观察C57BL/6哮喘小鼠肾组织瞬时感受器电位M6离子通道(TRPM6) mRNA的表达,探讨哮喘低镁血症的可能原因。【方法】 健康4 ~ 6周龄清洁级雌性C57BL/6小鼠48只,体质量(12 ± 2)g,随机数字表法分为哮喘组和对照组,每组各24只。哮喘组应用卵蛋白(OVA)建立哮喘小鼠模型。第1天(1 d)。21 d。34 d天每组分别随机抽取8只检测血浆Mg2+。红细胞内Mg2+。肾组织TRPM6 mRNA的表达。【结果】 1 d血浆Mg2+。红细胞内Mg2+。肾组织TRPM6 mRNA表达水平哮喘组与对照组之间差异无显著性:[(0.85 ± 0.07 vs. 0.89 ± 0.12) mmol/L。(2.48 ± 0.14 vs. 2.49 ± 0.07) mmol/L。0.51 ± 0.08 vs. 0.49±0.06, P均 > 0.05];21 d 哮喘组血浆Mg2+。红细胞内Mg2+。肾组织TRPM6 mRNA表达水平均显著低于对照组:[(0.84 ± 0.09 vs. 0.95 ± 0.07) mmol/L。(2.39 ± 0.14 vs. 2.44 ± 0.09) mmol/L。0.32 ± 0.06 vs. 0.52 ± 0.05,P均 < 0.05]; 34 d哮喘组血浆Mg2+。红细胞内Mg2+。肾组织TRPM6 mRNA表达水平亦显著低于对照组: [(0.67 ± 0.10 vs. 0.94 ± 0.10) mmol/L。(2.17 ± 0.08 vs. 2.43 ± 0.08) mmol/L。0.24 ± 0.05 vs. 0.53 ± 0.06,P均 < 0.05]。肾组织TRPM6 mRNA表达水平与血浆Mg2+浓度呈正相关(r = 0.630, P < 0.001);肾组织TRPM6 mRNA表达水平与红细胞内Mg2+浓度呈正相关(r = 0.715, P < 0.001)。 【结论】 肾组织TRPM6 mRNA的低表达可能是导致 C57BL/6哮喘小鼠低镁血症的原因。     

胃癌组织的细胞早期凋亡与Bcl-2蛋白、PAI-1活性的研究

目的研究不同胃癌组织中的细胞凋亡与侵袭转移的相关性.方法收集41例胃癌新鲜组织1.0cm3大小,分离单细胞悬液,流式细胞仪检测早期凋亡指数(EAI);免疫组化SABC法检测邻近胃癌组织中Bcl-2蛋白的表达;-80℃冰箱冻存后成批匀浆,检测上清液的PAI-1比活性.结果EAI在弥漫型胃癌与肠型胃癌以及有无淋巴结转移中差异显著[(18.2±3.5)%vs(11.4±3.7)%,P《0.001;(14.2±3.9)%vs(20.7±3.5)%,P《0.001)].肠型胃癌84%(11/13)Bcl-2阳性,弥漫型胃癌中只有36%(12/28)阳性,差异显著(P《0.05).淋巴结转移的胃癌中59%(17/29)Bcl-2阳性,无淋巴结转移的33%(4/12),无显著性差异(P》0.05).弥漫型胃癌的PAI-1比活性高于肠型胃癌组织[(0.76±0.12)vs(0.54±0.12)Au/ml,P《0.01)],有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者[(0.71±0.18)vs(0.52±0.18)Au/ml,P《0.05)].结论EAI与Bcl-2是肿瘤组织中细胞早期凋亡的指标,两者在不同组织和有无淋巴结转移中有重要意义;其与侵袭转移指标PAI-1无直接的相关性.     

Mibefradil通过下调FoxO1表达改善HepG2细胞的胰岛素抵抗

目的 探索Mibefradil在体外对胰岛素抵抗HepG2细胞的作用.方法 将HepG2细胞分为对照组、棕榈酸盐(Palmitate,PA)诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗模型组、药物溶剂(DMSO)组、低剂量(0.025 μmol/L) Mibefradil组、高剂量(0.05 μmol/L)Mibefradil组,通过检测各组糖原合成及葡萄糖消耗,观察Mibefradil对胰岛素抵抗HepG2细胞的改善作用.用qRT-PCR、Western blot检测各组FoxO1,糖异生、糖原分解限速酶,即:磷酸烯醇式丙酮酸羧基激酶(PEPCK)、葡萄糖-6-磷酸激酶(G6Pase)的mRNA、蛋白相对表达量,明确转录因子FoxO1及其靶基因的表达水平.结果 相比于对照组,HepG2细胞胰岛素抵抗模型组的糖原合成量[(3.28 ±0.74) μg/μL vs(9.14 ±0.33) μg/μL,P＜0.01]及葡萄糖消耗量[(1.31±0.49)nmol/μg vs(5.87±2.26)nmol/μg,P＜0.01]明显下降;经Mibefradil干预后,胰岛素抵抗HepG2细胞的糖原合成及葡萄糖消耗得到明显改善,且高剂量组的糖原合成[(7.09 ±0.60) μg/μL vs(5.73 ±0.16) μg/μL,P＜0.01)]及葡萄糖消耗[(6.45 ±0.02) nmol/μgvs(5.61 ±0.29) nmol/μg,P＜0.01]显著高于低剂量组,表明Mibefradil可改善HepG2细胞的胰岛素抵抗.qRT-PCR及Western blot检测结果表明,胰岛素抵抗HepG2细胞的FoxO1、PEPCK、G6Pase的表达量均显著增加(P＜0.01);经Mibefradil干预后,其表达量呈剂量依赖性下降(P＜0.05).结论 Mibefradil对胰岛素抵抗HepG2细胞具有改善作用,此作用可能与下调FoxO1的表达有关.     

青藤碱调控NLRP3/ caspase-1通路抑制BV-2小胶质细胞焦亡及炎症的机制研究

摘 要： 目的 探究青藤碱(sinomenium)调控NLRP3/caspase-1通路抑制BV-2小胶质细胞焦亡及炎症的机制。方法 以氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)模型诱导BV-2细胞焦亡模型，采用CCK-8法检测不同浓度(0、10、20、50、100 μmol /L)的青藤碱干预BV-2小胶质细胞24h后的细胞活性，筛选药物浓度。将BV-2细胞分为正常组、OGD/R组和OGD/R+青藤碱组(20μmol/L)进行研究分组。使用微量酶标法测BV-2小胶质细胞乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)活性。采用赫斯特(Hoechst)/碘化丙啶(PI)细胞染色法检测BV-2细胞中PI阳性细胞数。采用RT-PCR和Western blot方法检测青藤碱对BV-2小胶质细胞硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-1、白细胞介素(interleukin, IL)-1β和IL-18的mRNA和蛋白表达水平的影响。结果 10、20μmol/L青藤碱干预24h后，OGD/R诱导的BV-2小胶质细胞活性较对照组无显著差异[(97.69±0.51)%、(96.03±1.13)%比(100.00±0.00)%,P均>0.05)], 50、100μmol/L青藤碱干预24h后，OGD诱导的BV-2小胶质细胞活性较对照组显著降低[(78.92±3.02)%、(64.12±4.55)%比(100.00±0.00)%，P均<0.05]。与正常组相比，OGD组BV-2小胶质细胞LDH相对释放量明显上升[(2.23±0.19)比(1.00±0.00)，P<0.05]，PI活性细胞比例显升高[(46.28±4.02)%比(3.52±0.31)%，P<0.05]，TXNIP、NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA表达明显上调[TXNIP :(1.58±0.20)比(0.69±0.08),P<0.05;NLRP3:(2.32±0.18)比(0.88±0.09),P<0.05;caspase-1:(1.61±0.11)比(0.77±0.15),P<0.05;IL-1: (3.17±0.43)比(1.03±0.09),P<0.05;IL-18:(1.82±0.22)比(0.81±0.13),P<0.05]和蛋白表达水平明显上调[TXNIP:(1.26±0.13)比(0.72±0.09),P<0.05; NLRP3:(0.43±0.04)比(0.16±0.04),P<0.05; caspase-1:(1.30±0.09)比(0.58±0.07),P<0.05;IL-1β:(1.21±0.11)比(0.39±0.06),P<0.05; IL-18:(0.54±0.07)比(0.23±0.06),P<0.05]。与OGD组相比，OGD/R+青藤碱组BV-2细胞LDH相对释放量明显下降[(1.28±0.09)比(2.23±0.19)，P<0.05]，PI活性细胞比例显著减少[(23.08±3.46)%比(46.28±4.02)%，P<0.05]，TXNIP、NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA明显下降[TXNIP :( 0.95±0.11)比(1.58±0.20),P<0.05; NLRP3:(1.26±0.12)比(2.32±0.18),P<0.05; caspase-1:(0.95±0.05)比(1.61±0.11),P<0.05; IL-1: (1.55±0.18)比(3.17±0.43),P<0.05;IL-18:(1.23±0.14)比(1.82±0.22),P>0.05]和蛋白表达水平显著下降[TXNIP :(0.78±0.04)比(1.26±0.13);NLRP3:(0.26±0.03)比(0.43±0.04); caspase-1:(0.71±0.05)比(1.30±0.09);IL-1β: (0.54±0.03)比(1.21±0.11);IL-18:(0.34±0.08)比(0.54±0.07),P均<0.05]。结论 青藤碱能通过下调NLRP3/ caspase-1通路磷酸化水平，抑制BV-2小胶质细胞焦亡及炎症反应。     

福莫特罗对哮喘小鼠气道杯状细胞增生及 粘蛋白MUC5ac mRNA表达的影响

 【目的】 探讨长效β2受体激动剂福莫特罗对哮喘(支气管哮喘)小鼠气道杯状细胞增生及粘蛋白MUC5ac mRNA表达的影响&;#65377;【方法】 40只雌性SPF级BABL/c小鼠,随机分为4组,每组10只&;#65377;A组为生理盐水对照组;B组为卵蛋白(ovalbumin,OVA)哮喘组;C组为哮喘福莫特罗干预组;D组为哮喘地塞米松干预组&;#65377;在末次激发24 h后所有小鼠取左肺组织行过碘酸雪夫(PAS)染色,采用医学图像分析软件测定支气管上皮杯状细胞面积占上皮细胞总面积的百分比并计算杯状细胞数量&;#65377;取右肺组织行real-time qRT-PCR,检测粘蛋白MUC5ac mRNA的表达&;#65377;【结果】 B组小鼠支气管上皮杯状细胞的数量&;#65380;杯状细胞占上皮细胞总面积的百分比和MUC5ac mRNA水平显著高于A组[(163.63 ± 16.68)个vs (0.46 ± 0.16)个,(77.36 ± 5.05)% vs (0.03 ± 0.01)%,(10.31 ± 0.73) vs ( 1.00 ± 0.13),P均 < 0.05];C组小鼠支气管上皮杯状细胞的数量&;#65380;杯状细胞占上皮细胞总面积的百分比和MUC5ac mRNA水平均低于B组[(52.04 ± 4.60)个 vs (163.63 ± 16.68)个,(30.05 ± 3.72)% vs (77.36 ± 5.05)%,(1.64 ± 0.14) vs (10.31 ± 0.73),P均 < 0.05] ;D组小鼠支气管上皮杯状细胞的数量&;#65380;杯状细胞占上皮细胞总面积的百分比和MUC5ac mRNA水平均低于B组[(63.41 ± 6.39)个 vs (163.63 ± 16.68)个,(38.52 ± 3.83)% vs(77.36 ± 5.05)%,(1.72 ± 0.10) vs (10.31 ± 0.73),P均 < 0.05];C组和D组的杯状细胞数量&;#65380;面积百分比和MUC5ac mRNA水平间差异均无统计学意义[(52.04 ± 4.60)个 vs (63.41 ± 6.39)个,(30.05 ± 3.72)% vs (38.52 ± 3.83)%,(1.64 ± 0.14 ) vs (1.72 ± 0.10),P均 > 0.05]&;#65377;【结论】 长效β2受体激动剂福莫特罗可抑制哮喘小鼠气道杯状细胞增生及粘蛋白MUC5ac mRNA的表达&;#65377;     

慢病毒介导siRNA干扰CEP55表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响

本文通过慢病毒介导siRNA干扰卵巢癌SKOV3细胞中心体相关蛋白55(CEP55)表达,以观察其对细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移等生物学行为的影响。实验分为CEP55组(转染CEP55 siRNA慢病毒)、阴性对照组(转染不含CEP55 siRNA的慢病毒)和空白对照组(不处理)。结果显示:CEP55 siRNA慢病毒转染效率为(89.4±4.7)%,CEP55组CEP55的mRNA和蛋白表达显著降低(P＜0.05),第12、24、36、48、72 h时的OD(570)值显著降低(P＜0.05),细胞凋亡率[(23.7±6.9)%]显著增加(P＜0.05),穿膜细胞数目[(11.3±4.1)/个]明显减少(P＜0.05),细胞迁移距离[(245.8±33.7)μm]明显减小(P＜0.05)。提示慢病毒介导siRNA干扰CEP55表达可显著抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、促进其凋亡、降低其侵袭和迁移能力。