TRF与ELISA乙型肝炎病毒检测中的应用比较

目的 调查时间分辨荧光免疫分析技术和ELISA法在乙型肝炎血清学标志物检测中的应用情况.方法 采用上海新波ANYIEST2000型时间分辨荧光免疫分析仪及配套试剂对192例乙型肝炎患者血清检测乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、乙肝病毒表面抗体(HBsAb)、乙肝病毒e抗原(HBeag)、乙肝病毒e抗体(HBeAb)及乙肝病毒核心抗体(HBcAb),同时用ELISA法进行检测.结果 时间分辨荧光免疫分析法(TRF)检测乙型肝炎血清学5项标志物比EUSA法灵敏度高.结论 时间分辨荧光免疫分析技术检测乙型肝炎血清学5项标志物,灵敏度高、稳定性好、经济、符合国情,可作为乙型肝炎病毒定量的一种常规方法.     

两种方法在乙型肝炎病毒检测中的应用比较

目的调查时间分辨荧光免疫分析技术和胶体金法在乙型肝炎血清学标志物检测中的应用情况。方法采用泰莱——I型半自动时间分辨荧光免疫分析仪及配套试剂对96例乙型肝炎患者血清检测乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝病毒表面抗体（HBsAb）、乙肝病毒e抗原（HBeAg）、乙肝病毒e抗体（HBeAb）及乙肝病毒核心抗体（HBcAb）,同时用胶体金法进行检测。结果时间分辨荧光免疫分析法（TRF）检测乙型肝炎血清学5项标志物结果同胶体金法比较灵敏度较高,特异性稍差。结论时间分辨荧光免疫分析技术检测乙型肝炎血清学5项标志物,灵敏度高、稳定性好、经济、符合国情。可作为乙型肝炎病毒定量的一种常规方法。     

过敏原特异性IgE抗体实验室检测及其临床应用

摘要：过敏原特异性IgE(sIgE)抗体检测对过敏性疾病的诊断和治疗具有重要价值。从待检抗体角度分析，sIgE抗体检测分为sIgE抗体物质含量检测和sIgE抗体病理活性检测，前者采用免疫化学(血清学)方法，后者采用细胞生物学方法。血清学检测为临床实验室常用方法，涉及斑点-酶免疫吸附试验(Dot-ELISA)、ELISA和荧光酶免疫分析(FEIA)等标记免疫技术。从已知抗原角度分析，sIgE抗体检测分为混合组分诊断(MRD)和单一组分诊断(CRD)。CRD可获得sIgE抗体谱结果，为临床提供更丰富的诊断信息。无论采用何种标记免疫技术，sIgE抗体实验室检测已从定性分析发展到定量分析，且分析灵敏度不断提升，这将逐渐满足临床诊断的需求，提高过敏性疾病的诊断和治疗水平。     

100例荧光抗核抗体阳性结果分析

抗核抗体(Antinudear antjbody ANA)又称为抗核因子(Antinuckar factor ANF)，是以真核细胞的核成分为靶抗原的自身抗体的总称，属自身抗体，抗核抗体的检测是自身免疫性疾病．特别是系统性红斑狼疮(SLE）以及结缔组织性疾病的实验室检查的主要项目之一。抗核抗体的检测方法很多，目前临床实验室以间接荧光免疫法为最常用。本文就间接荧光免疫法检测的100例荧光抗核抗体阳性结果作如下分析。     

干式荧光发光法快速检测梅毒螺旋体抗体的方法建立和初步应用与评价

目的　建立一种干式荧光发光法快速检测梅毒螺旋体(Treponema pallidum,TP)总抗体的检测技术,并评价其检测性能。方法　利用高活性优势表位嵌合TP抗原,基于免疫层析和荧光发光平台,采用双抗原夹心原理建立检测梅毒螺旋体总抗体的快速检测方法。应用该方法检测梅毒螺旋体抗体快速试剂国家参考品,并与酶联免疫法平行检测360例临床样本,比较评价该技术的检测性能。结果　建立了梅毒螺旋体总抗体干式荧光发光快速检测技术,检测国家参考品10份阳性参考品符合率为10/10,20份阴性参考品符合率为19/20,三批产品的批内重复性分别为12.00%,12.30%和9.10%,批间重复性为10.90%,最低检测限参考品L1和L2 检测为阳性,L3检测为阴性。在临床样本评价中,该检测技术诊断梅毒患者的AUC值为0.986,敏感度和特异度分别为99.08%和94.02%,阳性预测值和阴性预测值分别为87.80%和99.58%,阳性似然比和阴性似然比分别为16.569和0.009 8。与酶联免疫法检测试剂相比较,总体符合率为98.06% (Kappa=0.965),具有高度等效性。结论　本研究建立的梅毒螺旋体抗体干式荧光发光快速检测技术是一种敏感度和特异度均高的检测方法,能够满足临床检测需要。     

回顾性分析抗核抗体单一荧光核型与抗核抗体谱分型的关系

目的分析抗核抗体(ANA)单一荧光模型阳性的样本免疫印迹法检测的结果,探讨两者的相关性,并研究是否能通过荧光模型初步判断其特异性抗体。方法回顾性分析347例ANA单一荧光模型阳性标本,对比间接免疫荧光法和免疫印迹法检测的符合率。结果 347例间接荧光法ANA阳性标本,其中自身免疫性疾病标本137例,非自身免疫性疾病标本210例,免疫印迹法检测ANA阳性例数分别为100、60例,符合率分别为73.0%、28.6%。核型主要以核颗粒型为主,多出现抗SSA、抗SSB、抗Ro52抗体,高尔基体型、肌动蛋白型核型等核型少见。仅有3例标本的核仁型在分型中出现条带。着丝点型多会出现抗着丝点抗体,特异性高。结论在自身免疫性疾病患者中,间接免疫荧光法和免疫印迹法两者具有较高的相关性,但因其具有各自的局限性,应将两者结合起来,报告荧光核型。     

免疫分析标记物技术的革新

本文综述标记物技术的历史及新进展,并概述新的标记物使用在经典免疫分析及免疫测量分析的优缺点.讨论:酶标记物技术的新进展如渠道(channeling)技术、酶受体—供体系统,酶蛋白重激活分析.荧光偏振化免疫分析,时间分辨荧光分析是二种较新的荧光技术.发光标记物如叮啶酯,由于其稳定、敏感、检测容易而有希望.若干新的粒子标记技术已研究成功,其中最有意义的是溶液粒子标记物及脂质体标记物.比较了这些新的标记物和放射性标记物的优缺点.其主要原理是患者标本中的抗原与放射性标记抗原互相竞争固定数量的抗体结合部位.     

结核杆菌三种实验方法的应用评估

目的比较痰涂片法、实时荧光定量PCR法和免疫结核抗体(金标法)检测对结核病的诊断意义。方法选取2015年7月至2015年10月在我院诊疗疑似或确诊患者172例,进行涂片抗酸染色、实时荧光定量PCR法检测和采集血样进行免疫结核抗体检测。结果 172例检测样本中,抗酸染色痰液标本阳性例数只有20例,阳性率为11.6%。实时荧光定量PCR法阳性例数55例,阳性率31.2%。免疫结核抗体(金标法)阳性例数为87例,阳性率为50.6%。结论三种方法中,以结核抗体阳性率最高,实时荧光定量PCR法次之,抗酸染色法阳性率最低。如果三种方法联合运用,相互佐证,可提高准确性。     

时间分辨荧光免疫法与酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒感染血清学标志物的对照探究

目的对照研究时间分辨荧光免疫法与酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒感染血清学标志物的临床效果。方法将该院肝胆专科门诊于2012年1月至2013年12月间收治的298例乙肝患者作为研究对象,分别采用时间分辨荧光免疫法与酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒感染血清学标志物统计检测数据,评价不同检测方法对于诊断乙肝的有效性。结果时间分辨荧光免疫法检测乙肝病毒表面抗原的阳性率为26.17%,乙肝e抗原的阳性率为7.38%,乙肝表面抗体的阳性率为52.01%,乙型肝炎病毒e抗体的阳性率为29.17%,乙肝核心抗体的阳性率为35.23%,诊断符合率达到97.98%;酶联免疫吸附法检测乙肝病毒表面抗原的阳性率为24.49%,乙肝e抗原的阳性率为6.37%,乙肝表面抗体的阳性率为46.31%,乙型肝炎病毒e抗体的阳性率为23.82%,乙肝核心抗体的阳性率为28.18%,诊断符合率为78.52%,两种检测方法比较差异有统计学意义(P0.05)。结论时间分辨荧光免疫法检测乙型肝炎病毒感染血清学标志物相较于酶联免疫吸附法更加敏感准确,具有较高的临床推广和应用价值。     

时间分辨荧光免疫分析技术的应用及进展

时间分辨荧光免疫分析(time-resolvedfluoroimmunoassay,FRFIA)是80年代初期发展起来的一项新的免疫技术,具有放射免疫分析(RIA)的灵敏度高、特异性强、检测速度快等特点,克服了RIA 技术中同位素的辐射防护、半衰期短及需特殊处理等缺陷。该技术问世虽仪数年时间,但已被广泛的应用。可测定的物质种类繁多,包括药物、甲状腺激素、类固醇、多肽、蛋白质、抗原、抗体、酶、肿瘤标志物、NK 细胞等。     

ELISA法和荧光免疫层析法检测马尔尼菲蓝状菌抗原的应用价值

目的评价双抗体夹心ELISA法和荧光免疫层析法检测马尔尼菲蓝状菌Mp1p抗原的临床应用价值。方法用ELISA法和荧光免疫层析法检测335例住院患者血清中的马尔尼菲蓝状菌抗原,比较2种方法检测结果与血培养结果的一致性。结果以血培养结果为金标准,ELISA与荧光免疫层析法检测马尔尼菲蓝状菌抗原的敏感性分别为75.0%和78.1%,特异性均为100%,准确度分别为97.6%和97.9%,Kappa值分别为0.844和0.866。结论双抗体夹心ELISA法和荧光免疫层析法检测马尔尼菲蓝状菌抗原快速、简便,结果可靠,适用于临床急性期马尔尼菲蓝状菌感染的辅助诊断。     

HCV抗原检测与HCV-RNA和HCV抗体检测的比较研究

目的 评价丙型肝炎病毒核心抗原(HCV抗原)、丙型肝炎病毒抗体(HCV抗体)及丙型肝炎病毒RNA(HCV-RNA)三种检测方法在丙型肝炎实验室诊断中的作用.方法 HCV抗原采用双抗体夹心法;HCV-RNA采用实时荧光定量PCR技术(RT-PCR),HCV抗体采用酶联免疫技术(间接法),对44例HCV抗体阳性标本进行HCV抗原和HCV-RNA检测.结果 在HCV抗体阳性标本中,HCV抗原阳性检出率为43.2％,HCV-RNA阳性检出率为82.5％;在HCV-RNA阳性标本中,HCV抗原阳性检出率为45.5％.结论 三种丙肝标志物中,实时荧光定量PCR技术检测HCV-RNA是判断丙肝感染最可靠的方法而HCV抗原诊断丙肝,仍有54.5％的漏检率,其应用于临床还有距离.所以在没有条件应用实时荧光定量PCR技术检测HCV-RNA的医院,在用HCV抗原对HCV抗体阳性标本进行确认,来判断HCV既往感染或现症感染时,应结合肝功能指标及临床表现以明确诊断.     

病毒性心肌炎患者自身抗体的检测及其临床意义

病毒性心肌炎(Viral myocarditis,VM)已成为内儿科常见疾病,然而临床诊断尚缺乏可靠手段.鉴于病毒可通过多种不同机制促进自身免疫应答.作者等运用免疫印迹技术,间接荧光抗体法以及快速斑点免疫金渗滤法,对42例VM病人血清标本分别进行抗(ENA)抗体、抗心肌抗体(ANA)及抗ds-DNA抗体的检测,以探讨它们在病毒性心肌炎诊断中意义.     

免疫荧光技术在临床检验中的应用

免疫荧光技术又称荧光素标记技术是指用荧光色素对抗体或抗原进行标记,然后用于免疫学测定。前者称为荧光抗体技术,后者称为荧光抗原技术。在实际工作中主要用荧光抗体技术,荧光抗原技术很少用(用于标记SPA 和亲和素)。荧光抗体技术由Coons 等于1941年建立,当时是用异氰酸荧光黄(fluorescein isocyanatc FIC)来标记抗体,用于在小白鼠的组织切片中检测可溶性肺炎球菌多糖体获得成功。1958年Riggs 等合成了异硫氰酸荧光黄(fluorescein isothiocyanateFITC)性能较FIC 更为优良,使荧光抗体技术迅速     

影响IFMA效果的常见问题与对策

IFM A是时间分辨免疫荧光分析测定法的简称,是继免疫吸附试验和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。它以免疫学反应为基础,将抗原与抗体的特异性反应与金属铕标记抗体作用相结合,再加入增强液将复合物标记抗体上的Eu3 解离到溶液中,并与增强液中有效成分形成高荧光强度     

化学发光免疫技术对乙型肝炎两对半定量检测的临床意义

目的应用化学发光免疫技术对乙型肝炎（下称乙肝）两对半定量检测的意义进行探讨。方法应用Chemflex化学发光免疫技术定量检测乙肝两对半。结果补充血清乙肝病毒DNA（HBV-DNA）荧光定量聚合酶链反应测定可以直接反映病毒复制状态,具有临床应用价值,但有不能完全反映病毒复制静息肝细胞内HBV病毒状态的缺点。结论乙肝病毒表面抗体的定量测定能够对抗体是否真正具有“中和”HBV的免疫力作出正确评价,对乙肝的预防起到监督作用。     

双标记时间分辨荧光免疫分析技术

时间分辨荧光免疫分析(TR—FIA)法单标记分析技术的原理、步骤和实际临床应用效果许多作者已先后作了报道.双标记分析同经典RIA法的双标记分析技术一样,是在单标记基础上发展起来的,它不仅解决了人们向往已久的灵敏度高、无放射性、操作简便和样本处理快捷等问题,而且实现了一个样本一次可同时测定两种抗原或抗体之目的.因而无论是基础医学的研究还是临床样品的检测,该法都是一种更为理想而实用的免疫分析技术,值得研究和应用.     

免疫胶体金渗透技术检测抗卵巢抗体的试验研究

目的建立免疫胶体金渗透技术检测抗卵巢抗体(AOAb)的新方法。方法采用人源卵巢抗原,以胶体金颗粒结合的羊抗人IgG为标记抗体,根据免疫胶体金技术原理,建立免疫胶体金渗透技术法检测人血清抗卵巢抗体。分别检测72份抗卵巢抗体阳性血清和88份健康体检女性血清,并与酶联吸附试验的结果进行对比分析。结果与酶联免疫吸附试验的结果对比,其符合率为88.75%,特异性为90.91%,敏感度为86.11%。交叉试验与重复试验结果显示,免疫胶体金渗透技术测定抗卵巢抗体具有稳定性和特异性。结论免疫胶体金渗透技术可以快速准确地测定血清抗卵巢抗体,便于推广普及。     

乙肝血清免疫标志物及HBV-DNA监测结果相关性分析及临床应用

目的 分析了解乙肝血清免疫标志物的各种表达模式与乙肝病毒含量的相关性,为临床诊断、治疗提供依据.方法 应用时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)检测乙型肝炎免疫标志物,同时应用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术定量监测乙型肝炎病毒(HBV-DNA).所有检测标本乙肝血清免疫标志物和乙肝病毒含量同时检测.结果 乙肝血清免疫抗原标志物乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性、乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)阳性其HBV-DNA均为阳性,且含量较高;乙肝血清免疫标志物大三阳[HBsAg阳性乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)阳性、乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)阳性]模式中其HBV-DNA阳性率为94.61%;乙肝血清免疫标志物小三阳[HBsAg阳性、HBeAb阳性、HBcAb阳性]模式中其HBV-DNA阳性率为39.26%;乙肝血清免疫抗体标志物HBsAb+、HBcAb+模式中HBV-DNA阳性率显著减少.结论 在乙肝检测中应联合应用两种方法进行检测,提高检出率,避免漏诊,为临床HBV感染、复制及传染性的判断以及疗效分析提供更为可靠的判断依据.     

抗心磷脂抗体IgG时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的建立高灵敏度、宽量程的定量检测患者血清中的抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody,ACA)IgG的时间分辨荧光免疫分析方法。方法采用ACA抗原(心磷脂+β2糖蛋白I)和鼠抗人IgG抗体分别作为固相抗原和铕标记抗体,如果样本中存在ACA抗体,则形成ACA抗原-ACA抗体-铕标记鼠抗人IgG抗体复合物,加入解离增强液解离铕离子,检测荧光强度,样本中ACA-IgG抗体含量与荧光强度成正比;对建立的时间分辨荧光免疫(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)法检测ACA抗体的线性范围、精密度、检测范围进行分析;对25例ACA-IgG抗体阳性血清标本分别利用TRFIA及ELISA法检测ACA-IgG抗体,分析其相关性;收集50例健康献血者,利用TR-FIA检测其血清中的ACA-IgG抗体,计算临床特异度。结果 利用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,TRFIA法检测高、中、低3种浓度混合血清的批内(n=20)精密度分别为2.34%、3.25%和3.87%,批间(n=8)精密度分别为2.89%、3.67%和4.50%;方法的灵敏度为0.1GPL U/ml;TRFIA法检测健康献血者,临床特异度为98%;TRFIA与ELISA 2种方法检测结果的一致性检验采用相关性分析,相关系数为0.987;TRFIA比ELISA的检测范围更宽,稳定性能好。结论首次建立稳定的高灵敏度和宽检测范围的TRFIA法检测人血清中的ACA-IgG抗体,对早期诊断自身免疫性疾病及监测疗效具有重要意义,该方法以其优势有望在各检验科室得以普遍应用。