荧光定量PCR技术在检测HCV—RNA中的应用

目的 评价荧光定量ＰＣＲ技术测定ＨＣＶ－ＲＮＡ水平的价值,探讨ＰＢＭＣ中检出ＨＣＶ－ＲＮＡ的意义。方法 采用荧光定量ＫＲ及ＲＴ－ＰＣＲ技术同时检测８７例血液透析患者的血清和淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果血清、淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ的荧光定量ＰＣＲ检出率（４９．４％、６９．０％）,分别高于相应标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ阳性率（３３．３％、３５．６％）（Ｐ ＜０．０５）。血清、淋巴细胞中同时检出ＨＣＶ－ＲＮＡ的一致率,荧光定量ＰＣＲ法（３１．０％）显著高于ＲＴ－ＰＣＲ定性法（６．９％）（Ｐ＜０．００１）． 荧光定量ＰＣＲ法,淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ检出率高于血清（Ｐ＜０．０１）。结论 与 ＲＴ－ＰＣＲ相比,荧光定量ＰＣＲ技术检测 ＨＣＶ－ＲＮＡ敏感性较高,对ＰＢＭＣ内ＨＣＶ－ＲＮＡ检测有利于提高ＨＣＶ检测的阳性率。     

武汉地区献血员血清TTV等几种肝炎相关病毒的基因检测

了解武汉地区不同献血员血清ＴＴＶ感染特点及其与其它几种肝炎相关病毒感染之间的关系。方法采用ＰＣＲ及巢式ＰＣＲ对５４例武汉市城区义务献血员及７４例既往乡村献血者分别进行血清ＴＴＶ ＤＮＡ,ＨＣＶ ＲＮＡ及ＨＧＶ ＲＮＡ等检测。结果：ＴＴＶ ＤＮＡ、ＨＣＶ ＲＮＡ及ＨＧＶ ＲＮＡ指标阳性率在既 往乡村个体献血员为４３．２％、２３．０％与２．７％,城区义务献血员为５．６％、１．９％与１．９％,前者ＴＴＶ     

树Qu对丙型肝炎病毒的易感性研究

目的：探讨树Ｑｕ对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的易感性。方法：对来自云南的树Ｑｕ接种含ＨＣＶ的病人血清,然后用ＰＣＲ方法检测树Ｑｕ血清的ＨＶＣ ＲＮＡ,用反向被动血凝法测定抗－ＨＣＶ抗体,用原位ＰＣＲ方法检测树Ｑｕ肝细胞内的ＨＶＣ ＲＮＡ。结果：３４．８％的树Ｑｕ（８／２３）在接种ＨＣＶ后,血清中检出ＨＣＶ ＲＮＡ,对４例抗ＨＣＶ阳性和谷丙转氨酶升高的树Ｑｕ的肝组织进行原位ＰＣＲ检测,结果在１例肝细胞中     

慢性肝病患者庚肝病毒RNA检测分析

应用逆转录酶链反应技术（ＲＴ－ＰＣＲ）对９６例慢性肝病患者进行ＨＧＶ ＲＮＡ检测,结果：慢性肝炎９例,肝硬化５６例,肝癌３１例中ＨＧＶ ＲＮＡ阳性分别为１例,６例,３例,总检出率为１０．４２％（１０／９６）在ＨＢＶ感染６３例,ＨＣＶ感染,８例及ＨＢＶ＋ＨＣＶ重叠感染１１例中,ＨＧＶ ＲＮＡ阳性分别为８例,１例和１例,在慢性肝病中ＨＧＶ ＲＮＡ阳性与阴性组间,ＡＳＴ,ＡＬＴ水平无显著性差异（Ｐ〉０．     

贵州HICV感染株基因分型研究

为了解本地区ＨＣＶ感染株的基因型及现有分型方法的适用性，从贵州２６例慢性肝炎和血液病患者中筛出３５份抗－ＨＣＶ阳性血清，用逆转录套式聚合酶链反应作ＨＣＶ ＲＮＡ检测，３０份ＨＣＶ ＲＮＡ阳性血清用３种分型方法进行ＨＣＶ基因分型。结果３份血清为ＨＣＶ２α感染，２７份为ＨＣＶ１ｂ感染。对８份ＨＣＶ１ｂ，１份ＨＣＶ２ａ血清的ＰＣＲ扩增产物直接测序，核酸序列分型结果与原型另一致。     

徐州地区部分人群庚型肝炎病毒感染的检测及分析

目的 了解徐州地区部分人群中庚型肝炎病毒感染状况。方法 以逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｅｅｄ ＰＣＲ）对血清ＨＧＶ ＲＮＡ进行检测。结果 ＨＧＶ ＲＮＡ阳性率在血液透析患者及丙型肝炎病人中分别为５．５Ａ％（１１／３１）,１９．０％（１９／１００）,显著高于自然人群１．３％（１／８０）及职业献血员５．８０％。     

PCR法检测尿毒症病人血清HCV—RNA结果分析

应用ＰＣＲ技术检测尿毒症病人血清ＨＣＶ—ＲＮＡ１６５例，结果显示：ＥＩＡ检测病人血清抗ＨＣＶ阳性率为６３．０％；抗ＨＣＶ阳性病人ＨＣＶ—ＲＮＡＰＣＲ检出阳性率为６５．３％；抗ＨＣＶ阴性病人检出率为９．８％；ＰＣＲ总阳性检出率为７５．１％。提示：ＣＲＦ病人抗ＨＣＶ和ＨＣＶ—ＲＮＡ检出率与输血呈正相关。ＣＲＦ病人接受透析与输血次数愈多，感染ＨＣＶ的机会就愈大。在血清中单独出现抗ＨＣＶ或同时检出抗ＨＣＶ和ＨＣＶ—ＲＮＡ者，表明与早期输血感染ＨＣＶ者已产生抗ＨＣＶ，ＨＣＶ—ＲＮＡ阳性与近期输血再次感染者关系极为密切。用ＰＣＲ法直接检测病毒毒粒要早于ＥＩＡ检出抗ＨＣＶ的阳性结果，有利于早期诊断。     

病毒性肝炎中庚肝病毒感染的分子流行病学调查

为探讨山东地区各型病毒性肝炎中庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）的感染状况,采用逆转录－套式聚合酶链反应法（ＲＴ－ｎＰＣＲ）检测１５９例病毒性肝炎血清ＨＧＶ－ＲＮＡ。结果表明：甲型和戊型肝炎ＨＧＶ－ＲＮＡ均阴性。乙型肝炎ＨＧＶ－ＲＮＡ的检出率,在急性肝炎（０／２０）、慢性肝炎（２／５０）、肝硬变（１／１０）和慢性重型肝炎（１／５）依次升高。慢性丙型肝炎ＨＧＶ－ＲＮＡ的检出率为３０．０％。非甲－戊（ＮＡ－Ｅ）型     

献血员庚型肝炎病毒感染情况和部分基因序列分析

为探讨河南省献血员中庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）的感染情况和病毒基因的变异特征。方法：利 用逆转录－巢式－聚合酶链反应（ＲＴ－Ｎｅｓｔ－ＰＣＲ）检测 ＨＧＶ ＲＮＡ;克隆人 Ｔ载体并测序。结果：在 ３００名义务献血员 中发现１例庚型肝炎病毒ＲＮＡ阳性;２００例初检合格献血员标本中无１例阳性。河南株ＨＧＶ与ＧｅｎＢａｎｋ中ＨＧＶ 对应位置序列的同源性为９０.９％～９８．８％。结论：河南省义务献血员中有ＨＧＶ携带者;河南株ＨＧＶ与国内（河 北株ＨＧＵ７５３５６）分离株的同源性为９８．８％,其同源性高于国外分离株（９０．９％～９５．２％）;建议对献血员增加 ＨＧＶ 检测。     

贵州HCV感染株基因分型研究

为了解本地区ＨＣＶ感染株的基因型及现有分型方法的适用性，从贵州２０６例慢性肝炎和血液病患者中筛出３５份抗－ＨＣＶ阳性血清，用逆转录套式聚合酶链反应作ＨＣＶＲＮＡ检测。３０份ＨＣＶＲＮＡ阳性血清用３种分型方法（核心区特异引物ＰＣＲ，非结构５区特异探针核酸杂交，５′末端非编码区限制性长度多态性分析）进行ＨＣＶ基因分型。结果３份血清为ＨＣＶ２ａ感染，２７份为ＨＣＶ１ｂ感染。对８份ＨＣＶ１ｂ、１份ＨＣＶ２ａ血清的ＰＣＲ扩增产物直接测序，核酸序列分型结果与原型别一致。表明ＨＣＶ１ｂ是贵州地区ＨＣＶ感染株的主要基因型，ＨＣＶ２ａ感染并不常见。以ＨＣＶ基因组不同区域为基础的各方法分型结果间有很好的相符性。     

陕西株庚型肝炎病毒（GBV—C／HGV）RNA NS3区cDNA（4248nt— …

目的 了解陕西株庚型肝炎病毒（ＨＧＶ,ＲＮＡ／ＧＢＶ－Ｃ）的核苷酸序列特点。方法从陕西省西安市两位非甲、乙、丙、丁、戊型肝炎患者的血清中,应用反转录及套式ＰＣＲ技术,从血清中提取ＲＮＡ,经特异性的反转录及套式ＰＣＲ技术,从血清中提取ＲＮＡ,经特异性的反转录引物Ｐ４反转录成ＣＤＮＡ,以此为模板分别用Ｐ３,Ｐ４及Ｐ１,Ｐ２两对引物进行ＰＰＣＲ扩增,扩增到２１８ｂｐ的ＨＧＶ ＲＮＡ ＮＳ３区部分基因,将     

丙型肝炎病毒5’非编码区PCR产物单链构象多态性分析及序列测定

目的：研究慢性肝炎病人血清、肝细胞肝癌组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５＇非编码区变异情况．方法：收集１０例慢性肝炎病人及４例肝细胞肝癌病人血清和肝细胞肝癌组织，检测抗ＨＣＶ抗体阳性，进行ＨＣＶ５＇非编码区ＲＮＡ的逆转录ＰＣＲ扩增，ＰＣＲ产物进行单链构象多态性分析，并对部分病例序列进行测定．结果：６例慢性肝炎病人血清及３例肝细胞肝癌组织中检测到ＨＣＶＲＮＡ，单链构象多态性分析显示各例条带之间无明显差异，对１例肝细胞肝癌组织中ＨＣＶ５＇非编码区ｃＤＮＡＰＣＲ产物的序列测定表明它与ＨＣＶ－１的同源性为９７．３％，与ＨＣＶ－ＢＫ的同源性为９７．７％．结论：我们的结果提示在西安地区ＨＣＶ５＇非编码区几乎是一样的，并进一步证实不同地区ＨＣＶ５＇非编码区的高度保守性．     

山东地区输血后丙肝患者HGV感染状况及HGV部分核酸序列测定

目的 了解山东地区输血后丙型肝炎患者庚肝病毒感染的状况及ＨＧＶ部分基因核苷酸序列。方法 应用ＲＴ－ＰＣＲ法检测ＨＧＶＲＮＡ，并对阳性扩增的产物采用ＰＣＲ技术片段直接克隆法测定。结果 从８６例ＰＴＨ－Ｃ患者血清中检出ＨＧＶＲＮＡ阳性者３１例（３６％），其中一例患者ＨＧＶＮＳ５区部分核苷酸序列与美国原始株和另一例日本株核苷酸同源性比较分别为８６％和８４％。结论 证实山东地区ＰＩＨ－Ｃ患者存在着ＨＧＶ感     

血液透析尿毒症患者肝炎病毒感染的研究

目的 观察尿毒症血液透析患者乙型,丙型,庚型肝炎病毒感染情况,以及此三型肝炎病毒（ＨＣＶ）多重感染的情况,并探讨其感染的相对危险因素。方法 对３００例血液透析患者的单份血清共３００份,进行ＨＢｓＡｂ,ＨＢｓＡｇ,ＨＢｅＡｂ,ＨＢｃＡｂ,ＨＢＶ－ＤＮＡ,ａｎｔｉ－ＨＣＶ,ＨＣＶ－ＲＮＡ的检测,并随机抽取其中的４０份血清以逆转录－巢式ＰＣＲ方法检测ＨＧＶ－ＲＮＡ,以酶联免疫吸附试验方法检测ＨＧＶ抗体（     

HBV与HCV重叠感染的研究

应用ＰＣＲ法和套式ＰＣＲ法对深圳地区４４例ＨＢＶ血清学标志物阳性者进行ＨＣＶ－ＲＮＡ检测，并同时作ＨＢＶ－ＤＮＡ检测，以了解ＨＢＶ与ＨＣＶ重叠的感染情况，同时观察其血清ＡＬＴ的情况。结果发现，４４例患者中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性１２例（２７．２７％）；ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性２２例（５０．００％），抗ＨＣＶ阳性２１例（４７．７３％）．表明ＨＢＶ与ＨＣＶ的重叠感染率较高，应引起人们的重视。     

中国株HGV部分基因的分子克隆与核苷酸序列分析

采用ＲＴ－ＰＣＲ对广东地区３３例肝炎病血清进行ＨＧＶＲＮＡ检测，结果２例（６．１％）阳性，对其中１株输血后ＨＧＶ（ＣＨ－Ｓ）基因组５端非翻译区（５′ＵＴＲ）进行分子克隆与测序，并分别与Ｌｉｎｎｅｎ等报道的２株ＨＧＶ（ＰＮＦ２１６１，Ｒ１０２９１）和Ｌｅａｒｙ等报道的ＧＢＶ－Ｃ相比较，其核苷酸序列的同源性分别为８９．２％，８８．７％，８７．１％，本研究首次证实我国华南地区存在ＨＧＶ感染，ＨＧＶ高度保     

献血员血清抗－HCV－IgM检测及其意义

目的探讨献血员血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ与ＨＣＶ感染的关联性。方法献血员血清８３６份。以ＨＣＶ混合抗原包被聚苯乙烯反应板微孔,以辣根过氧化物酶标记的羊抗人ＩｇＭ单克隆抗体为酶标抗体,建立ＥＬＩＳＡ检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ。以第二代ＥＬＩＳＡ法检测抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ,以ＰＣＲ检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ或抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ阳性样品中的ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果２－巯基乙醇破坏试验及ＨＣＶ抗原抑制试验结果显示,以所建立的ＥＬＩＡＳ检测到的为ＨＣＶ特异ＩｇＭ,批内变异系数为３．４７％,批间变异系数为７．０６％。８３６份献血员血清中,有２份抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ阴性而抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ和ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性。结论本研究中建立的ＥＬＩＳＡ可较好地用于检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ、献血员筛选及防止丙型肝炎传播。     

地高辛掺入法检测HCV RNA含量在肝病诊断中的应用

目的;研究血清ＨＣＶ ＲＮＡ含量与ＨＣＶ感染者肝病程度的关系。方法：应用地高辛掺入法检测血清ＨＣＶ ＲＮＡ含量。在ＰＣＲ过程中将ＤＩＧ－ｄＵＴＰ掺入到ＰＣＲ产物叶地用ＰＣＲ ＥＬＩＳＡ法检测ＰＣＲ产物,结合标准参考样本而达定量目的。结果;丙肝后肝硬化组血清ＨＣＶ ＲＮＡ含量显著高于丙型肝炎组。     

献血员血清抗－HCV－IgM检测及其意义

目的探讨献血员血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ与ＨＣＶ感染的关联性。方法献血员血清８３６份。以ＨＣＶ混合抗原包被聚苯乙烯反应板微孔，以辣根过氧化物酶标记的羊抗人ＩｇＭ单克隆抗体为酶标抗体，建立ＥＬＩＳＡ检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ。以第二代ＥＬＩＳＡ法检测抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ，以ＰＣＲ检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ或抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ阳性样品中的ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果２－巯基乙醇破坏试验及ＨＣＶ抗原抑制试验结果显示，以所建立的ＥＬＩＡＳ检测到的为ＨＣＶ特异ＩｇＭ，批内变异系数为３．４７％，批间变异系数为７．０６％。８３６份献血员血清中，有２份抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ阴性而抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ和ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性。结论本研究中建立的ＥＬＩＳＡ可较好地用于检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ、献血员筛选及防止丙型肝炎传播。     

肝细胞癌患者血清与癌组织中抗HCV及HCVRNA的检测

８８例经病理确诊的肝细胞癌患者，用ＥＬＩＳＡ法检测其血清抗－ＨＣＶ与ＨＢＶ－Ｍ，阳性率分别为１４．７７％和９０．９１％。用ＰＣＲ法检测发现血清ＨＣＶＲＮＡ阳性１２例（１３．６４％）；１１例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性病人的肝癌组织中８例ＨＢＶＤＮＡ阳性；１例肝癌组织中同时检出ＨＣＶＲＮＡ与ＨＢＶＤＮＡ。结果表明，本组肝癌的发生主要与ＨＢＶ感染有关。而与ＨＣＶ感染也可能有一定关系。