痛痹颗粒对兔软骨细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:观察中药复方痛痹颗粒对体外一氧化氮(NO)诱导的兔软骨细胞凋亡和细胞周期的影响。方法:采用流式细胞仪的Annexin V和DNA分析方法分别检测各组的细胞早期凋亡和细胞周期百分率。结果:硝普钠和痛痹颗粒混合培养的软骨细胞组的早期凋亡率与模型组(P<0.01)和空白对照组(P<0.05)比较显著下降,S期细胞百分率较模型组、空白组显著升高(P<0.05)。G0/G1期细胞百分率则显著低于模型组(P<0.01)。结论:痛痹颗粒能明显降低体外NO诱导的兔软骨细胞凋亡,并有促进兔软骨细胞增殖的作用。     

痛痹颗粒对兔软骨细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:观察中药复方痛痹颗粒对体外一氧化氮(NO)诱导的兔软骨细胞凋亡和细胞周期的影响。方法:采用流式细胞仪的Annexin V和DNA分析方法分别检测各组的细胞早期凋亡和细胞周期百分率。结果:硝普钠和痛痹颗粒混合培养的软骨细胞组的早期凋亡率与模型组(P<0.01)和空白对照组(P<0.05)比较显著下降,S期细胞百分率较模型组、空白组显著升高(P<0.05)。G0/G1期细胞百分率则显著低于模型组(P<0.01)。结论:痛痹颗粒能明显降低体外NO诱导的兔软骨细胞凋亡,并有促进软骨细胞增殖的作用。     

丹参注射液对体外小鼠心脏成体干细胞的影响

目的：研究丹参注射液对体外小鼠成体心脏干细胞的细胞学特性影响。方法：体外分离培养小鼠Sca-1＋成体心脏干细胞,荧光显微镜及流式细胞仪鉴定细胞纯度。培养的小鼠心脏干细胞分为3组,分别为低剂量丹参注射液组（75μg/mL）,高剂量丹参注射液组（300μg/mL）及对照组。干预后,采用CCK-8检测细胞活力;EdU掺入法检测细胞DNA合成情况;5%CO2和95%N2缺氧条件培养12h诱导细胞凋亡后,Caspase-3分光光度法检测细胞内Caspase-3酶活性情况。结果：成功分离培养小鼠心脏成体干细胞。荧光显微镜及流式细胞仪鉴定细胞纯度〉95%。与对照组相比,高剂量丹参注射液组细胞活力（P〈0.05）和DNA合成（P〈0.05）显著增加;与低剂量组相比,高剂量丹参注射液组细胞活力增强（P〈0.05）,但DNA合成无显著差异。缺氧条件下,丹参注射液高剂量处理组Caspase-3酶活性较对照组显著下降（P〈0.05）。结论：丹参注射液增加小鼠心脏成体干细胞的细胞活力及DNA合成能力,减少缺氧诱导的细胞凋亡。     

冬虫夏草诱导乳癌细胞MCF-7凋亡的实验研究

目的探讨中药冬虫夏草(cordyceps sinensis,CS)对人乳癌细胞株MCF-7体外增殖抑制作用及凋亡的影响。方法应用MTT比色法测定CS对MCF-7的增殖抑制率;应用流式细胞仪、DNA琼脂糖凝胶电泳法观察细胞凋亡。结果CS能抑制MCF-7细胞生长,且呈浓度/时间依赖性,CS在1.0~50μg/mL培养24~96 h生长抑制率改变最为明显;CS可使MCF-7细胞凋亡,流式细胞仪DNA直方图上出现了凋亡峰,凋亡率分别为(4.9±3.2)%(、10.7±2.7)%(、14.7±0.5)%,对照组凋亡率为(0.9±0.2)%,凋亡率呈浓度依赖性;琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯形条带。结论CS可诱导MCF-7细胞凋亡,对MCF-7细胞具有增殖抑制作用。     

短管兔耳草正丁醇提取物诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的:探讨藏药短管兔耳草正丁醇提取物诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的活性。方法:MTT比色法检测其对SGC-7901胃癌细胞株增殖的抑制作用;荧光显微镜及电镜观察细胞的形态学变化;琼脂糖电泳法检测细胞凋亡过程中DNA碎片的形成;流式细胞仪分析测定细胞的凋亡率。结果:藏药短管兔耳草正丁醇提取物在0.34~21.60 mg/mL范围内,对SGC-7901胃癌细胞株的增殖有明显抑制作用;荧光显微镜及电镜下可观察到凋亡的形态学改变;流式细胞仪通过对单个细胞的快速测定,可以观察到“亚G1峰”;DNA凝胶电泳呈现梯形条带。结论:藏药短兔耳草正丁醇提取物能够抑制胃癌SGC-7901细胞的增值并诱导凋亡。     

心脑宁诱导增生VSMC凋亡及对相关基因表达的影响

目的 :探讨活血化瘀中药血清体外诱导增生血管平滑肌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法 :采用流式细胞仪分析 ,DNA电泳分析检测细胞凋亡 ;应用Northen印迹检测bcl- 2、c-myc基因表达活性。结果 :经中药血清处理的血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmuclecell,VSMC) ,可出现典型的凋亡特征 ,DNA电泳呈梯状图谱 ;流式细胞仪分析显示G0 /G1期细胞阻滞现象 ,亚二倍体凋亡细胞增多 ,出现典型的凋亡峰 ,细胞凋亡率与中药血清浓度具有量效关系。杂交结果提示 ,2 0 %中药血清可抑制抗凋亡基因bcl- 2的表达 ,上调促凋亡基因c -myc的mR NA水平。结论 :活血化瘀中药可通过影响凋亡相关基因bcl- 2、c -myc的表达活性而诱导VSMC凋亡。     

红花注射液对肝星状细胞HSC-T6增殖、凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的 研究红花注射液对肝星状细胞(hepatic steuate cell,HSC)HSC-T6增殖、凋亡及凋亡相关基因bcl-2及bax mRNA表达的影响.方法 体外培养HSC株,用不同质量浓度的红花注射液处理HSC-T6,采用MTT法检测细胞增殖;采用5、10、20 mg/mL红花注射液干预细胞24 h,流式细胞仪检测细胞周期;倒置显微镜下观察细胞凋亡形态学改变;并用琼脂糖凝胶电泳法检测DNA Ladder凋亡梯度;Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞仪分析凋亡率;Real time-RT PCR检测凋亡相关基因bcl-2、bax mRNA的表达水平.结果 红花注射液对HSC增殖有明显的抑制作用,且作用呈剂量和时间依赖性;红花注射液(10、20 mg/mL)作用24 h流式细胞术测出G0/G1期细胞所占比例增多,与对照组比较差异显著(P<0.05、0.01);药物干预后细胞表现不同程度的凋亡,琼脂糖电泳可见DNA出现断裂、PI/Annexin V双染流式细胞仪分析对照组凋亡率为(0.73±0.33)%,红花注射液在5、10、20 mg/mL凋亡率分别为(2.04±0.58)%、(9.46±1.29)%、(16.55±11.27)%,差异显著(P<0.01);Real time-RT-PCR结果显示红花下调抗凋亡基因bcl-2的mRNA表达,同时上二调HSC-T6的促凋亡基因bax的mRNA表达.结论 红花注射液能抑制HSC增殖及增殖周期,促进活化的HSC凋亡,其机制可能是调控bcl-2/bax mRNA的表达.     

雄黄诱导维甲酸耐药的急性早幼粒细胞白血病细胞(MR2细胞)凋亡的体外研究

目的 :深入了解雄黄治疗急性早幼粒细胞白血病 (APL)的机理。方法 :以对全反式维甲酸 (ATRA)耐药的APL细胞株MR₂ 细胞为体外模型 ,用不同剂量的雄黄处理细胞一定时间后 ,利用MTT实验观察细胞的存活、增殖状态 ,应用细胞形态学、基因组DNA电泳、流式细胞仪检测细胞凋亡 ,利用流式细胞仪分析细胞周期及细胞膜AnnexinⅤ的表达。结果 :一定浓度范围内雄黄对MR₂ 细胞的生长、增殖有剂量、时间依赖性抑制作用 ;Wright’s及HE染色均可见凋亡细胞 ,透射电镜下可见核染色质边集、核碎裂及凋亡小体 ;基因组DNA电泳出现“梯形”条带 ;流式细胞仪分析出现低于G1期DNA含量的亚二倍体细胞峰 ;经雄黄处理后AnnexinⅤ FITC⁺/PI^-的凋亡细胞逐渐增多。结论 :雄黄可诱导ATRA耐药的APL细胞发生凋亡 ,提示雄黄治疗APL的效应途径可能不同于ATRA。     

灵芪胶囊含药血清对K562白血病细胞的诱导凋亡作用

[目的]观察灵芪胶囊含药血清在体外对K562白血病细胞凋亡的影响.[方法]采用血清药理学方法制备灵芪胶囊含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562白血病细胞,采用流式细胞仪(FCM)及DNA片段凝胶电泳观察和检测细胞凋亡情况.[结果]不同浓度灵芪胶囊含药血清能够诱导K562细胞的凋亡,且凋亡率随着剂量的增加而增大,与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01);DNA琼脂糖凝胶电泳谱可见典型的DNA梯形带形成.[结论]灵芪胶囊含药血清具有诱导细胞凋亡的作用,其作用强度与时间-浓度呈正相关.灵芪胶囊含药血清对K562细胞发生细胞毒作用可能与诱导K562细胞凋亡有关.     

白花丹参叶制剂对乳腺癌BCaP-37细胞株增殖抑制的体外研究

目的 观察白花丹参叶制剂对于人乳腺髓样癌细胞株BCaP-37生长的抑制作用.方法 以体外培养的人乳腺癌细胞株BCaP-37为靶细胞,运用四氮唑盐法(MTT法)观察白花丹参叶制剂作用12h后对于人乳腺癌细胞株生长的影响.以流式细胞仪分析其对细胞周期和凋亡率的影响.结果 MTT法结果显示,白花丹参叶制剂作用12h可抑制BCaP-37的生长,并呈剂量依赖性.流式细胞仪测定结果显示,随白花丹参叶制剂浓度的增加,凋亡峰越来越显著,说明白花丹参叶制剂可在一定程度上诱导细胞凋亡,并且凋亡率与浓度呈正相关;但对细胞周期无明显影响.结论 白花丹参叶制剂可抑制体外培养的人乳腺癌细胞株BCaP-37增殖并促使癌细胞凋亡且呈一定的量效关系.     

丹参植株原位侵染RNAi毛状根体系的建立及其干扰效果

目的:利用土培植物进行原位侵染获得RNAi型丹参毛状根,并对其干扰效果进行研究。方法:利用转化有目标基因RNAi载体的发根农杆菌对土壤中生长的丹参幼苗根茎部分进行侵染产生毛状根,经荧光显微镜鉴定阳性毛状根,并利用实时荧光定量PCR检测目标基因的表达情况。结果:在土培丹参根茎部分成功侵染产生毛状根,利用荧光显微镜进行检测显示目标基因RNAi型毛状根阳性转化率为72.72%,RNAi空载毛状根阳性转化率为66.67%。实时荧光定量PCR结果表明RNAi型毛状根中目标基因表达受到抑制,表达量下降到空载型对照组的8.61%,证明对土培植物直接进行侵染能够成功诱导RNAi毛状根。结论:采用原位侵染法诱导丹参根茎部位成功产生阳性RNAi型毛状根,侵染过程无需无菌操作,简单快捷,对植株生长无影响,能够用于功能基因的体内功能研究。     

左旋氨氯地平联合丹参冻干粉针防治冠脉支架内再狭窄

目的:研究左旋氨氯地平和丹参冻干粉联合防治冠脉支架内再狭窄的临床价值.方法:收集并回顾性研究本院进行冠脉内支架植入术成功的冠心病患者血浆标本222例,分为对照组、丹参冻干粉针组、左旋氨氯地平组和联合组用药组(左旋氨氯地平+丹参冻干粉针,观察对术前、后和随访6个月经冠脉造影(CAG),并测定血浆中术后和随访6个月的内皮素(endothelin,ET)、一氧化氮(nitrogen monoxide,NO)、甘油三酯(triglyceride,TG)、血清总胆固醇(serum total cholesterol,TC)的水平.结果:与对照组相比,丹参冻干粉组、左旋氨氯地平组的再狭窄率降低,但无统计学差异,而联合组的再狭窄率降低并且有统计学意义.丹参冻干粉组、左旋氨氯地平组、联合组TG,TC均降低,且左旋氨氯地平组、联合组ET降低,NO升高(P＜0.05).结论:丹参冻干粉和左旋氨氯地平两者联合使用对支架内再狭窄(IRS)的发生有预防作用.     

铁筷子多糖诱导小鼠S180细胞凋亡的实验研究

目的:观察铁筷子多糖(HFPS)诱导小鼠S180细胞凋亡的作用.方法:MTT比色法检测HFPS对小鼠原代腹水型S180肉瘤细胞的生长抑制效应,应用光镜、激光共聚焦显微镜、DNA凝胶电泳和流式细胞术研究HFPS诱导S180细胞凋亡的作用.结果:MTT检测结果显示HFPS可以有效抑制S180细胞生长,作用呈时间和剂量依赖性.光镜、激光共聚焦显微镜观察凋亡细胞的形态学变化,表现为核固缩、碎裂、染色质边集、凋亡小体形成等.DNA凝胶电泳可见以180bp倍数裂解的DNA梯形电泳带出现,同时随药物浓度的升高,细胞周期S期比例下降,G0/G1期比例上升,PI增殖指数下降.结论:铁筷子多糖可诱导S180肿瘤细胞凋亡.     

天花粉蛋白抑制HeLa细胞增殖的实验研究

目的研究天花粉蛋白(TCS)对人宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用,探讨TCS抗肿瘤的作用机制。方法采用MTT法检测TCS对Hela细胞的抑制作用,形态学观察、DNA电泳及流式细胞仪检测TCS对HeLa细胞的诱导凋亡作用。结果TCS对HeLa细胞的生长具有明显的抑制作用,显微镜下可见细胞圆缩,胞浆凝聚等凋亡细胞的形态学改变,DNA凝胶电泳呈梯级格局,流式检测出现凋亡峰,凋亡比例具有剂量和时间依赖性。结论天花粉蛋白通过诱导细胞发生凋亡而抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖。     

丹参粉针剂对高血压患者凝血功能的影响

目的观察丹参粉针剂对高血压患者凝血功能的影响。方法入选120例初诊为轻中度原发性高血压患者,根据治疗方案分为常规降压治疗组（常规降压组）或丹参粉针剂治疗组（丹参治疗组）,每组60例。丹参治疗组在常规降压治疗基础上加用丹参粉针剂400mg加入5％葡萄糖注射液250mL,1次／日,共2周。另入选50名同期年龄、性别相匹配之健康体检者为对照组。检测对照组观察前及两组高血压患者治疗前后凝血功能各项指标：纤维蛋白原（Fg）、血小板计数（PLT）、凝血酶时间（TT）、凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）、组织纤溶酶原激活物（t—PA）和D-二聚体（DD）的变化,并比较各组间的差异。结果与对照组比较,高血压患者存在凝血功能紊乱现象,具体表现为TT、PT和APTT下降,Fg、PLT、PAI-1和DD升高,t—PA降低（均P〈0．05）。与治疗前比较,两组高血压患者治疗后凝血功能改善,表现为TT、PT和APTT延长,Fg、PLT、PAI一1和DD下降,t—PA升高;与常规降压组比较,丹参治疗组凝血功能各项指标改善程度更显著（P〈0．05）。结论丹参粉针剂有助于改善高血压患者的凝血功能障碍。     

大黄素对人胃癌细胞MKN45增殖抑制及诱导凋亡的研究

目的：研究大黄素（Emodin）对人胃癌细胞MKN45增殖及诱导凋亡的作用。方法：用噻唑蓝（MTT）法观察Emodin对MKN45的生长抑制作用;用DNA Ladder凝胶电泳法、荧光染色法、流式细胞仪法分析Emodin的诱导凋亡作用。结果：与对照组相比,Emodin能明显抑制MKN45细胞的生长且与浓度、时间呈依赖性,其IC50（48小时）为（47.5±0.3）μmol/L;Emodin处理胃癌细胞后,DNA凝胶电泳结果显示呈明显的梯状条带;吖啶橙（AO）染色观察示细胞核内可见浓染致密的颗粒荧光、新月型改变、核固缩或片段化及凋亡小体的形成;流式细胞仪分析Emodin能浓度依赖性诱导MKN45细胞凋亡和G2/M期阻滞。结论：Emodin对人胃癌细胞MKN45有明显的生长抑制作用,且该作用与诱导细胞凋亡有关。     

益气健脾中药对血管平滑肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的：探讨益气健脾中药血清体外诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法：采用缺口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nicked labeling,TUNEL)分析、透射电镜、流式细胞仪分析、DNA电泳分析检测细胞凋亡；应用Northern印迹检测bcl-2、c-myc和p53基因表达活性。结果：经中药血清处理的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC)，可出现典型的凋亡特征，DNA电泳呈梯状图谱；流式细胞仪分析显示G0／G1期细胞阻滞现象，亚二倍体凋亡细胞增多，出现典型的凋亡峰，细胞凋亡率与中药血清浓度具有量效关系。杂交结果提示，30％中药血清可抑制抗凋亡基因bcl-2的表达，上调促凋亡基因c-myc和p3 mRNA水平。结论：益气健脾中药通过影响凋亡相关基因bcl-2、c-myc和p53的表达活性而诱导VSMC凋亡。     

淫羊藿苷对缺氧诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对缺氧所致血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)损伤的影响。方法 建立体外细胞缺氧模型,用MTT法观察ICA对缺氧损伤的血管内皮细胞活性的影响,测定细胞中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及乳酸脱氢酶(LDH)活力,并对细胞进行Hoechst33342荧光染色、电镜观察细胞超微结构,运用流式细胞仪及DNA琼脂糖凝胶电泳分析DNA断裂情况,以观察ICA对缺氧诱导的内皮细胞凋亡的影响。结果 ICA能抑制缺氧引起的血管内皮细胞的减少,降低LDH活力,并抑制缺氧条件下MDA生成,提高SOD活力;缺氧能诱导血管内皮细胞凋亡,表现为细胞核浓缩,沿核膜排列成块状,DNA琼脂糖凝胶电泳显示典型“梯形条带”,流式细胞仪分析呈现典型凋亡亚二倍体峰。ICA能显著抑制缺氧诱导的内皮细胞凋亡。结论 ICA具有保护缺氧诱导的血管内皮细胞损伤的作用,其作用机制与抗脂质过氧化物产生、提高SOD活力以及抗细胞凋亡有关。