营养

012749大豆异黄酮抑制BCap一37乳腺癌细胞增殖的作用研究/杨镇洲…//中国公共卫生.一2000,16(10).一913～914 采用二羟异黄酮、三羟异黄酮处理BCap一37细胞1～4d后,以生长曲线、。H—TdR掺入试验反映其增殖活力,用流式细胞仪检测其对细胞周期的影响。结果显示:l～9×10。mol/L三羟异黄酮处理BCap一37细胞3～4d后,对BCap一37细胞有增殖抑制作用,且与剂量及培养时间成正相关,而在相同剂量条件下二羟异黄酮对BCap一37细胞生长无抑制作用。三羟异黄酮处理BCap一37细胞4d后,BCap一37细胞的增殖指数明显下降,细胞主要阻滞于G。期。提示:三…     

大豆异黄酮抑制BCap-37乳腺癌细胞增殖的作用研究

采用二羟异黄酮、三羟异黄酮处理BCap－37细胞1～4d后，以生长曲线、3H－TdR掺入试验反映其增殖活力，用流式细胞仪检测其对细胞周期的影响。结果显示1～9×105mol／L三羟异黄酮处理BCap－37细胞3～4d后，对BCap－37细咆有增殖抑制作用，且与剂量及培养时间成正相关，而在相同剂量条件下二羟异黄酮对BCap－37细胞生长无抑制作用。三羟异黄酮处理BCap－37细胞4d后，BCap－37细胞的增殖指数明显下降，细胞主要阻滞于G1期。提示三羟异黄酮对BCap－37细胞有显著增殖抑制作用。     

三羟异黄酮对人乳腺癌细胞外调节激酶影响

目的探讨三羟异黄酮（genistein）对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞外调节激酶1/2（ERK1/2）MAPK信号转导通路的影响.方法采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）比色法分别检测三羟异黄酮以及与ERK1/2上游激酶MEK1/2抑制剂联合作用时对MDA-MB-231增殖的抑制作用;应用Western blot蛋白免疫印记法分别检测ERK1/2总蛋白、c-Jun、c-Fos蛋白的表达.结果 MTT结果显示,与对照组相比,三羟异黄酮作用48h后,细胞存活度随浓度增加而降低,合用MEK1/2抑制剂细胞存活度最低;Western blot分析提示,随三羟异黄酮剂量的增加,ERK1/2、c-Jun、c-Fos蛋白表达增加,但合用抑制剂后蛋白表达降低.结论三羟异黄酮可以抑制MDA-MB-231细胞增殖,并激活了ERK1/2 MAPK信号转导通路;MEK1/2抑制剂可以抑制三羟异黄酮介导的ERK1/2活化,同时提高三羟异黄酮的肿瘤抑制作用.     

二羟异黄酮对人乳腺癌细胞系MCF-7生长影响

大豆异黄酮是豆科植物的重要成分.近年来研究显示,其具有抗肿瘤作用,尤其对人类乳腺癌细胞株及前列腺癌细胞株均具有明显的体外抗肿瘤作用.献表明,二羟异黄酮可以抑制细胞增殖及阻滞细胞周期.本实验初步探讨二羟异黄酮的抗肿瘤作用.     

异黄酮对前列腺癌细胞的激素受体基因表达的影响

[目的] 通过大豆异黄酮的活性物质染料木黄酮和大豆苷元抑制前列腺癌PG-3和LNCaP细胞增殖和对激素基因表达的影响，探讨大豆异黄酮治疗和预防前列腺癌的可能机制。[方法] 0、10、20、40、60、80和160μmol／L剂量组的染料木黄酮和大豆苷元处理前列腺癌细胞，细胞存活率用MTT方法检测，α雌激素受体(ERα)、β雌激素受体(ERβ)、雄激素受体(AR)和血管上皮生长因子(VEGF)等基因的mRNA表达用RT-PCR进行检测。[结果] 染料木黄酮和大豆苷元对PC-3、LNCaP细胞具有明显的抑制生长作用，在160μmol／L的浓度时，染料木黄酮、大豆苷元作用72h后，PC-3细胞的存活率分别为12．28％和44．88％，LNCaP细胞的存活率分别为25．48％和43．14％，其抑制效应具有时间和剂量依赖性，同时发现对．PC-3细胞的VEGF、ERα和ERβ基因表达下调，AR基因处理前后没有检测到；对LNCaP细胞的VEGF和AR基因表达下调，ERα和ERβ的表达并无影响。[结论] 大豆异黄酮能抑制前列腺癌细胞的增殖效应，存在时间和剂量效应关系，雌激素受体基因可能直接在大豆苷元抑制PC-3细胞的增殖中参与作用，而染料木黄酮抑制PC-3细胞和染料木黄酮及大豆苷元抑制LNCaP细胞可能主要是通过Akt通路影响VEGF和AR等基因而实现。     

TGF-β1调控MAP1S通过NER信号通路影响肺癌细胞的增殖和侵袭

目的探讨TGF-β1调控MAP1S通过NER信号通路影响肺癌细胞的增殖和侵袭。方法免疫组化检测肺癌和正常肺组织中TGFβ1和MAP1S的表达情况;免疫共沉淀实验检测TGFβ1和MAP1S蛋白的相互关系;MTT实验检测沉默MAP1S后肺癌细胞增殖能力的变化;Transwell试验检测沉默MAP1S后肺癌细胞侵袭能力的影响;Western blotting检测沉默MAP1S后ERCC1和ERCC3蛋白的表达情况;裸鼠体内成瘤实验检测沉默MAP1S后肺癌细胞成瘤能力变化。结果与正常肺组织相比,肺癌组织中TGFβ1和MAP1S表达水平明显升高;免疫共沉淀实验表明TGFβ1和MAP1S结合为共同体;沉默MAP1S抑制肺癌A549细胞的增殖和侵袭能力、下调ERCC1和ERCC3蛋白的表达、抑制肺癌A549细胞的体内成瘤能力。结论 TGFβ1和MAP1S在肺癌中表达明显升高,同时沉默MAP1S可以抑制肺癌细胞增殖和侵袭能力,TGFβ1可以靶向MAP1S蛋白通过NER信号通路调控肺癌细胞的生物学行为。     

大豆异黄酮对乳腺癌细胞抑癌基因启动子区的去甲基化作用研究

目的:探讨大豆异黄酮是否能够逆转乳腺癌细胞中关键抑癌基因—上皮型钙粘蛋白基因(E-cadherin)启动子的异常甲基化状态,并有效地重新激活该基因的表达,从而抑制乳腺肿瘤细胞生长。方法:采用不同浓度大豆异黄酮处理乳腺癌SKBR3细胞6d后,通过噻唑蓝比色法检测大豆异黄酮对乳腺癌细胞增殖的影响,进而通过甲基化特异性聚合酶链反应结合半定量PCR方法,检测乳腺癌细胞中E-cadherin基因启动子区CpG岛的去甲基化状态及恢复表达情况。结果:大豆异黄酮在10,20,40,80,160μmol/L浓度对乳腺癌细胞的抑制率分别为(7±2.11)%,(10±3.23)%,(44.33±4.93)%,(84.33±3.06)%,(86.33±3.51)%,其对细胞的生长抑制呈剂量依赖效应。甲基化特异性PCR及半定量PCR结果提示大豆异黄酮对E-cadherin基因启动子区异常甲基化具有去甲基化效应,并能使Ecadherin基因部分恢复表达。结论:植物雌激素大豆异黄酮作为一种天然的表观遗传修饰剂能够通过逆转关键抑癌基因启动子甲基化,激活抑癌基因,抑制乳腺癌细胞的生长,在乳腺肿瘤的预防和治疗中发挥重要作用。     

MAPK在三羟异黄酮抑制静脉内皮细胞中作用

目的探讨丝裂素活化蛋白激酶(mitogen activator protein kinase，MAPK)在三羟异黄酮(genistein)抗肿瘤血管生成中的作用。方法以脐静脉内皮细胞(ECV304)为研究对象，通过四甲基偶氮唑盐(MTT)实验检测三羟异黄酮和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)对ECV304细胞增殖的影响。应用免疫细胞化学和激酶活性分析方法检测ECV304细胞MAPK磷酸化水平和激酶活性。结果血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)单独处理能使ECV304细胞增殖，MAPK磷酸化水平和活性升高，而三羟异黄酮单独处理能抑制ECV304细胞增殖，MAPK磷酸化水平和活性降低，三羟异黄酮和VEGF同时处理时，细胞增殖受抑，MAPK磷酸化和MAPK激酶活性比VEGF单独处理组低，而比三羟异黄酮单独处理组高。结论MAPK在三羟异黄酮抑制ECV304细胞增殖中发挥着重要作用，可能是三羟异黄酮抑制肿瘤血管生成的机制之一。     

大豆苷原对体外培养人胃癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的:了解二羟异黄酮对胃癌细胞有无促增殖与诱导凋亡作用。方法:以不同浓度的二羟异黄酮处理人胃癌细胞系MGC-803细胞。然后分别用MTT法测定细胞增殖情况、流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳测定细胞周期和细胞凋亡等。结果:MTT 结果显示:二羟异黄酮对胃癌细胞具有促进和抑制增殖的双相作用-在低浓度(0.1-1 μmol/L)时促进细胞生长,在较高浓度(10-100 μmol/L)时对细胞生长则有抑制作用。流式细胞术结果显示:癌细胞群阻滞在G1期,没有明显凋亡峰的出现;凝胶电泳也末检测到明显的DNA阶梯状条带。结论:二羟异黄酮对体外培养的胃癌细胞的生长有双相作用,较高浓度可抑制胃癌细胞的生长并使细胞阻滞在G1期,而无诱导细胞凋亡的作用。     

TGF-β1对人早孕滋养层细胞和绒毛膜癌JAR细胞增殖的影响及其意义

目的:研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对人早孕滋养层细胞和人绒毛膜癌JAR细胞增殖的影响,探讨TGF-β1在人妊娠滋养细胞疾病发病机制中的作用和意义。方法:分别用细胞计数法、MTT比色法研究TGF-β1对两种细胞增殖活性的影响。结果:随着TGF-β1浓度的增高,TGF-β1抑制人正常早孕滋养层细胞的增殖作用加大;在一定的浓度范围内,以浓度依赖性和时间依赖性的方式促进JAR细胞的增殖,提示TGF-β1在良性滋养细胞疾病的恶变中可能有促进作用。结论:TGF-β1具双重作用,既抑制人正常早孕滋养层细胞的增殖,又在一定浓度范围内以浓度依赖性和时间依赖性的方式促进恶性滋养细胞JAR细胞系的增殖。     

三羟异黄酮对人乳腺癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的 观察三羟异黄酮对体外培养的人乳腺癌细胞MDA—MB—435S细胞存活率、细胞周期和凋亡的影响。方法 用噻唑蓝(MTT)法观察三羟异黄酮对MDA—MB—435S细胞生长的影响；流式细胞仪观察三羟异黄酮处理人乳腺癌细胞后细胞周期改变的剂量效应和时间效应；吖啶橙／溴乙锭染色法在荧光显微镜下观察三羟异黄酮对MDA—MB—435S细胞的凋亡作用。结果 随剂量增大和作用时间延长，三羟异黄酮对细胞增殖的抑制作用逐渐增强。同时可以阻滞细胞周期于G2—M期，而且随剂量的增大，作用时间的延长，阻滞作用也增强。经吖啶橙染色法于荧光显微镜下可见，随三羟异黄酮剂量增大，细胞凋亡也逐渐明显。结论 三羟异黄酮可抑制人乳腺癌细胞的增殖，其作用机制可能包括诱导细胞凋亡和G2—M期阻滞。     

环境雌激素致乳腺癌细胞DNA损伤作用

目的观察环境雌激素辛基酚（0P）和三羟异黄酮（GEN）对乳腺癌细胞株（MDA-MB-231）增殖和DNA损伤的影响。方法以2，8和32μmol／LOP或GEN与乳腺癌细胞共培养24，48或72h，用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）试验和单细胞凝胶电泳观察环境雌激素影响细胞增殖和DNA损伤程度。结果OP能明显抑制细胞增殖，DNA损伤明显增加，并呈剂量-效应和时间-效应关系。2，8μmol／LGEN促进细胞的增殖，DNA损伤无明显改变，32μmol／L却明显抑制细胞的增殖，彗星拖尾长度明显增长，但增长效应不及OP。结论OP和高浓度GEN通过损伤MDA-MB-231细胞DNA导致细胞增殖受到抑制，但GEN损伤效应不及OP。     

镉对MCF-7细胞生长和雌激素受体表达影响

目的 观察镉对MCF-7人乳腺癌细胞生长和雌激素受体表达的影响.方法 四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法筛选镉促进MCF-7细胞增殖的最佳作用时间和剂量,用流式细胞术观察细胞死亡情况,划痕实验评价细胞迁移能力,western-blot检测雌激素受体α、雌激素受体β蛋白表达,同时加入雌激素受体阻断剂氟维司群观察细胞增殖和2种雌激素受体表达的变化情况.结果 1μmol/L镉处理24 h和1nmol/L镉处理72 h对MCF-7细胞的促增殖效应最明显,增殖率(PR)分别为133％、138％;l nmol/L镉处理72 h能明显抑制MCF-7细胞死亡,死亡细胞比例为28.5％,低于对照组的44.5％(t=4.557,P ＜0.05);增强细胞迁移能力,划痕伤口愈合率为25.7％,与对照组比较差异有统计学意义(t =5.696,P＜0.05);增加雌激素受体α蛋白的表达;雌激素受体阻断剂能够抑制镉对MCF-7细胞的促增殖作用和拮抗镉对雌激素受体α蛋白表达增加的效应.结论 长时间低剂量处理镉对MCF-7乳腺癌细胞生长有促进作用并可能与激活雌激素受体α表达有关.     

胃癌TGF-β1蛋白表达及与癌细胞增殖活性的关系研究

目的 研究胃癌组织转化生长因子β1(TGF-β1)表达和意义及与癌细胞增殖活性的关系。方法 运用免疫组化S-P法检测50例胃癌、10例正常胃黏膜TGF-β1与Ki-67抗原的表达。结果 胃癌TGF-β1表达率与Ki67-LI值明显高于正常胃黏膜。TGF-β1表达与分化程度、淋巴结转移和浸润深度显著相关。淋巴结转移组Ki67-LI值明显高于无淋巴结转移组，不同浸润深度的Ki67-LI值差异有显著性。胃癌TGFβ1阳性表达组Ki67-LI值明显高于TGF-β1阴性表达组。结论 TGF-β1过表达胃癌组织细胞具有较强的增殖活性，TGF-β1不能抑制癌细胞增殖。TGF-β1促进胃癌细胞浸润转移。TGF-β1和Ki-67可作为评估胃癌生物学行为的参考指标。     

染料木黄酮对MDA-MB-453乳腺癌细胞uPA表达及PTK活性的影响研究

目的: 观察染料木黄酮(亦称三羟异黄酮,genistein,Gen)对MDA-MB-453乳腺癌细胞尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator,uPA)表达及蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTK)活性的影响,探讨Gen抗HER-2/neu高表达乳腺癌血管生成的分子机制。方法: 5×10-5mol/L Gen处理MDA-MB-453细胞24、48、72 h后,应用Western blot、免疫沉淀、RT-PCR及激酶活性分析法检测Gen对MDA-MB-453乳腺癌细胞uPA表达、HER-2/neu受体蛋白磷酸化水平及PTK活性变化。结果: Gen处理MDA-MB-453细胞后,uPA的mRNA和蛋白表达量下调,HER-2/neu受体蛋白磷酸化水平降低,PTK活性下降,且这种作用具有时效性。结论: Gen能有效抑制乳腺癌细胞HER-2/neu受体的PTK活性和蛋白磷酸化水平,在转录和翻译水平下调uPA的表达,从而抑制HER-2/neu高表达乳腺癌血管生成。     

辛基酚和三羟异黄酮对大鼠乳腺癌ER、AIB1和PCNA表达的影响

目的:探讨辛基酚和三羟异黄酮对大鼠乳腺癌激活因子(AIB1)、雌激素受体(ER)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法:动物随机分为正常对照组(Con)、二甲苯恩(DMBA)诱导乳腺癌模型组(Mod)、三羟异黄酮组(GEN)、辛基酚组(OP)和联合作用组(GP),采用RT-PCR和免疫组化检测正常乳腺组织和乳腺癌组织中AIB1、ER和PCNA的mRNA或蛋白表达水平。结果:与Con组比较,Mod组乳腺癌组织中AIB1和ER mRNA表达水平上调,PCNA、ER表达量增加。与Mod组比较,GEN组乳腺癌组织中AIB1、ER mRNA及ER表达量明显降低,而OP组AIB1、ER mRNA和ER、PCNA表达水平则明显增加。与OP组比较,GP组能部分降低乳腺癌组织中AIB1、ER mRNA和ER、PCNA的表达量。结论:OP上调乳腺癌组织中AIB1、ER、PCNA的表达使二甲苯蒽诱导乳腺癌的发生率增加,而GEN及其与OP联合作用可下调AIB1、ER和PCNA的表达量,降低诱导乳腺癌的发生。     

转化生长因子β1小干扰RNA对肝星状细胞生物学特性的影响

目的 观察转化生长因子β1小干扰RNA（TGFβ1 siRNA）对肝星状细胞增殖、活化、胶原合成的影响.方法 利用脂质体将TGFβ1 siRNA表达质粒转入肝星状细胞中,培养72 h后,收集肝星状细胞和上清液,采用Western blotting和RT-PCR法分别检测细胞TGFβ1和a-SMA蛋白表达、Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达;MTT法检测细胞增殖活性和放射免疫法检测培养上清液中IV型胶原和透明质酸含量.结果 与无关对照siRNA组相比,TGFβ1和a-SMA蛋白表达分别下调（79±5）%和（55±4）%（均P〈0.01）;细胞增殖活性降低（25±4）%（P〈0.01）;Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达分别下调（63±6）%和（57±4）%（均P〈0.01）;培养上清中IV型前胶原和透明质酸含量分别降低（53±8）%和（46±8）%（均P〈0.01）.结论 TGFβ1 siRNA能显著下调TGFβ1的表达,抑制肝星状细胞活化、增殖及细胞外基质的合成和分泌.     

酮缬氨酸钙与酮异亮氨酸钙对人肾系膜细胞增殖影响及机制研究

目的体外观察酮缬氨酸钙和酮异亮氨酸钙对人肾系膜细胞（HMC）的影响。方法10mM酮缬氨酸钙和酮异亮氨酸钙对HMC体外干预，检测干预后转化生长因子-β1（TGF-B1）和血管紧张素Ⅱ-1型受体（AT1R）的变化，并采用MTT和流式细胞仪检测细胞增殖、凋亡和细胞周期。结果10mM酮缬氨酸钙和酮异亮氨酸钙干预HMC，实验组与对照组相比，TGF-β1含量增加；细胞AT1R表达亦有增加；同时细胞出现增殖抑制，细胞流式分析发现，实验组干预后出现了细胞周期G1期阻滞并观测到了细胞凋亡。结论10mM的酮缬氨酸钙和酮异亮氨酸钙可以增加AT1R在HMC的表达，诱导TGF-β1的表达增加；同时诱导细胞周期G1阻滞并伴随细胞凋亡。     

TGF-β1对绒癌JEG-3细胞增殖及其Smad3,7 mRNA表达的影响

目的:观察转化生长因子β1(TGF-β1)作用下绒癌JEG-3细胞的增殖及其Smad3,7 mRNA的表达变化,进一步探讨TGF-β/Smads信号通路在绒癌发生发展中的作用机制。方法:分别取不同浓度和不同作用时间的TGF-β1处理绒癌JEG-3细胞,采用四甲基氮唑法(MTT)检测细胞的增殖活力,RT-PCR技术检测Smad3,7 mRNA的表达差异。结果:TGF-β1促进了绒癌JEG-3细胞的增殖;随着TGF-β1应用浓度的增高,Smad3 mRNA的表达水平逐渐升高,用一定浓度的TGF-β1作用12h后Smad3 mRNA的表达量随着时间的延长开始逐渐增加;同样条件下Smad7 mRNA的表达差异无统计学意义。结论:TGF-β1可促进绒癌JEG-3细胞的增殖;Smad3mRNA对外源性的TGF-β1有良好的反应性,Smad7 mRNA则表现为无应答。     

大豆异黄酮抑制人乳腺癌细胞生长及作用机制研究

采用体外细胞培养的方法 ,探讨大豆异黄酮对体外培养的人乳腺癌MCF - 7细胞生长的作用及作用机制。结果表明 ,大豆异黄酮抑制MCF - 7细胞生长 ,诱导MCF - 7细胞凋亡。蛋白水平检测表明大豆异黄酮可使MCF - 7细胞iNOS表达升高。结果提示大豆异黄酮抑制MCF - 7细胞生长 ,诱导细胞凋亡 ,并主要是通过调节iNOS基因表达实现的