干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β在体外对人气管平滑肌细胞凋亡的作用

目的:研究是否干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)在体外能够诱导人气管平滑肌细胞(ASMCs)凋亡。方法:分离人ASMCs并在含有10%胎牛血清的DMEM培养基中培养。用4-6代的细胞作实验。IFN-γ、TNF-α和IL-1β,每种细胞因子单独或一起用于处理人ASMCs。用MTT法在0、24、48、72h检测IFN-γ、TNFα和IL-1β对细胞生长的作用。用光镜和电镜观察形态学的改变。用琼脂糖电泳分析DNA片断。用SP-免疫组化染色方法检测p53、bcl-2、bax基因表达的改变。通过碎片DNA原位末端标记技术(TUNEL)检测凋亡细胞的百分率。结果①IFN-γ以时间依赖的方式单独或/和TNF-α和IL-1β一起减低存活的细胞数;②光镜和电镜检查显示人ASMCs细胞皱缩、膜出泡,核缩小,染色质浓聚和核破碎;③琼脂糖电泳显示在用上述细胞因子联合处理的人ASMCs,有代表寡核苷酸片断整倍数的特征性的DNA梯状条带(大约180-200bp);④在细胞因子联合处理组p53和bax基因表达显著高于对照组,但bcl-2基因表达低于对照组(P＜0.01);⑤用IFN-γ(4×10⁵U/L)、TNF-α(4×10⁵U/L)和/或IL-1β(10×10⁴U/L)同时刺激诱导人ASMCs凋亡。在用细胞因子联合处理组的人ASMCs的凋亡指数显著高于对照组(P＜0.01)。结论:用IFN-γ、TNF-α和/或IL-1β联合处理诱导人ASMCs凋亡。这些免疫性细胞因子在哮喘和慢性阻塞性肺疾病的气道重建中也许起了重要的作用。     

β-淀粉样蛋白对D-半乳糖致衰大鼠海马线粒体膜流动性的影响

目的:研究β-淀粉样蛋白(β-AP)对衰老大鼠海马线粒体膜流动性的影响。方法:用D-半乳糖(D-gal)建立衰老动物模型,并且海马内微注射β-AP;检测各组大鼠学习记忆行为;以DPH为荧光探针,测定大鼠海马线粒体膜粘滞系数,同时测定海马Na⁺-K⁺ATP酶活性的变化。结果:D+A组大鼠Na⁺-K⁺ATP酶活性明显低于D组和A组(P＜0.05),与N组比较有显著差异(P＜0.01);海马线粒体膜流动性显著低于N组(P＜0.01),与D组和A组比较也有显著差异(P＜0.05)。结论:β-AP与D-gal联合可导致脑海马自由基损伤效应加重,海马线粒体膜流动性显著降低,Na⁺-K⁺ATP酶活性明显降低。     

利用噬菌体肽库序贯筛选组织因子靶向肽

目的: 建立一种高效的筛选跨膜受体靶向肽的噬菌体展示新方法,据此筛选出组织因子( TF) 高亲和力靶向肽。方法: 分别以纯化TF蛋白和具有TF高特异性表达的结直肠癌细胞株HT-29为靶标,用噬菌体七肽库进行序贯筛选(受体-细胞序贯筛选法,STRCA法),ELISA初步鉴定噬菌体克隆对HT-29亲和力。对噬菌体克隆进行测序,利用竞争抑制 ELISA比较各合成肽的TF结合力。重复实验检测筛选结果的可靠性。结果: 经过5轮筛选,与TF结合的噬菌体得到了富集,回收率由(2.25×10^-4)%增加到(1.32×10^-2)%;ELISA结果显示30个克隆中,阳性率为76.7%。噬菌体测序结果中,4种合成肽(分别命名为A、B、C、D肽)中A肽序列重复率为23.3%(7/30),B肽为23.3%(7/30),C肽为26.7%(8/30),D肽为10.0%(3/30);E肽为A、B肽合成的复合靶向肽。经竞争抑制 ELISA比较5种肽的TF亲和力,其IC₅₀分别为3.25 nmol/L、6.72 mol/L、3.24×10³ mol/L、2.08×10² mol/L和45.77 mol/L。重复实验所获得的阳性噬菌体克隆序列与第1次实验相比,重复率为33.3%。结论: STRCA法是一种理想的筛选跨膜受体靶向肽方法,采用该法获得的TF靶向肽对TF具有高度的亲和力。     

纯化和标记抗人轻链β2m单克隆抗体的方法

背景:通过杂交瘤细胞株接种小鼠腹腔可获得含大量抗体的腹水,但以往纯化腹水中单克隆抗的方法较复杂,不易操作。 目的：制备、纯化和标记抗人类白细胞抗原Ⅰ类分子轻链的单克隆抗体,以检测肿瘤细胞表面的人类白细胞抗原Ⅰ类分子的表达。 方法：将杂交瘤细胞接种至小鼠腹腔,获得含抗人轻链β2m抗体的腹水,用改良的辛酸-硫酸铵方法纯化腹水,将纯化后的单克隆抗体标记异硫氰酸荧光素(FITC),标记后的抗体用于检测外周血单个核细胞、表达空载人类白细胞抗原A2分子的T2细胞和白血病K562细胞表面的人类白细胞抗原Ⅰ类分子,并用流式细胞仪和荧光显微镜观察人类白细胞抗原Ⅰ类分子的表达。 结果与结论：纯化后的抗人轻链β2m-FITC单克隆抗体纯度为96%。流式细胞检测结果表明,人类白细胞抗原Ⅰ类分子在外周血单个核细胞表面高表达,在表达空载人类白细胞抗原A2分子的T2细胞表面低表达,而在白血病K562细胞表面不表达。结果证实,用改良的辛酸-硫酸铵方法纯化腹水以此制备的抗人轻链β2m-FITC能有效区别不同细胞表达人类白细胞抗原Ⅰ类分子的强弱,其纯化方法简便易行。     

内毒素、IL-1β对家兔下丘脑神经细胞内游离钙浓度的影响

目的:研究内毒素(ET)性发热家兔下丘脑神经细胞内游离钙([Ca²⁺]i)浓度变化及ET、白介素-1β(IL-1β)对正常家兔离体下丘脑神经细胞 [Ca²⁺]i浓度的影响。方法:采用荧光分光光度法,应用钙离子探针(Fura-2/AM),检测 i浓度。结果:(1)微量ET(2 ng/mL)使正常家兔下丘脑神经细胞内 [Ca²⁺]i浓度显著升高;ET性发热家兔下丘脑神经细胞 [Ca²⁺]i水平也显著高于对照组;(2) 3种剂量IL-1β(100、500、1 000 ng/mL)均未能明显影响下丘脑神经细胞 [Ca²⁺]i 浓度。结论:(1)低Ca²⁺参与ET性发热体温调节的作用部位,可能不是在下丘脑神经细胞内;(2)ET引起下丘脑神经细胞 [Ca²⁺]i 浓度变化,不是通过IL-1β直接引起。     

一组抗重组人肝再生增强因子单克隆

目的:制备抗重组人肝再生增强因子(rhALR)单克隆抗体(McAb)。方法:以纯化的rhALR为抗原免疫小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,以ELISA,Westernblot法分别筛选测其滴度及免疫特异性。结果:获得2株稳定分泌抗rhALR单克隆抗体杂交瘤株。其效价,腹水10^-3-10^-5,培养上清10^-2-10^-3,两株McAb针对不同抗原决定簇。结论:制备的抗体具有高特异性。对rhALR在体内组织器官的分布,示踪rhALR在体内的代谢及探索rhALR在翻译水平上对细胞发育的调控分布等研究具有重要的应用价值。     

17β雌二醇增强小鼠肌原细胞的胰岛素效应

目的:探讨17β雌二醇对小鼠肌原细胞的胰岛素效应的影响和对高胰岛素诱导的胰岛素抵抗的防止作用。方法:将小鼠肌原细胞分为6组, 3组不加高胰岛素(5×10^-7 mol/L)预处理24 h后, 以其中1组为对照, 另2组分别用1 nmol/L、10 nmol/L的17β雌二醇再处理24 h。另外3组加高胰岛素(5×10^-7 mol/L)预处理24 h之后, 弃培养液, 用冷的PBS洗涤细胞3次, 即为胰岛素抵抗细胞, 以其中1组为胰岛素抵抗细胞组, 另2组分别用1 nmol/L、10 nmol/L的17β雌二醇再处理24 h。对上述6组细胞进行胰岛素刺激的葡萄糖摄取能力、糖原合酶(GS)、磷酸果糖激酶(PFK)和丙酮酸激酶(PK)的活性测定。结果:17β雌二醇可提高小鼠肌原细胞的葡萄糖转运能力;提高总糖原合酶活性和糖原合酶的活性;还可增强细胞的磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶活性。 结论:17β雌二醇可加强小鼠肌原细胞的胰岛素效应和防止高胰岛素诱导的胰岛素抵抗。     

人白细胞介素1β通过caspase途径诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡

目的:对interleukin-1β(IL-1β)诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡的信号转导途径进行研究。方法:使用倒置显微镜观察细胞形态学变化。通过MTT法测定IL-1β对A375-S2细胞的抑制作用以及细胞内半胱氨酸蛋白酶(caspases)与这种作用的关系。利用乳酸脱氢酶(LDH)测定法对IL-1β作用后细胞的损伤情况进行分析。琼脂糖凝胶电泳法检测IL-1β对细胞DNA降解的影响。结果: IL-1β对A375-S2细胞的抑制作用呈剂量和时间依赖性,在10^-9mol/L作用72 h时达到90%以上。caspase-1、-3、-8、-9和caspase-10的抑制剂能够部分抑制IL-1β早期诱导的细胞凋亡。 LDH活力测定显示,在IL-1β诱导的细胞死亡过程中,凋亡占主导地位,并呈现剂量和时间依赖性 。细胞经过10^-11mol/L IL-1β处理72 h后,出现凋亡典型的DNA梯状条带,与上述结果一致。 结论: IL-1β能够诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡,这种作用可能依赖于激活一类介导凋亡的caspase家族蛋白酶。     

川芎嗪对肠粘膜屏障功能的保护作用

目的:探讨川芎嗪对失血性休克再灌注后肠粘膜屏障功能的保护作用。方法:30只日本大耳白兔随机分为3组:假手术组(A组),单纯休克组(B组),川芎嗪治疗组(C组)。以硫代巴比妥酸比色法、放射免疫法及硝酸还原酶法测定末端回肠粘膜丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子(TNFα)、白细胞介素-1β(IL-1β)及一氧化氮代谢产物(NO^-2/NO^-3)含量,并取体循环血做细菌培养,取肠粘膜行光镜和电镜观察。结果:B组肠粘膜MDA、TNFα、IL-1β含量明显高于A组,NO^-2/NO^-3浓度显著低于A组,而C组变化无显著;B组细菌移位率明显高于A组,而C组与A组比较无显著差异;B组肠粘膜损伤明显重于A组,C组明显轻于B组,而C组与A组差异无显著。结论:川芎嗪能保护失血性休克再灌注后肠粘膜屏障功能,这可能与其清除体内氧自由基、提高一氧化氮水平及阻抑炎性介质作用有关。     

低氧后心肌钙瞬变变化与β-肾上腺素受体脱敏的关系

目的:慢性低氧时,心脏对β-肾上腺素受体激动的反应出现脱敏现象,细胞内钙[Ca²⁺]_i瞬变的幅度降低、时程延长,本研究观察上述变化在低氧时发生和发展的时间过程和对应关系。方法:在年龄对等的正常及慢性低氧1d、3d、1周、2周、3周、4周和8周的大鼠,分别分离正常及慢性低氧条件下的心室肌细胞,以Fura-2为[Ca²⁺]_i的指示剂,用光谱荧光法测定心肌细胞的[Ca²⁺]_i瞬变及其对心肌β-受体激动后反应的变化。结果:在低氧1d、3d、1周等时间内,电刺激引起的[Ca²⁺]_i瞬变、咖啡因引起的[Ca²⁺]_i瞬变及电刺激引起的[Ca²⁺]_i瞬变对β-受体激动剂异丙肾上腺素的增加反应无明显变化;在低氧2周以上时,电刺激引起的[Ca²⁺]_i瞬变的幅度开始降低,而时程开始延长,其对异丙肾上腺素的反应也开始降低。咖啡因引起的[Ca²⁺]_i瞬变幅度也开始降低;在低氧3周和4周时,上述变化程度逐渐加重;在低氧8周时各参数的变化有所恢复,但与4周时的变化程度无明显差异。结论:低氧2-4周时,心脏的β-肾上腺素受体发生脱敏现象,脱敏的机制与3种调节[Ca²⁺]_i瞬变的蛋白质:L-型钙通道、ryanodine受体操纵的钙通道和钙泵等活性的降低有关,后者也可能是低氧时心脏功能降低的重要机制。低氧4-8周时,心脏对低氧产生了适应和代偿。     

NF-κB/IκB信号通路在IL-1β诱导的肾系膜细胞环氧化酶-2表达中的作用

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)/IκB信号通路在肾小球系膜细胞环氧化酶-2(COX-2)表达中的作用。方法:放射免疫测定法检测系膜细胞培养上清中PGE₂水平;RT-PCR和Westernblot检测COX-2表达;凝胶电泳迁移率(EMSA)和Westernblot检测肾小球系膜细胞中NF-κB活化、p65亚基核转位以及IκBα和IκBβ的降解。结果:IL-1β显著上调系膜细胞PGE₂释放和COX-2表达,PDTC显著抑制IL-1β诱导的COX-2表达及PGE₂释放;IL-1β诱导系膜细胞NF-κB活化,p65核转位及胞浆内IκBα和IκBβ的降解。结论:IL-1β通过NF-κB/IκB信号转导通路诱导肾小球系膜细胞中COX-2表达。     

转染肿瘤坏死因子α及其突变体基因对H22肿瘤细胞体内致瘤能力的影响

目的:比较转染野生型TNF-(Wt-TNF)及多种突变体,包括分泌型TNF-α突变体(S-TNF^m)、跨膜型TNF-α突变体(TM-TNF^m)基因后,H2 2细胞体内致瘤能力,并探讨其可能的机制。方法:将表达TNF-α及其突变体的H22细胞分别与未转染基因的H22细胞以不同比例混合,2.5× 10⁵(10 0 μL)接种于小鼠体内,观察肿瘤的生长情况;并用免疫组化检测肿瘤局部淋巴细胞浸润和肿瘤细胞表达Fas和CD44V。结果:转染TNF-α及其突变体基因的肿瘤细胞的致瘤能力均明显减弱(P <0.0 1);除二型TNF对瘤细胞的胞毒效应外,TM-TNF^m 可诱导肿瘤细胞表达死亡受体Fas,而S-TNF^m 则可明显促进肿瘤灶局部淋巴细胞的浸润(P <0.01)。此外,注射H2 2/S-TNF^m细胞,小鼠出现一过性体重下降。结论:转染TM-TNF^m 和S-TNF^m 基因肿瘤细胞的致瘤能力明显降低,其原因除与二者胞毒效应有关外,前者可能通过Fas途径导致瘤细胞凋亡,后者则可能通过募集和激活淋巴细胞发挥抗瘤作用.     

17β-雌二醇对骨髓基质细胞骨形态发生蛋白受体ⅠA、B mRNA表达的影响

目的:研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中,17β-雌二醇(E₂)对其骨形态发生蛋白受体(BMPR)ⅠA,ⅠBmRNA表达的影响,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用。方法:用1,25(OH)₂D₃和地塞米松(DEX)诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化,应用半定量RT-PCR技术,观察不同浓度E₂对骨髓基质细胞分化过程中BMPR-ⅠA,ⅠBmRNA表达的影响,以α-磷酸奈酚为底物测定细胞碱性磷酸酶的活性,VanGieson染色法显示Ⅰ型胶原的含量。结果:E₂能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中BMPR-ⅠAmRNA的表达,且呈剂量依赖性,随E₂浓度增加,BMPR-ⅠAmRNA从(23.7±1.7)%降至(16.3±1.5)%(P<0.05)和(8.3±1.2)%(P<0.01);BMPR-ⅠBmRNA随E₂浓度增加而增加,从(1.3±0.6)%增至(5.7±2.0)%(P<0.05)和(15.3±3.0)%(P<0.01)。ALP活性随E₂浓度增加而降低,从(42.6±2.5)U·L^-1·g^-1protein降至(10.8±1.5)U·L^-1·g^-1protein和(3.6±1.7)U·L^-1·g^-1protein(P<0.01);细胞Ⅰ型胶原的含量随E₂浓度增加而减少。结论:E₂能明显抑制体外培养的骨髓基质细胞分化过程中BMPR-ⅠAmRNA的表达,降低成骨细胞生成。     

肝癌细胞冻融抗原负载树突状细胞瘤苗的制备与活化

目的: 探讨制备肝癌树突状细胞(DCs)瘤苗和体外诱导DCs活化的优化方法。方法: 取健康人新鲜血50mL, Ficoll密度梯度离心分离外周血单个核细胞(PBMC), 制备肝癌细胞冻融抗原, 采用不同因子组合培养PBMC, 诱导和激活DCs, A组: rhGM-CSF+IL-4; B组: rhGM-CSF+IL-4+冻融抗原负载;C组:rhGM-CSF+IL-4+TNF-α; D组: rhGM-CSF+IL-4+TNF-α+冻融抗原负载。结果: 各组均诱导出DCs, 并高表达CD11c和CD54, 冻融抗原可明显上调CD86、CD80、HLA-DR表达和IL-12 p40分泌(P<0.01), TNF-α促进CD86表达的作用更显著, 但对IL-12分泌无影响, 依次用TNF-α诱导和冻融抗原负载可进一步促进CD86表达和IL12 p40分泌(P<0.05)。CD54和HLA-DR双标记免疫细胞化学染色显示, 各组DCs大多为CD54⁺。表达HLA-DR的DCs均为CD54⁺HLA-DR⁺, 其中, A组CD54⁺HLA-DR⁺细胞数量最少, D组最多, 平均每个细胞HLA-DR的表达水平也与此对应。结论: 采用rhGM-CSF、IL-4诱导的未成熟DCs, 依次使用TNF-α刺激与肝癌细胞冻融抗原修饰可有效促进DCs的活化与成熟。     

胰高糖素样肽-1(7-36)NH2对胰岛β细胞胰岛素分泌和膜电位的作用

目的:探讨GLP-1(7-36)NH₂促胰岛素分泌的机制。方法:以DiBAC₄(3)为探针,用粘附式细胞仪研究GLP-1(7-36)NH₂对培养的新生大鼠胰岛β细胞膜电位的作用,并用放免法检测GLP-1(7-36)NH₂在不同葡萄糖浓度下引起的胰岛素分泌量的变化。结果:在2.8mmol/L葡萄糖时,GLP-1(7-36)NH₂使β细胞胰岛素分泌无明显增加,β细胞膜电位无明显变化;在5.6、16.7mmol/L葡萄糖时,GLP-1(7-36)NH₂使胰岛素分泌明显增加,它能增强葡萄糖引起的β细胞膜去极化反应。在16.7mmol/L葡萄糖时,加入EGTA或硝苯吡啶后,GLP-1(7-36)NH₂不能引起胰岛素分泌,β细胞膜也无去极化反应。结论:GLP-1(7-36)NH₂具有葡萄糖浓度依赖的促胰岛素释放作用,它能增强葡萄糖引起的β细胞去极化反应。     

远志皂苷减轻Aβ1-40诱导的AD大鼠脑神经元tau蛋白Ser396位点的过度磷酸化

目的:探讨远志皂苷对β-淀粉样肽_1-40(Aβ_1-40)诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠脑神经元tau蛋白过度磷酸化的影响。方法:大鼠右侧海马CA1区注射Aβ_1-40建立AD模型,并用远志皂苷(18.5 mg/kg、37.0 mg/kg和74.0 mg/kg)对大鼠进行灌胃治疗;免疫组织化学染色法观察大脑神经元中总tau蛋白、p-tau(Ser³⁹⁶)、蛋白激酶A(PKA)和蛋白磷酸酶2A(PP2A)蛋白的表达;蛋白免疫印迹技术检测大脑神经元中总tau蛋白含量、tau蛋白Ser³⁹⁶位点磷酸化以及PKA、PP2A蛋白的表达水平。结果:与对照组相比,Aβ_1-40组大脑神经元中总tau蛋白含量、tau蛋白Ser³⁹⁶位点磷酸化水平和PKA蛋白的表达水平显著升高,而PP2A蛋白的表达水平明显降低。与Aβ_1-40组相比,远志皂苷各治疗组大鼠大脑神经元中总tau蛋白含量、tau蛋白Ser³⁹⁶位点磷酸化水平和PKA蛋白表达水平下降明显,而PP2A蛋白表达水平显著升高。结论:远志皂苷可能是通过下调PKA蛋白表达量,上调PP2A蛋白表达量,减轻AD大鼠脑神经元中tau蛋白Ser³⁹⁶位点的过度磷酸化,使神经细胞免遭Aβ_1-40的毒害。     

牛磺酸减轻β-甘油磷酸诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化氧化应激在反流物所致食管粘膜损伤中的作用

目的：观察牛磺酸对钙化的形成及逆转作用的影响，探讨牛磺酸在血管钙化发生中的作用。方法：利用β-甘油磷酸制备钙化血管平滑肌细胞（VSMCs），测定细胞钙含量、碱性磷酸酶活性、[⁴⁵Ca]沉积及[³H]-胸腺嘧啶。结果：与对照组相比，钙化细胞的钙含量、ALP活性和[⁴⁵Ca]沉积均明显升高（P<0.05），而牛磺酸与β-甘油磷酸同时孵育呈剂量依赖性地抑制钙化发生。在牛磺酸逆转实验中，钙化细胞的钙含量、ALP活性和[⁴⁵Ca]沉积均较换液前明显降低（P<0.01）；且牛磺酸呈剂量依赖性地逆转已钙化细胞。与对照组相比，钙化细胞的细胞数量和[³H]-TdR掺入量增加（P<0.01），牛磺酸早期干预组显著抑制钙化细胞的增殖，但牛磺酸对已钙化的细胞,增殖抑制效应不明显。结论：牛磺酸可抑制细胞钙化形成且能逆转已形成钙化。     

肾上腺髓质素拮抗转化生长因子β1的促纤维化作用及其机制

目的:探讨肾上腺髓质素(AM)在人肾小管上皮细胞系(HK-2)对转化生长因子β₁(TGFβ₁)促纤维化作用的影响及机制。方法:细胞总胶原的合成和分泌以[³H]-脯氨酸掺入量及培养液内[³H]-羟脯氨酸放射活性来判断;ELISA法检测培养液中纤维连接蛋白(FN)含量;FN、IV型胶原和组织型金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)mRNA的表达采用RT-PCR法;信号蛋白Smad2及Smad6蛋白表达采用Westernblot法。结果:(1)AM在蛋白和mRNA水平均明显抑制TGFβ₁刺激的胶原和纤维连结蛋白的表达;(2)AM抑制TGFβ₁刺激的TIMP-1mRNA的上调;(3)AM(10^-8mol/L)本身对Smad2和Smad6的表达无明显影响,且对TGFβ₁刺激的Smad2的表达也无明显影响;但是可以明显上调被TGFβ₁抑制的Smad6的表达。结论:在HK-2细胞,AM通过上调抑制性Smad6的表达拮抗TGFβ₁的促纤维化作用。     

戊型肝炎病毒Ⅰ、Ⅱ与Ⅲ、Ⅳ基因型B细胞抗原表位的异同

目的：制备戊型肝炎病毒(HEV)缅甸株和墨西哥株ORF2重组蛋白(p166Bur和p166Mex)的单克隆抗体(McAbs)，用于分析HEV不同基因型B细胞抗原表位的特点。方法：将免疫BALB/C小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，获得分泌抗-p166Bur和抗-p166Mex McAbs的杂交瘤细胞株，然后采用ELISA和免疫印迹法测定McAbs与不同基因型HEV ORF2编码蛋白p166的免疫反应性。结果：获得4株杂交瘤细胞株，即分泌抗-p166Bur McAbs的2G2、2B1以及分泌抗-p166Mex McAbs的D8G10和E5E12，其中2B1分泌的McAb仅能与第Ⅰ、Ⅱ基因型编码的重组蛋白结合，而其余3株分泌的McAbs既能与Ⅰ、Ⅱ基因型HEV的p166重组蛋白发生反应，也能与Ⅲ、Ⅳ基因型的p166蛋白反应。结论：HEV第Ⅰ、Ⅱ基因型与Ⅲ、Ⅳ基因型ORF2编码蛋白既有共同又有不同的B细胞抗原表位。     

IgE高亲和力受体β链基因与中国湖北成人变应性哮喘的关系

目的:探讨IgE高亲和力受体β链基因(FcεRⅠβ)启动子-109位和编码区Glu237Gly基因多态性与湖北成人变应性哮喘及血浆总IgE的关系。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术检测FcεRⅠβ基因启动子区-109位和编码区Glu237Gly两位点多态性,采用病例-对照法共研究106例成人变应性哮喘患者和106例相匹配的对照者。结果:①成人变应性哮喘患者FcεRⅠβ基因启动子区-109位T/T、T/C和C/C基因型频率是0.415、0.491和0.094;与对照相比差异无显著(χ²=0.5575,P＞0.05),但成人变应性哮喘组T/T基因型患者血浆总IgE对数值为2.6490±0.9241与T/C基因型的2.2960±1.1040和C/C基因型的2.3130±0.8052相比差异显著。②FcεRⅠβGlu237Gly位点Glu/Glu、Glu/Gly和Gly/Gly基因型频率为0.566、0.377和0.057,与正常对照相比差异显著(χ²=7.31,P＜0.05),Gly/Gly基因型血浆总IgE对数值为2.7220±0.9374,与Glu/Glu和Glu/Gly相比差异显著。结论:IgE高亲和力受体β链启动区-109位T/T基因型与血浆总IgE高度相关,编码区237位Gly/Gly基因型与湖北汉族成人变应性哮喘及血浆高IgE相关。