SARS冠状病毒多聚酶基因临床检测方法的建立

目的 分析SARS冠状病毒广东株多聚酶基因片段的异质性。建立RT-PCR检测SARS冠状病毒的方法，为SARS的快速诊断提供依据。方法 合成针对SARS冠状病毒多聚酶基因区段的特异性引物，从广东省SARS病人及疑似病人标本中提取RNA，经反转录和巢氏PCR扩增出相应大小的DNA片段。对这些片段克隆后进行DNA序列分析，并将序列与SARS冠状病毒和其他已知冠状病毒进行同源性分析。结果 从多例SARS病人痰、咽拭子或血液标本中得到RT-PCR阳性片段，随机选取其中8例经克隆和DNA序列分析证实均为SARS冠状病毒序列(同源性100％)，而所有阴性参照标本RT-PCR均为阴性。克隆片段BNll09与已知冠状病毒在核苷酸和氨基酸水平进行分析显示，该片段与牛冠病毒(bovinecoronavirus，BCV)和鼠肝炎病毒(murine hepatitis virus，MHV)同源性最高，在氨基酸水平上同源性高达75％。结论 SARS冠状病毒多聚酶基因片段BNll09的保守性极强，适合建立RT-PCR法检测SARS冠状病毒。     

SARS的病原学研究

2002年底开始，一种新的传染性呼吸道疾病在我国广东流行，并蔓延到世界上32个国家。面对此种人类从未认识到的疾病，全球临床医务工作、流行病学家、科学家和政府部门通力协作，在不到2个月的时间内基本明确严重急性呼吸综合征(SARS，即传染性非典型肺炎)的病原体为一种新的变异冠状病毒，这一发现为有效遏制SARS的疫情，提高临床诊断准确率和治疗成功率奠定了基础。     

SARS冠状病毒多聚酶基因临床检测方法的建立

目的分析SARS冠状病毒广东株多聚酶基因片段的异质性,建立RT-PCR检测SARS冠状病毒的方法,为SARS的快速诊断提供依据。方法合成针对SARS冠状病毒多聚酶基因区段的特异性引物,从广东省SARS病人及疑似病人标本中提取RNA,经反转录和巢氏PCR扩增出相应大小的DNA片段。对这些片段克隆后进行DNA序列分析,并将序列与SARS冠状病毒和其他已知冠状病毒进行同源性分析。结果从多例SARS病人痰、咽拭子或血液标本中得到RT-PCR阳性片段,随机选取其中8例经克隆和DNA序列分析证实均为SARS冠状病毒序列(同源性100%),而所有阴性参照标本RT-PCR均为阴性。克隆片段BNI109与已知冠状病毒在核苷酸和氨基酸水平进行分析显示,该片段与牛冠病毒(bovinecoronavirus,BCV)和鼠肝炎病毒(murinehepatitisvirus,MHV)同源性最高,在氨基酸水平上同源性高达75%。结论SARS冠状病毒多聚酶基因片段BNI109的保守性极强,适合建立RT-PCR法检测SARS冠状病毒。     

SARS患者血清中SARS相关冠状病毒抗体产生规律的初步分析

目的 :了解严重急性呼吸综合征 (SARS)患者血清中 SARS病毒特异性 Ig M、Ig G抗体产生的规律。方法 :随机选取32例 SARS患者 5 5份血清标本 ,应用 EL ISA分别检测抗 SARS病毒 Ig M、Ig G抗体。结果 :Ig M抗体阳性率为 5 6 .4 % ,平均出现时间为 (5 .88± 2 .6 2 ) d,其中 2例患者在发病后第 2天即出现阳性 ,平均消失时间为 (14 .2 5± 2 .97) d;Ig G抗体阳性率为4 1.9% ,平均出现时间为 (11.4 0± 4 .2 0 ) d,其中 2例患者在发病后第 3天即为阳性 ;Ig M和 Ig G抗体的总体阳性漏检率为6 .2 5 %。结论 :SARS患者于发病后 3～ 7d血清中出现特异的 Ig M抗体 ,可用于实验室诊断 ;同时进行 Ig M和 Ig G抗体的检测可用于发病 8～ 14 d左右的实验室排查检测     

RT-PCR对SARS患者粪便SARS冠状病毒RNA的连续测定及其临床意义

目的采用RT-PCR方法,观察SARS冠状病毒(SARS-associatedcoronavirus,SARS-CoV)在SARS患者粪便中的排出状况。方法以2003年5月16日至23日在本院住院的46例临床确诊SARS患者为研究对象,连续留取粪便标本共103份,提取RNA后采用14对SARS-CoV特异性引物,对每份标本同时进行7次套式RT-PCR扩增,只要有1次RT-PCR结果阳性即判定该标本为阳性。结果在46例患者中,有17例(37.0%)患者的粪便SARS-CoV套式RT-PCR扩增结果为阴性,29例(63.0%)为阳性。粪便SARS-CoVRT-PCR结果阳性时SARS患者的病程为(31.76±10.78)d(12～64d),其中最长1例为64d,系2次连续留取的粪便标本均为阳性、每次标本用2个不同引物RT-PCR扩增结果均为阳性。结论SARS-CoV在患者粪便中排出的时间可长达发病后64d,平均32d,对SARS患者恢复期的消毒隔离应该予以足够的重视。     

SARS冠状病毒医院感染的防治

目的 探讨严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒(简称SARS-Cov)医院内感染的流行特点和预防措施，为临床诊治提供依据。方法 根据诊断SARS的临床实践和体会，参考相关资料，综合评价本病的早期诊断和治疗。结果 SARS-Cov医院内感染医务人员主要由于接触门诊首诊或抢救严重SARS患，感染主要由于与患间近距离接触，预防主要是有效切断传播途径，保护高危人群。结论 SARS由冠状病毒引起，诊断主要依据流行痫学和临床综合资料，积极有效的内科综合治疗可提高SARS的治愈率，降低死亡率。     

SARS病人SARS冠状病毒核壳抗原抗体的变化规律

OBJECTIVE: To assess serum antibody responses of patients with severe acute respiratory syndrome (SARS) to nucleocapsid (N) antigen of SARS-associated coronavirus. METHODS: The serum levels of IgM and IgG antibodies to N antigen were measured in 200 healthy blood donors and 13 SARS patients at different time points of acute and convalescent phases using indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) with N fusion proteins of SARS-associated coronaviruses. RESULTS: The IgM positive critical value of 0.233 and IgG of 0.239 were selected as the threshold value for positive results that equals the product of 2.1 and the mean IgM and IgG levels of 200 healthy blood donors. In 13 patients with SARS, the antibody responses to N antigen were not detectable in the first week after the onset of symptoms. The IgM and IgG seroprotection rates were 83.3% and 66.7% respectively in the second week, both reaching 100% at the third week. IgM seroprotection rates was 61.5% in the second month, and 38.5% at third month. The IgG peaked one month after the onset and remained at high levels in the following 2 months. CONCLUSION: The antibody responses suggest that N protein of SARS is immunodominant and plays an important role in viral pathogenesis. This ELISA-based test for detecting anti- N antigen may be of significant value for SARS diagnosis.     

SARS患者血清冠状病毒抗体检测

目的探讨SARS患者血清冠状病毒抗体产生情况.方法采用ELISA方法,对42例临床诊断SARS患者、47例普通肺炎患者和30例正常人进行血清冠状病毒抗体(IgG,IgM)检测.结果42例临床诊断为SARS患者,36例可在10 d左右检测到IgM抗体,阳性率为85.7%,IgG抗体阳性33例,阳性率为78.6%.47例临床诊断为普通肺炎的患者,IgM阳性2例,阳性率为4.26%,IgG阳性4例,阳性率为8.51%.30例正常人体检者没有出现IgM或IgG阳性.结论SARS冠状病毒抗体检测对临床早期诊断有一定的帮助.     

非SARS患儿体内SARS冠状病毒抗体的检测分析

目的 探讨非急性重症呼吸综合征(SARS)患儿体内是否存有SARS冠状病毒相关抗体。方法采用国家药品生物制品检定所正式检定通过的2种SARS抗体诊断试剂(间接免疫荧光检测试剂和双抗原夹心ELISA试剂)，对广州地区l060例非SARS患儿血清样本进行检测。结果 1060例非SARS患儿血清样本，间接免疫荧光法检测IgM、IgG均为阴性。双抗原夹心ELISA法检测也仅有2例出现弱阳性。结论 非SAILS患儿体内并未存在SAILS病毒相关抗体。     

SARS冠状病毒辅助蛋白的研究进展

严重急性呼吸道综合征冠状病毒（SARS-CoV）2002～2003年在全球范围内引起了SARS的大规模暴发。其基因组约30kb,含14个潜在的开放阅读框（ORF）,其中6个ORF编码病毒复制的必需蛋白如复制酶（ORF 1a和1b）和4个结构蛋白：核衣壳、刺突、膜和包膜。其余8个ORF编码SARS-CoV特有的辅助蛋白。本文主要在3个方面概述了SARS-CoV辅助蛋白的研究进展：检测感染病人辅助蛋白的抗体;辅助蛋白的表达、加工和定位;辅助蛋白对细胞功能的影响,从而揭示SARS-CoV辅助蛋白的分子和生化特征,为研究SARS-CoV为何有如此强大的致病力提供线索。     

SARS冠状病毒N蛋白单克隆抗体在SARS尸检组织中的表达

目的观察SARS死者的尸检组织中SARS冠状病毒(SARS-CoV)的存在与分布情况。方法应用免疫组化技术检测4例尸检标本肺、脾脏、淋巴结、脑、垂体、心、肝、肾、胰腺、气管、食道、胃肠道和骨髓等组织的SARS-CoV N蛋白。结果肺泡上皮、肺、脾、淋巴结内浸润的单核细胞/巨噬细胞、脑神经元、肝细胞、肾远曲小管上皮细胞、胰腺腺泡细胞、垂体嗜酸细胞、甲状旁腺嗜酸性细胞、肾上腺皮质细胞、气管及支气管浆液腺上皮细胞、食道粘膜鳞状上皮、胃肠道柱状上皮细胞及胃壁细胞、骨髓早幼粒细胞及小静脉内皮细胞等细胞质内SARS-CoV N蛋白单克隆抗体均为阳性。结论SARS-CoV可侵犯全身多种器官和组织。SARS-CoV N蛋白单克隆抗体在胃肠道、肾远曲小管及汗腺细胞内的阳性表达,对研究SARS-CoV传播途径具有重要意义。     

SARS冠状病毒PUMC01分离株的基因组序列分析

目的 对北京协和医院分离的SARS冠状病毒(SARS-CoV)PUMC01株的基因组序列进行变异及系统发育分析。方法 利用随机引物法构建SARS-CoV-PUMC01分离株的cDNA文库,随机挑选质粒克隆进行大规模测序,测序反应经过组装后获得全基因组序列(Genbank Accession No．,AY350750),对该序列与SARS-CoV的参考序列相比进行系统发育及变异分析。结果 与参考序列(SARS-CoV-Tor2及SARS-CoV-Urbani)相比较,在SARS-CoV-PUMC01上共发现10个变异位点;与其他的17株SARS-CoV进行系统发育分析后发现,18株SARS-CoV分为两类,两类之间及每一类的各株病毒间具有不同的分化时间。结论 了解不同地区SARS-CoV之间的系统发育关系,为系统了解不同SARS-CoV分离株之间的临床关系以及SARS-CoV的传播链提供了进化上的证据。     

SARS冠状病毒S蛋白基因片段的表达及其单克隆抗体的制备

目的: 表达SARS冠状病毒S蛋白片段,并制备特异性单克隆抗体(mAb).方法: 原核表达SARS冠状病毒S蛋白片段,从SARS病毒cDNA中扩增S蛋白(N端205至419aa)基因片段,测序结果正确.将该基因片段插入pQE-30中,构建重组质粒pQE-30-S1m,以重组质粒转化E.coli M15诱导表达His-S1m蛋白.纯化后免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性mAb.结果: 表达并纯化了重组蛋白His-S1m,获得1株抗His-S蛋白的mAb1H2.Ig亚类鉴定为IgG1a,轻链为κ型.经Western blotting检测,mAb1H2与S蛋白发生特异性反应,而与His蛋白无交叉反应.结论: 成功表达了重组S蛋白并制备了特异性mAb,为SARS-CoV的早期诊断及进一步研究S蛋白的功能奠定了基础.     

惠州市少年儿童SARS冠状病毒抗体调查分析

目的　分析惠州市少年儿童人群SARS CoV抗体水平情况。　方法　抽取惠州市学生、学龄前儿童血清标本共 10 2 8人份 ,采用酶联免疫方法进行SARS病毒IgG抗体检测。　结果　 10 2 8份样本 ,SARS病毒IgG抗体阳性率为 2 40 % (2 5 /10 2 8)。学龄前儿童 (0～ 6岁 )阳性率为 4 0 0 % (2 0 /5 0 1) ,其中男童阳性率为 4 0 1% (9/2 74) ,女童为3 96% (9/2 2 7) ,男、女童之间差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;学生儿童 (7～ 14岁 )的阳性率为 0 95 % (5 /5 2 7) ,其中男生阳性率为 1 3 5 % (4 /2 96) ,女生为 0 43 % (1/2 3 1) ,男生和女生差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,而学龄前组儿童抗体阳性率明显高于学生组 (P <0 0 5 )　结论　通过对少年儿童人群SARS CoV抗体水平的监测 ,可预防SARS的流行趋势 ,及早作好预防措施     

SARS冠状病毒与实验室诊断

引起严重急性呼吸综合征(SARS)的病原是一种新型冠状病毒。作者对其结构、致病性、抵抗力以及实验室诊断的现状与不足进行了综述。     

SARS基因研究进展

为了应对严重急性呼吸综合征(SARS)全球流行的严峻形势，世界卫生组织(WHO)组织了多个国家的临床工作、流行病学专家和实验室研究人员进行广泛的协作。这种国际协作显示出了强大的威力，在2003年3月，美国、加拿大、德国和我国香港特别行政区的实验室均报道从SARS患分离出了一种新的冠状病毒，