凝血因子Ⅸ基因剔除小鼠近交系的建立

目的 :建立可稳定遗传、临床症状显著的凝血因子 (F )基因剔除小鼠近交系。 方法 :以 PCR扩增检测小鼠尾组织 DNA,一期法检定小鼠血浆 F 活性和血浆凝血酶原时间 (PT)、白陶土部分凝血活酶时间 (KPTT)值 ;取以上结果为全阳性的小鼠以选优法进行全同胞兄妹交配 ,每代选用第一胎小鼠留种 ,第 8代开始筛选纯合子。 结果 :F8代 F 基因剔除小鼠PCR检测阳性率 92 % ,到 F1 2 代小鼠阳性率达 10 0 % ;F 活性 (2 .4 7± 1.75 ) %较正常小鼠 (14 8.18± 4 6 .98) %明显降低 (P<0 .0 1) ;F 基因剔除小鼠已近交培育到第 12代 ,遗传性状稳定 ,并有自发出血倾向。结论 :成功建立了纯合子 F 基因剔除小鼠近交系 ,该小鼠符合人血友病 B相应临床症状     

凝血因子Ⅸ基因剔除小鼠的生长繁育和主要血液学指标观测

为研究凝血因子IX基因剔除小鼠的生长繁育和血液学指标等生物学特性,对种群中38窝母鼠所生仔鼠进行生长发育指标的测定,测其5、10、15、21、30、40、50、60日龄的体重、体长和尾长;测定交配种鼠的繁殖性能及发病时间和临床症状;部分小鼠的血液生理、生化值。结果表明,5、21日龄平均体重分别为3.70 g,3.44 g和11.12 g,10.35 g;初配至生产平均30.24d,产仔数5.39只,平均离乳率81.09％。小鼠发病时间30～90日龄不等,有出血症状;凝血因子IX基因剔除小鼠的血液成分指标与正常小鼠基本一致。     

凝血因子IX基因剔除小鼠的生长繁育和主要血液学指标观测

为研究凝血因子IX基因剔除小鼠的生长繁育和血液学指标等生物学特性,对种群中38窝母鼠所生仔鼠进行生长发育指标的测定,测其5、10、15、21、30、40、50、60日龄的体重、体长和尾长;测定交配种鼠的繁殖性能及发病时间和临床症状;部分小鼠的血液生理、生化值.结果表明,5、21日龄平均体重分别为♂3.70 g,♀3.44 g和♂11.12 g,♀10.35 g;初配至生产平均30.24 d,产仔数5.39只,平均离乳率81.09%.小鼠发病时间30～90日龄不等,有出血症状;凝血因子IX基因剔除小鼠的血液成分指标与正常小鼠基本一致.     

凝血因子Ⅸ基因剔除小鼠的遗传及血液学指标检测

目的　鉴定凝血因子IX基因剔除小鼠。方法　采用PCR扩增检测小鼠的DNA样品以及采用一期法检定小鼠血浆FIX活性和血浆凝血酶原时间 (plasmaprothrombintime ,PT)、白陶土部分凝血活酶时间 (Kaolinpartialthromboplastintime ,KPTT)值。结果　小鼠PCR检测为阳性 ,FIX活性 <5 %。结论　凝血因子IX基因剔除小鼠能稳定遗传 ,鉴定结果提示该小鼠符合人血友病B相应临床症状。     

瞬时性受体电位通道香草酸受体亚型6基因敲除小鼠模型的建立

目的 建立Trpv6基因剔除小鼠模型,为在体研究Trpv6的生物学功能及其与骨代谢关系创造条件。 方法 从Ensembl数据库中获得小鼠Trpv6基因组序列。设计基因剔除策略,构建基因剔除载体pBR322-MK-Trpv6。以电穿孔方法将基因剔除载体导入ES细胞,用G418和Ganciclovoir进行正负筛选,获得双抗性克隆。PCR鉴定出正确同源重组的胚胎多能干细胞（ES细胞）克隆。将正确同源重组的ES细胞注射到C57BL/6J小鼠的囊胚中,获得嵌合体小鼠。挑选嵌合率在50%的雄鼠与C57BL/6J小鼠交配,获得的灰鼠,PCR鉴定为杂合子小鼠。杂合子小鼠交配后获得纯合子小鼠。 结果 成功构建了打靶载体pBR322-MK-Trpv6。电穿孔后,共获得24个正确同源重组的克隆,同源重组效率为25%。同源重组的克隆经显微注射后,共获得4只嵌合率大于50%的雄鼠。嵌合鼠与野生型C57BL/6J交配,获得57只来源于ES细胞的灰鼠,PCR鉴定证实17只为杂合子小鼠,阳性率为33.3％。杂合子小鼠交配获得纯合子小鼠。经Western印迹证实纯合子小鼠无Trpv6蛋白的表达。 结论 已成功建立了Trpv6基因剔除小鼠模型,其中纯合子小鼠未出现胚胎致死现象。     

hApoE7转基因小鼠纯合子的培育和鉴定

目的：载脂蛋白E(apoE)是血浆中参与脂质代谢的重要蛋白质，并且与迟发型早老性痴呆(AD)相关。为从整体水平研究人突变ApoE基因剂量与效应的关系，我们拟培育C57BL/6-hApoE7纯合子转基因小鼠。方法：将经Southern杂交鉴定为阳性的F1代小鼠进行互配，仔代经PCR初筛，再行Southern杂交鉴定，杂交结果经扫描定量分析以确定hApoE7基因整合的拷贝数，纯合子小鼠的拷贝数为杂合子的两倍。经此法鉴定的纯合子小鼠与正常C57 BL/6小鼠进行侧交以进行进一步的鉴定。结果：Southern杂交鉴定出F1代转基因小鼠6只，F2代转基因小鼠7只，其中纯合子3只。将所得到的纯合子小鼠与正常的C57 BL/6小鼠交配，仔代鼠经PCR鉴定结果全部为阳性。结论：通过培育C57 BL/6-hApoE7纯合子转基因小鼠，发现人ApoE7基因在转基因小鼠体内可以稳定遗传，转基因的遗传特征符合常染色体单位点整合。     

TAFA2基因剔除小鼠模型的建立

目的 建立TAFA2基因剔除小鼠模型,为在体研究TAFA2基因的生物学功能及其与中枢神经系统发生、发育的关系创造条件. 方法 运用生物信息学手段确定小鼠TAFA2基因组的序列,设计基因剔除策略,构建基因剔除载体pBR322-MK-MCS-TAFA2,以电穿孔方法将基因剔除载体导入ES细胞,用G418和Ganciclovoir进行正负筛选,获得双抗性克隆,PCR鉴定出正确同源重组的ES细胞克隆. 结果 同源重组的ES细胞注入小鼠囊胚后获得嵌合体小鼠,嵌合体小鼠与C57BL/6J小鼠交配后获得Aguoti（野生型）毛色的小鼠41只,其中14只为TAFA2基因剔除杂合子小鼠,阳性率为34.1%.在雌、雄杂合子小鼠交配的后代中获得纯合子小鼠,初步的表型观察未发现TAFA2基因剔除小鼠出现异常改变. 结论 已成功建立了TAFA2基因剔除小鼠模型,其中纯合子小鼠未出现胚胎致死现象.     

利钠肽受体-A基因敲除小鼠的繁育与鉴定

目的:繁殖和鉴定NPR-A基因敲除小鼠.方法:将所引进的雄性野生型和雌性NPR-A基因敲除杂合子小鼠进行交配繁殖,可以得到野生子、杂合子及纯合子3种基因型,提取每只小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行基因型鉴定.结果:NPR-A基因敲除小鼠的饲养和繁殖均获得成功,成功获得了较多的NPR-A基因敲除纯合子小鼠.结论:雌、雄性NPR-A基因敲除杂合子小鼠交配是繁育NPR-A基因敲除纯合子子鼠的较好方法;用PCR方法能够精确鉴定NPR-A基因敲除纯合子子鼠.     

miR-100基因敲除小鼠模型的构建及基因型鉴定

目的探讨miR-100基因敲除小鼠模型的构建及基因鉴定。方法将引进的miR-100^flox/flox小鼠与EIIa-Cre小鼠进行交配繁育出F1代小鼠,将F1代小鼠中基因型为miR-100^flox/-的雌雄小鼠继续进行交配,获得F2代小鼠,待小鼠1周龄时剪尾部组织提取DNA,PCR法扩增目的基因片段,琼脂糖凝胶电泳进行基因型结果判定。结果结果显示有所需要的miR-100基因敲除纯合子小鼠,将获得的敲除纯合子小鼠再交配,就可获得更多的基因敲除纯合子小鼠。F1代杂合子小鼠交配获得的F2代小鼠中出现3种基因型:miR-100^flox/flox、miR-100^flox/-、miR-100^-/-,使用PCR法成功鉴定出了子代小鼠的基因型。同时剪取miR-100敲除纯合子小鼠、miR-100^flox/flox小鼠及miR-100敲除杂合子小鼠的耳朵提取RNA,然后进行qRT-PCR验证miR-100的表达情况。qRT-PCR结果显示,miR-100基因全身敲除纯合子小...     

FMR1基因敲除小鼠的繁殖及基因鉴定

目的繁殖和鉴定脆性X智力低下蛋白基因敲除小鼠。方法引进FMR1基因敲除小鼠,提取每只小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,获得的雄性纯合子子代小鼠与杂合子雌鼠进行交配。结果 FMR1基因敲除小鼠的饲养和繁殖获得成功,获得较多的基因敲除纯合子小鼠。结论正确的饲养繁殖以及鉴定方法是获得FMR1基因敲除纯合子小鼠的有效途径。     

Caveolin-1敲除对C57BL/6小鼠繁殖性能及子代离乳前体质量的影响

目的探讨小窝蛋白Caveolin-1敲除对C57BL/6小鼠离乳前繁殖性能及体质量的影响。方法分别对Caveolin-1基因敲除小鼠和同源C57小鼠进行体质量、初产日龄、胎次间隔时间、平均产仔数及离乳存活率的观察及分析。结果 C57BL/6小鼠鼠仔平均体质量均高于Caveolin-1基因敲除鼠,在1、7、14 d时两者比较差异无统计学意义(P>0.05);21 d时,两者差异具有统计学意义(P<0.05);两组初产日龄、胎次间隔时间及平均产仔数差异无统计学意义(P>0.05),但C57BL/6小鼠离乳存活率明显高于基因敲除鼠,两者差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Caveolin-1敲除小鼠的体质量下降、繁殖性能下降。     

昆明小鼠生长发育指标及繁殖性能测定

目的 作为我国昆明小鼠生物学特性标准化研究工作的一部分,我们承担了兰州生物制品所昆明小鼠生长发育指标及繁殖性能测定工作。方法 从生产大群中选取了170只怀孕母鼠,用其所生仔鼠进行生长发育指标的测定,测其3、7、10、14日龄窝重和3、4、5、6、8、10、12、14周龄体重。用育成雄、雌仔鼠各140只,饲养至70～75日龄配种,共配136盒,作繁殖性能测定。测初配后30d产仔率、各胎平均窝产仔数、离乳成活率和胎间隔。结果 兰生所昆明小鼠平均初生窝重为20g,反映小鼠哺乳情况的14日龄平均窝重为67．4g。公鼠10周龄时体重已达体成熟,母鼠10周龄时体重也达体成熟的90％以上。初配后30d产仔率81．6％。1～5胎平均产仔数10只以上,6～10胎平均产仔数约7只,平均离乳率84％。结论 上述结果为中国昆明小鼠标准化提供可靠数据。     

IRM-2近交系小鼠的生殖生长特性

观察复方女贞子对实验性高血糖模型的影响。结果表明：该药对由肾上腺素、葡萄糖引起的小鼠血糖升高有明显的对抗作用;可明显降低四氧嘧啶糖尿病大、小鼠的血糖水平及降低高血糖大鼠并发血清甘油三酯升高的作用。对正常血糖无明显影响。     

6种常用SPF级大小鼠繁殖性能测定与分析

目的测定、分析本中心保存的6种常用SPF级大小鼠(SD大鼠、C57BL/6小鼠、BALB/c小鼠、NIH小鼠、KM小鼠、ICR小鼠)的主要繁殖性状。方法近交系小鼠采用全同胞同居交配,封闭群大鼠和小鼠采用循环交配。测定这6种品系大小鼠第1~4胎所生仔鼠的平均产仔数、平均带仔数和平均离乳数,并计算离乳率。同时测定初配日龄、初产日龄、初产间隔和各胎胎间隔。结果近交系小鼠的平均产仔数均为6~7只,前3胎繁殖数据基本保持稳定,第4胎各项数据相比第3胎明显下降(P0.05)。BALB/c小鼠的离乳率在98%~99%,C57BL/6小鼠为96%~98%。封闭群实验动物的平均产仔数可达12~14只,第2~3胎平均产仔数均较第1胎明显升高(P0.05),但第4胎又比第3胎显著下降(P0.05)。NIH、KM和ICR小鼠的离乳率都维持在98%~99%;SD大鼠的离乳率则略低(95%~97%)。小鼠的初配日龄在70 d~80 d之间,大鼠在109 d;封闭群小鼠的初产日龄和初产间隔低于近交系小鼠,大鼠的初产日龄和初产间隔分别为136.3 d和27.7 d;近交系小鼠的胎间隔在34 d~40 d之间,封闭群小鼠在25.5 d~28.7 d之间,大鼠在32.8 d~33.8 d之间。结论本中心保存的6种常用大小鼠繁殖性能较高,获得的繁殖性能参数为华南地区实验大小鼠商业化生产和啮齿类实验动物资源库的建立提供依据和基础数据。     

Caveolin-1基因敲除小鼠子代基因型的鉴定及繁育方法

目的 探讨小凹蛋白-1(caveolin-1)基因敲除小鼠的鉴定方法与最优繁育方式,为深入研究caveolin-1在脑缺血损伤修复中的作用提供理想的动物模型。方法 将引进的caveolin-1基因敲除小鼠饲养于SPF级实验室,煮沸裂解法提取鼠尾组织基因组DNA,根据美国杰克逊实验室(Jackson Laboratory)提供的引物序列进行PCR反应检测其基因型,采用caveolin-1^+/-杂合子互交、杂合子与caveolin-1^-/-纯合子杂交(正交及反交)、纯合子互交4种不同的交配方式,观察亲代小鼠的受孕率、子代小鼠的外形特征及纯合率。结果 琼脂糖凝胶电泳显示PCR产物分子量大小约200 bp和661 bp,与预期的目的基因片段分子量大小一致,成功鉴定了caveolin-1基因敲除小鼠的不同基因型;不同交配方式的繁殖结果基本符合孟德尔遗传规律,且雌性、雄性caveolin-1^-/-纯合鼠具有一定的繁殖能力,三种不同基因型小鼠的外形特征无明显差异。结论 煮沸裂解法提取基因组DNA、PCR法能够快速可靠鉴定caveolin-1基因敲除小鼠的基因型;caveolin-1杂合子小鼠互交与纯合子互交相结合的繁育方法可能是短期内获得足量纯合子子鼠与同源野生子鼠的较好方式。     

重度联合免疫缺陷小鼠的繁育及其应用初报

应用带过滤罩的透明鼠在层流柜内繁育Ｔ和Ｂ淋巴细胞缺失的重度联合免疫缺陷（ｓｃｉｄ）小鼠获得成功，１９９３年５月至１９９４年４月，共繁育ｓｃｉｄ小鼠２２１只，寿命均超过１２个月。平均每窝产仔数为５．５只，显著低于对照组ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，不育率为１４．９％，离乳率为８８．２％，与ＢＡＬＢ／ｃ小鼠相比均无明显差异。ｓｃｉｄ小鼠４～１０周龄的体重与同龄ＢＡＬＢ／ｃ小鼠相比无明显差异，微生物学检测均符合ＳＰ     

海风藤酮对小鼠抗着床作用的免疫组织化学观察

目的观察海风藤酮对小鼠胚泡着床的影响。②方法未经产雌性昆明小白鼠于妊娠第２天,一侧子宫角内分别注射不同剂量海风藤酮（５,１０,２０,４０,６０μＬ）作为实验组,另一侧子宫角注射相应剂量的生理盐水为对照。于妊娠第８天及第１０天,取子宫组织做常规石蜡切片,ＨＥ及免疫组织化学染色,光镜观察。③结果注入海风藤酮（≥２０μＬ）组子宫蜕膜变薄,层粘连蛋白（Ｌｎ）免疫阳性物减少,纤粘连蛋白（Ｆｎ）免疫阳性物增多,并伴有不同程度胚胎发育迟缓及退化等改变。大剂量海风藤酮（≥４０μＬ）组部分动物子宫内膜无蜕膜反应,而且胚胎已消失。④结论海风藤酮通过拮抗血小板激活因子影响蜕膜反应,并使Ｌｎ及Ｆｎ的量和分布发生异常改变。这可能是该药抗着床作用的重要途径之一。     

西藏小型猪F1代与F0代生长繁殖性能的比较

目的比较研究广州地区西藏小型猪F1代与F0代引入群母猪繁殖和仔猪生长性能的差异。方法观察记录西藏小型猪F1代和F0代的产仔数、产活仔数、离乳仔数、初生重、30日龄和60日龄体重。结果西藏小型猪F1代和F0代母猪其初产平均产仔数、产活仔数、离乳仔数、平均初生重、30日龄和60日龄体重分别为3.83头、2.30头;3.29头、2.20头;3.14头、3.11头;0.66 kg、0.53 kg;2.70 kg2、.30 kg;4.50 kg、4.01 kg;F1代初产仔数和离乳率均显著高于F0代。结论西藏小型猪已经适应了广州高温高湿环境,能够稳定地生长繁殖。     

转基因和基因敲除内脂素对小鼠脂肪积累的对比研究

目的内脂素(visfatin)也被叫做尼克酰胺磷酸核糖基转移酶,是一种脂肪因子,研究表明其与肥胖有关,但是与脂肪积累的关系仍然不明确,本研究是以内脂素转基因和内脂素基因敲除杂合子小鼠为对象,研究内脂素与脂肪积累的关系。方法 Western blot法对比分析转基因、基因敲除杂合子和野生型小鼠脂肪组织中内脂素表达水平。从2月龄开始对3种雌性小鼠饲喂高脂饲料,分别在2、4、6、8、9月龄测定其体重变化,并在9月龄时利用磁共振成像定性观测小鼠脂肪积累及分布,称量皮下和腹腔脂肪总重量并对腹腔脂肪组织进行组织学观察。结果内脂素转基因小鼠脂肪组织中内脂素的表达量比野生小鼠增加37%,基因敲除杂合子小鼠比野生小鼠降低了55%。饲喂7个月高脂饲料后,转基因小鼠体重平均27.8±0.8 g,野生小鼠体重平均33.6±1.1 g,基因敲除杂合子小鼠体重平均37.6±1.9 g。皮下和腹腔脂肪总重量测定结果显示转基因小鼠的脂肪总重量比野生小鼠降低了40%,基因敲除杂合子小鼠的脂肪总重量比野生小鼠增加了37%,组织学染色显示,内脂素转基因小鼠的平均单个脂肪细胞面积最小,而基因敲除杂合子小鼠面积最大。结果证实,内脂素表达量与体重、皮下和内脏脂肪总重量及脂肪细胞大小呈负相关。结论在饲喂高脂饲料的情况下,内脂素可以抑制脂肪的积累。