新生大鼠缺氧、缺血合并高、低血糖的脑细胞凋亡研究

目的应用显微镜观察及原位末端标记技术,对新生大鼠缺氧、缺血（HI）合并高、低血糖模型进行脑细胞凋亡形态学研究。方法7日龄SD新生大鼠通过不同的模型制备方法,分为8组：正常对照组、假手术组、HI组、HI前轻度高血糖组、HI前重度高血糖组、HI前低血糖组、HI后轻度高血糖组及HI后重度高血糖组。在对新生大鼠HI合并高、低血糖模型进行脑病理研究的同时,运用原位末端标记技术进一步对其进行脑细胞凋亡形态学研究,观察不同血糖浓度对脑细胞凋亡造成的影响。结果HI前重度高血糖组大鼠的脑凋亡细胞数明显减少,而HI前低血糖组大鼠的脑凋亡细胞数明显增加。提示HI前重度高血糖可显著减轻HI后脑细胞凋亡,HI前低血糖则可进一步加剧HI后脑细胞凋亡。结论HI前重度高血糖减轻HI后脑细胞凋亡的机制可能与其补充了一定量的葡萄糖,使能源物质不至匮乏,因而避免或减轻脑HI损伤加剧及脑细胞凋亡有关。     

PI3K/Akt通路对缺氧缺血皮质神经元细胞GLUT3转位的影响

目的 研究PI3K/Akt通路对大鼠缺氧缺血皮质神经元细胞葡萄糖转运蛋白3(GLUT3)转位的影响.方法 将原代培养的大鼠皮质神经元随机分为对照组、缺氧缺血组、缺氧缺血加LY294002 (PI3K特异性抑制剂)组,用Western blot检测3 h后3组细胞中PI3K/Akt磷酸化蛋白的表达,RT-PCR检测GLU...     

新生大鼠缺氧缺血脑损伤时脑组织GLUT1表达及神经元凋亡研究

目的 研究新生大鼠缺氧缺血 (HI) 时脑组织葡萄糖转运体1 (GLUT1) 表达及其与神经元凋亡的关系.方法 实验分为正常对照组、假手术组和HI组,采用Rice方法建立10日龄SD大鼠缺氧缺血脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)模型.分别于HI后2、8、24、48和72 h 处死取脑.HE染色观察脑组织病理改变,RT-PCR法检测GLUT1 mRNA表达,免疫组织化学法检测GLUT1及活性天冬氨酸酶-3(cleaved caspase-3, CC3) 的表达,TUNEL法检测凋亡细胞.结果 HE染色显示随HI时间延长,细胞损伤程度加重,48 h 细胞缺失明显,对照组细胞排列有序,形态正常.RT-PCR 及免疫组织化学检测结果显示脑组织 GLUT1 的 mRNA 及蛋白于 HI 后表达增加,即 2 h 开始升高,24 h 达高峰,与对照组(正常对照组和假手术组)比较,差异有统计学意义(P<0.01).CC3 蛋白于HI后2 h开始表达,48 h 达到高峰,高于对照组(P< 0.01).TUNEL 染色显示 HI 后随时间延长,阳性细胞数逐渐增多,48 h 达到高峰,高于对照组(P<0.01).结论 新生大鼠HI后,脑组织GLUT1 mRNA及蛋白表达增高,其高峰早于CC3及凋亡高峰,提示GLUT1上调可能对神经元凋亡具有一定的抑制作用.     

缺氧缺血新生大鼠合并高、低血糖模型的制备

目的 建立不同血糖浓度的缺氧缺血新生大鼠模型。方法 在已具有成功建立缺氧缺血新生大鼠模型丰富经验的基础上，通过调节不同的25％葡萄糖注射次数及注射时间，建立缺氧缺血前后合并高血糖新生大鼠模型，通过禁食建立缺氧缺血前后合并低血糖新生大鼠模型。结果 成功建立了缺氧缺血前后合并高、低血糖新生大鼠模型，所建立的正常对照组血糖值范围在5～7mmol／L，低血糖组在3～4mmol／L，轻度高血糖组在10～15mmol/L，重度高血糖组在15～25mmol／L，均达到预期设计目标。结论 本方法稳定可靠，重复性好，能满足相关研究的需要。     

不同程度的缺氧缺血对新生大鼠神经元凋亡和星形胶质细胞增生的影响

目的 探讨不同程度的缺氧缺血(HI)对新生大鼠神经元凋亡和星形胶质细胞增生的影响.方法 72只日龄为7 d的Wistar大鼠随机平均分为假手术对照组、轻度HI组和重度HI组.后两组大鼠行右颈总动脉结扎,分剐置于含8%氧的密闭氧舱内34.5℃、40 min和35.5℃、65 min.用免疫组化法观察脑内胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化;TUNEL染色评估细胞凋亡.结果 与假手术对照组相比,轻度HI后48 h和1周缺血侧脑皮质与白质GFAP阳性细胞数均明显增加(P＜0.01,P＜0.05),有些区域GFAP阳性细胞增多可持续至4周(P＜0.05);重度HI后48 h和1周脑皮质与白质GFAP阳性细胞数明显多于假手术对照组(P＜0.01)和轻度HI组(P＜0.05),4周时GFAP阳性细胞不再增加.与假手术对照组相比,轻度HI后48 h、1周和4周,缺血侧皮质下白质TUNEL阳性细胞数量均明显增加(P＜0.05),而皮质阳性细胞数量无明显变化.重度HI后48 h缺血侧皮质与白质TUNEL阳性细胞数量均明显增加(P＜0.01),1周和4周梗死周边区TUNEL阳性细胞数量仍增加(P＜0.05).结论 轻度缺氧缺血细胞凋亡主要局限于皮质下白质,星形胶质细胞增生持续较久;重度缺氧缺血可致缺血侧大脑半球广泛的细胞凋亡,星形胶质细胞增生短暂且强烈.     

新生大鼠缺氧缺血后不同部位脑组织中Par-4基因的表达

目的：观察Par-4基因在新生大鼠脑缺氧缺血后，不同脑组织中的表达。方法：制备新生大鼠缺氧缺血性脑病的动物模型。利用RT-PCR检测脑缺氧缺血后不同时间点海马组织、大脑额叶皮质及小脑中Par-4的mRNA表达的改变，利用Western blot检测在缺氧缺血24h后，海马组织大脑额叶皮质和小脑中Pat-4蛋白表达量的改变。结果：①海马组织和大脑额叶皮质中的Pat4 mRNA在脑缺氧缺血后2h已明显升高，至6h已达高峰。而小脑未见表达；②在新生大鼠脑缺氧缺血24h后，海马组织及大脑额叶皮质中Pat-4蛋白表达量显著升高，并且海马组织中Par-4蛋白表达量高于大脑额叶皮质中Par-4蛋白表达量。而小脑未见其蛋白表达。结论：缺氧缺血对新生大鼠不同脑组织中Par-4基因表达影响不同，Pat-4可能参予了缺氧缺血对新生大鼠海马组织和大脑额叶皮质的致病过程。     

针刺百会、人中穴对急性脑缺血大鼠模型葡萄糖转运蛋白1、3的影响

【目的】探讨早期针刺治疗对脑缺血模型大鼠局部葡萄糖代谢的调节作用。【方法】将80只3个月龄的SD大鼠随机分为正常组、模型组、2 h针刺组和24 h针刺组4组,每组20只。采用开颅法复制急性脑缺血模型。针刺治疗取百会、人中穴,采用泻法,针刺行针捻转频率120次/min,每隔4 min行针1次,每次行针1 min,总共针刺治疗30 min。2 h针刺组在造模后2 h即开始针刺治疗,在24 h后再次针刺治疗,一共治疗2次;24 h针刺组在模型制备后24 h针刺1次。针刺治疗结束后,大鼠予以神经功能评分,并取材,行2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定缺血区域梗死面积,采用免疫组织化学法检测缺血脑组织葡萄糖转运蛋白(GLUT)1、3的表达。【结果】模型组大鼠神经功能评分指数较正常组升高,TTC染色结果显示左侧大脑半球肿胀,梗死体积明显大于对侧,免疫组织化学结果显示缺血脑组织区域GLUT1和GLUT3免疫阳性物较正常组增多(P0.01)。与模型组比较,2 h针刺组和24 h针刺组均能有效改善脑缺血状况,降低神经功能评分指数,减少TTC染色后的梗死面积,增加缺血脑组织区域GLUT1和GLUT3蛋白表达(P0.05),而2 h针刺组疗效优于24 h针刺组(P0.05)。【结论】针刺可以有效改善急性脑缺血大鼠脑缺血损伤。针刺改善缺血性脑组织的能量代谢作用可能是通过上调脑内GLUT1和GLUT3的蛋白表达,提高葡萄糖的血脑屏障转运效率,从而促进葡萄糖代谢,为缺血性脑组织提供能量以延缓供能的相对不足,对抗脑缺血损伤。早期以针刺干预调节脑缺血大鼠能量代谢可以起到积极效果。     

缺血缺氧新生大鼠脑内HO-1的表达及与CO的相关性

目的：研究缺血缺氧时新生大鼠脑内血红素氧化酶－1（HO－1）表达的变化及其与内源性一氧化碳的相关性。方法：7d龄SD仔鼠110只，随机分为3组：假手术对照组（Control,10只），缺血缺氧组（HI，50只）及缺血缺氧＋锌原卟啉组（HI＋Znpp,50只），于模型建立后0，1，4，12和24h处死，观察各组脑组织HO－1活性的变化及CO和cGMP含量。结果：（1）缺血缺氧组cGMP及CO水平在缺血缺氧后0h即升高，与对照组相比较有明显差异（P＜0．01），但与HI＋Znpp组无显著差别（P＞0．05）。（2）缺血缺氧后0h各组HO－1活性均无显著差异（P＞0．05）。（3）缺血缺氧组在1，4和12hHO－1，cGMP，CO水平与对照组及HI＋Znpp组比较均 明显升高（P＜0．01），在12h达到高峰，在24h恢复正常水平。与HI和12h均明显减低（P＜0．01），但仍高于正常组（P＜0．01）。结论：缺血缺氧对脑内HO－1诱导高表达，并与内源性一氧化碳的增高密切相关。HO－CO－cGMP系统可能在缺血缺氧脑损伤的病理生理过程中起着重要作用。     

选择性COX-2抑制剂NS398干预对HIBD新生鼠脑细胞凋亡的影响

目的研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)时应用选择性COX-2抑制剂NS398干预后不同时段脑原位细胞凋亡的变化。方法于制备新生大鼠左脑的HIBD模型前30min,腹腔注射NS39820mg/kg,同时设未注射组及假手术组对照,应用TUNEL染色方法及图像分析软件研究于HI后24h、7d脑皮层及海马TUNEL染色阳性细胞百分率变化。结果假手术组组脑组织中偶见TUNEL染色阳性细胞;未注射组缺氧缺血(HI)后24hTUNEL染色阳性细胞数较多,至HI后7d明显减少;NS398干预组染色阳性细胞数较未注射组明显减少。结论应用选择性COX-2抑制剂NS398于HIBD新生鼠,可以有效减少HI后凋亡细胞,提示NS398对发育期脑组织缺氧缺血损伤存在保护作用。     

新生大鼠缺氧/缺血性脑损伤时皮层神经元HIF-1α的表达与凋亡相关基因P53、Bcl-2的关系

目的:探讨新生大鼠缺氧/缺血性脑损伤时皮层神经元缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及其与凋亡相关基因P53、Bcl-2的关系.方法:新生7日龄SD大鼠随机分为假手术组、单纯缺氧组和缺氧/缺血组,在缺氧或缺氧/缺血后3、6、12、24、72 h断头取脑,HE染色观察脑组织病理学改变,免疫组织化学方法检测皮层神经元H...     

参附注射液对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤干预作用的实验研究

目的研究参附注射液对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的干预作用。方法建立新生大鼠HIBD模型,把实验分成两部分(1)观察缺氧缺血后3、7、14和28d各组新生大鼠的体重变化以及各组28d内生存率。(2)流式细胞术测量缺氧缺血前2h,缺氧缺血后2h、12h、24h、3d、7d、14d和28d各时间点新生大鼠海马CA1区神经元的凋亡率,每组实验随机分为4组(每组20只)假手术组,生理盐水对照组,参附预处理组,参附治疗组。结果缺氧缺血后3、7、14和28d,生理盐水对照组大鼠体重的增长均明显小于假手术组(7d8.8g±2.1gvs14.0g±2.9g,均P<0.01),且明显小于参附预处理组(7d11.7g±3.3g,P<0.01或P<0.05),缺氧缺血后7、14、28d生理盐水对照组大鼠体重的增长均明显小于参附治疗组(7d10.9g±2.7g,P<0.01或P<0.05)。各组的体重明显小于假手术组。生理盐水对照组存活率为60%(12/20),参附预处理组存活率为90%(18/20),参附治疗组存活率为85%(17/20),生理盐水对照组存活率明显低于其他各组(P<0.05),其余各组存活率差异无统计学意义(均P>0.05)。缺氧缺血后2h生理盐水对照组、参附治疗组、参附预处理组海马神经元凋亡率开始升高,于缺氧缺血后24h凋亡率达到峰值后开始下降,缺氧缺血后14d降到正常。参附治疗组和参附预处理组海马神经元凋亡情况明显好于生理盐水对照组(24h16.0%±4.2%vs11.9%±2.3%vs18.1%,P<0.05或P<0.01)。结论参附注射液减少了新生大鼠缺氧缺血后神经元凋亡的发生,改善了新生大鼠HIBD后的生长发育,提高了其生存率。     

The regulatory effect of memantine on expression and synthesis of heat shock protein 70 gene in neonatal rat models with cerebral hypoxic ischemia

Objective To evaluate the neuroprotective effect of memantine, a non-competitive antagonist at the N-methyI-D-aspartate receptor, against hypoxic ischemia (HI) by exploring its regulation on the expression and synthesis of heat shock protein 70 (HSP70) gene in neonatal rat models with cerebralHI.Methods Memantine was intraperitoneally injected at a dose of 20 mg/kg in neonatal rat models either before (PRE group) or after (POST group) induction of HI. The expression and synthesis of the HSFr70 gene and its corresponding product were determined by rapid competitive PCR and immunohistochemistry, respectively.Results There was an increase in the expression of HSP70 mRNA two hours after induction of HI,which reached its peak at 48 hours, then decreased gradually. The same expression occurred at relatively low levels in the control group. Also, HSP70 synthesis was detected as early as 2h after HI,reached its peak between 48 and 72 hours, then declined over time. After memantine administration,the expression of the gene and its synthesis of the corresponding product decreased significantly during the time intervals 24 -72 h for the gene and 48 -72 h for the product compared to the HI group.Conclusion It was shown that HI is very sensitive to the expression of the HSP70 gene and synthesis of its corresponding product, which could be regulated by memantine. The latter may have the ability to reduce brain damage; thus decreased HSP70 mRNA expression could be a marker for HI. It is suggested that memantine can be a promising agent for neuroprotection against HI, although an overall and objective assessment of memantine is required to see if it can be used on neonates clinically later on.     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠IL-16的表达及意义

目的观察缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠白细胞介素-16（IL-16）表达的变化。方法建立新生大鼠缺氧缺血（HI）模型,实验分为假手术组、HIBD组。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测假手术组手术后和HIBD组缺氧缺血后3h、12h、24h、3d、7d、14d、28d脑组织匀浆中IL-16的水平。结果IL-16在HIBD组3h开始上升,24h达高峰,3d开始下降,28d基本恢复正常。与假手术组相比,HIBD组的IL-16水平在缺氧缺血后3h、12h、24h、3d、7d、14d均明显升高（P〈0．01）,而28d无明显差异（P〉0．05）。结论HIBD新生大鼠IL-16蛋白表达的增加出现早、持续时间长,表明IL-16参与HIBD的发病过程。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑低氧诱导因子1αmRNA的表达及参麦注射液的干预作用

目的 研究缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑组织低氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA的表达及参麦注射液的干预作用.方法 新生7 d龄SD大鼠随机分为假手术组、生理盐水组、参麦组,又各分为缺血缺氧后2、12、24 h,3、7、14 d 6个哑组,每亚组9只.采用反转录(RT)-PCR法检测鼠脑HIF-1α mRNA;流式细胞仪膜联蛋白V/碘化丙啶双染色法检测细胞凋亡.结果 (1)缺氧缺血后2 h,生理盐水组和参麦组右侧海马神经元凋亡率即均高于假手术组(均P<0.05),于24 h达到峰值后开始下降[(16.80±1.44)%、(11.95±1.13)%],14 d各组差异均无统计学意义(均P>0.05).参麦组海马神经元凋亡率在缺血缺氧后12、24 h,3和7 d均明显低于生理盐水组(均P<0.05).(2)缺血缺氧后2 h生理盐水组、参麦组新生大鼠右侧大脑中HIF-1α mRNA的表达即均高于假手术组(均P<0.05),于24 h达峰值后开始下降[(她32±4.03)%、(35.63±3.73)%],14 d各组表达差异均无统计学意义(均P>0.05);参麦组大脑中HIF-1α mBNA的表达在缺血缺氧后12、24 h,3和7 d均明显高于生理盐水组(均P<0.05).结论 新生大鼠HIBD时HIF-1α mBNA表达增强,参麦注射液可提高新生大鼠HIBD后的HIF-1α mRNA的表达,减少新生大鼠缺氧缺血后神经元凋亡的发生.     

新生鼠反复低血糖引起神经元变性的动态观察

目的 建立新生鼠低血糖脑损伤模型,并观察损伤后不同脑区神经元变性的动态变化。方法 160只新生Wistar大鼠随机分为胰岛素诱导短时间低血糖组(INS-S组,n=40)、胰岛素诱导长时间低血糖组(INS-P组,n=40)、饥饿组(FAS组,n=40)和对照组(CON组,n=40)。在大鼠出生后第2、4、6天分别采用皮下注射胰岛素(15U/kg)和饥饿的手段,诱导新生鼠低血糖;在生后第6天诱导低血糖后2h、6h、1d、3d、7d和14d采用Fluoro-Jade B(FJB)染色法观察7个脑区变性神经元的动态变化,并应用特异性神经核抗原(NeuN)荧光免疫双标对FJB阳性细胞进行细胞类型鉴定。结果 INS-S组、FAS组和CON组新生大鼠各脑区各时间点均未见FJB阳性细胞,而INS-P组在旁矢状面、梨状皮层、海马齿状回、丘脑和下丘脑可见大量的FJB阳性细胞,并同时显示NeuN免疫源性。结论 胰岛素(15U/kg)皮下注射可建立稳定可靠的新生鼠低血糖脑损伤模型。新生鼠反复严重低血糖可引起广泛的神经元变性,皮层、丘脑、下丘脑和海马齿状回对低血糖损害更为敏感。     

Topiramate对宫内缺血大鼠脑组织含水量及神经细胞凋亡的影响

目的 : 观察topiramate对宫内急性脑缺血损伤的Wistar大鼠神经细胞凋亡及脑组织含水量的影响。方法 : 夹闭足月妊娠大鼠子宫血管，制成急性脑缺血损伤的新生鼠模型(n=315)，随机分为topiramate 1次和5次给药组及缺血组（n=105），另取105只正常Wistar大鼠作为正常对照组。治疗组给予topiramate，观察脑缺血后再灌注3 h、6 h 、24 h、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d海马TUNEL法标记的凋亡神经细胞的变化及生后7 d内脑组织 含水量的变化。结果 ： topiramate 1次组脑组织含水量12和72 h显著低于缺血对照组，topiramate 5次组48和72 h显著低于缺血对照组及topiramate 1次组（P<0.05）；topiramate 1次组24 h、3 d、7 d、21 d 凋亡神经细胞数明显低于缺血对照组，topiramate 5次组3和7 d凋亡神经细胞数明显低于缺血对照组和topiramate1次组（P<0.05）。结论 ： topiramate可以明显减少宫内急性脑缺血后新生大鼠神经细胞的凋亡数目，并可以缩短凋亡持续时间；延缓脑水肿的发生，减轻脑水肿的程度, 并缩短其持续时间,多次给药组的作用明显高于1次给药 组。     

BIA法评估维持性血液透析患者水平衡及干体质量

目的采用全身生物电阻抗分析（BIA）法评估维持性血液透析（MHD）患者水平衡动态变化及于体质量。方娃选择血液透析龄≥1年且病情稳定的20例MHD患者作为研究对象（MHD组）,分别于血液透析前后及透析间期（透析后24h和48h）采用BIA法测定细胞外液量（ECW）和细胞内液量（ICW）,计算并获得相关指标;分析MHD患者0h达到干体质量与否及其平均每日尿量对ECW和ICW的影响。以20名健康志愿者作为正常对照组。结果与正常对照组比较,MHD组透析前理想体质量纠正的ECW明显升高（P〈0．05）。在MHD组中,血液透析后ECW较透析前明显下降（P〈0．05）;与透析前和透析间期比较,血液透析后ECW／机体总水量（TBW）降低,ICW／TBW升高,差异均有统计学意义（P〈0．05）;各时间点ICW和ECW与患者相应体质量显著相关;达到干体质量患者0h和24h时间点理想体质量纠正的ICW和ECW均明显高于未达到干体质量患者（P〈0．05）;尿量〈400mL／d的患者透析前和透析后24h,ECW和ICW均显著低于尿量≥400mL／d的患者（P〈0．05）。结论BIA法研究提示,MHD患者血液透析前后及透析间期水平衡动态变化以ECW为主,评价指标以ECW／TBW较为敏感;理想体质量纠正的ICW和ECW可能是评判干体质量的敏感指标。     

依达拉奉对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织MMP-9的影响

目的观察依达拉奉对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠脑组织基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响,探讨依达拉奉对新生大鼠HIBD的保护作用。方法随机将7日龄Wistar大鼠108只分为3组（假手术组、HIBD组、依达拉奉治疗组）,每组36只。根据造模后处死时间,各组又分6个亚组：6h、1d、2d、3d、5d、7d组,每亚组各6只。通过结扎左颈总动脉和吸入8%低氧混合气制备缺氧缺血性脑损伤（HIBD）动物模型。假手术组动物只分离左颈总动脉,不结扎,亦不做低氧处理。治疗组于缺氧缺血后即刻给予腹腔注射生理盐水稀释的依达拉奉注射液（2mg/kg,每24h1次,连续5d。HIBD组和假手术对照组腹腔注射等量生理盐水）。分别于相应时点断头处死各组动物,取脑,采用干湿质量法测定大鼠脑组织含水量,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测MMP-9mRNA的表达情况。结果 HIBD组大鼠脑组织含水量在缺氧缺血后逐渐上升,2d时达到高峰,各时间点均高于假手术组（P〈0.05）。同时,MMP-9mRNA表达量与脑含水量呈相应逐渐上升改变,MMP-9mRNA表达量与脑组织含水量呈正相关。依达拉奉治疗组与HIBD组相比,脑组织含水量明显下降（P〈0.05）,MMP-9mRNA表达量显著下调（P〈0.05）。结论 MMP-9参与了HIBD脑水肿的发生发展过程,依达拉奉可降低脑组织MMP-9的表达,从而减轻脑水肿,这可能是其脑保护作用机制之一。