VEGF受体flt-1和KDR在骨髓间充质干细胞中的表达及意义

目的:观察血管内皮生长因子(VEGF)受体flt1和KDR在成人骨髓间充质干细胞(MSCs)的表达情况,探讨MSCs分化为血管内皮细胞的可能性。方法:采用Percoll(1.073g·mL-1)分离液分离骨髓单个核细胞,体外培养MSCs,流式细胞术分析鉴定MSCs的纯度,在激光共聚焦扫描显微镜(LSCM)下观察flt1和KDR的表达,RTPCR检测VEGF作用下flt1及KDR表达改变情况。结果:经Percoll分离、体外培养扩增的MSCs,细胞纯度可达95%左右;flt1和KDR定位于MSCs的胞膜及胞浆;经VEGF处理的MSCs和flt1mRNA的表达较对照组增强,KDRmRNA的表达无明显改变。结论:培养的MSCs在体外稳定扩增,具有VEGF受体,传导VEGF的刺激,在适宜的环境和诱导因子的作用下,MSCs有望分化为血管内皮细胞。     

三羧氨基喹啉对人舌鳞状细胞癌Tca8113裸鼠移植瘤效应及其机制研究

目的:观察三羧氨基喹啉(Linomide)对人口腔癌裸鼠移植瘤的治疗作用,并探讨其作用机制。方法:建立人舌癌裸鼠移植瘤模型,观察Linomide对肿瘤生长的抑制作用,采用免疫组化染色检测Linomide治疗组和对照组荷瘤裸鼠的肿瘤微血管密度(MVD)的变化,用半定量RT-PCR方法研究治疗组和对照组肿瘤组织中VEGF和VEGF受体FltlmRNA表达的改变,并测定各组小鼠血清VEGF水平的变化,同时,用原位末端标记(TUNEL)法观察治疗组和对照组裸鼠瘤体内肿瘤细胞凋亡的发生情况。结果:Linomide治疗组的裸鼠皮下肿瘤生长明显受到抑制,平均瘤重低于对照组(P<0.01)。结论:Linomide可有效抑制人舌鳞状细胞癌裸鼠移植瘤的生长,降低肿瘤微血管密度,通过抑制血管形成而发挥抗肿瘤作用,Linomide可抑制瘤组织VEGF受体FltlmRNA的表达;Linomide治疗荷瘤裸鼠后可诱导肿瘤细胞发生凋亡。     

VEGF反义寡核苷酸对裸鼠荷胃癌肿瘤的生长抑制作用研究

目的 研究血管内皮细胞生长因子反义寡核苷酸(VEGF-ASODN)对裸鼠荷人胃癌肿瘤的生长抑制作用.方法 人工合成硫代磷酸化VEGF-ASODN,建立人胃癌荷瘤裸鼠移植瘤模型(共3组),实验分为4组,(1)VEGF-ASODN组:于瘤体及瘤周注射VEGF-ASODN66μg;(2)错义寡核苷酸组:注射错义寡核苷酸66μg;(3)生理盐水组:注射生理盐水,每3d1次,共治疗7次;(4)另设无荷瘤对照组.实验结束后2 d,处死动物,取血清测VEGF蛋白,测量肿瘤大小及重量,取肿瘤组织用流式细胞技术测增殖细胞核抗原(PCNA)及HE切片染色检查.结果 VEGF-ASODN能抑制VEGF的表达,显著降低荷瘤裸鼠血清VEGF蛋白水平,减小肿瘤的体积和重量,PCNA表达量VEGF反义治疗组76.16%,错义寡核苷酸组87.50%,生理盐水组91.16%.结论 VEGF-ASODN通过抑制VEGF表达,从而能抑制胃癌细胞的生长、增值.     

人舌癌移植瘤模型中血管内皮细胞来源的实验研究

目的观察人舌癌裸鼠皮下移植瘤模型中肿瘤新生血管内皮细胞的来源。方法通过皮下移植人舌癌Tca8113-M1细胞建立人舌癌裸鼠移植肿瘤模型,并于肿瘤生长至直径1cm时切除肿瘤,对移植瘤进行病理组织学观察,利用免疫组织化学方法检测移植瘤内新生血管内皮细胞的来源,抗体为鼠抗人单克隆抗体CD34和大鼠抗小鼠单克隆抗体CD34;并进行微血管密度（microvessel density,MVD）计数及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达检测。结果右腋窝皮下接种人舌癌Tca8113-M1细胞2周后,6只裸鼠的肿瘤直径都达到1cm以上,切片HE染色可见肿瘤组织病理形态为鳞状上皮细胞癌,MVD平均值为10．72±2．12,其中肿瘤新生血管内皮细胞大鼠抗小鼠CD34免疫组化结果是阳性,而鼠抗人CD34阴性。VEGF在6例移植瘤标本中均阳性表达,平均阳性率为（67±5．6）％。结论人舌癌移植瘤模型中血管内皮细胞主要来源于宿主裸鼠,并且可能与肿瘤细胞分泌的VFGE诱导有关。     

胃安宁颗粒对肿瘤血管VEGF Ki-67表达影响的实验研究

目的：观察胃安宁颗粒对SGC-7901荷瘤裸鼠血管VEGF、Ki-67表达的影响。方法：将裸鼠皮下接种胃癌SGC-7901细胞后随机分为对照组、阳性药组及胃安宁颗粒大、中、小剂量组,用药后分别计算瘤重系数,并将肿瘤组织进行免疫组织化学染色,检测VEGF、Ki-67表达的情况。结果：胃安宁颗粒大、中剂量均能明显降低荷瘤裸鼠瘤重和瘤重系数（P〈0.05～0.001）,免疫组织化学染色显示,应用胃安宁颗粒后肿瘤组织VEGF、Ki-67的表达有所下降。结论：胃安宁颗粒可能通过抑制VEGF、Ki-67的表达起到抑制肿瘤血管生成的作用,从而达到抗肿瘤的目的。     

多西紫杉醇在肝癌细胞裸鼠肝脏移植瘤中对P53、VEGF作用的研究

目的探讨多西紫杉醇在肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠皮下移植瘤中与血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤抑制蛋白(p53)表达的研究.方法建立肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠皮下移植瘤模型,建模成功后,将20只裸鼠分成两组,多西紫杉醇组及肿瘤对照组.3周后处理裸鼠,应用免疫组化Envision法检测实验组与对照组肝癌组织中p53、VEGF表达情况.结果实验组肝癌组织中p53表达阳性率41.26%,显著低于对照组肝癌组织的p53表达阳性率87.16%,两者间差异有统计学意义(P<0.05).实验组肝癌组织中VEGF表达阳性率为36.79%,显著低于对照组肝癌组织的VEGF表达阳性率68.27%,两者间差异有统计学意义(P<0.05).结论p53在诱导肝癌细胞凋亡中起到重要作用,VEGF过度表达在肝癌微血管生成过程中起重要作用,多西紫杉醇可降低p53、VEGF的表达,从而起到移植肿瘤生长及转移的作用.     

α 1,2-岩藻糖转移酶基因转染对卵巢癌细胞RMG-1裸鼠体内致瘤性及血管生成因子表达的影响

目的 比较α1,2岩藻糖转移酶(α1,2-FT)基因转染前后卵巢癌细胞株RMG-Ⅰ的裸鼠体内致瘤性及移植瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及碱性成纤维生长因子(b-FGF)表达的变化.方法 我们在前期工作中利用基因转染技术将α1,2-FT基因转入人卵巢癌细胞株RMG-Ⅰ,建立了α1,2-FT及Lewis y高表达细胞株RMG-I-H.本实验将转染前后细胞种植裸鼠皮下建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,观察两组肿瘤生长情况.5周后处死动物,测量移植瘤质量,免疫组织化学方法检测肿瘤组织VEGF、TGF-β1及b-FGF的表达.结果 两组裸鼠均有皮下荷瘤形成,但转染组的成瘤时间(5.2±0.8d)早于未转染组(8.8±1.3d),且转染组的瘤质量和体积与未转染组相比亦明显增加(P<0.05).转染组裸鼠移植瘤组织VEGF、TGF-β1及b-FGF的表达均明显高于未转染组(P均<0.05).结论 α1,2-FT基因转染能增强卵巢癌细胞RMG-Ⅰ的体内致瘤性,上调裸鼠移植瘤组织VEGF、TGF-β1及b-FGF的表达.提示α1,2-FT及Lewis y抗原参与血管生成,其高表达在促进血管生成中可能发挥重要作用.     

POFUT1对人胃腺癌裸鼠移植瘤微血管生成的抑制作用

目的探讨POFUT1对人胃腺癌裸鼠移植瘤微血管生成的影响及其作用机制。方法制备人胃腺癌BGC823的POFUT1慢病毒低表达及对照组、过表达及对照组细胞模型,分别命名为shRNA-POFUT1-BGC82组、shRNA control-BGC823组、PLV-POFUT1-BGC823组及PLV control-BGC823组。采用皮下成瘤的方法,分别用这4组细胞构建裸鼠皮下移植瘤模型（每组5只）,观察和测算肿瘤体积。30d后处死裸鼠并取瘤,采用免疫组化方法检测裸鼠瘤组织中VEGF和CD31的表达;Western印迹法检测裸鼠瘤组织中POFUT1和VEGF的表达。结果20只裸鼠全部成瘤,实验过程无死亡。与PLV control组相比,PLV-POFUT1组裸鼠肿瘤体积显著增加（P<0.05）;shRNA-POFUT1较shRNA control组裸鼠肿瘤体积明显偏小（P<0.05）。免疫组化结果显示,与PLV contro1组相比,PLV-POFUT1组瘤组织中VEGF和CD31表达显著增高（P<0.05）;与shRNA control组相比,shRNA-POFUT1组则明显降低(P<0.05)。与shRNA control组相比,shRNA-POFUT1组POFUT1和VEGF蛋白表达水平均显著下调;PLV-POFUT1组较PLV contro1组,其POFUT1和VEGF蛋白水平均显著增强（P<0.05）。结论过表达POFUT1可以显著促进裸鼠移植瘤的增殖和肿瘤微血管形成,低表达POFUT1可抑制裸鼠移植瘤的增殖和肿瘤微血管形成,表明POFUT1在人胃 腺癌裸鼠移植瘤的微血管形成中起着重要的作用,其机制可能与VEGF密切相关。     

苦参素与顺铂合用对人肝癌裸鼠皮下移植瘤组织VEGF、CD31表达的影响和意义

目的 分析苦参素与顺铂合用对人肝癌裸鼠皮下移植瘤组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)表达的影响及临床意义.方法 建立40只人肝癌裸鼠模型,随机分为4组(对照组、苦参素组、顺铂组、联合组),采用腹腔注射方式给药,给予对照组裸鼠注射生理盐水,给予苦参素组裸鼠注射苦参素,给予顺铂组大鼠注射顺铂,给予联合组裸鼠注射苦参素和顺铂,给药结束后第15天将4组裸鼠处死,取皮下移植瘤组织,对比4组抑瘤率,采用免疫组织化学染色法检测4组裸鼠皮下移植瘤组织中VEGF、CD31的表达情况.结果 联合组裸鼠的肿瘤体积小于其他3组裸鼠,差异具有统计学意义(P＜0.05).VEGF阳性率检出率为20.00％,低于苦参素组的80.00％、顺铂组的70.00％、对照组的100.00％,差异具有统计学意义(P＜0.05).联合组裸鼠的CD31阳性率检出率为30.00％,低于苦参素组的90.00％、顺铂组的70.00％、对照组的100.00％,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 苦参素与顺铂合用能够抑制人肝癌皮下移植瘤组织中VEGF、CD31的表达,延缓肿瘤生长.     

血管内皮生长因子及其受体在肺癌组织中表达的研究

目的　探讨血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(Flt 1及Flk 1/KDR)与肺癌临床指标及预后的关系。方法　收集6 0例原发性支气管肺癌标本及10例正常肺组织,应用免疫组化方法检测肺癌组织及正常肺组织VEGF、Flt 1及KDR的表达。结果　肺癌组织VEGF、Flt 1及KDR的表达较正常肺组织增强,阳性率分别为6 1 6 %、4 6 6 %及6 0 0 %。VEGF、Flt 1及KDR在肺癌细胞、血管内皮细胞、间质成纤维细胞均呈阳性表达,以癌细胞表达最强。VEGF及KDR表达在不同淋巴结转移及临床分期之间存在显著性差异。肺癌组织VEGF和KDR的表达具有相关性及一致性。CoxRegression风险比例模型分析提示VEGF表达程度为影响肺癌患者预后的指标。结论　VEGF可由肿瘤细胞、血管内皮细胞、间质成纤维细胞等多种细胞产生。VEGF和KDR在肺癌淋巴结转移及临床分期中起重要作用,VEGF可作为肺癌患者判断预后的可靠指标。VEGF主要通过受体KDR介导发挥其生理作用     

HIF-1α基因转染人胃腺癌SGC7901细胞对裸鼠移植瘤的影响及机制

目的 探讨低氧诱导因子(HIF)-1α基因转染人胃腺癌SGC7901对裸鼠移植瘤血管生成及EphA2表达的影响及其可能机制.方法 采用HIF-1α基因重组质粒pGCsi-shHIF-1α,转染胃腺癌SGC7901细胞并接种裸鼠(SGC7901/shRNA,实验组),建立裸鼠皮下人胃腺癌移植瘤模型,动态观测裸鼠肿瘤体积和质量;设SGC7901(未转染组)、转染空质粒的SGC7901(SGC7901/Neo,空载体组)为对照.观察移植瘤生长情况,8周后,获取移植瘤模型瘤组织,称取湿重,免疫组化SP法检测移植瘤组织的微血管密度,Western blot检测上皮细胞激酶A2(EphA2)表达.结果 与未转染组比较,空载体组瘤体积、质量改变不明显,HIF-1α转染的实验组的瘤体积、质量明显降低;HIF-1α转染的实验组诱导血管增生、形成血管生成拟态和EphA2蛋白表达较未转染组组、空载体组明显降低(P<0.05,P<0.01).结论 HIF-1α基因转染可明显抑制裸鼠人胃腺癌移植瘤的生长,该作用可能与其抑制肿瘤血管新生、形成血管拟态及EphA2蛋白表达有关.     

羟基红花黄色素A抑制异常增殖血管内皮细胞的机制研究

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)抑制异常增殖血管内皮细胞的作用机理。方法建立人结肠腺癌细胞LS180上清液和人脐静脉内皮细胞ECV304体外共培养模型,通过实时荧光定量PCR检测ECV304细胞中血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(KDR)、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)及其受体(b FGFR)、HSPG2、p53、c-myc mRNA水平的表达;ELISA法检测细胞培养上清VEGF、VEGFR(KDR)、b FGF、b FGFR蛋白的表达。结果在共培养细胞模型中,0.66、0.33 mg/L浓度的HSYA对血管生成促进因子VEGF及其受体KDR、b FGF及其受体b FGFR和癌基因c-myc及与细胞增殖相关蛋白多糖HSPG2的mRNA表达具有抑制作用;对抑癌基因p53 mRNA的表达具有促进作用。0.66、0.33 mg/L浓度的HSYA对血管生成促进因子VEGF及其受体KDR、b FGF及其受体b FGFR的蛋白表达具有抑制作用。结论 HSYA抑制新生血管的生成、抑制共培养模型中血管内皮细胞的异常增殖,其可能的作用机理是通过调控VEGF及其受体、b FGF及其受体、HSPG2、c-myc和野生型p53的表达发挥抗肿瘤作用,揭示HSYA可能是潜在的肿瘤血管生成抑制剂。     

人胃癌SGC7901/VCR裸鼠移植瘤模型的建立及耐药性检测

目的建立人胃癌SGC7901/VCR裸鼠移植瘤模型,并检测其多药耐药性,为进行肿瘤多药耐药逆转剂的筛选和体内实验研究奠定基础。方法采用皮下接种法建立裸鼠移植瘤模型;观察裸鼠生长状况;移植瘤生长情况;进行瘤重及瘤体积比较;移植瘤P-gp耐药蛋白表达;原代培养细胞,检测移植瘤模型多药耐药性。结果人胃癌SGC7901/VCR裸鼠移植瘤组织病理学检查为低分化腺癌,移植瘤组织原代细胞培养后,P-gp表达强阳性+++,具有多药耐药性,模型建立成功。结论成功建立了人胃癌SGC7901/VCR裸鼠多药耐药移植瘤模型,为胃癌耐药研究提供了较理想的动物模型。     

人胃癌细胞悬液裸小鼠原位移植模型建立及其部分生物学特性

目的 建立人胃癌裸小鼠原位移植模型,观察其部分生物学特性。方法 用人胃低分化腺癌细胞（ＳＧＣ－７９０１）悬液种植于小裸小鼠胃壁,观察原位移植瘤的生长情况、移植成功率和自发转移的发生率。结果 原位移植成功率（成瘤率）为６７％。移植瘤的局部淋巴结转移率８５％,远处淋巴结转移率５０％,肝转移发生率３０％。荷瘤鼠的中位生存期为１６周,晚期出现消瘦和全身衰竭。结论 该裸小鼠原位移植模型具有人胃癌自然生长过程     

重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子体外抗血管内皮细胞增殖的活性

目的：研究重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子（VEGI）体外抗血管内皮细胞增殖的活性。方法：MTT法检测重组人可溶性VEGI对血管内皮细胞及肿瘤细胞增殖的抑制活性。结果：在体外,重组人可溶性BEGI可强烈抑制人脐静脉内皮细胞ECV304、大鼠肺源毛细血管内皮细胞（MPCEC）及新生牛主动脉内皮细胞（BAEC）的增殖,不能报制黑色素瘤细胞B－16和小鼠成纤维细胞L－929的增殖。结论：重组人可溶性VEGI能作用于不同来源的血管内皮细胞,而对肿瘤细胞增殖无抑制作用,提示其可能通过抗肿瘤新生血管生成而发挥抗肿瘤作用。     

血管内皮生长因子及其受体在人胃癌组织中的分布和意义

目的：探讨ＶＥＧＦ在固体肿瘤生长，进展，转移过程中的作用为通过阻断ＶＥＧＦ与其受体ＫＤＲ的作用治疗肿瘤提供依据。方法；采用免疫组织化学ＡＢＣ法对５０例人胃癌组织中的血管内皮生长因子及其受体的定位与分布进行研究。结果：５０％的胃癌组织表达ＶＥＧＦ，阳性物质主要位于肿瘤细胞胞膜及胞浆，ＫＤＲ染色阳性物质主要位于癌组织及癌组织旁的血管内皮细胞上。     

VEGF、VEGFR2(KDR)、MMP-1以及转录调节因子Ets-1在子宫颈癌组织中的表达及其意义

目的 从分子水平观察肿瘤血管生成因子VEGF、VEGF受体KDR、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及其转录调节因子Ets-1(E26 tranformation-specific-1,Ets-1)在子宫颈癌中的表达并揭示其因子间相互关系,为判断患者预后和解释促血管生成因子间内在规律提供根据。方法 利用原位杂交和免疫组织化学染色法检测87例子宫颈癌组织中VEGF、KDR、MMP-1以及Ets-l等因子mRNA和蛋白表达规律;患者生存曲线比较在阴性组和阳性组间进行;因子间分析利用Pearson相关分析法。结果 VEGF mRNA和蛋白主要分布在癌细胞胞质中,阳性率分别为78．6％(68／87)和70．4％(61／87);KDR mRNA和蛋白主要在内皮细胞上表达,其表达率与VEGF表达率间存在密切的相关关系,r=0．892;MMP-1在肿瘤细胞和间质血管内皮细胞中表达,尤其在血管新生处表达明显;Em-1主要分布在内皮细胞和肿瘤细胞中,其表达率与KDR和IVl／vtP-1表达率间的相关系数(r)分别为0．900和0．873;上述四因子表达与肿瘤分化度、淋巴结转移及5年存活率均有密切的相关性。结论 VEGF、KDR、MMP-1以及Ets-1是参与子宫颈癌血管生成的重要因子,且彼此间存在密切的相关性,检测其表达规律可为判断子宫颈癌生物学行为和解释促血管生成因子间内在联系提供理论根据。     

环氧合酶-2抑制剂抑制胃癌转移的实验研究

目的研究环氧合酶-2抑制剂SC236对胃癌转移的影响，并初步探讨其作用机制。方法用人胃癌细胞株SGC7901建立裸鼠人胃癌原位移植瘤模型，随机分为实验组和对照组，分别经尾静脉注射SC236和生理盐水，观察各组生存期和肿瘤转移情况，并通过免疫组化方法检测移植瘤MVD、VEGF及MMP-2蛋白的表达。结果与对照组相比，SC236可明显延长荷瘤鼠生存期，抑制胃癌转移，降低移植瘤MVD，减低移植瘤VEGF及MMP2蛋白的表达。结论SC236能有效抑制胃癌的转移。其机制可能与其抑制肿瘤的血管生成、减低MMP-2的表达有关。     

丹参多酚酸盐对裸鼠HCC 系人肝癌细胞株SMMC-7721 移植瘤的影响

目的：观察丹参多酚酸盐对人肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠皮下移植瘤的影响,探讨其对肝癌肿瘤的作用 机制。方法：建立裸鼠肝癌肿瘤模型,将36只裸鼠(雌雄各半)随机分成6组,每组6只,分别为模型组、阴性对照组 (生理盐水组)、阳性对照组(顺铂组)、3种不同质量浓度(10,20,50 mg/kg)的丹参多酚酸盐给药组。在裸鼠长出肉眼 可见瘤体后注射丹参多酚酸盐治疗16 d收集皮下肿瘤标本。肿瘤标本进行HE检测观察组织形态变化和免疫组织化学 检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和肿瘤增殖抗原Ki67的表达情况,以验证是否抑制肿瘤 细胞生长、增殖。结果：各用药组的肿瘤生长受到抑制,肿瘤组织细胞形态较之模型组和阴性对照组呈现皱缩、破 碎、 不规则排列;且随着给药剂量的增大形态学改变更明显。丹参多酚酸盐给药组和顺铂组的VEGF和Ki67表达量均 较模型组和阴性对照组低(P<0.05)。结论：丹参多酚酸盐能抑制裸鼠HCC系人肝癌细胞株SMMC-7721移植瘤的生长, 其机制可能与下调Ki67和VEGF有关。