六神丸含药血清制备的方法学研究

[目的]研究六神丸含药血清的制备,探讨六神丸血清药理学的实验方法。[方法]分不同的给药剂量、给药天数和不同的采血时间制备含药血清。用原子吸收法测定血砷含量;薄层色谱法定性检测六神丸含药血清中蟾酥成分。用四氮唑溴盐(MTT)法确定最佳血清制备方案。[结果]血砷含量随着给药剂量、给药天数增加和采血时间的延长而升高;薄层色谱表明六神丸含药血清中有蟾酥成分。六神丸含药血清对人髓系白血病细胞株-60(HL-60)细胞的抑制率,随给药剂量、天数增加、采血时间的延长而升高,且随着含药血清的添加量而升高。[结论]中药血清药理学含药血清的制备应区分不同的中药,采用相应的方案。     

益心定悸方含药血清对人脐静脉内皮细胞VEGF表达影响的研究

[目的] 通过观察益心定悸方对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响探讨其治疗冠心病快速心律失常的作用机制, 同时为临床应用提供客观依据。[方法] 用20只雄性Wistar大鼠制备含药血清, 将内皮细胞接种在两种血清培养基上, 采用免疫组化方法测定VEGF的表达。[结果] 含药血清组细胞边界和核结构清晰细胞核颜色深染, 正常血清组VEGF仅有微弱表达。[结论] 益心定悸方能够明显促进VEGF表达, 这可能是本方治疗冠心病快速心律失常的作用机制之一。     

救心胶囊对LDL损伤内皮细胞抗氧化损伤能力影响的实验研究

[目的]观察救心胶囊对低密度脂蛋白(LDL)损伤后内皮细胞抗氧化损伤能力的影响,以探讨该复方保护内皮细胞和防治冠心病的作用机制。[方法]运用内皮细胞培养技术,建立LDL损伤模型,并以两种不同的给药方式——无菌中药提取液和载药血清进行分组培养,并观察内皮细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的变化。[结果]内皮细胞LDL损伤后,其SOD活性显著降低,而MDA含量明显升高,而中药处理后能有效抑制上述改变。[结论]救心胶囊能增强细胞的抗氧化损伤能力,具有良好的保护内皮细胞的作用。     

犀黄丸对大肠癌LoVo细胞基质金属蛋白酶2,9蛋白表达的影响

[目的] 研究犀黄丸含药血清对大肠癌LoVo细胞中基质金属蛋白酶-2,9(MMP-2,MMP-9)表达的影响及意义.[方法] 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测犀黄丸含药血清作用下LoVo细胞培养上清液中MMP-2、MMP-9的蛋白表达水平.[结果] 在犀黄丸含药血清的干预下,LoVo细胞中MMP-2、MMP-9的蛋白分泌水平与空白对照组比较明显下调,差异具有统计学意义(P < 0.05).[结论] 犀黄丸可能通过抑制MMP-2和MMP-9的蛋白表达,达到抑制大肠癌转移的作用.     

救心胶囊对损伤内皮细胞黏附因子表达的影响

[目的]观察救心胶囊通过抑制损伤内皮细胞黏附因子的表达,保护内皮细胞功能。[方法]通过建立缺氧及低密度脂蛋白(LDL)损伤内皮细胞模型,并以两种不同的给药方式:无菌中药提取液和载药血清,运用免疫细胞化学的方法检测黏附分子的表达。[结果]内皮细胞损伤后黏附分子表达明显增加,救心胶囊显著降低其表达。[结论]救心胶囊保护内皮细胞,使其免受炎症介质损伤,从而延缓冠心病(CHD)的发生发展。     

山茱萸总苷及其含药血清对MSCs增殖的影响

[目的] 探讨山茱萸总苷及其含药血清对骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响。[方法] 分离、培养大鼠MSCs,分别加入山茱萸总苷及其含药血清, 运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度山茱萸总苷及其含药血清对大鼠MSCs增殖的影响。[结果] 大鼠灌胃1 h后采血所得含药血清以20%的浓度干预时具有最佳的促MSCs增殖作用, 山茱萸总苷最佳促MSCs增殖浓度为625 μg/mL.[结论] 山茱萸总苷及其含药血清可促进大鼠MSCs增殖。     

基于妊娠期应用中药安全性评价体系探讨黄芩的胚胎毒性

[目的] 利用妊娠期应用中药安全性评价体系,应用胚胎干细胞实验(EST)方法,通过对中药-含药血清-胚胎蓄积组分的综合评价,揭示黄芩的胚胎毒性,验证妊娠期应用中药安全性评价体系的客观性.[方法]分别将胚胎干细胞D3系(ES-D3)和胚胎成纤维细胞(Balb/c 3T3)在不同浓度黄芩培养液和20%黄芩含药血清培养液中培养,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,绘制细胞生长曲线,分别计算50%的ES细胞和3T3细胞增殖受抑制的黄芩浓度,即IC₅₀D3和IC₅₀3T3.利用悬滴-悬浮-贴壁方法,体外培养ES细胞向心肌细胞分化,实时定量PCR(Q-PCR)方法检测肌球蛋白重链基因(β-MHC)的表达量,计算50%的ES细胞分化受抑制的黄芩浓度,即ID₅₀D3.利用生物统计公式,预测黄芩及其含药血清的胚胎毒性.[结果]黄芩的IC₅₀D3、IC₅₀3T3、ID₅₀D3分别为25.58、42.20、0.28 μg/mL,预测其具有强胚胎毒性.低、高剂量黄芩含药血清对3T3细胞和ES细胞增殖均呈现抑制作用,ES细胞分化为心肌细胞β-MHC表达量为空白血清表达量的32.5%.[结论]黄芩存在胚胎毒性,应用中药-含药血清的综合评价方法,能够客观准确评价中药的胚胎毒性.     

益气养阴方抗血管生成抑制肿瘤转移作用的研究

[目的]研究益气养阴方抗血管生成抑制肿瘤转移的效应。[方法]制备接种肿瘤细胞的鸡胚尿囊膜(CAM)模型,采用血清药理学方法制备含药血清。观察含药血清对肿瘤细胞诱导CAM血管生成的影响,并与生理盐水血清组对照。另用小鼠经肌肉接种U14子宫颈癌细胞悬液,观察小鼠实体瘤的瘤质量、抑瘤率、肺部转移率、肺部转移瘤生长情况。[结果]益气养阴方含药血清可抑制肿瘤细胞诱导CAM血管生成,与生理盐水组比较差异具显著性。益气养阴方组的肺部转移结节较模型组明显减少,并且明显改善化疗对机体的免疫损伤。[结论]益气养阴方对肿瘤细胞诱导的CAM血管生成有明显抑制作用,并且益气养阴方对自发性转移模型有一定的抑制作用。     

活血化瘀注射液(HHI-I)对TNF-α诱发大鼠肺微血管内皮细胞黏附分子mRNA表达的影响

[目的]从调节白细胞内皮细胞过度黏附角度研究活血化瘀中药的作用机制。[方法]体外培养肺微血管内皮细胞,RT-PCR方法观察活血化瘀注射液对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱发的体外培养大鼠肺微血管内皮细胞E-选择素、P-选择素、细胞间黏附分子ICAM-1mRNA表达的影响。[结果]肺微血管内皮细胞与含TNF-α培养基共同孵育后,可显著增加内皮细胞E-选择素、P-选择素、ICAM-1mRNA表达,在培养基中加入活血化瘀注射液含药血清后,则内皮细胞E-选择素、P-选择素、ICAM-1mRNA过度表达被明显抑制。[结论]抑制内皮细胞E-选择素、P-选择素、ICAM-1mRNA过度表达是活血化瘀重要的作用机制之一。     

灵芪胶囊含药血清对K562白血病细胞的诱导凋亡作用

[目的]观察灵芪胶囊含药血清在体外对K562白血病细胞凋亡的影响。[方法]采用血清药理学方法制备灵芪胶囊含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562白血病细胞,采用流式细胞仪(FCM)及DNA片段凝胶电泳观察和检测细胞凋亡情况。[结果]不同浓度灵芪胶囊含药血清能够诱导K562细胞的凋亡,且凋亡率随着剂量的增加而增大,与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01);DNA琼脂糖凝胶电泳谱可见典型的DNA梯形带形成。[结论]灵芪胶囊含药血清具有诱导细胞凋亡的作用,其作用强度与时间—浓度呈正相关。灵芪胶囊含药血清对K562细胞发生细胞毒作用可能与诱导K562细胞凋亡有关。     

血清含量对HaCaT细胞生长特性及迁移能力的影响

[目的] 考察不同血清含量以及培养不同时间对人永生化角质形成细胞(HaCaT)细胞的生长及迁移特性的影响,为HaCaT细胞划痕实验条件优化提供实验数据支撑。[方法] 培养HaCaT细胞,按10%血清浓度全培基(全培基阳性对照组)、2%低浓度血清培基(低血清培基组)及无血清培基(对照组)分组,通过进行细胞划痕实验,CCK-8细胞活力检测、Brdu细胞增殖实验,分析HaCaT生长特性。[结果] 在24 h内,低血清培基组HaCaT细胞与全培基组相比,细胞增殖能力无明显差异,细胞活力有增高的趋势。细胞孵育48 h后,全培基组细胞增殖能力及活力明显升高。24~48 h,全培基组细胞增殖能力及细胞活力的提升速度明显高于低血清培基组。[结论] 培养基中血清含量对HaCaT细胞生长特性及迁移能力具有重要影响,培养24 h内低血清培养条件有利于划痕实验的观察与测定。     

从五脏论治小儿便秘

从中医五脏辨证理论对儿童便秘的病因病机及治法方药进行总结,发现儿童便秘与心肝脾肺肾五脏关系密切,通过临床脏腑辨证选方用药可减轻患儿便秘症状。从五脏辨证施治儿童便秘,在改善临床症状方面作用明显。     

消脂胶囊对家兔动脉粥样硬化干预的实验研究

[目的] 观察消脂胶囊对家兔动脉粥样硬化(AS)的防治作用,为今后进一步研究提供实验依据.[方法] 将实验动物分为对照组、模型组、消脂胶囊高剂量组和消脂胶囊低剂量组,于治疗结束时(给药10周后),耳缘静脉取血,检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、脂联素(ADP)、C反应蛋白(CRP)和 内皮素-1(ET-1)含量;同时测量血压;取心脏、主动脉、下肢动脉、肝脏,以12%甲醛溶液固定,进行组织病理学检查,对AS评分,分析得出动脉硬化指数.[结果] 消脂胶囊给药10周后,消脂胶囊高剂量组家兔血清中SOD活性显著升高,消脂胶囊高、低剂量组家兔血清中ADP含量显著升高,MDA、CRP、ET-1含量明显降低,家兔收缩压下降,而消脂胶囊低剂量组家兔的舒张压下降.组织病理学结果显示,消脂胶囊高、低剂量组均能对主动脉及心肌内小动脉动脉AS及肝细胞空泡变性的病变程度有不同程度的减轻.[结论] 消脂胶囊能够对家兔AS病变指标产生有效调节,调节动脉AS家兔血压,清除自由基,防止脂质过氧化,减少炎症介质产生和保护血管内皮细胞的作用,表明该药对家兔AS病变的发生和发展有较好的防治作用.     

大承气颗粒药物血清对小鼠肠上皮内淋巴细胞增殖的作用*

[目的]探讨大承气颗粒药物血清对小鼠肠上皮内淋巴细胞(IELs)的增殖作用及其作用途径.[方法]分离、鉴定、培养Balb/c小鼠IELs;制备不同浓度的大承气颗粒单次灌胃大鼠的药物血清和临床等效剂量的大承气颗粒多次灌胃大鼠的药物血清,并与大黄素、大黄酚等比较,观测其对IELs增殖及IELs[Ca2+]i的作用.[结果]IELs是CD3阳性细胞为(82.76±2.61),CD8阳性细胞为(72.48±3.57),CD4阳性细胞为(9.91±2.52)的淋巴细胞.单次灌胃的药物血清和多次灌胃的药物血清均能显著刺激IELs增殖.单次灌胃的药物血清对IELs的作用与大承气颗粒的浓度、采血时间、药物血清的作用时间等有关.稀释的药物血清比其原液及正常血清原液作用强.等摩尔浓度的大黄酚、大黄素、厚朴酚的作用以大黄酚较强.大鼠正常血清、药物血清和植物血凝素均能增加IELs[Ca2+]i.[结论]大承气颗粒药物血清能显著刺激IELs增殖,其作用途径之一是增加IELs[Ca2+]i,对维护肠免疫屏障有重要意义.     

补肾调冲含药血清对离体卵巢颗粒细胞Bcl-2、P53蛋白表达的影响

【目的】探讨补肾调冲方对大鼠离体卵巢颗粒细胞原癌基因蛋白表达的影响。【方法】采用血清药理学的方法，以不同含药量的大鼠血清与体外培养的卵巢颗粒细胞共同孵育24h，用免疫组化法检测Bcl-2、P53蛋白的表达。【结果】补肾调冲含药血清可增强Bcl-2蛋白的阳性表达。【结论】原癌基因作为卵巢内局部调节因子，参与卵巢颗粒细胞凋亡过程。补肾调冲含药血清可通过促进卵巢颗粒细胞内抑癌基因的蛋白表达，抑制颗粒细胞的凋亡。     

桑仙降压颗粒对自发性高血压大鼠心肌VEGF及nm23的干预

[目的]观察桑仙降压颗粒对自发性高血压大鼠(SHR)心肌血管内皮生长因子(VEGF)及nm23的影响,探讨其对高血压病心肌血管生长促进因子、抑制因子的干预作用。[方法]SHR随机分为3组,空白对照组、吲哒帕胺西药对照组、桑仙降压颗粒组,以Wistar大鼠为正常对照,4周及8周后观察SHR心肌VEGF及nm23的表达。[结果]实验前正常对照组与空白对照组相比VEGF及nm23蛋白光密度值差异均无统计学意义。实验4、8周后相较空白对照组,桑仙降压颗粒组VEGF表达明显增多而nm23蛋白密度值显著减少。[结论]桑仙降压颗粒能增强VEGF的表达及降低nm23的蛋白密度值。     

正常和缺氧条件下磁场对人脑微血管内皮细胞增殖的影响

[目的] 观察不同强度的永磁磁场对正常和缺氧条件下人脑微血管内皮细胞（HBMEC）增殖的影响。[方法] 采用正常和缺氧两种条件体外培养HBMEC,实验分为10组,即对照组、药物组（银杏叶注射液350 mg/L）、不同强度磁场组（3.4、5.6、13.8、27.8、52.6、107.0、178.9、292.2 mT）,各组细胞于磁场作用48 h后收集样本,用四甲基偶氮唑盐法（MTT法）检测细胞增殖。[结果] 正常和缺氧条件下,与对照组相比较,药物组有统计学意义（P<0.05）,各磁场组差异均无统计学意义（P>0.05）;磁场组组间比较,差异无统计学意义（P>0.05）.[结论] 正常和缺氧条件下,磁感强度3.4、5.6、13.8、27.8、52.6、107.0、178.9、292.2 mT的磁场对人脑微血管内皮细胞的增殖无影响。     

中药对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用的研究*

[目的]研究中药抑制血管平滑肌细胞(VSMC)生长增殖的作用和机制.[方法]采用3H-TdR(氚胸腺苷)掺入和外源性c-jun cDNA在血管平滑肌细胞中表达的方法,观察血管平滑肌细胞(VSMC)生长增殖变化.[结果]与对照血清+内皮素组(cpm 2 534.54±54.2/105细胞)相比,中药血清+内皮素组(cpm 1 104.33±37.31/105细胞)血管平滑肌细胞3H-TdR掺入量有显著下降(P＜0.01),而且血管平滑肌细胞原癌基因的c-jun mRNA表达也较弱.[结论]本实验表明复方丹参对血管平滑肌细胞增殖及其原癌基因c-jun mRNA的表达有明显的抑制作用.