益肾达络饮对自身免疫性脑脊髓炎小鼠IL一2、IL-4的影响

目的：探讨益肾达络饮对自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠白介素-2（IL-2）、白介素4（IL4）的影响。方法：将40只小鼠随机分为正常组、模型组、益肾达络饮组和泼尼松组,每组各10只。正常组和模型组给予生理盐水0．01mL·g-1灌胃,益肾达络饮组给予益肾达络饮[2g（生药）·mL-1]0．01mL·g-1灌胃,泼尼松组给予泼尼松（0．42mg·L-1）0．01mL·g-1灌胃。采用蛋白质免疫印迹法测定EAE小鼠中枢神经组织中IL一2、IL．4的变化。结果：免疫后第6l天神经功能评分,模型组高于益肾达络饮组,两者比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。模型组中枢神经组织中IL-2的表达水平高于正常组,差异有统计学意义（p〈0．05）;益肾达络饮组和泼尼松组中枢神经组织中IL一2的表达水平低于模型组,差异有统计学意义（P〈0．05）。益肾达络饮组中枢神经组织中IL4的表达水平高于模型组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：益肾达络饮能降低EAE小鼠的神经功能评分,减轻EAE小鼠中枢神经组织的炎性细胞浸润和髓鞘脱失,其机制可能与降低IL-2的表达,升高IL4的表达有关。     

Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立

目的 研究用牛的髓鞘碱性蛋白(MBP)诱导Wistar大鼠发生实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)。方法 一次性给Wistar大鼠双后腿足垫皮内注射牛MBP-福氏完全佐剂(CFA)混合乳剂，同时辅以百日咳杆菌。结果 实验组大鼠全部发病，对照组无一发病。结论 用牛脊髓MBP的粗提品可成功地诱导Wistar大鼠发生EAE。     

单核细胞趋化蛋白-1在多发性硬化及实验性自身免疫性脑脊髓炎中的研究现状

单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)是趋化因子超家族中重要的一员,文献报导MCP-1在机体防御、炎症恢复和抗肿瘤及维持内环境稳态等方面起重要作用。大量研究证实,多种自身免疫性炎性疾病的发生和发展都与MCP-1密切相关。本文试图将其在多发性硬化(mu ltip le sc lerosis,MS)及实验性自     

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型的构建

目的 通过髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG_35-55)多肽两次免疫C57BL/6J小鼠,构建实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型。方法 将8周龄C57BL/6J雌性小鼠按随机数字表法分为EAE组和对照组,每组10只。EAE组采用MOG_35-55多肽与完全弗式佐剂混合后的抗原乳剂,于小鼠双侧腹股沟和后肢分4点皮下注射,首次免疫后6 d注射相同剂量的抗原乳剂加强免疫,并且于首次免疫后0、48 h腹腔注射百日咳毒素;对照组采用不含MOG_35-55多肽的CFA,其余方法同EAE组。观察两组小鼠的行为学表现并进行神经功能评分;免疫后第19天,取两组小鼠的脑和脊髓组织进行Black Gold髓鞘染色和髓鞘碱性蛋白(MBP)免疫荧光染色,检测其脱髓鞘情况;小胶质细胞特异性标志物(Iba-1)免疫荧光染色检测两组脑和脊髓组织中小胶质细胞的增殖活化情况。结果 EAE组小鼠在首次免疫后第12天左右开始发病,第19天症状达到高峰,随后开始缓解,发病率为100%,而对照组小鼠只在首次免疫后第14天出现短暂的尾巴无力症状。Black Gold髓鞘...     

黄岑苷对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的影响

目的观察不同浓度黄岑苷(baicalin)对实验性自身免疫脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠模型的作用,并研究其初步机制。方法建立实验性自身免疫性脊髓炎小鼠模型,免疫后第3天给予高低剂量黄岑苷灌胃,每天1次,共20 d。对小鼠活动进行神经功能评分,TUNEL染色检测脊髓组织细胞凋亡情况,ATP水平检测试剂盒检测脊髓组织ATP含量水平,免疫印迹法(Western blot)检测Bax、Bcl-2、cleaved cas-9和cleaved cas-3蛋白表达水平。结果黄岑苷能够提高实验性自身免疫脑脊髓炎小鼠神经功能,延后发病时间;黄岑苷干预后,Tunel染色结果显示脊髓组织凋亡细胞数下降,ATP水平下降,免疫印迹法结果显示Bcl-2的蛋白表达显著上升,Bax、cleaved cas-9和cleaved cas-3的蛋白表达显著下降。结论黄岑苷可通过抑制线粒体内源性凋亡途径抑制细胞凋亡,保护线粒体,提高实验性自身免疫脑脊髓炎小鼠神经功能,为预防疾病提供了实验理论依据。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠模型的建立

目的 为深入研究人类多发性硬化症建立EAE大鼠模型。方法 采用双后退足垫皮内注射豚鼠全脊髓匀浆（GPSPH）-福氏完全佐剂（CFA）混合乳剂，辅以注射百日咳疫苗，诱导Wistar大鼠EAE模型。取对照及发病高峰期大鼠脑、脊髓组织，常规病理切片，HE染色。ELISA法检测血清MBP抗体。结果 一次性双后腿足垫皮内注射GPSPH-CFA混合乳剂可诱导Wistar大鼠EAE模型，临床症状约在造病后10-15d出现。同时注射百日咳疫苗能提高发病率和发病程度。EAE大鼠脑、脊髓组织HE染色见大量淋巴细胞浸润，在血管周围形成淋巴鞘，但未见脱髓鞘改变。与对照组相比，EAE大鼠血清中抗MBP抗体明显增高。结论 非敏感品系Wistar大鼠可用于制备EAE动物模型。发病大鼠除有EAE临床症状外，还伴有中枢神经系统炎性改变和血清MBP抗体的增高。     

二次免疫诱导大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎动物模型的建立

目的　建立一种新的可靠的实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠模型制备方法,为人类多发性硬化实验研究提供理想模型。方法　用豚鼠全脊髓生理盐水匀浆 完全福氏佐剂制成免疫抗原,主动免疫Wistar大鼠,14 d后用豚鼠全脊髓生理盐水匀浆 不完全福氏佐剂再次免疫。结果第1次免疫后7 d左右,所有大鼠出现食量、活动减少;在第2次免疫后6-15 d,部分大鼠出现肢体无力、瘫痪,脑组织切片HE染色可见炎性细胞浸润和白质丰富区广泛肿胀变性。结论二次免疫诱导Wistar大鼠EAE病情严重,发病率高,病情及病理更接近人类多发性硬化症。本方法操作简单,对非敏感动物制备EAE模型也有较满意的效果。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠模型的建立及病理特征

目的建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠模型,观察其组织病理特征。方法 采用豚鼠全脊髓匀浆制备抗原免疫Lewis大鼠建立EAE模型。每天监测动物体质量和行为学变化。应用HE染色观察脑和脊髓炎性浸润、血管袖套等变化,罗克沙尔坚牢蓝(luxol fast blue,LFB)染色观察脊髓脱髓鞘变化,电子显微镜观察脊髓髓鞘超微结构。结果 随着病程进展,EAE模型组大鼠体质量下降明显;从第8天起出现行为学异常,神经功能损伤评分逐渐增高,于第12天达峰值。病理形态学检查显示,EAE模型组大鼠脑组织血管周围和脑实质有大量炎性细胞浸润;脊髓腰膨大脊膜出现炎性水肿,并有炎性细胞浸润;脊髓血管周围有大量炎性细胞密集环绕,呈"袖套样"改变;脊髓髓鞘大面积脱失,且髓鞘板层松散。结论 采用该模型作为急性MS的研究模型较为理想。     

C57BL/6J小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立及其病理特征

目的 探讨C57BL/6J小鼠建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型的可能性及其发病特点.方法 使用PLP139-151抗原及其C57BL/6J小鼠自制脑脊髓匀浆(spinal cord homogenate,SCH)免疫C57BL/6J小鼠,使用完全福(氏)免疫佐剂为免疫佐剂,并在尾静脉注射百日咳杆菌,建立EAE模型,与经典的PLP139-151免疫的SJL/J小鼠EAE模型进行对比.结果 PLP139-151免疫C57BL/6J小鼠仅有一只小鼠表现为尾部张力明显降低;自制SCH免疫C57BL/6J小鼠可见明显脱髓鞘改变.与PLP139-151免疫SJL/J小鼠组相比发病率较低(P<0.05),神经功能评分比较没有明显差异(P>0.05),但发病时间长于PLP139-151免疫SJL/J小鼠组(P<0.05).结论 SCH免疫C57BIJ6J小鼠的EAE动物模型,主要表现为急性单相病程,从临床表现和病理学特点来看符合人类MS的病理特点,值得在以后的研究中进一步研究探讨.     

神经生长因子对实验性自身免疫性脑脊髓炎的保护作用

目的 建立实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）动物模型,探讨神经生长因子（hNGF)对豚鼠EAE的保护作用。方法 豚鼠经一次足跖真皮内注射完全福氏佐剂－豚鼠全脊髓匀浆,诱发EAE疾病;在豚鼠致炎前注射hNGF,观察其对EAE临床症状、发病率及脊髓病变的影响。结果 模型组豚鼠免疫注射后相继出现明显的EAE症状,发病率为9／10。豚鼠在致炎前注射hNGF,可明显控制病情,降低EAE发病率,明显改善脊髓的病理改变,且hNGF的作用呈剂量依赖性。结论 hNGF对实验性自身免疫性脑脊髓炎有显著的保护作用。     

补肾益髓胶囊对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠大脑内BDNF和Nogo A的影响

目的 观察补肾益髓胶囊对EAE小鼠大脑内脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor， BDNF）和勿动蛋白（Nogo A）表达的影响，探讨本方促进EAE小鼠轴突损伤修复再生的可能机制。方法 小鼠背部皮下注射抗原MOG_35-55，诱导EAE模型。每天观察小鼠的体质量变化和神经功能评分，发病第18天（发病急性期）和第40天（发病缓解期）取小鼠大脑，HE染色观察其病理改变，用免疫组化（immunohistochemistry， IHC）法测定小鼠大脑中BDNF和Nogo A的变化。结果 补肾益髓胶囊明显减轻病灶部位的炎性细胞浸润，明显增加不同时间点BDNF在大脑皮层（P<0.01）、脑室下（P<0.01）及侧脑室旁（P<0.01）的表达，并且可以减少Nogo A在大脑上述不同部位的表达（P<0.05，P<0.01）。结论 补肾益髓胶囊的神经保护作用机制可能与其能够促进神经营养因子BDNF及降低抑制因子Nogo A的表达相关。     

预防性治疗急性实验性自身免疫性脑脊髓炎的实验研究

目的　观察己酮可可碱及溴隐亭能否抑制急性实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE)模型的发病 ,以及对血清 TNF、IL- 6活性及 PRL 水平的影响 ,为临床应用提供实验依据。方法　将 EAE模型豚鼠随机分成两组 ,分别给予治疗组肌注己酮可可碱 (30 mg/ kg· d)或口服溴隐亭 (5 mg/ kg· d) ,对照组肌注等容量的无菌生理盐水或口服等容量 5 %葡萄糖液。观察动物 EAE的发病数、临床评分、病灶计数以及检测各组动物血清 TNF、IL- 6活性及血清 PRL 水平。结果　己酮可可碱及溴隐亭治疗组豚鼠发病数较对照组减少 ,临床表现及病理变化明显减轻 ,血清 TNF、IL- 6活性及 PRL 水平较对照组明显降低。结论　己酮可可碱可能通过抑制 TNF释放及其活性的表达 ,而溴隐亭可能通过抑制 PRL 释放 ,从而抑制 EAE的发病 ,可尝试将该药物用于临床 MS的急性发作或复发的治疗。     

二黄胶囊对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠细胞免疫的影响

目的观察二黄胶囊对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠(EAE)细胞免疫的影响。方法皮下注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)与完全弗氏佐剂(CFA)混合的抗原,辅以腹腔注射百日咳毒素(PTX),建立EAE模型。造模后每天记录各组小鼠体质量及神经功能评分;用流式细胞仪检测小鼠外周血T淋巴细胞亚群及自然杀伤(NK)细胞;采用HE染色进行脑组织病理学观察。结果模型组小鼠造模后第9天陆续发病,第22天达到高峰,发病急性期(造模后第25天)T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+明显比正常组增高(P<0.01),CD4/CD8比值也有所升高(P<0.05);发病缓解期(造模后第40天)T淋巴细胞亚群CD8+和NK细胞明显下降(P<0.05);病理检查发现EAE小鼠脑组织神经元细胞核固缩,小静脉周围炎性细胞浸润形成袖套样改变。二黄胶囊治疗后,EAE小鼠神经功能评分比模型组明显降低(P<0.05),脑组织炎性浸润程度减轻,发病急性期外周血T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+比值显著降低(P<0.01);恢复期T淋巴细胞亚群(CD3+、CD8+)及NK细胞明显增加(P<0.05)。结论二黄胶囊可在EAE小鼠发病的不同时期通过调节T淋巴细胞亚群(CD3+,CD4+,CD8+,CD4+/CD8+)及NK细胞而起到防治EAE作用。     

滋阴固本方对急性EAE模型大鼠脊髓损伤后Nogo-A蛋白表达的影响

目的 :观察滋阴固本方对急性实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型大鼠脊髓损伤后轴突生长抑制因子(Nogo-A)蛋白表达的影响。方法:雌性Wistar大鼠72只,按随机数字表法分为6组,建立EAE模型。观察各组大鼠体质量、饮食量和神经行为学评分、脊髓组织的病理变化、脊髓组织中Nogo-A蛋白的表达情况。结果:各组大鼠的行为学改变与模型组比较,各中药组发病率降低,临床症状改善、体质量下降(P0.01);神经功能评分中药低剂量组与高、中剂量组比较差异有统计学意义(P0.01)。各组大鼠Nogo-A免疫组织化学结果:模型组可见Nogo-A蛋白的表达呈强阳性,与之比较,激素组与中药高、中剂量Nogo-A蛋白的表达相对减少(P0.01),中药高、中剂量与低剂量比较差异有统计学意义(P0.01)。结论:滋阴固本方在急性期对Nogo-A蛋白的表达有明显抑制作用,使受损的神经系统得到良好的修复。     

SPK1基因转染脂肪间充质干细胞对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的治疗效果及对辅助性T细胞17/调节性T细胞平衡的影响

目的考察SPK1基因转染脂肪间充质干细胞(ADMSC)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的治疗效果及对辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)平衡的影响。方法采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白_35-55对小鼠进行EAE诱导,将44只小鼠随机分为4组:空白对照组(NC组)、模型组(EAE组)、ADMSC组和ADMSC-鞘氨醇激酶1(SPK1)组。在免疫后40 d时,对小鼠进行脑与脊髓的病理学观察、脑组织Th17/Treg相关炎症指标检测、脑和脊髓组织中白细胞介素17和叉头框蛋白P3蛋白表达检测以及脾脏免疫细胞的流式细胞术分析。结果免疫后40 d时,EAE组小鼠脑和脊髓组织发生严重炎性细胞浸润髓鞘脱失严重,ADMSC组与ADMSC-SPK1组脱髓鞘和轴突损伤得到改善;与EAE组比较,ADMSC组和ADMSC-SPK1组的脑组织IL-17A(Z=1.021,P=0.017;Z=1.193,P=0.009)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(Z=2.540,P=0.004;Z=3.005,P=0.006),与ADMSC组比较,ADMSC-SPK1组的脑组织IL-1...     

人参皂苷Rg1抑制小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的作用及免疫机制

目的 观察人参皂苷Rg1对实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）的抑制作用及其对脾淋巴细胞T细胞亚群和外周血细胞因子水平的影响。方法 采用C57BL/6小鼠皮下多点注射MOG35-55、百日咳毒素的方法复制EAE模型。将EAE小鼠随机分为模型组,人参皂苷Rg1低、中、高剂量组,同时设置正常对照组,每组6只。首次免疫后第10天予以不同剂量Rg1腹腔注射,连续给药14 d。第35天处死小鼠后取脊髓,观察各组小鼠脊髓炎症细胞浸润和脱髓鞘等病理变化,采用流式细胞仪检测小鼠脾淋巴细胞Th1、Th17、Treg细胞亚群,采用ELISA法检测外周血白细胞介素（interleukin,IL）-17A、干扰素γ（interferon gamma, IFN-γ）、IL-6、IL-10水平。结果 与模型组比较,人参皂苷Rg1低、中、高剂量组小鼠神经症状评分显著下降（P＜0.05）,脊髓炎症细胞浸润评分和脱髓鞘评分显著降低（P＜0.05）,脾淋巴细胞CD4+、CD8+、Th1、Th17 T细胞亚群比例显著降低（P＜0.05）,Treg（CD4+CD25+FoxP3+）比例显著升高（P＜0.05）,外周血IFN-γ、IL-17A、IL-16水平显著降低（P＜0.05）,IL-10水平显著升高（P＜0.05）,人参皂苷Rg1的作用呈现明显的剂量依赖性。结论 人参皂苷Rg1可显著改善EAE小鼠的临床症状,减轻中枢神经系统脱髓鞘和炎症细胞浸润,其作用可能与调控Th17、Th1、Treg细胞亚群失衡,抑制炎症细胞因子表达相关。     

减毒百日咳杆菌对实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠模型诱导的影响

目的 :探讨在不同部位加用减毒百日咳杆菌对EAE非敏感品系Wistar大鼠EAE模型诱导影响。方法 :免疫组除常规免疫外在足背皮下或腹腔注射减毒百日咳杆菌 0 .0 5ml/只 (含 5 .0× 10 10 个菌体 )。结果 :足背皮下注射百日咳组发病率为 87.5 % ,发病时间为免疫后 (10 .2 5± 1.6 7)d ,而腹腔组分别为 35 .7%和 (14 .8± 1.79)d。结论 :足背皮下注射百日咳毒素诱导EAE模型适合在国内开展。