量子点快速检测弓形虫IgG抗体方法的建立及初步应用

目的 建立一种简便、快速的人弓形虫(Toxoplasma,TOXO)IgG抗体检测新方法,并在临床初步应用.方法 应用TOXO抗原包被羧基磁珠作为固相载体,量子点标记羊抗人IgG作为检测抗体,建它TOXO IgG检测方法,同时优化检测条件;对255份临床血清标本进行了检测,并与意大利DiaSorin TOXO IgG ELISA试剂进行比较.结果 检测最佳条件为:抗原包被浓度100 μg/ml,量子点标记二抗工作浓度为1∶200,待测血清稀释度为1∶100.本方法的诊断敏感性、特异性分别为93.3%、96.7%,与进口试剂盒的总符合率为96.5%.结论 基于量子点标记及免疫磁珠技术检测TOXOIgG,操作简便、快速,具有较高的特异性、敏感性和有较好的临床应用价值.     

应用ELISA法检测结核病患者血清抗体最佳条件的筛选

检测了影响ELISA法检测结核病患者血清抗体结果的有关因素 ,筛选出抗原最佳浓度为2 5 μg/ml、患者血清稀释度为 1∶40、酶结合物浓度为 1∶10 0 0 ,此时P/N值最大 ,非特异现象最弱。     

兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体的制备及初步鉴定

目的狨猴血清中纯化IgG抗体,制备兔抗狨猴抗血清,并纯化抗血清中IgG,HRP(辣根过氧化物酶)标记兔抗狨猴IgG。方法 Hi TrapTMProtein G亲和层析纯化狨猴和兔抗狨猴血清IgG,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行纯度鉴定,免疫琼脂双扩散法(double immunodiffusion assay)测定制备的兔抗狨猴抗血清效价,改良"简易过碘酸钠标记法"制备兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体,酶联免疫吸附测定法(ELISA)及蛋白免疫印迹法(Western blotting)对兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体进行工作浓度测定及特异性鉴定。结果狨猴和兔抗狨猴血清纯化IgG纯度分别大于95%、97%;兔抗狨猴IgG抗血清的效价为1∶64。ELISA和Western blotting鉴定了兔抗狨猴IgG-HRP酶标抗体参考工作浓度为1∶256 000、1∶15 000,特异性明显。结论制备狨猴IgG-HRP标记抗体并初步鉴定,包括ELISA及Western blotting的特异性及使用浓度,为狨猴病原体免疫学检测体系及分子免疫学检测体系储备了资源。     

检测H5N1型高致病性禽流感病毒抗体的间接ELISA方法的初步建立

目的建立一种快速检测H5N1病毒感染的血清学方法。方法以H5N1病毒作为抗原包被96孔板,与待检血清作用后,以辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG作为二抗,用ELISA方阵法确定最佳抗原、血清稀释浓度。结果感染7 d小鼠血清中抗体水平很低,感染14 d血清抗体水平较高,最佳抗原稀释度1∶100,最佳血清稀释度1∶200。结论这种快速检测H5N1病毒的诊断方法直接有效、方便易行,有助于H5N1病毒感染的早期诊断     

酶联免疫吸附试验检测乙脑病毒抗原的研究Ⅰ实验方法的建立

采用ELISA双夹心法,通过对影响因素实验条件的研究,建立检测乙脑病毒抗原的方法。包被抗体(豚鼠抗乙脑病毒IgG)和第二抗体(兔抗乙脑病毒IgG),用提纯病毒免疫动物制备;以及稀释液中BSA含量提高为2％,显著地降低非特异性反应,并提高敏感性。特异性抑制试验,抗血清浓度越高OD值下降越多;两种乙脑病毒抗原分别与抗血清和正常血清中和后进行测定,阻抑百分率均>50％。敏感试验结果能测出≥5TCID_(50)组织培养病毒抗原和0.5ug/ml差速离心病毒抗原。     

定量检测ProMBP双抗体夹心ELISA方法的建立

目的:建立定量检测ProMBP的双抗体夹心ELISA方法.方法:采用Protein A亲和层析法纯化自制的抗ProMBP单克隆抗体(mAb),并行SDS-PAGE和Western blot对纯化抗体特性进行鉴定;利用简易过碘酸钠法对抗ProMBP mAb进行标记辣根过氧化物(HRP)后行抗体配对实验;通过方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体的最适工作浓度;以纯化的妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)/ProMBP抗原为标准品建立标准曲线;以重复性、灵敏性和回收性实验评价ELISA方法,初步对人血清中的ProMBP水平进行检测.结果:最佳配对组合为抗ProMBP mAb 4C6E5B9和HRP标记的抗ProMBP mAb 9G4A6G10,最适工作浓度分别为2.5 μg/ml和1:3 000,该方法的批内、批间变异系数分别为4.6%～6.2%和4.6%～10.5%,灵敏度达2.0 ng/ml,回收率为92%～113%.正常非妊娠血清、9～11周妊娠血清、15～17周妊娠血清ProMBP水平分别为(26.37±2.90)ng/ml、(357.71±33.60)ng/ml和(1088.77±58.13)ng/ml.结论:建立了一种可用于检测ProMBP的双抗体夹心ELISA方法.     

脊髓灰质炎病毒主要壳蛋白VP_1诱生的IgG抗体在ELISA和中和试验中的性质

脊髓灰质炎病毒主要以两种抗原形式存在,即D抗原和C抗原。前者含病毒RNA,能诱发产生中和抗体;后者则否。加热可使病毒D抗原转变为C抗原。本实验将未经福尔马林灭活固定的脊髓灰质炎病毒浓缩和纯化,用SDS-PAGE制备其主要壳蛋白成分VP_1,免疫动物,获得抗VP_1血清,从中提纯IgG抗体。用ELISA和常规中和试验方法测定此IgG抗体与脊髓灰质炎病毒的免疫反应性。 在ELISA试验中,抗VP_1IgG抗体与脊髓灰质炎病毒呈抗原抗体反应,IgG阳性反应的下限为1ng/ml。如果将抗VP_1IgG预先与脊髓灰质炎病毒37℃孵育2h,再包被酶标板,则不再出现阳性反应,     

间接ELISA检测蛔虫抗体方法的建立

目的 寻找能更准确地对蛔虫感染进行检测的方法。方法 以蛔虫虫卵可溶性蛋白为抗原,建立检测蛔虫特异性抗体的间接ELISA方法。结果 ELISA的最佳工作条件是：抗原包被浓度为1 μg/mL,血清最佳稀释度为1: 80,酶标二抗的最佳工作浓度为1: 8 000。对100份人血清样本采用本方法进行检测,其阳性检出率为10.0 %;血清样本对应粪便样本进行现场粪检虫卵法确定阳性率为2.0 %。结论 本研究建立了稳定而特异的抗蛔虫体IgG 的间接ELISA检测方法,可用于蛔虫感染的临床监测。     

夹心ELISA法快速检测肝病患者血清中金属蛋白酶组织抑制剂-1

目的：建立一种快速检测肝病患者血清基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的双抗体夹心ELISA，了解血清TIMP-1的水平与肝纤维化病程进展程度的关系．方法：以不同浓度的抗人TIMP-1单克隆抗体（mAb）为包被抗体，加入待测抗原以及辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗TIMP-1mAb作为标记抗体进行方阵滴定，建立双抗体夹心ELISA，并用于临床检测408例肝病患者血清TIMP-1的水平．结果：方阵滴定的结果表明包被抗体浓度为1mg／L，血清稀释倍数1：100，HRP标记mAb的最佳工作浓度为1：400．     

IgM特异性激活补体Clq类循环免疫复合物的检测

目的：建立检测IgM特异性激活Clq类循环免疫复合物（IgG/Clq-TCIC）的捕捉法ELISA。方法：以羊IgM抗人Clq为包被抗体，HRP－羊抗人IgM为检测抗体，采用捕捉法ELISA检测IgM/Clq-TCIC,并通过阻断试验、替代试验、重复性试验进行方法学论证。结果：最佳包被浓度为15μg/ml，标本稀释度为1：75，酶标抗体浓度为1：800。结论：本法敏感度高、特异性强、重复性好，对研究经典途径激活补体类循环免疫复合物具有重要意义。     

左肺逆循环伴双向腔肺吻合术的动物模型建立

为临床提供实验手术基础，以期拓宽复杂先心的手术适应症，建立了左肺逆循环与双向腔肺吻合术相结合的动物模型，将犬左心耳与左肺动脉远心端吻合；桥接管道连接左肺动脉近心端与左肺静脉；将上腔静脉与右肺动脉吻合，实现左肺逆循环与双向腔肺吻合。6头实验犬均存活3d以上，彩超及血管造影检查显示吻合口血流通畅，上腔静脉回流血及左肺逆行血流行进良好。结果提示，左肺逆循环伴双向腔肺吻合手术切实可行，且可进一步向全腔肺吻合术过渡；本实验为今后拓展复杂先心合并过高肺动脉压力患儿手术治疗的适应症提供了实验基础。     

PULMONARY BLOOD DISTRIBUTION AFTER TOTAL CAVOPULMONARY CONNECTION OF DIFFERENT TYPES

Objective. To assess the feature of pulmonary blood flow distribution after total cavopulmonary connection (TCPC) of different types, and to provide the selection of the best type .Methods. Thirty-two consecutive survival patients after TCPC underwent radionuclide lung perfusion imaging. According to the radionuclide counts in the left and right lungs, analyses of the distribution of blood flow from superior venous cava (SVC) and inferior venous cava (IVC) and the whole pulmonary blood flow in both lungs were made. All patients were divided into 4 groups by the the anastomosis between IVC and pulmonary artery.Results. Group Ⅰ: The flow ratio of the IVC to left lung was greater than that to the right lung , P≤0. 01; the flow ratio of the SVC to right lung was greater than that to the left lung, P≤0. 01; and the whole pulmonary blood flow went dominantly to the left lung, P≤0. 05, which is not in line with physiological distribution. Group Ⅱ: the flows from the SVC and IVC were mixed in the middle of     

Bilateral bidirectional superior cavopulmonary shunt is more beneficial in medium and long term clinical outcomes than unilateral shunt

Background The present study was aimed to compare the effects of bilateral and unilateral bidirectional superior cavopulmonary shunt （b-BDG and u-BDG） on pulmonary artery growth and clinical outcomes. Methods The 51 subjects enrolled in this study were divided into two groups： those receiving b-BDG （n=21） and those receiving u-BDG （n=30）. Clinical records were reviewed retrospectively at a mean of 43.3 months after BDG procedures. Chi square and t-tests were performed to analyze the data. Results Left and right pulmonary artery diameters increased 27%-37% in both groups. The pulmonary artery index increased 37.2% after b-BDG and 27.0% after u-BDG, b-BDG patients experienced a significant decrease in mean hemoglobin concentration and hematocrit value, and a correlated change in postoperative diameter of left pulmonary artery （LPA） and pulmonary artery index （y=0.2719, x=-1.8278; R=0.564, P=-0.008）. The change ratio of hemoglobin and postoperative LPA were also correlated in b-BDG patients （y= -0.0522x ＋ 0.3539; R=-0.479, P=-0.028）. Only one b-BDG patient versus twelve u-BDG patients needed total cavopulmonary connections 31.8 months after BDG surgery （P=-0.0074）. Moreover, only one （4.8%） b-BDG patient but eight u-BDG patients （26.7%） developed pulmonary arteriovenous malformations. Conclusions b-BDG increases bilateral pulmonary blood flow and promotes growth of bilateral pulmonary arteries, with preferable physiological outcomes to u-BDG. Results may imply that subsequent Fontan repair may not always be needed. Chin Med J 2009; 122（2）： 129-135     

Total Cavopulmonary Connection for Complex Cardiac Anomalies with the Functional Single Ventricle

Many complex congenitalheartdiseases with se-vere intracardiac anomalies and paradoxical arteriesconnection are unlikable to be corrected in biventri-cles,especially forthosewith functionalsingle ventri-cle.One and a half ventricles conception may havecertain advantages for hypoplastic right ventricleheart,butisdisable for hypoplastic leftventricle.Fi-nally univentricle repair,classically named Fontan-like operations,leads the current surgical treatmentof congenital cardiac complexes.The recen…     

改良三袖套吻合法建立大鼠左肺原位移植模型及其鉴定

目的对三袖套吻合法建立的大鼠肺移植模型进行改进,建立操作简便和稳定有效的大鼠左肺原位移植模型。方法在预实验的基础上,对三袖套吻合法建立的大鼠肺移植模型进行以下改进:供体采用胸骨正中切口,经肺动脉圆锥处进行低压肺灌注;制作袖套时用无损伤血管夹固定套管尾部;套入袖套时用无创显微心耳钳钳夹住左肺门,在不离断病肺的情况下完成吻合;完善呼吸道管理流程。以手术成功率、手术时间、移植肺功能、肺组织病理学改变等对模型进行评估。结果完成大鼠左肺原位移植10例,手术成功率80%。供肺灌洗到获取时间为(12±2)min,体外套管时间为(18±3)min,吻合时间为(31±3)min。移植肺再灌注15 min的氧合指数显著高于单肺通气30 min(P<0.05)。移植肺再灌注2 h后的病理学改变符合典型的缺血-再灌注损伤特征。结论成功改进了大鼠左肺原位移植模型,该模型稳定有效且操作简便。     

全腔肺动脉连接术在复杂先心病治疗中的应用

目的 旨在探讨全腔肺动脉连接术在复杂先心病治疗中应用的几个问题，以提高其治疗效果和存活率。方法 回顾分析全腔肺动脉连接术在复杂先心病治疗中的体会，并对全腔肺动脉连接术在术式选择及其影响因素方面进行讨论。2001年8月至2005年5月25例复杂先心病患者在协和医院行全腔肺动脉连接术。其中完全性大动脉转位（TGA）5例，完全性房室通道并右室双出口（AVC＋DORV）11例，三尖瓣闭锁（TA）5例，单心室4例。4例合并永存左上腔静脉（PLSVC）。所有患者均有不同程度的肺动脉瓣和右室流出道狭窄或闭锁。所有患者均在体外循环下完成，22例心内隧道引流下腔，其中开窗12例；3例心外管道引流下腔。结果 23例存活，SaO2≥90％，中心静脉压（CVP）15～18cmH2O，无心律失常；2例死亡（8％），死于低心排血量和严重缺氧。术后并发灌注肺3例、反复胸水乳糜胸2例、1例肾功能不全、1例心内隔片片周漏行再次心内修补。结论 全腔肺动脉连接术是不能进行双心室治疗时的有效术式，术前仔细选择适应证、术中适当的术式设计、术后对并发症较好的处理可有效提高存活率。     

左肺反向循环逆转肺动脉高压的的机制

目的探讨左肺反向循环 (LLIC)逆转肺动脉高压的机制。方法选用杂种上海犬 8条 ,低氧 30min后行LLIC术。分别于术前、低氧 30min、LLIC完成时及完成后 2h行血流动力学指标、血气分析、NO和一氧化氮合成酶 (NOS)检测。结果平均肺动脉血压(MPAP)和心率 (HR)在低氧 30min和LLIC完成时明显高于术前和LLIC完成后 2h(P <0 .0 5 ) ;PaO2 、SaO2 、NO、NOS值在低氧 30min后和LLIC完成时明显低于术前和LLIC完成后 2h(P <0 .0 5 ) ;各项检测指标在术前和LLIC完成后 2h之间比较无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论反向肺循环可能通过转换血气交换的解剖位置、提高血氧携带和增加NO的产生而逆转肺动脉高压     

Transient heart murmur in the late neonatal period: its origin and relation to the transition from fetal to neonatal circulation

To elucidate the origin of transient heart murmur during the late neonatal period, we examined 50 neonates with this type of heart murmur and compared them with 50 controls. We serially examined the morphology of and blood flow in the main pulmonary artery (MPA), the right pulmonary artery (RPA), and the left pulmonary arteries (LPA) using two-dimensional and Doppler echocardiography. The heart murmurs were first noticed at 6 to 60 days after birth (mean 33 +/- 14). At that time, the diameters of both the RPA and the LPA in the heart murmur group were significantly smaller than those in the control group, and the velocities of blood flow in the right and left pulmonary arteries in the heart murmur group were significantly greater than those in the control group. When the heart murmur disappeared, the diameters and the flow velocities of both the RPA and the LPA were not different compared with the control group. Two cases in the heart murmur group continued to have a heart murmur and were diagnosed as having intrinsic congenital peripheral pulmonary artery stenosis. In conclusion, our findings suggest that a transient heart murmur in the late neonatal period is caused by transient branch pulmonary arteries stenosis during the transitional circulation from fetus to neonates.     

无泵体外肺辅助技术对犬急性呼吸窘迫综合征血流动力学的影响

目的 探讨无泵型体外肺辅助技术（Pecla）对犬急性呼吸窘迫综合征（ARDS）模型血流动力学的影响,寻找安全的分流范围.方法 建立犬ARDS模型,连接Pecla装置,将12只杂种犬随机分为两组,A组采用心排量的25%,20%,15%,10%的分流量顺序进行分流,B组采用心排量的10%,15%,20%,25%的分流量顺序进行分流,各分流量持续1小时,分别记录Pecla模型在模型建成后稳定一小时和各分流量末时的体循环血压,心率,肺循环血压.结果 两组的体循环血压,心率,肺循环血压均有轻度变化,但无显著差异（P＞0.05）.结论 Pecla使用25%的分流量不会对血流动力学产生严重影响.     

全腔肺动脉连接术的体外循环管理

目的总结全腔肺动脉连接术体外循环转流的方法与经验。方法全组26例均在全麻体外循环下行全腔肺动脉连接术,麻醉诱导后放血,使红细胞压积稀释到术前的50%～60%。预充液中加入血浆和白蛋白等胶体液使晶胶比值维持在0.5～0.6,胶渗压16～18mmHg;实施浅低温体外循环,灌注流量2.4～2.8L/(m2.min),维持平均动脉压40～60mmHg。心脏复温时,启动常规超滤并再次加入血浆和白蛋白,提高红细胞压积(HCT)和胶体渗透压,通过增加血容量和提高血浆胶体渗透压来适应新的血流动力学变化。停机时"置换性"的超滤使得血红蛋白浓缩至35%～45%,血浆胶体渗透压至18～21mmHg。结果该组4例患者死于术后低心排血量,余22例患者均存活痊愈出院,体外循环期间血流动力学基本稳定,血气电解质维持在正常范围,术后SaO2≥92%,中心静脉压(CVP)15～17cmH2O。结论停机前加入大量的血浆和白蛋白以增加血容量、提高并长时间维持胶体渗透压以适应新的血流动力学变化,保持机体内环境稳定是全腔肺动脉连接术中体外循环管理的关键。