中医药对各型慢性阻塞性肺疾病大鼠γ-谷氨酰半胱氨酸合酶表达和气道病理改变的影响

[目的]通过观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠γ-谷氨酰半胱氨酸合酶(γ-GCS)水平和气道病理改变的变化,探讨中医药治疗COPD的机制。[方法]采用改良烟熏加气管滴加脂多糖方法复制COPD模型,光镜下观察大鼠小气道病理改变,电镜下观察大鼠气管纤毛的变化,并以免疫组化法检测γ-GCS水平。[结果]各方剂能缓解肺内细支气管、终末细支气管管腔及周围炎细胞浸润及分泌物阻塞;恢复纤毛粘连、倒伏、脱落,从而改善气道高反应性和气道重塑;与正常对照组相比,各造模组γ-GCS在支气管和肺泡上皮细胞、平滑肌细胞以及炎细胞等都为高表达(P<0.01),经过治疗后,阳性表达率有明显降低,其差异具显著性(P<0.05)。[结论]通过辨证论治各中药方剂能纠正COPD大鼠的氧化抗氧化失衡,减少炎性反应,对于COPD气道的修复和炎症具有缓解作用,从而有效治疗各型COPD。     

组蛋白乙酰化修饰在哮喘小鼠气道内黏蛋白5AC表达中的作用研究

目的 探讨哮喘小鼠体内组蛋白乙酰基转移酶（HAT）活性对气道内黏蛋白5AC（MUC5AC）表达的重要性。方法 复制哮喘小鼠模型,行外周血常规分析,肺泡灌洗液常规瑞氏染色并计数,肺组织HE染色,免疫组织化学法检测肺组织内MUC5AC蛋白表达,酶联免疫吸附试验（ELISA）测定HAT、组蛋白去乙酰基酶（HDAC）活性、MUC5AC水平,进行统计学分析。结果 哮喘组小鼠外周血嗜酸性粒细胞计数（EOS）较曲古抑菌素A（TSA）治疗组、对照组均升高（P <0.05）;哮喘组肺泡灌洗液总细胞计数及EOS均较TSA治疗组、对照组升高（P <0.05）;TSA治疗组与哮喘组比较,可同时降低小鼠体内HAT、HDAC活性,差异有统计学意义（P <0.05）,但以HAT为主;TSA治疗组MUC5AC水平较哮喘组降低（P <0.05）;肺组织HE染色可见哮喘组小鼠气道炎症细胞增多,而TSA治疗后明显改善;免疫组织化学结果示,TSA治疗组较哮喘组能明显减少MUC5AC蛋白含量（P <0.05）。结论 组蛋白乙酰化修饰在哮喘小鼠气道黏液分泌中起重要的调控作用。     

布地奈德对哮喘气道重塑大鼠骨桥蛋白和mRNA表达的影响

目的探讨布地奈德对气道重塑模型大鼠肺组织骨桥蛋白(OPN)表达的影响及其在哮喘气道重塑中的作用。方法大鼠于第1天和第8天腹腔注射卵清蛋白(OVA)/AI(OH)3,第15天起雾化吸入OVA激发,隔天1次,制备哮喘气道重塑幼年大鼠模型。布地奈德组在雾化吸入OVA前30 min,给予雾化布地奈德混悬液(2ml:1mg)。正常对照组以生理盐水代替OVA。运用彩色医学图像分析系统测量大鼠支气管壁总面积和平滑肌面积,计算平滑肌厚度(Wam)和支气管壁厚度(Wat),通过反转录-聚合酶链(RT-PCR)测定各组大鼠肺组织中OPN的mRNA,运用免疫组化法测定各组大鼠OPN蛋白的表达,并对Wat、Wam与OPN的蛋白和mRNA表达进行相关性分析。结果哮喘组Wat及Wam显著高于对照组,布地奈德组较哮喘组显著降低(P均<0.01)。免疫组化检测结果提示,布地奈德组OPN蛋白的表达高于正常对照组,但显著低于哮喘组,差异具有统计学意义(P均<0.01)。RT-PCR检测结果显示,哮喘组OPN mRNA表达均高于正常对照组,布地奈德组组较哮喘组显著减弱,差异具有统计学意义(P均<0.01)。肺组织中Wat、Wam与OPN的蛋白、mRNA表达均呈正相关。结论布地奈德能显著抑制哮喘大鼠OPN的表达,缓解气道重塑。     

青蒿琥酯抑制Wnt/β-catenin信号通路和改善大鼠哮喘模型气道炎症及气道重塑关系的研究

目的 研究Wnt/β-catenin信号通路在哮喘气道炎症和气道重塑中的作用,探讨青蒿琥酯（artesunate,ART）治疗哮喘的可能机制。方法 采用卵白蛋白（OVA）激发和雾化吸入的方式建立哮喘模型,并予以药物治疗。观察各组大鼠肺组织的病理形态改变、外周血、支气管肺泡灌洗液（BALF）白细胞计数;Image-Pro plus 6.0图像分析软件测量大鼠肺组织支气管壁厚度和平滑肌厚度;免疫组化法检测大鼠肺组织β-catenin和WISP-1表达情况,RT-PCR检测大鼠肺组织WISP-1表达情况,ELISA法检测血清及BALF中IL-6的表达情况。结果 ART干预哮喘组大鼠气道炎性细胞浸润、支气管壁厚度、平滑肌厚度均明显低于哮喘组大鼠,差异有统计学意义（P<0.01）;ART干预哮喘组肺组织β-catenin、WISP-1蛋白和WISP-1 mRNA的表达均明显低于哮喘组,差异有统计学意义（P<0.01）;ART干预哮喘组大鼠血清及BALF中IL-6水平表达均明显低于哮喘组,差异有统计学意义（P<0.01）。结论 ART改善哮喘大鼠气道炎症及气道重塑的机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活性及下调IL-6水平有关。     

益气活血中药对心力衰竭大鼠MMP-1、TIMP-1影响的实验研究

[目的]观察益气活血复方对慢性心力衰竭大鼠心肌组织基质金属蛋白酶1(MMP-1)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响。[方法]选用雄性SD大鼠,采用冠状动脉结扎术配合饥饿、游泳等方法造成慢性心力衰竭的动物模型。将造模成功的大鼠随机分为3组:模型组、中药组和西药对照组;中药干预6周后,将动物处死,取其心肌组织,利用实时定量荧光聚合酶链反应(PCR)技术和蛋白印迹分析法(Western blot)分别检测心肌组织中MMP-1、TIMP-1基因表达和蛋白表达。[结果]与对照组比较,大鼠模型组MMP-1的表达高于正常组(P<0.01),而TIMP-1的表达明显低于正常组(P<0.01);中药组和西药组MMP-1的表达均低于模型组(P<0.01),TIMP-1的表达明显高于模型组(P<0.01)。[结论]益气活血中药可以下调MMP-1的表达,增加TIMP-1的表达,从而阻止MMP-1对心肌细胞外基质结构的破坏作用,延缓心肌重塑,改善心脏功能,从而阻止CHF的发展。     

针刺对心肺复苏后家兔心肌ATP酶活性及SOD、MDA的影响

[目的]探讨针刺对心肺复苏后家兔心肌细胞三磷酸腺苷(ATP)酶活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的影响。[方法]30只家兔随机分3组,假手术(Sham)组不进行窒息和复苏;常规复苏组心搏骤停后予常规心肺复苏术;针刺复苏组心搏骤停后予常规心肺复苏术并针刺人中、内关穴。所有动物于自主循环恢复后2h取心肌组织,测定ATP酶活性、SOD活性及MDA含量。[结论]与Sham组相比,针刺复苏组、常规复苏组心肌ATP酶活性降低(P<0.01);与常规复苏组相比,针刺复苏组ATP酶活性升高(P<0.05)。复苏后两组SOD活性均低于Sham组(P<0.01),MDA含量均高于Sham组(P<0.01);针刺复苏组SOD活性高于常规复苏组(P<0.05),而MDA含量低于常规复苏组(P<0.05)。[结论]针刺人中、内关穴可增加心肺复苏后心肌组织ATP酶活性,增加SOD活力,减少MDA生成。     

活血平肝汤治疗椎动脉型颈椎病临床观察

[目的]观察活血平肝汤治疗椎动脉型颈椎病的临床疗效。[方法]将96例椎动脉型颈椎病患者随机分为两组,治疗组48例,予活血平肝汤内服,对照组48例,予口服氟桂利嗪每次10 mg,每日1次。15 d为1个疗程。[结果]总有效率比较差异有统计学意义(P<0.05),治疗组的椎-基底动脉供血不足有明显改善(P<0.01),组间比较(P<0.01)。[结论]活血平肝汤治疗椎动脉型颈椎病疗效确切。     

益气活血方治疗轻中度中风后抑郁60例临床观察

[目的]:观察益气活血方早期干预中风后抑郁症(PSD)的临床疗效。[方法]60例中风后抑郁症患者,随机分为治疗组和对照组。治疗组(30例)用常规西药治疗并加服中药益气活血方。对照组(30例)在常规治疗基础上加服氟西汀。对治疗前后情况进行比较。[结果]治疗组治疗后汉密尔顿抑郁量表评分、中医证候疗效评分明显优于对照组(P<0.01),神经功能缺损评分也优于对照组(P<0.05)。[结论]益气活血方治疗中风后抑郁具有较好的疗效,并能明显促进中风后神经功能的康复。     

针刺对局灶性脑缺血大鼠缺血脑组织及血清白介素-8的影响

[目的]观察针刺对局灶性脑缺血大鼠脑组织及血清白介素8(IL-8)含量的影响。[方法]以热凝法阻断一侧大脑中动脉造成大鼠局灶性脑缺血模型,采用放免法测定大鼠脑组织及血清IL-8含量。[结果]脑缺血后各时段模型组与同时段假手术组及正常组比较脑组织及血清IL-8显著升高(P<0.05,P<0.01);治疗后6、12、24、48h各时段针刺组与同时段模型组比较脑组织IL-8含量明显降低(P<0.01),6、12及48h针刺组血清IL-8含量显著低于同时段模型组(P<0.05,P<0.01)。[结论]针刺可能通过抑制缺血区脑组织IL-8的合成和分泌,调节血清IL-8的含量,抑制炎性细胞的黏附及浸润,从发挥脑保护作用。     

蕨麻正丁醇部位对缺氧损伤心肌细胞的保护作用

[目的]研究蕨麻正丁醇部位对缺氧损伤心肌细胞的保护作用。[方法]建立大鼠原代培养心肌细胞缺氧损伤模型,采用噻唑蓝(MTT)法检测心肌细胞代谢活力;胎盼兰染色法检测细胞成活率;比色法测定细胞外乳酸脱氢酶(LDH),肌酸激酶(CK)活性及细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。[结果]与模型组比较,蕨麻正丁醇提取部位各剂量组细胞代谢活力及细胞成活率显著提高(P<0.01),并均可显著减少缺氧损伤引起的LDH、CK的外漏量(P<0.01),提高细胞SOD活性(P<0.01),减少MDA的产生(P<0.01或P<0.05)。[结论]蕨麻正丁醇部位具有抗心肌缺氧损伤作用,其途径之一可能与其抗自由基氧化的能力有关。     

早期糖皮质激素应用对豚鼠哮喘模型气道重塑影响的病理学研究

目的探讨慢性哮喘气道重塑的发生及早期应用糖皮质激素对哮喘气道重塑的影响。方法选健康豚鼠60只，随机分成6组：正常组1、哮喘组1、地塞米松治疗组1和正常组2、哮喘组2、地塞米松治疗组2．分别代表急性和慢性模型；用卵蛋白致敏和诱喘，急性模型2周后取支气管肺组织制作病理切片和电镜切片：慢性模型4周后取支气管肺组织制作病理切片和电镜切片。采用计分法对气道病理指标进行评价。结果光镜下急性哮喘模型可见支气管、细支气管上皮细胞脱落、管壁炎症细胞浸润、杯细胞增生、平滑肌增厚，肺泡间隔亦可见炎症细胞浸润。与急性模型比较，慢性哮喘模型基底膜和平滑肌层增厚更明显，支气管壁内可见纤维组织增生。地塞米松治疗后气道炎症细胞浸润减少，基底膜和平滑肌增生减轻。电镜观察显示慢性哮喘模型基底膜层大量成纤维细胞增生、胶原纤维沉积、平滑肌细胞增多肥大。病理指标评分结果示急性哮喘模型EOS浸润、杯细胞增生、基底膜增厚、平滑肌增生、炎症细胞浸润5项指标计分均高于正常组（P〈0．05）。慢性哮喘模型EOS浸润、炎症细胞浸润、基底膜增厚、平滑肌增生、管壁纤维化5项指标评分高于正常组，地塞米松治疗后平滑肌增生计分略仍高于正常。慢性哮喘模型与急性哮喘模型比较仅平滑肌增生和管壁纤维化计分有差异（P〈0．05）。结论豚鼠哮喘模型存在气道重塑病理改变，慢性模型比急性模型更明显；急性模型的病理变化说明气道重塑在哮喘的早期即开始；糖皮质激素早期应用可预防气道重塑的发展。     

布地奈德对哮喘小鼠模型IL-22的调控作用

目的观察白介素22(IL-22)在哮喘模型中的作用,研究布地奈德对哮喘小鼠模型气道炎症及IL-22的调控作用。方法 24只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘模型组和布地奈德组3组,用卵清蛋白(OVA)致敏、激发小鼠以制备哮喘模型。小鼠肺组织进行HE及AB-PAS染色,进行气道炎症评分,ELISA法检测3组小鼠肺泡灌洗液(BALF)中IL-22的水平,实时荧光定量PCR检测小鼠肺组织中IL-22mRNA的表达水平。结果与对照组相比较,哮喘小鼠肺组织炎症评分增加,BALF中IL-22水平增高,肺组织中IL-22mRNA表达水平升高,差异均具有统计学意义。给予布地奈德治疗后,小鼠气道炎症评分及肺组织IL-22mRNA的表达水平均较哮喘组降低,差异具有统计学意义。结论布地奈德对哮喘气道炎症的治疗作用与其抑制肺内IL-22的表达和分泌有关。     

拆方研究通降和胃方对胃食管反流性咳嗽豚鼠气道炎症及肺通透性的影响

[目的] 观察通降和胃方及其拆方对胃食管反流性咳嗽豚鼠模型气道炎症及肺组织通透性的影响,探讨通降和胃方治疗胃食管反流性咳嗽的作用机制。[方法] 健康雄性豚鼠60只,随机分为通降和胃方组、疏肝泄热拆方组、和胃降逆拆方组、西药组、模型组和正常组。除正常组外,其余各组采用食管下端酸灌注法制作胃食管反流性咳嗽模型,并分别予相应药物混悬液及等量生理盐水处理,光镜下观察食管及气管组织学改变,伊文思蓝浸入法测定各组豚鼠的肺毛细血管通透性。[结果] 1)模型组食管、气管炎症积分较正常组明显升高;疏肝泄热拆方组、和胃降逆拆方组在改善豚鼠气管炎症上存在交互作用(P<0.05);通降和胃方与奥美拉唑在改善豚鼠食管、气管炎症积分上比较差异均有统计学意义(P<0.05)。2)模型组肺组织通透性较正常组明显升高(P<0.05),通降和胃方与奥美拉唑在改善豚鼠肺组织通透性上比较差异有统计学意义(P<0.05),疏肝泄热拆方组、和胃降逆拆方组在改善肺组织通透性上存在交互作用(P<0.05)。[结论] 通降和胃方全方能有效改善豚鼠食管、气管组织学改变,降低肺组织通透性,从而减少炎性渗出,达到治疗胃食管反流性咳嗽的目的。     

射干麻黄汤加味对哮喘小鼠气道炎症及树突细胞的影响

目的：探讨射干麻黄汤加味对慢性哮喘小鼠气道炎症及树突状细胞的影响。方法：健康清洁级雌性BALB／c小鼠50只,每组10只,随机分为A组：正常对照组;B组：哮喘模型组;C组：地塞米松组;D组：射干麻黄汤组;E组：射干麻黄汤加味组。建立慢性哮喘小鼠模型后,分别予以相应药物干预,取材后采用HE染色、免疫组化检测小鼠气道炎症情况及树突状细胞数量。结果：与正常对照组相比哮喘小鼠的BALF中白细胞总数、EOS、淋巴细胞、肺组织DC数量均明显增加（P〈0．05）;经给予地塞米松、中药处理后上述指标均明显减少,哮喘发作程度减轻（P〈0．05）,射干麻黄汤加味优于射干麻黄汤。结论：射干麻黄汤加味可抑制BALB／c哮喘小鼠哮喘的发生,其机制有可能是通过降低气道炎症及DC的数量而实现的。     

淫羊藿女贞子合布地奈德对哮喘大鼠肺组织JAKs/STAT4-5的影响

目的 研究中药淫羊藿女贞子煎剂及提取物配伍对布地奈德气道雾化的哮喘大鼠肺组织JAKs/STAT4-5蛋白磷酸化表达的影响。方法 SPF级雄性SD大鼠,采用数字表法随机分为7组,分别是正常组、模型组、布地奈德组、煎剂组、布地奈德合煎剂组、提取物组、布地奈德合提取物组。卵蛋白致敏、激发建立大鼠哮喘模型,雾化吸入布地奈德和（或）灌胃淫羊藿女贞子煎剂或提取物,免疫荧光法检测肺组织JAKs （包括JAK1、JAK2、JAK3、TYK2）及STAT4、STAT5蛋白的磷酸化表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠肺组织pJAK1、pJAK3、pTYK2和pSTAT5蛋白表达均显著上调（P均<0.01）,pJAK2和pSTAT4显著下调（P均<0.01）。与模型组比较,5个给药组均能显著影响pJAKs各蛋白的表达（P<0.01或P<0.05）,上调pSTAT4蛋白表达的阳性面积,下调pSTAT5蛋白的阳性面积及积分光密度（IOD）（P<0.01或P<0.05）。与单用布地奈德比较,布地奈德合煎剂组或合提取物组对pJAKs蛋白表达和pSTAT4、pSTAT5蛋白表达的Area作用更优（P均<0.01）。结论 在布地奈德治疗哮喘的同时合用中药淫羊藿女贞子,可通过调节JAK/STAT4-5蛋白的磷酸化表达产生协同增效作用。     

疏风通络方对哮喘大鼠嗜酸细胞跨膜迁移 相关因子VCAM-1/PI3K/Rac-1/NOX2/ NOX4/SHP-2表达影响的研究

[目的] 探讨疏风通络方对哮喘大鼠嗜酸细胞跨膜迁移的影响。[方法] 选择SPF级雄性Wistar大鼠70只为研究对象, 随机分为正常组、模型组、地塞米松组、DPI组、中药低、中、高剂量组, 共7组, 每组大鼠10只。第1天致敏:正常组给予生理盐水1 mL腹腔注射致敏, 而其他6组给予1 mL造模液(含V级卵清蛋白100 mg,氢氧化铝100 mg和灭活百日咳杆菌6×10⁹个)腹腔注射致敏;第15天开始激发:将各组大鼠分别置于相同大小的雾化箱内, 正常组给予生理盐水6 mL雾化激发, 其他6组给予5%的 V级卵清蛋白溶液6 mL雾化激发, 每次激发前2 h正常组给予生理盐水1 mL灌胃, 而其他6组给予相应的药物灌胃。各组每天激发1次, 每次激发30 min,连续激发10 d后处死大鼠, 并采集相应标本, 并进一步检测影响嗜酸细胞跨膜迁移的相关指标。[结果] 模型组肺组织嗜酸细胞跨膜迁移相关调节因子血管内皮黏附分子-1(VCAM-1)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、Rac-1、NADPH氧化酶2(NOX2)、NADPH氧化酶4(NOX4)、酪氨酸磷酸酶(SHP-2)出现高表达, 高于正常组(P<0.001);各治疗组与模型组相比, 地塞米松组抑制上述因子表达的效果最好(P<0.001),中药高剂量组的抑制效果略差于地塞米松组, 但两者差异无统计学意义(P>0.05),氯化二联苯碘(DPI)组、中药低、中剂量组抑制效果一般。[结论] 疏风通络方对哮喘大鼠嗜酸细胞跨膜迁移有一定的阻抑作用, 这可能是其平喘作用机制之一。     

天麻钩藤饮对原发性高血压患者动态血压及颈动脉中膜-内膜厚度、左室重构的影响

[目的] 观察天麻钩藤饮对轻中度原发性高血压患者(肝阳上亢证)降压效果及颈动脉中膜-内膜厚度、左室重构的影响。[方法] 将60例轻中度原发性高血压(肝阳上亢证)患者随机分为两组, 分别为天麻钩藤饮组(治疗组)和盐酸贝那普利组(对照组), 口服治疗各6个月后, 检测治疗前后两组患者24 h动态血压水平, 计算其血压平滑指数(SI), 并检测颈动脉中膜-内膜厚度(IMT), 左室重量指数(LVMI).[结果] 研究结果显示, 经过6个月的治疗, 治疗组治疗前后24 h平均动态收缩压(SBP)差异有统计学意义(P<0.01), 白天平均SBP及平均舒张压(DBP)均显着降低(P<0.01), 夜间平均SBP及平均DBP均明显降低(P<0.05), 白天降幅大于夜间。血压平滑指数:治疗组和对照组患者治疗后均具有较高的平滑指数, 两组比较差异无统计学意义。两组治疗前后IMT比较差异有统计学意义 (P<0.01), 两组治疗后比较差异有统计学意义(P<0.05).两组治疗前后LVMI差异有统计学意义(P<0.01), 两组治疗后比较无统计学差异。[结论] 提示天麻钩藤比盐酸贝那普利具有更好的降压作用, 具有同样的降压平滑指数, 对颈动脉粥样硬化、心脏重构有逆转作用。     

ｃ-ｋｉｔ磷酸化与哮喘气道重塑的关系及布地奈德对其的影响

目的:研究干细胞因子(stem cell factor,SCF)/c-kit通路在气道重塑中的作用及糖皮质激素影响气道重塑的可能机制.方法:将30只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘气道重塑组、布地奈德干预组,每组10只;鸡卵清蛋白致敏和激发建立哮喘小鼠气道重塑模型;HE染色观察各组气道炎症发生及气道结构改变情况;免疫沉淀/蛋白质印记(IP/WN)法测定各组小鼠肺组织中c-kit受体磷酸化程度的变化.结果:HE染色提示哮喘组与对照组相比出现黏膜下层和平滑肌增厚,气道管腔狭窄,大量炎细胞浸润的表现,布地奈德组上述改变较哮喘组为轻;IP/Wb检测发现磷酸化的c-kit受体在哮喘组表达较对照组为高(P<0.01),而布地奈德组表达量低于哮喘组(P<0.01).结论:c-kit受体磷酸化可能在哮喘气道重塑过程中表达上调;布地奈德抑制c-Kit受体磷酸化可能是其减轻气道炎症和气道重塑的机制之一.