APP/PSl双转基因阿尔海默病小鼠的繁殖及基因型鉴定

目的:繁殖和基因鉴定APP/PS1双转基因阿尔海默病(AD)小鼠。方法:将雄性纯合子APP/PS1双转基因AD小鼠与阴性纯合子(野生型)雌鼠进行交配。PCR鉴定APP/PS1双转基因AD传代小鼠的基因表型。结果:50只APP/PS1双转基因AD传代小鼠基因组DNA中31只小鼠基因组DNA扩增出300 bp的APP条带和600 b P的PS1条带。APP/PS1双转基因AD小鼠的饲养和繁殖获得成功,获得了较多的成功转入APP/PS1基因的纯合子小鼠。结论:正确饲养繁殖及利用PCR对AD模型鼠的繁殖小鼠进行基因鉴定,是有效获得APP/PS1双转基因纯合子小鼠的有效途径,为临床更好的研究认知障碍提供有效的AD动物模型。     

特应性皮炎小鼠模型研究进展

特应性皮炎（Atopic Dermatitis，AD）是一种慢性复发性炎症性皮肤病。随着人们对于该病研究的不断深入．AD的实验动物模型渐渐成为研究其发病机制和探索新的治疗途径的不可缺少的工具。本文综述近年有关AD小鼠模型的研究，将其分为3类：能自发产生AD样表现的小鼠，包括NC/Nga小鼠、NOA小鼠、DS-Nh小鼠；转基因小鼠，包括IL-4、IL-18、IL-31转基因小鼠；半抗原诱导的AD样皮肤损害，包括不同蛋白质致敏来诱导出现AD样皮肤损害、食物超敏反应的AD鼠模型。作者分别从其发病机理、病理特点等方面进行阐述，认为三类动物模型各自有其最适应的方向。NC/Nga小鼠最适于研究AD的发病机制和生理特征；基因技术小鼠模型适于研究特定因子在AD发病中的作用，并研究新的治疗途径；由于NC/Nga小鼠模型和基因技术小鼠模型的应用目前尚不能推广，半抗原诱导的模型仍然在我们的研究中占主要地位。     

乙型肝炎病毒转基因小鼠中外源基因整合的检测

目的了解乙型肝炎病毒DNA序列在乙型肝炎病毒转基因小鼠中的整合情况。方法用头尾相接的乙型肝炎病毒全序列基因,通过原核显微注射法产生转基因小鼠,用C区特异性引物扩增鼠尾DNA检测整合,对其中10只阳性鼠的扩增产物测序。结果128只仔鼠中,14只整合阳性。对10只阳性鼠测序,9只与所转基因序列完全相同,1只在1739、1740位缺失两个碱基。结论外源乙型肝炎病毒基因确定整合至小鼠基因组,多数为正常整合,但也存在缺失整合。     

过表达精神分裂断裂基因1对APP/PS1转基因阿尔茨海默病小鼠突触可塑性及学习记忆能力的改善

目的 探索精神分裂断裂基因1(DISC1)对APP/PS1转基因阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)小鼠突触可塑性及学习记忆能力的影响.方法 Western blot比较正常人和AD患者脑组织中DISC1的表达情况;体外培养C57胎鼠神经元,分为GFP组、GFP+Aβ组、DISC1+Aβ组,激光...     

外源突变型p53和潜伏膜蛋白1基因在转基因鼠不同器官组织中的表达

目的：观察转基因小鼠鼻腔、鼻咽、肺、食道、胃、大肠、肝、肾、脾中外源突变型p53mt和潜伏膜蛋白1基因的表达情况.方法：实验于2005-03/04在湖南中医学院中西医结合系基础研究室完成.选取4月龄转p53mt和潜伏膜蛋白1基因F0代小鼠1只,以正常同龄未转基因C57BL/6J小鼠4只作为对照.采用免疫组化分别检测转基因鼠和对照鼠鼻腔、鼻咽、肺、食道、胃、大肠、肝、肾、脾中p53mt和潜伏膜蛋白1基因的表达强度,用图像分析系统测定阳性反应物的平均灰度值.系统设定白色最大灰度为256,黑色最小灰度为0.灰度值越小,代表阳性反映程度越高.结果：实验纳入转基因鼠1只,对照鼠4只,均进入结果分析.①蛋白质阳性表达信号的定位分布：转基因鼠p53mt和潜伏膜蛋白1基因的免疫组化阳性信号均为棕黄色的颗粒或斑块,表达量高,p53mt蛋白绝大部分分布于细胞膜和胞浆内,少数位于细胞核中.对照鼠p53mt蛋白在组织中呈弱表达,潜伏膜蛋白1的蛋白阳性信号主要位于上皮细胞的细胞膜和胞浆中.②转基因鼠和对照鼠不同组织部位中p53mt基因表达的平均灰度值：转基因鼠食道、肝、脾中平均灰度值较高（131.75&;#177;17.25,135.15&;#177;13.14,139.42&;#177;11.55）,在鼻腔黏膜、鼻咽组织、大肠中平均灰度值较低（96.61&;#177;12.43,109.26&;#177;9.90,109.45&;#177;6.72）.除了胃、脾外,各组织部位与对照鼠比较均有显著差异（P＜0.05）.③转基因鼠和对照鼠不同组织部位中潜伏膜蛋白1基因表达的平均灰度值：转基因鼠鼻咽部平均灰度值最低（106.75&;#177;19.57）,其次为鼻腔、食道、肺、胃,而在大肠、肝、脾中表达水平较高（152.29&;#177;12.17,134.98&;#177;17.79,158.35&;#177;10.75）.除鼻腔、大肠、肝、脾外,各组织部位中潜伏膜蛋白1基因的表达水平与对照鼠比较均有显著差异（P＜0.05）.④转基因鼠不同组织部位中p53mt基因与潜伏膜蛋白1基因表达水平的相关性分析：转基因鼠鼻腔黏膜、鼻咽组织、食道、肺、胃、大肠、肝、肾、脾中潜伏膜蛋白1基因表达水平和p53mt基因表达水平无相关性（相关系数｜r｜分别为0.744,0.459,0.589,0.722,0.258,0.252,0.337,0.111,0.209）.结论：外源突变型p53mt基因在转基因鼠鼻腔、鼻咽和大肠中表达水平较高,潜伏膜蛋白1基因在鼻咽组织中表达呈最高.两种基因在不同器官组织部位的表达均存在显著性差异,尤以潜伏膜蛋白1基因表达的组织特异性较强,但两种基因的表达不存在相关性.     

外源突变型p53和潜伏膜蛋白1基因在转基因鼠不同器官组织中的表达

目的:观察转基因小鼠鼻腔、鼻咽、肺、食道、胃、大肠、肝、肾、脾中外源突变型p53m t和潜伏膜蛋白1基因的表达情况。方法:实验于2005-03/04在湖南中医学院中西医结合系基础研究室完成。选取4月龄转p53m t和潜伏膜蛋白1基因F0代小鼠1只,以正常同龄未转基因C57BL/6J小鼠4只作为对照。采用免疫组化分别检测转基因鼠和对照鼠鼻腔、鼻咽、肺、食道、胃、大肠、肝、肾、脾中p53m t和潜伏膜蛋白1基因的表达强度,用图像分析系统测定阳性反应物的平均灰度值。系统设定白色最大灰度为256,黑色最小灰度为0。灰度值越小,代表阳性反映程度越高。结果:实验纳入转基因鼠1只,对照鼠4只,均进入结果分析。①蛋白质阳性表达信号的定位分布:转基因鼠p53m t和潜伏膜蛋白1基因的免疫组化阳性信号均为棕黄色的颗粒或斑块,表达量高,p53m t蛋白绝大部分分布于细胞膜和胞浆内,少数位于细胞核中。对照鼠p53mt蛋白在组织中呈弱表达,潜伏膜蛋白1的蛋白阳性信号主要位于上皮细胞的细胞膜和胞浆中。②转基因鼠和对照鼠不同组织部位中p53m t基因表达的平均灰度值:转基因鼠食道、肝、脾中平均灰度值较高(131.75±17.25,135.15±13.14,139.42±11.55),在鼻腔黏膜、鼻咽组织、大肠中平均灰度值较低(96.61±12.43,109.26±9.90,109.45±6.72)。除了胃、脾外,各组织部位与对照鼠比较均有显著差异(P<0.05)。③转基因鼠和对照鼠不同组织部位中潜伏膜蛋白1基因表达的平均灰度值:转基因鼠鼻咽部平均灰度值最低(106.75±19.57),其次为鼻腔、食道、肺、胃,而在大肠、肝、脾中表达水平较高(152.29±12.17,134.98±17.79,158.35±10.75)。除鼻腔、大肠、肝、脾外,各组织部位中潜伏膜蛋白1基因的表达水平与对照鼠比较均有显著差异(P<0.05)。④转基因鼠不同组织部位中p53mt基因与潜伏膜蛋白1基因表达水平的相关性分析:转基因鼠鼻腔黏膜、鼻咽组织、食道、肺、胃、大肠、肝、肾、脾中潜伏膜蛋白1基因表达水平和p53m t基因表达水平无相关性(相关系数｜r｜分别为0.744,0.459,0.589,0.722,0.258,0.252,0.337,0.111,0.209)。结论:外源突变型p53m t基因在转基因鼠鼻腔、鼻咽和大肠中表达水平较高,潜伏膜蛋白1基因在鼻咽组织中表达呈最高。两种基因在不同器官组织部位的表达均存在显著性差异,尤以潜伏膜蛋白1基因表达的组织特异性较强,但两种基因的表达不存在相关性。     

胎鼠子宫内电穿子L检测胎鼠脑生物学形态指标

该课题对胚胎期12．5、13．5、14．5d的C57／BL6孕鼠胎鼠以不同的电压参数进行子宫内电穿孔，分析比较不同电压对不同胚胎期胎鼠的存活率，从而总结出适应胚胎期12．5、13．5、14．5d胎鼠的最优电转电压参数。结果显示，胚胎早期，电转所需要的电压相对小一些，同样胚胎早期的胎鼠的存活率低一些。。在E14．5胎鼠脑室单侧电穿孔电转带有PCDF．EGFP质粒。该质粒表达绿色荧光蛋白（GFP）。进一步分析了电转后不同天数转染细胞的迁移程度，结果显示，在电转后2d，转染阳性的细胞主要分布在脑室和中间带，而在转染后3d，转染阳性细胞在脑室、中间带及皮层均有分布。继而对电转后的皮层厚度进行了分析，结果显示，电转皮层的厚度与未进行电转的皮层没有明显区别。该结果为子宫内电转在皮层发育中的应用提供了技术支持，并表明子宫内电转可以应用在皮层发育研究中。     

人慢性粒细胞白血病小鼠实验模型的研究

目前制备人慢性粒细胞白血病(CML)小鼠模型的方法主要有三种：①用CML细胞种植免疫缺陷鼠(SCID或NOD／SCID)；②用表达P210^bcr/abl。逆转录病毒载体转染小鼠骨髓细胞并移植人正常鼠体内；③构建bcr／abl转基因鼠。所有这些CML动物模型的研究加深了人们对CML致病机理的认识。本文就目前人CML小鼠模型的研究进展作一综述。     

阿尔茨海默病APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠脑区中老年斑的分布

目的:观察老年斑在不同月龄的APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠脑区中的分布。方法:将雄性的杂合子小鼠与C57BL/6J雌鼠交配,所生的小鼠提取鼠尾DNA,PCR扩增目的基因。取鉴定为阳性的2.5、4.5、8月龄的杂和子小鼠各3只,进行Thioflavine S和Aβ免疫组织化学染色,观察老年斑的沉积。结果:共生产小鼠F1代39只,鉴定为阳性的有17只,阳性率为43.6%。组织学染色发现2.5月龄小鼠的脑区未见老年斑沉积,而4.5月龄及8月龄小鼠的皮质及海马可见老年斑沉积,并且随着月龄的增加,老年斑的数目增多,面积增大。结论:APP-swe/PS1ΔE9双转基因小鼠在4月龄时已有老年斑的沉积,为研究AD提供了很好的载体。     

铁在阿尔茨海默病APPswe/PS1ΔE9双转基因小鼠模型脑组织内的沉积

目的:研究铁在阿尔茨海默病(AD)APPswe/PS1ΔE9转基因小鼠脑区中的沉积情况以及与老年斑的对应关系,并探讨铁在AD发病机制中的作用。方法:将PCR鉴定为阳性的APPswe/SI△E双转基因4及8月龄小鼠为实验组,通过Thioflavine S,Perl’s-DAB,Aβ免疫组化染色,观察铁在脑组织中的沉积并与同月龄野生型小鼠(对照组)对照比较。结果:实验组小鼠基底神经节处均见到铁的沉积,在皮质及海马处呈棕褐色沉积,其分布与老年斑的分布相类似;而对照组小鼠的皮质及海马未见铁的沉积。结论:脑内过多铁的沉积可能是Aβ蛋白在脑内聚集,从而形成老年斑的原因之一,提示铁螯合剂疗法有可能成为治疗AD的一个新的靶点。     

黄连解毒汤对APP/PS1双转基因AD小鼠海马区病理形态学及脑内β-APP基因mRNA的影响

目的:探讨黄连解毒汤(HLJDD)对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(AD)模型小鼠海马CA1区的病理形态学及脑内β-淀粉样前体蛋白(β-APP)基因mRNA的影响。方法:选用3月龄的APP/PS1双转基因AD小鼠模型50只,随机分为对照组、安理申组、HLJDD大剂量组、HLJDD中剂量组、HLJDD小剂量组各10只,分别给予安理申或不同剂量HLJDD灌胃治疗6个月,对照组不予治疗,记录并比较各组死亡率;分别于6月龄和10月龄时采用HE染色观察各组海马CA1区神经细胞形态,采用改良甲醇刚果红染色观察各组老年斑形成情况;于末次灌胃治疗后,通过实时荧光定量PCR检测各组脑内β-APPmRNA水平。结果:各组小鼠死亡率差异无统计学意义;10月龄HLJDD各剂量组海马CA1区神经损伤情况较对照组明显减轻,老年斑数量少于对照组(P0.05);HLJDD各剂量组β-APPmRNA水平低于对照组(P0.05),其中以中剂量组水平降低最明显(P0.01)。结论:HLJDD能保护海马神经细胞。     

阿尔茨海默病APPswe/PS1dE9双转基因小鼠对挥发性吸入麻醉药药物敏感性的变化

目的:研究阿尔茨海默病APPswe/PS1dE9双转基因小鼠对挥发性吸入麻醉药药物敏感性的变化.方法:C57BL/6J雌鼠与C3H/HeJ雄鼠交配得到F1代.再将F1代与3月龄的APPswe/PSldE9双转基因小鼠交配得到F2代.F2代小鼠提取鼠尾DNA,PCR扩增目的基因并鉴定.选8月龄F2代同窝小鼠根据是否含APP和PSI基因分为转基因组和野生对照组,用夹尾法分别测定两组异氟醚、七氟醚和地氟醚3种挥发性吸入麻醉剂的最低肺泡有效浓度(MAC值).结果:繁育F2代小鼠12只,其中转基因组7只,野生对照组5只.转基因组小鼠3种挥发性吸入麻醉剂MAC值分别为异氟醚1.129 ±0.160,七氟醚1.900±0.153,地氟醚5.614±0.363,均较野生对照组低,但是无统计学差异(P>0.05).结论:APP/PSI双转基因对8月龄小鼠异氟醚、七氟醚、地氟醚3种挥发性吸入麻醉剂的MAC值无明显影响.     

小檗碱对三转基因阿尔茨海默病小鼠海马组织Aβ和Bcl-2、Bax表达的影响

目的:观察旋小檗碱对APP/PS1/Tau三转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠海马组织β-淀粉样蛋白(Aβ)和Bcl-2、Bax表达的影响。方法:20只三转基因AD小鼠随机分为对照组和给药组,各10只。加药组给予小檗碱50 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃,对照组给予等容量生理盐水灌胃,共3个月。Western Blot检测小鼠海马组织蛋白Aβ、Bcl-2和Bax表达,免疫组化测定小鼠海马Aβ表达,ELISA检测小鼠海马Bcl-2、Bax表达。结果:给药组海马组织Aβ表达较对照组降低(P0.05);与对照组比较,给药组海马组织Bcl-2表达增加而Bax表达减少(P0.05)。结论:小檗碱能降低三转基因AD小鼠的Aβ表达,其机制可能与Bcl-2和Bax表达改变有关。     

pEGFP/A_2M(FP_6)转染神经干细胞海马移植治疗APP/PS1双转基因AD小鼠的实验观察

目的:携带pEGFP/A2M(FP6)的神经干细胞(NSCs)定向移植到APP/PS1双转基因AD小鼠海马内,观察移植细胞的分化、迁移,脑内Aβ沉积的变化,以及对AD小鼠学习记忆功能的影响。方法:APP/PS1转基因AD小鼠分为假手术(SO)组、人工脑脊液(ACSF)组、转染pEGFP的NSCs(pEGFP-NSCs)组及转染pEGFP/A2M(FP6)的NSCs(pEGFP/A2M(FP6)-NSCs)组,移植物小鼠海马CA1区定位注射,水迷宫实验检测小鼠认知功能,免疫组化观察小鼠脑内移植细胞的分化、迁移及Aβ病理变化。结果:pEGFP/A2M(FP6)-NSCs组和pEGFP-NSCs组转基因小鼠逃避潜伏期较SO组及ACSF组显著缩短(P<0.05);pEGFP/A2M(FP6)-NSCs组转基因小鼠逃避潜伏期较pEGFP-NSCs组缩短(P<0.05)。pEGFP/A2M(FP6)-NSCs组和pEGFP-NSCs组转基因小鼠海马及皮质内,部分Aβ染色阳性斑块周围可见表达EGFP的移植细胞。pEGFP/A2M(FP6)-NSCs组转基因小鼠额叶、海马区域,Aβ染色阳性斑块数量和平均面积均较其他3组显著减少(P<0.05)。移植的NSCs,部分细胞Nestin染色呈阳性,部分细胞GFAP染色呈阳性,少数细胞MAP-2染色呈阳性。结论:移植pEGFP/A2M(FP6)NSCs到APP/PS1双转基因AD小鼠海马,可减少AD小鼠脑内Aβ斑块沉积,部分移植的NSCs分化为神经元及星形胶质细胞,小鼠的学习记忆功能显著改善。     

Detection of amyloid plaques targeted by USPIO-Aβ1-42 in Alzheimer's disease transgenic mice using magnetic resonance microimaging

Amyloid plaques are one of the pathological hallmarks of Alzheimer's disease (AD). The visualization of amyloid plaques in the brain is important to monitor AD progression and to evaluate the efficacy of therapeutic interventions. Our group has developed several contrast agents to detect amyloid plaques in vivo using magnetic resonance microimaging (μMRI) in AD transgenic mice, where we used intra-carotid mannitol to enhance blood-brain barrier (BBB) permeability. In the present study, we used ultrasmall superparamagnetic iron oxide (USPIO) nanoparticles, chemically coupled with Aβ1-42 peptide to detect amyloid deposition along with mannitol for in vivo μMRI by femoral intravenous injection. A 3D gradient multi-echo sequence was used for imaging with a 100μm isotropic resolution. The amyloid plaques detected by T2*-weighted μMRI were confirmed with matched histological sections. Furthermore, two different quantitative analyses were used. The region of interest-based quantitative measurement of T2* values showed contrast-injected APP/PS1 mice had significantly reduced T2* values compared to wild-type mice. In addition, the scans were examined with voxel-based morphometry (VBM) using statistical parametric mapping (SPM) for comparison of contrast-injected AD transgenic and wild-type mice. The regional differences seen in VBM comparing USPIO-Aβ1-42 injected APP/PS1 and wild-type mice correlated with the amyloid plaque distribution histologically, contrasting with no differences between the two groups of mice without contrast agent injection in regions of the brain with amyloid deposition. Our results demonstrated that both approaches were able to identify the differences between AD transgenic mice and wild-type mice, after injected with USPIO-Aβ1-42. The feasibility of using less invasive intravenous femoral injections for amyloid plaque detection in AD transgenic mice facilitates using this method for longitudinal studies in the pathogenesis of AD.     

造血干细胞移植建立血小板整合素β3胞内段截短体转基因小鼠模型

本研究通过逆转录病毒感染整合素β3缺陷小鼠（β3-/-）骨髓造血干细胞再进行骨髓移植建立β3及其胞内段不同截短体的转基因小鼠模型,为进一步研究整合素β3胞内段在血小板双向信号转导途径中的作用提供基础。将整合素β3野生型、β3-Δ759（缺失R760GT762氨基酸片段）和β3-Δ754（缺失T755NITYRGT762氨基酸片段）的cDNA分别克隆至带有GFP编码基因的MSCV MigR1逆转录病毒载体质粒中,用质粒转染BOSC23包装细胞株包装出带有β3全长及不同突变体的逆转录病毒,再感染β3-/-供体小鼠骨髓细胞,尾静脉注射移植入经致死剂量辐照的野生型C57BL/6小鼠体内,移植后6-8周流式细胞术检测GFP和β3的表达率以评估转基因效率。结果表明,成功建立了空载（Vector）、β3野生型和截短突变β3-Δ759、β3-Δ754等4种小鼠模型,血小板转基因成功的比率（即GFP阳性率）为18%-66%,转基因血小板β3表达可达到β3＋/-水平。结论：利用逆转录病毒感染的造血干细胞移植建立血小板转基因小鼠模型是一种高通量快速有效的建立转基因小鼠模型的方法,这为进一步研究整合素β3胞内不同区段对血小板整合素信号转导途径的影响及体内对血小板进行基因操作和基因治疗奠定了基础。     

小鼠牙本质涎蛋白转基因载体的构建

Dentinsialophosphoprotein(DSPP)isaproteinthatrelatescloselytothedevelopmentandbiomineralizationoftooth,andcon-sistsoftwoproteinscalleddentinsialoprotein(DSP)anddentinphosphoprotein(DPP),whicharedifferentbutrelatedinfunction犤1-2犦.Itishardtoestablishakindofinvitromodelforthestudiesaboutitsfunctionbecauseofthespecialityofitsstructureandfunction.TostudythefunctionofDSPPfurther,thustoelucidateitsexactfunc-tioninthedevelopmentandbiomineralizationoftooth,aseriesofinvivomodelsforthestudiesofthe…     

NUP98-HOXA9融合基因转基因小鼠的建立及乙烷亚硝基脲诱变的研究

目的从整体动物水平阐明NUP98 HOXA9融合蛋白在白血病发病机制中的作用。方法采用分子克隆技术构建含有NUP98 HOXA9的转基因质粒 ,经显微注射建立含有该融合基因的转基因小鼠 ,并对其细胞表型进行分析 ;采用PCR、RT PCR等技术进行转基因整合和表达检测 ;对表型正常的转基因小鼠用乙烷亚硝基脲 (ENU)诱变 ,观察转基因小鼠的表型变化。结果 5个单系的转基因小鼠在骨髓细胞中检出NUP98 HOXA9融合基因的稳定表达 ,但血常规、骨髓象及肝、脾等未见异常改变。ENU诱变后部分转基因阳性小鼠出现类似人类慢性髓系白血病的表现。结论NUP98 HOXA9融合基因产物能在转基因小鼠中表达 ,但不足以诱发白血病 ;ENU诱变结果提示转基因小鼠对ENU造成的第二次打击可提高白血病的易感性