乙型肝炎患者树突状细胞内HBV DNA存在状况的研究

目的:研究慢性乙型肝炎患者外周血培养的树突状细胞(DC)内乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)存在状况,分析HBV DNA与DC功能下降的内在联系.方法:从慢性乙型肝炎患者外周血中分离单个核细胞,在含rhGM-CSF,rhIL-4的培养基中诱导培养为DC,用流式细胞仪检测乙肝患者DC的表型变化,用流式细胞仪分选出树突状细胞,应用PCR技术检测DC内HBV DNA存在状况.结果:①表达于慢性乙型肝炎患者DC表面的共刺激分子(B7-1,B7-2,CD1α)及MHC-Ⅱ类分子(HLA-DR)的水平明显降低.②树突状细胞内HBV DNA检测结果阳性.结论:乙型肝炎患者树突状细胞内存在HBV DNA感染,慢性乙型肝炎患者树突状细胞与正常人相比,表型表达降低.     

负载HBcAg对慢性HBV感染患者树突状细胞的活化作用及功能影响

目的:探讨免疫耐受期慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血树突状细胞(DC)负载HBcAg后细胞表型及免疫功能的改变。方法:从CHB免疫耐受期患者外周血分离培养DC,在DC成熟前,加入重组HBcAg表位肽,诱导HBV特异性DC分化成熟,流式细胞仪检测DC表面共刺激分子CD1a、CD80、CD83的表达水平,应用淋巴细胞增殖试验评估DC功能。结果:负载不同剂量的HBcAg后,DC细胞活化增强,DC细胞共刺激分子标志物CD1a、CD80以及CD83表达率均明显上升,且随着抗原负载剂量的增加,表达率进一步增加,各组之间差异具有统计学意义(均P<0.001);未负载HBcAg的DC细胞激活的淋巴细胞反应较弱,负载HBcAg的DC细胞刺激同种异体健康成人T淋巴细胞增殖能力增强,且随着负载抗原剂量的加大,T淋巴细胞的增殖能力进一步提高,与未负载抗原的对照组相比,差异具有统计学意义(F=428.14,P=0.000)。结论:体外负载HBcAg刺激CHB患者DC细胞可增强其有效抗原提呈能力,促进T淋巴细胞增殖。     

慢性乙型肝炎患者树突状细胞的研究进展

全世界约有3．5亿慢性乙型肝炎病毒（Hepatitis Bvirus，HBV）携带者，而我国是乙型肝炎的高发区，约有1．2亿HBV携带者，因此慢性HBV感染是当前我们急需解决的难题。新近的研究表明，乙型肝炎患者的树突状细胞（dendritic cell，DC）表型和功能的缺陷可导致患者体内T、B淋巴细胞耐受，继而导致HBV感染的慢性化。目前对DC应用于乙型肝炎的基础理论及实验研究已经取得惊人的进展，成为研究慢性乙型肝炎免疫学发病机制的前沿领域。     

乙型肝炎病毒感染者外周血树突状细胞的检测分析

目的检测急、慢性乙型肝炎、肝硬化患者和健康人外周血树突状细胞(DC)数量和功能的变化,了解DC与乙型肝炎病毒感染(HBV)的关系。方法采用流式细胞技术检测15例急性乙型肝炎,40例慢性乙型肝炎,20例肝硬化患者及25例健康人体内DC亚群(MDC和PDC)的变化;体外分离培养产生的DC1表型及刺激混合性淋巴细胞反应(MLR)的能力反映MDC的功能;外周血单个核细胞(PBMCs)产生的α-干扰素水平反映PDC的功能。结果慢性乙型肝炎患者的DC1表面CD80、CD86、CD83的表达水平低于健康人;健康人外周血MDC的比例为0.42%±0.09%,绝对数为(12.9±6.1)×106/L,两者在慢性肝炎、肝硬化患者中均下降;而健康人外周血PDC的比例为0.37%±0.14%,绝对数为(9.0±4.1)×106/L,两者在慢性肝炎、肝硬化患者均降低,慢性肝炎和肝硬化患者PDC分泌的α-干扰素量也低于健康人。结论慢性乙型肝炎、肝硬化患者体内两种DC均出现数量和功能异常,此种异常降低了DC的抗原递呈作用,导致HBV的慢性化及疾病进程。     

乙型肝炎肝硬化患者外周血树突状细胞亚群的鉴定及其临床意义

目的：探讨检测乙型肝炎肝硬化患者外周血树突状细胞（DC）亚群的临床意义。方法采用流式细胞分析技术检测42例乙型肝炎肝硬化患者、45例慢性乙型肝炎患者和30例健康人外周血 DC 细胞亚群和淋巴细胞亚群的构成,比较三者间的差异。结果乙型肝炎肝硬化患者外周血 DC1和 DC2百分数分别为（0.2±0.1）%和（0.2±0.04）%,慢性乙型肝炎患者为（0.3±0.1）%和（0.2±0.1）%,均显著低于健康人群[（0.4±0.1）%和（0.3±0.1）%, P＜0.01];13例 HBeAg 阳性乙型肝炎肝硬化患者外周血 DC2亚群细胞绝对计数为（5.62±1.28）个/μL,显著低于29例 HBeAg 阴性的乙型肝炎肝硬化患者[（8.75±2.32）个/μL,P＆lt;0.05],但是两者 DC1细胞水平无明显差别;乙型肝炎肝硬化患者外周血 CD4＋T 淋巴细胞和 CD8＋T 淋巴细胞计数分别为（588.4±124.2）个/μL 和（338.5±97.4）个/μL,均显著低于慢性乙型肝炎患者[（686.7±106.5）个/μL 和（432.1±102.6）个/μL,P＜0.05],而且乙型肝炎肝硬化患者和慢性乙型肝炎患者外周血 CD8＋T 细胞数均显著低于健康对照人群[（560.2±105.6）个/μL,P＜0.05]。结论乙型肝炎肝硬化患者外周血 DC1和 DC2数量减少,伴 CD8＋T 细胞数降低,可能是导致肝硬化形成的原因之一。     

慢性HBV感染者树突状细胞体外经HBsAg活化后的免疫效应

目的研究慢性HBV感染者、健康人的外周血树突状细胞(DC)经HBsAg活化后免疫功能的差异。方法从慢性HBV感染组及健康组外周血中培养扩增(以HBsAg刺激)DC和细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)。用流式细胞仪检测DC、CIK的表型,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测DC、CIK上清液中的白细胞介素-12(IL-12)的浓度,用CCK-8比色法测定DC共培养的CIK对HepG2.2.15细胞的杀伤活性。结果经HBsAg致敏的健康组DC表面标志CD1a、CD80、HLA-DR及CD83阳性率明显高于慢性HBV感染组,差异具有统计学意义(P<0.01);慢性HBV感染组中经HBsAg致敏的DC表面标志阳性率与未经HBsAg致敏者相比差异无统计学意义(P>0.05)。健康组DC经HBsAg致敏后诱导的CIK对HepG2.2.15细胞的杀伤率显著高于慢性HBV感染组(P<0.01)。结论慢性HBV感染组与健康组DC经HBsAg活化后,对HepG2.2.15细胞的免疫效应差异有统计学意义,健康组高于慢性HBV感染组。     

乙型肝炎病毒在造血干细胞内复制及对其免疫活性的影响

目的 研究不同载量HBV感染脐血来源的CD34~+造血干细胞(HSC)的一般规律,以及探讨HBV感染HSC后诱生的树突状细胞(DC)的功能状态.方法 无菌条件下采集脐血,磁珠分离仪分离纯化CD34~+ HSC.把CD34~+ HSC分为HBV感染组及对照组,用免疫组织化学及原位杂交方法检测HSC内病毒感染情况.分3组将HSC接种于24孔板连续培养12 d,各组分别加入细胞因子组合及不同病毒载量HBV(A组1×10~7拷贝/mL,,B组1×10~5拷贝/mL,C组1×10~3拷贝/mL)的血清,于培养的0、1、6、12 d检测各组细胞数,上清液及细胞中HBV DNA拷贝数.用两步法诱生的DC作为刺激细胞,以异基因健康者外周血T淋巴细胞作为反应细胞,噻唑蓝比色法检测DC对同种异体T淋巴细胞的刺激增殖作用.组间比较采用t检验.结果 免疫组织化学检测结果显示,HBV感染12 d的HSC中可检测到HBsAg的表达,而未感染的HSC中无HBsAg阳性细胞.原位杂交检测结果显示,HBV感染12 d的HSC中可检测到HBV DNA,未感染的HSC中无阳性细胞.C组第1天的细胞增殖与A、B组比较无明显差异,第6、12天细胞增殖高于A、B组,且第6天的细胞计数差异有统计学意义(t=5.125,t=6.327;均P<0.05).在第12天A组细胞内可检出1×10~6拷贝/mL HBV DNA,B组可检出1×10~3拷贝/mL,C组则12 d内均不能检出.上清液检出情况与细胞内相符.混合淋巴细胞反应显示HBV感染组诱生的DC对同种异体T淋巴细胞刺激增殖作用明显低于对照组,且差异有统计学意义(在DC与T淋巴细胞的比例达到0.05时,t=3.156,P<0.05;在比例达到0.1、0.5时,t=4.873,t=5.103,均P<0.01).结论 HBV可以在CD34~+ HSC内复制并随HSC扩增而同步增加.HBV感染的HSC诱生的DC对同种异体T淋巴细胞刺激增殖能力减低,即HBV感染HSC后其分化的免疫细胞的生物活性降低.     

不同病程的慢性乙型肝炎病毒感染者外周血中调节性T细胞和自然杀伤细胞的表达及相关性

目的:观察乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)慢性感染者外周血中调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)和自然杀伤(natural killer,NK)细胞的表达及相关性.方法:选取HBV慢性感染患者共96例,其中慢性乙型肝炎患者42例,乙型肝炎肝硬化患者30例,HBV携带者24例,抽取外周血用流式细胞分析技术检测其Tregs和NK细胞的表达情况.同时选取健康者21例作为对照组.结果:HBV慢性感染者外周血CD4+CD25+Foxp3+Tregs占CD4+T细胞的比例整体高于健康对照组,其中乙型肝炎肝硬化患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Tregs占CD4+T细胞的比例最高,其次为慢性乙型肝炎患者,最后为HBV携带者和健康对照组.相反,NK细胞占淋巴细胞的比例在HBV慢性感染者外周血中整体较健康对照组低,其中乙型肝炎肝硬化组表达最低,其次为慢性乙型肝炎组,最后为HBV携带者,但都低于健康对照组.进一步分析显示NK细胞的表达与Tregs呈负相关性(r=-0.3280,P0.05).结论:不同阶段的HBV慢性感染患者外周血中Tregs和NK细胞表达不同,且两者呈明显的负相关性.     

慢性乙型肝炎树突状细胞表型和功能的变化与免疫耐受

目的 观察慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者树突状细胞（DC）形态和功能的改变。方法 从13例慢性乙型肝炎患者和11例健康人外周血中分离和培养DC,观察DC的形态,用流式细胞仪检测DC表面标记HLA－DR、CD1a、CD80和CD86的表达,用^3H-TdR掺入法测定DC诱导混合性淋巴细胞反应（MLR）的能力。结果 正常DC较慢性乙型肝炎患者在形态上更为典型,不规则,HLA－DR、CD80和CD86分子的表达水平较高（P＜0.05）,诱导MLR的能力较强（P＜0.05）。结论 慢性乙型肝炎患者外周血DC处于不完全成熟状态,其免疫刺激能力较低。     

儿童慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞亚群的变化和临床特点

目的观察慢性乙型肝炎患儿外周血树突状细胞(DC)亚群的变化,探讨DC亚群在乙型肝炎慢性化中的意义.方法慢性乙型肝炎患儿组26例,HBV携带儿童组16例,健康儿童25例,利用流式细胞技术对患者外周血髓样树突状细胞(mDC)和浆细胞样树突状细胞(pDC)的百分比和绝对值进行检测,并用CPG2216刺激外周血单个核细胞(PBMC),检测pDC的α干扰素产生能力.结果与健康对照组比较,慢性乙型肝炎患儿组血mDC和pDC的百分比和数量均显著下降(P＜0.05),PBMC经CpG2216刺激后产生干扰素的能力较健康对照组也有显著下降(P＜0.05),而HBV携带儿童仅pDC百分比与健康儿童比较有明显下降(P＜0.05).相关性分析表明,HBV携带儿童pDC绝对值与HBV DNA水平之间存在正相关(r=0.5464,P=0.0351),而慢型性乙型肝炎患儿mDC绝对值与HBV DNA水平存在负相关(r=-0.4554,P=0.0194).结论慢性乙型肝炎患儿外周血DC亚群下降的频率和数量导致其功能损伤,可能与HBV持续感染的致病机制有关.     

CD127在慢性重型乙型肝炎患者外周血T细胞中的表达及意义

目的:研究慢性重型乙型肝炎患者外周血T细胞表面CD127表达水平的变化及与慢性重型乙型肝炎发病的关系。方法:流式细胞术检测30例慢性重型乙型肝炎、20例慢性乙型肝炎(CHB)患者和20例健康志愿者外周血T细胞中CD127的表达,用ELISA方法检测血清中细胞因子IL-7(白细胞介素-7)的表达。结果:慢性重型乙型肝炎组和CHB组CD8+T比例均较健康对照组高(P均<0.01),慢性重型乙型肝炎组CD4+T比例较健康对照组高(P<0.01)。慢性重型乙型肝炎与CHB组CD127+细胞的比例均较健康对照组低(P均<0.05)。慢性重型乙型肝炎组CD4+CD127+双阳性细胞的比例低于CHB组,CHB组又低于健康对照组(P均<0.01);慢性重型乙型肝炎组CD8+CD127+双阳性细胞比例较CHB组和健康对照组低(P均<0.01)。CD8+CD127+细胞的表达与HBV DNA载量呈负相关。慢性重型乙型肝炎组和CHB组血清IL-7含量均较健康对照组高(P均<0.01)。结论:慢性重型乙型肝炎患者外周血中CD4+CD127+、CD8+CD127+细胞表达降低;以CD8+CD127+降低更明显,并与HBV DNA载量呈负相关;血清中IL-7表达增高,可能与慢性重型乙型肝炎的发病有关。     

Dendritic cells from chronic hepatitis B patients can induce HBV antigen-specific T cell responses

AIM: To determine whether dendritic cells (DCs) from chronic hepatitis B patients could induce HBV antigen-specific T cell responses or not. METHODS: DCs were generated from peripheral blood mononuclear cells of patients with chronic hepatitis B (CHB) infection and healthy donors. We compared the phenotypes of these DCs and their ability to secrete cytokines and to participate in mixed lymphocyte reactions. In addition, autologous lymphocytes were cultured with DCs loaded with HBV core region peptide HBcAg8-27, an epitope recognized by cytotoxic T lymphocytes (CTL), and bearing human leucocyte antigen (HLA)-A2 for 10 d. Cytokine secretion and lytic activity against peptide-pulsed target cells were assessed. RESULTS: DCs with typical morphology were generated successfully by culturing peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from CHB patients with AIM-V containing GM-CSF and IL-4. Compared with DCs from normal donors, the level of CD80 expressed in DCs from CHB patients was lower, and DCs from patients had lower capacity of stimulate T cell proliferation. When PBMCs isolated from patients with chronic or acute hepatitis B infection and from normal donors were cocultured with HBcAg18-27 peptide, the antigen-specific memory response of PBMCs from acute hepatitis B patients was stronger than that of PBMCs from chronic hepatitis B patients or normal donors. PBMCs cocultured with DCs treated with HBcAg18-27 CTL epitope peptide induced an antigen-specific T cell reaction, in which the level of secreted cytokines and lytic activity were higher than those produced by memory T cells. CONCLUSION: DCs from patients with CHB can induce HBV antigen-specific T cell reactions, including secretion of cytokines essential for HBV clearance and for killing cells infected with HBV.     

慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞诱导特异性T淋巴细胞应答

目的 探讨慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞(Dc)是否诱导特异性T细胞应答。方法(1)将研究对象分为慢性乙型肝炎患者组、急性乙型肝炎痊愈组、健康志愿者组,分离各组研究对象的外周血单个核细胞(PBMC),细胞内细胞因子染色方法检测其对细胞毒性T淋巴细胞(CTL)特异表位多肽乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)18-27的记忆性免疫应答;(2)培养慢性乙型肝炎患者DC,将负载有乙型肝炎抗原表位多肽的DC诱导特异的T细胞应答。采用细胞内细胞因子染色方法检测诱导的T细胞分泌的细胞因子,乳酸脱氢酶释放法测定诱导的T细胞杀伤活性。结果(1)急性乙型肝炎患者PBMC对HBcAg 18-27 CTL特异表位多肽存在记忆的免疫应答,其分泌干扰素-γ的CD8+T细胞占CD8+T细胞总数的(4.3±2.5)％,分泌白细胞介素-2的占总细胞数的(4.8±2.2)％,分泌肿瘤坏死因子-α占总细胞数的(4.6±2.3)％。而慢性乙型肝炎患者和健康志愿者对其记忆应答很低,与急性乙型肝炎患者比较差异有显著性,t值为2.508-3.305,P<0.05。(2)用多肽共孵育过的慢性乙型肝炎患者DC多次诱导的T细胞慢性乙型肝炎患者组,加肽孵育的靶细胞比例为30:1、10:1、3:1时,其杀伤率分别为(57.0±20.3)％、(49.5±20.2)％、(21.8±12.9)％,均高于对照组,表明慢性乙型肝炎患者DC可以诱导特异的T     

中国乙型肝炎患者外周血淋巴细胞亚群频率参考值范围

目的 调查中国乙型肝炎患者外周血淋巴细胞亚群频率参考值范围.方法 利用流式细胞术检测2846例乙型肝炎患者和117例健康人群外周血淋巴细胞亚群数值,调查我国健康人群和乙型肝炎人群的参考值范围.结果 调查了16～60岁健康人群和HBV感染相关的急性肝炎、慢性肝炎、重型肝炎和肝硬化人群外周血CD3+T淋巴细胞、CD3+CD...     

外周血DNT细胞和T细胞亚群检测在乙型肝炎病毒感染者诊断中的意义

目的：探讨乙型肝炎病毒感染者外周血CD3＋CD4-CD8-T细胞（DNT）和T细胞亚群的变化及意义。方法使用流式细胞仪检测136例乙型肝炎病毒感染者,包括33例无症状携带者、28例急性乙型肝炎患者、28例轻度慢性乙型肝炎患者、25例中度慢性乙型肝炎患者、22例重度慢性乙型肝炎患者和39例健康人外周血DNT细胞及T细胞亚群。结果健康人群和急性乙型肝炎患者外周血DNT细胞比例分别为（4.82±3.43）%和（4.75±2.71）%,显著低于无症状携带者[（5.43±3.31）%,P〈0.05]和慢性乙型肝炎患者（P〈0.05）;轻度慢性乙型肝炎患者DNT细胞比例为（7.97±4.12）%,显著低于重度慢性乙型肝炎患者[（11.36±5.01）%,P〈0.05];中度慢性乙型肝炎患者DNT细胞比例为（8.41±4.93）%,也显著低于重度慢性乙型肝炎患者（P〈0.05）;健康人、急性乙型肝炎患者和无症状携带者之间 T 淋巴细胞亚群分布无明显差异,但随着慢性乙型肝炎患者病情加重,外周血 CD3＋、CD3＋CD4＋CD8-细胞比例降低（P〈0.05）,CD3＋CD4-CD8＋细胞比例升高（P〈0.05）。结论外周血DNT细胞比例的升高与乙型肝炎病毒感染者慢性化及慢性乙型肝炎患者的疾病进程有关。     

Cellular immune responses in hepatitis B virus e antigen negative chronic hepatitis B

The immunopathogenesis of hepatitis B e antigen (HBeAg) negative chronic hepatitis B (CHB) virus (HBV) infection has not been adequately investigated. We studied the cellular immune responses of peripheral lymphocytes using proliferating assays, intracellular cytokine staining (ICS) and ELISPOT interferon-gamma (IFN-gamma) assays after non-specific and specific stimulation with whole HBV proteins and synthetic peptides. Thirty patients with HBeAg negative CHB, eleven HBsAg inactive carriers, nine patients with acute hepatitis B and 22 healthy controls were included in the study. Patients with HBeAg negative CHB demonstrated an increased number of peripheral CD8+ T cells while their peripheral blood mononuclear cells showed increased proliferation after in vitro stimulation with overlapping hepatitis B core derived peptides and an envelope derived epitope (HBs 182-191 aa), similar to those observed in acute hepatitis B. Using ICS, we found an expanded population of IFN-gamma producing T lymphocytes, CD4+ and CD8+, after non-specific stimulation, in HBeAg negative CHB compared to all other groups. HBeAg negative CHB and acute hepatitis B patients had a similarly increased number of core specific T cells measured by the IFN-gamma assays. Inactive HBsAg carriers showed minimal proliferative responses overall while they exhibited an increased number of envelope specific effector T cells (measured by ICS). In conclusion, we showed that overall CD4+ T cell responses from patients with HBeAg negative CHB were comparable to those of acute hepatitis B, while inactive HBsAg carriers despite their limited proliferative capacity the effector activity of their peripheral T cells was maintained.     

氧化苦参碱对慢性HBV携带者外周血树突状细胞及细胞因子的影响

目的：研究氧化苦参碱对慢性乙型肝炎病毒（ HBV ）携带者外周血树突状细胞及细胞因子的影响。方法：分离60例慢性HBV携带者外周血单核细胞后在诱导培养树突状细胞过程中治疗组加入氧化苦参碱,对照组不加,每组各30例,然后提取两组成熟的树突状细胞,计数后采用双标记流式细胞分析技术检测其活性,再用表位多肽刺激后,和自体淋巴细胞共育,分别检测IL-2和IFN-γ（ Th1分泌）及IL-4和IL-10（ Th2分泌）。结果：治疗组其树突状细胞数目增多,共刺激分子CD1a、 CD80、 CD86明显高于对照组（P＜0.05）。与自体淋巴细胞共育后产生的IL-2、 IFN-γ明显高于对照组（P＜0.05）; IL-4、 IL-10与对照组差异无显著性意义（P＞0.05）。结论：氧化苦参碱可增多、增强HBV携带者外周血树突状细胞的活性,当其与自体淋巴细胞共育时,可增强Th1类细胞因子的表达,对Th2类细胞因子无明显影响。     

Analysis of the CDR3 length of TCR alphabeta T cells in the peripheral blood of patients with chronic hepatitis B.

To clarify the characteristics of TCR alphabeta T cells in the peripheral blood of patients with chronic hepatitis B (CHB), we investigated the patterns of Complementarity Determining Region3 (CDR3) length distribution for all 24 TCR BV gene families and 32 TCR AV gene family in the peripheral blood lymphocytes of two patients with CHB and two healthy controls by immunoscope spectratyping technique. We found that the profiles of CDR3 length distribution for all TCR AV and TCR BV family showed Gaussian distribution (the polyclonal TCR alphabeta T cells) in healthy controls, however, the restricted usage of TCR BV and TCR AV family (the oligoclonal TCR alphabeta T cells) has been monitored in two CHB patients, furthermore, the oligoclonal TCR alphabeta T cells showed the different CDR3 sequences and length, it might be correlated to the different epitope of hepatitis B virus (HBV) or the different HLA type of the patients. Detailed analysis of the CDR3 length of TCR alphabeta T cells might be interesting to light on the further study of the individualized immunotherapy of CHB and the further research of the new T lymphocyte epitope vaccine of HBV.     

慢性乙型肝炎树突状细胞形态和吞噬功能的测定

目的 探讨慢性持续性HBV感染状态下树突状细胞（dendritic cells,DC）形态和功能的变化。方法 用密度梯度离心结合细胞贴壁和细胞因子共同培养的方法从外周血制备DC,观察其生长和形态;用HRP吞噬法观察DC成熟过程中吞噬能力的变化。结果 慢性乙型肝炎（CHB）患者DC数量较少,胞质突破起较少,形态不典型,在细胞发育分化成熟后仍保持较强的吞噬能力。结论 CHB患者的DC处于不成熟状态,可能与免疫耐受有关。     

Programmed death-1 expression is associated with the disease status in hepatitis B virus infection

AIM： TO define the potential role of programmed death-i/programmed death-ligand （PD-1/PD-L） pathway in different hepatitis B virus （HBV） infection disease status; we examined the expression of PD-1 on antigen specific CD8＋T cells in peripheral blood of patients with chronic hepatitis B （CriB） and acute exacerbation of hepatitis B （AEHB） infection.
METHODS： The PD-1 level on CD8＋ T lymphocytes and the number of HBV specific CD8＋ T lymphocytes in patients and healthy controls （HCs） were analyzed by staining with pentameric peptide-human leukocyte antigen2 （HLA2） complexes combined with flow cytometry. Real-time quantitative polymerase chain reaction （PCR） was used to measure the serum HBV- DNA levels.
RESULTS： The level of PD-1 expression on total CD8＋ T cells in CHB patients （13.86% ± 3.38%） was significantly higher than that in AEHB patients （6.80%± 2.19%, P 〈 0.01） and healthy individuals （4.63% ± 1.23%, P 〈 0.01）. Compared to AEHB patients （0.81% ± 0.73%）, lower frequency of HBV-specific CD8＋ T cells was detected in chronic hepatitis B patients （0.37% ± 0.43%, P 〈 0.05）. There was an inverse correlation between the strength of HBV-specific CD8＋ T-cell response and the level of PD-1 expression. Besides, there was a significant positive correlation between HBV viral load and the percentage of PD-1 expression on CD8＋ T cells in CriB and AEHB subjects （R = 0.541, P 〈 0.01）. However, PD-1 expression was not associated with disease flare-ups as indicated by alanine aminotransferase （ALT） levels （R = 0.066, P 〉 0.05）.
CONCLUSION： Our results confirm previous reports that HBV specific CD8＋T-cell response in the peripheral blood is more intense in patients with AEHB than in chronic hepatitis B wlth persistent viral infection. Moreover, there is a negative correlation between the level of PD-1 and the intensity of virus specific CD8＋ T cell response.