条斑紫菜和坛紫菜水溶性提取液体外抑瘤实验研究

目的 分析条斑紫菜和坛紫菜提取液对四种肿瘤细胞的体外抑制作用。方法 用MTT法测定两种紫菜和水溶性提取液对肿瘤细胞的抑制效应。结果 两种紫菜提取液对四种肿瘤细胞的外增殖均有一定的抑制作用，并存在明显的剂量反应关系，两种紫菜提取液对四种肿瘤细胞显示一定的选择性。结论 两种紫菜对四种肿瘤细胞均显示有不同程度的体外抑制作用，值得深入研究。     

益气免疫颗粒水提物免疫调节作用实验研究

以补脾益肾益气固本复方呀约组成的益气免疫颗粒，其水提物对人外周血单核细胞产生白细胞介素Ⅱ有显著促进作用。对Ｂ淋巴细胞产生ＩｇＧ的影响，低浓度能显著促进，高浓度转化为的抑制。对小鼠脾细胞溶血空斑形成试验结果，受环磷酰胺抑制的免疫低下小鼠脾细胞，随水提限浓度增加ＰＦＣ数增高，但对正常小鼠脾细胞，低浓度促进作用明显，高浓主组ＰＦＣ数反低于低浓度组。     

华蟾素注射液体外对小鼠脾淋巴细胞功能影响的研究

目的观察华蟾素注射液对小鼠脾淋巴细胞增殖、活化的影响,探讨其对免疫系统调节的作用,为阐明其免疫作用机制提供药理学依据。方法无菌分离小鼠脾淋巴细胞,制备淋巴细胞悬液,按临床给药量设置华蟾素注射液不同浓度组给药。MTT法分别检测刀豆蛋白A(Con A)刺激和脂多糖(LPS)刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖;用华蟾素注射液预孵育淋巴细胞6 h,分别加入Con A或LPS诱导淋巴细胞活化,利用流式细胞仪通过Aimplex对细胞上清液进行GM-CSF、TNF-α,IFN-γ,IL-1α,IL-2,IL-6,IL-10细胞因子检测,评价其免疫效果。结果华蟾素注射液7.82mg/ml、15.63 mg/ml和31.25 mg/ml浓度组与Con A协同刺激淋巴细胞增殖。1.96 mg/ml和62.50 mg/ml浓度组与LPS协同抑制细胞增殖。华蟾素注射液可促进TNF-α和IL-6分泌,一定程度抑制IFN-γ和GM-CSF分泌,与不同刺激剂作用可不同程度促进或抑制IL-2、IL-1α和IL-10的分泌。结论华蟾素注射液可一定程度促进B淋巴细胞增殖,但对体液免疫的作用效果和作用机制还有待进一步研究。     

EGCG对体外诱导小鼠Th17细胞的产生及促炎因子调控的影响

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对体外诱导小鼠Th17细胞的产生及促炎因子白细胞介素(IL)-17和肿瘤抑制因子(TNF)-α的表达和分泌的影响。方法分离小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞,加入刺激体系诱导体外培养的淋巴细胞活化分化成Th17细胞。设立对照组和不同剂量EGCG组(100、200、400 ng/mL),分别培养72 h后,采用流式细胞仪检测Th17细胞。分别采用荧光定量PCR和ELISA法检测培养细胞IL-17、TNF-α的基因表达和蛋白分泌水平。结果 EGCG能够抑制体外诱导的Th17细胞的产生,IL-17和TNF-α的基因表达和蛋白分泌水平均受到显著抑制,且其抑制作用呈剂量依赖性。结论 EGCG可抑制体外诱导的小鼠Th17细胞产生,抑制IL-17和TNF-α的表达和分泌。     

中药多糖的免疫增强作用

本文在体外研究了从十二种中药提取的多糖对小鼠脾淋巴细胞、胸腺细胞增殖的作用。结果表明，所研究的二十种中药多糖均能刺激脾淋巴细胞的增殖，并能增强ＬＰＳ刺激的Ｂ淋巴细胞增殖的程度；本文十二种多糖单独均不能刺激胸腺细胞的增殖，但一些多糖可以增强ＣｏｎＡ活化的胸腺细胞增殖。     

玉竹提取物A对小鼠巨噬细胞白细胞介素-1和肿瘤坏死因子产生的影响

目的研究玉竹提取物A(extraction A of polygonatum odoratum,EA-PAOA)对小鼠巨噬细胞和细胞因子产生的影响,以探讨对免疫功能的作用。方法检测小鼠体外巨噬细胞产生的白细胞介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子(TNF-α)。结果 10μg/mL以上浓度的EA-PAOA对小鼠巨噬细胞产生的IL-1有抑制作用,1000μg/mL浓度的EA-PAOA的抑制百分率(IP)达39.1%,对TNF-α抑制作用比对IL-1的抑制作用明显,10μg/mL浓度的EA-PAOA达28.6%,1000μg/mL浓度的EA-PAOA的CIP达78.6%。两者均呈量效依赖关系。结论 EA-PAOA对小鼠巨噬细胞产生的IL-1和TNF-α,均有抑制作用,可抑制小鼠的免疫功能。     

α-半水硫酸钙/辛伐他汀复合材料对新生小鼠成骨细胞增殖和分化的影响

目的:研究α-半水硫酸钙/辛伐他汀复合材料对新生小鼠成骨细胞增殖和分化的影响.方法:取新生的昆明小鼠头盖骨,胶原酶法培养成骨细胞,用MTT法测定不同浓度复合材料对体外培养成骨细胞在24、48、72 h不同时段的促细胞增殖作用;采用碱性磷酸(ALP)活性观察复合材料的促细胞分化作用.结果:5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL浓度的复合材料可使骨细胞增殖率升高(P＜0.05);不同浓度复合材料可使碱性磷酸酶(ALP)活性增强(P＜0.05).结论:α-半水硫酸钙/辛伐他汀复合材料具有促进成骨细胞增殖及分化的作用.     

霉酚酸酯对小鼠肾脏缺血再灌注损伤早期单核细胞TLR4信号传导途径的影响

目的探讨在小鼠肾脏缺血再灌注免疫损伤早期过程中霉酚酸酯对单核细胞TLR4信号传导途径的影响。方法采用雄性Bal B/C小鼠,随机分为2组。肾脏缺血再灌注损伤(IRI)组:采用双肾蒂阻断,缺血时间为45 min,分别于6 h、12 h、24 h、48 h再灌注。每个时间点6只小鼠;霉酚酸酯(MMF)药物组:缺血前2 d开始灌胃给MMF 40 mg?kg-1?d-1,其余同肾脏缺血再灌注损伤组。两组均设假手术对照各6只;观察不同时间点各组动物肾功能、肾组织学变化;流式细胞学检测单核细胞表面TLR4的表达及CBA法检测血浆细胞因子(IL-6、MCP-1、TNF-α)浓度;ELISA法检测血浆中TLR4配体HMGB-1的浓度。结果 MMF组较IRI组血肌酐水平明显降低(再灌注6 h、12 h、24 h、48 h,均P<0.05),病理组织学观察提示MMF组肾脏损伤程度较轻;而血浆中TLR4配体HMGB-1浓度无显著性差异(P>0.05),单核细胞表面TLR4表达及血浆细胞因子(IL-6、MCP-1、TNF-α)浓度均明显降低(P<0.05)。结论霉酚酸酯可减轻小鼠肾脏缺血再灌注损伤后肾功能和肾组织的损伤,可抑制小鼠肾脏缺血再灌注损伤早期过程中单核细胞TLR4信号转导途径的活化。提示单核细胞TLR4信号转导途径在小鼠肾脏缺血再灌注损伤早期过程中起着重要的调控作用,而霉酚酸酯可以通过抑制该途径对肾脏起到保护作用。     

姜黄素抑制猪链球菌诱导的炎症反应的体外研究

目的观察姜黄素对猪链球菌诱导的小鼠脾细胞促炎性细胞因子的影响,探讨姜黄素对猪链球菌引起的急性中毒性休克的干预作用。方法采用乳酸脱氢酶释放法检测猪链球菌和姜黄素的细胞毒作用,酶联免疫吸附试验和流式细胞术检测相关炎症因子。结果所选剂量猪链球菌和姜黄素均未发现明显细胞毒作用。猪链球菌诱导脾细胞产生了促炎性细胞因子IL-6、TNF-α、IL-12和较高剂量的IFN-γ以及少量的IL-1β,同时也产生了抗炎因子IL-10。姜黄素对促炎因子都有抑制作用同时降低了促炎因子与抗炎因子的比例。结论姜黄素能够降低猪链球菌诱导小鼠脾细胞产生的促炎因子而发挥抗炎作用。     

羊栖菜多糖免疫调节活性的实验研究

目的:观察羊栖菜多糖(SFPS)对离体小鼠脾细胞免疫调节活性的影响。方法:10、30、100mg/L浓度的SFPS分别作用离体培养的小鼠脾细胞24、48和72h,采用酶联免疫法测定其所分泌IL-2、TNF-α和IFN-γ量。结果:SFPS可显著升高小鼠脾细胞IL-2、TNF-α和IFN-γ的分泌量,这些作用与时间、浓度相关。其中,各浓度组均使IL-2的分泌量明显升高,100mg/L浓度组效应最为显著,作用24、48、72h后分别使IL-2的分泌量达到7.08、39.04、20.30pg/mL;TNF-α的分泌的最高值则是由100mg/LSFPS作用48h引起;SFPS对IFN-γ分泌量的影响具有明显的量效关系,而不同时间组的差异不显著。结论:SFPS能明显增强离体小鼠脾细胞的免疫活性物质的分泌,具有明显的免疫调节活性。     

溶菌酶对头孢他啶诱导的福氏志贺氏菌内毒素释放的抑制作用

目的：通过体外及动物体内实验研究溶菌酶(LZM)对头孢他啶(CFT)诱导的福氏志贺氏菌内毒素(LPS)释放的抑制作用。方法：在营养肉汤或稀释血液培养的福氏志贺氏菌中加入LZM或CFT作用一定时间后，将细菌悬液离心，收集培养上清液，测定释放到上清液中的LPS浓度；将稀释血液培养上清加入到巨噬细胞中，采用经放线菌素D增敏的L929细胞杀伤实验测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的诱生能力。给小鼠腹腔注射角叉菜胶12h后，将营养肉汤培养上清稀释10倍经尾静脉注入小鼠体内，采用经放线菌素D增敏的L929细胞杀伤实验测定小鼠血浆中TNF-α的浓度。给家兔腹腔注射福氏志贺氏菌肉汤培养悬液3h后，分别给各组家兔腹腔注射CFT或CFT与LZM。于给药后2、4和6h心脏取血，离心后分离血浆，测定各组家兔血浆中LPS的浓度及TNF-α和一氧化氮(No)的浓度。结果：营养肉汤培养中CFT(50和100mg儿)可导致较高浓度的LPS释放到培养上清液中，将该上清液静脉注入小鼠体内，产生大量的TNF-α；LZM与CFT联合用药可降低培养上清液中的LPS浓度，并减少小鼠体内TNF-α的产生。在血液培养系统中，CFT(50和100mg/L)可导致较高浓度的内毒素释放到培养上清液中，该上清液在体外培养的巨噬细胞上诱导大量的TNF-α产生，LZM与CFT联合用药可显著降低TNF-α的产生。与CFT单独用药比较，LZM与CFT联合用药可显著减少脓毒症家兔血浆中内毒素的浓度，降低家兔血浆中TNF-α和No的浓度。结论：LZM能抑制CFT诱导的福氏志贺氏菌LPS释放。     

板栗壳水提物对缺氧小鼠氧自由基的影响

目的研究板栗壳的提取方法以及板栗壳水提物对小鼠耐缺氧作用的影响,为板栗壳的进一步开发和利用提供理论依据。方法用水提法制备板栗壳水提物,各组小鼠给予不同剂量板栗壳水提物连续灌胃7 d,末次给药1 h后进行常压耐缺氧实验。记录存活时间并检测小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量的变化。观察板栗壳水提物对小鼠耐缺氧作用的影响。结果板栗壳水提物可在一定程度上延长小鼠存活时间、实验中用药小鼠血清SOD活力上升、MDA含量下降(均P<0.01);且与用药剂量呈相关性。结论板栗壳水提物能清除自由基,有提高小鼠耐缺氧能力作用。     

小半夏加茯苓汤对H22荷瘤小鼠的抑瘤及免疫调节作用

目的:探讨小半夏加茯苓汤对H22肿瘤的抑制作用及其对荷瘤小鼠免疫功能的影响.方法:建立H22荷瘤小鼠模型,观察小半夏加茯苓汤的抑瘤作用及瘤组织中增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达情况;同时检测免疫器官指数、T淋巴细胞增殖功能和血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量.结果:小半夏加茯苓汤高剂量对小鼠H22移植瘤有明显抑制作用,抑瘤率为13.7%,PCNA蛋白表达与对照组比较差异有显著性,同时脾脏指数、脾细胞刺激指数和血清中TNF-α等指标均显著高于对照组.结论:小半夏加茯苓汤可以抑制模型鼠肿瘤的生长,增强荷瘤小鼠的免疫功能.其机制可能是通过激活免疫细胞、调节机体的免疫功能达到有效控制肿瘤细胞增殖的作用.     

肿瘤坏死因子对间充质干细胞体内外免疫调节作用的影响

间充质干细胞(MSC)具有特征性的免疫调节作用;然而MSC对胶原诱导性关节炎(CIA)无治疗作用。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是类风湿性关节炎发生发展中的关键因素,因此本研究利用人脐带MSC为研究对象,观察TNF-α处理后MSC细胞内炎性反应相关转录因子NF-κB核转移情况;利用MTT法检测TNF-α对MSC增殖的影响;以SD大鼠脾脏为刺激细胞,Wistar大鼠脾脏单个核细胞为反应细胞,观察MSC对混合淋巴细胞反应的抑制作用;以Wistar大鼠CIA模型为研究对象,探讨MSC或TNF-α处理的MSC的治疗作用,用膝关节病理评分记录治疗效果。结果表明:TNF-α处理后NF-κB迅速从胞浆内转移至细胞核,但这种作用不影响MSC体外增殖。在不同细胞浓度条件下,无论用TNF-α处理与否,MSC均可显著抑制淋巴细胞增殖(均P<0.001);TNF-α处理的MSC有更强的抑制作用,在低细胞密度条件下尤为显著。然而,病理分析显示,MSC治疗组关节炎性浸润显著加重,病理评分明显高于未治疗组(P<0.05)。结论:TNF-α对体内外MSC的免疫调节作用具有不同的影响,其机制尚需进一步阐明。     

MUC5AC、MUC6核粘蛋白合成肽诱导小鼠抗肿瘤免疫反应

目的 探讨MUC5AC、MUC6核粘蛋白合成肽在诱导小鼠抗肿瘤免疫反应中的作用。方法 采用动物实验方法观察MUC5AC和MUC6粘核蛋白的合成肽诱导小鼠的细胞和体液免疫反应及其淋巴细胞体外杭肿瘤作用。结果 MUC5AC、MUC6合成肽可诱导小鼠产生相应的抗体及迟发型过敏反应，但不能产生脾淋巴细胞的明显增殖及体外杭790l胃癌细胞株的作用。结论 MUC5AC、MUC6合成肽免疫小鼠可引发体液及细胞免疫反应，但尚不足以产生淋巴细胞毒作用。     

姜黄素拮抗LPS活化巨噬细胞对胰岛β细胞的损伤

目的检测姜黄素对LPS诱导小鼠巨噬细胞极化的影响,并检测不同极化状态下细胞培养上清对小鼠胰岛β细胞的损伤作用;研究姜黄素通过拮抗LPS诱导巨噬细胞M1极化保护胰岛β细胞的效应与机制。方法体外培养小鼠小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞,通过LPS(2μg/ml)诱导建立M1极化模型,采用姜黄素(7.5 1μmol/l)单独或与LPS共同处理细胞。通过流式细胞术检测巨噬细胞CD40、CD86和CD206表达,并通过ELISA技术检测细胞培养上清液中TNF-α含量。采用不同诱导条件下巨噬细胞培养物上清液处理小鼠胰岛β细胞,检测其细胞凋亡与细胞增殖,分析胰岛β细胞损伤的程度。结果姜黄素可拮抗LPS诱导小鼠巨噬细胞向M1极化,降低细胞培养上清中TNF-α的含量,保护M1极化细胞培养液上清中TNF-α等炎症性细胞因子对胰岛β细胞的损伤。结论姜黄素拮抗LPS活化巨噬细胞对胰岛β细胞的损伤     

缬沙坦对CVB3病毒所致急性病毒性心肌炎小鼠MCP-1与TNF-α表达的影响

目的探究并分析缬沙坦对柯萨奇病毒B3(CVB3)所致急性病毒性心肌炎小鼠单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法选取4周龄雄性Balb/c小鼠100只,按照随机数字表法将其分为对照组和观察组,每组50只,两组小鼠均给与腹腔接种CVB3,观察组小鼠接种后次日给予缬沙坦治疗,对照组小鼠给予同等量生理盐水灌胃,均治疗2个月。观察并记录下两组小鼠治疗前后射血分数、平均动脉压,同时记录下两组小鼠治疗后心肌组织MCP-1表达、血清TNF-α、心脏/体质量比(HW/BW)及病理积分。结果对照组小鼠MCP-1mRNA为1.35±0.34,观察组小鼠MCP-1mRNA为0.84±0.36,观察组明显低于对照组(P0.05);对照组小鼠血清TNF-α为59.12±14.20 g/L,观察组小鼠血清TNF-α为39.36±5.63 g/L,观察组明显低于对照组(P0.05)。两组小鼠治疗前后射血分数差异明显,随着治疗的进行两组小鼠射血分数均有所改善,但观察组小鼠改善程度明显高于对照组(P0.05)。两组小鼠治疗前后血压差异明显,随着治疗的进行两组小鼠血压均有所降低,但观察组小鼠降低程度明显大于对照组(P0.05)。对照组治疗后病理积分和HW/BW分别为3.58±0.24、(8.87±0.89)×10~(-3),观察组治疗后病理积分和HW/BW分别为1.23±0.25、(7.14±0.62)×10~(-3),观察组明显低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论缬沙坦能有效降低急性病毒性心肌炎小鼠MCP-1与TNF-α表达,改善小鼠心肌病理积分及血流动力学,可能有助于减缓心肌炎进展。     

小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化过程中过氧化物酶增殖物激活受体γ与CCAAT/增强子结合蛋白α的表达

背景:目前关于脂肪细胞分化的分子作用机制的研究较少.过氧化物酶增殖物激活受体和CCAAT/增强子结合蛋白家族的转录调控因子可诱导前脂肪细胞表达促进其分化成熟的多个转录因子,但其作用机制却罕见报道.目的:观察小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞过程中过氧化物酶增殖物激活受体γ和CCAAT/增强子结合蛋白α的表达,以及在脂肪细胞分化过程中的变化.方法:体外培养3T3-L1前脂肪细胞,采用经典激素鸡尾酒诱导法诱导细胞分化,诱导剂为1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤、地塞米松和胰岛素.诱导后0,2,4,6和8 d,用油红O染色和染色比色法分析脂肪细胞的分化程度,采用实时PCR和Western blot技术检测不同时间点的过氧化物酶增殖物激活受体γ和CCAAT/增强子结合蛋白α的表达.结果与结论:在前体脂肪细胞的分化过程中,随时间的延长相对脂肪含量、过氧化物酶增殖物激活受体γ与CCAAT/增强子结合蛋白α表达水平均明显升高(P<0.01).说明在小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞过程中,过氧化物酶增殖物激活受体γ与CCAAT/增强子结合蛋白α对细胞分化可能起促进作用.     

阿霉素肾病小鼠病理机制中白细胞介素-18水平分析

目的探讨白细胞介素-18(IL-18)在阿霉素肾病模型(微小病变型肾病,MCN)小鼠病程中的免疫失调作用。方法采用阿霉素单次尾静脉注射昆明种小鼠,诱导形成微小病变型肾病模型,设置模型组、生理盐水对照组和IL-18mAb抗体中和实验组(mAb)。测定3组小鼠第1、2、4、6周24h尿蛋白(24hUPQ)水平;于第42天时心脏采血法留取血清,检测模型组与对照组血清总蛋白(TP)、清蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(Tch)的水平;取单侧肾做病理检测,同时制备脾淋巴细胞悬液、肾组织匀浆液检测3组IL-18、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及IL-4水平。结果模型组小鼠从注射阿霉素第2周起,24hUPQ值均高于对照组,差异均有统计学意义(P0.01);血清TP、ALB、BUN、Cr、Tch、TG结果和病理诊断结果显示,模型小鼠出现低蛋白血症、高脂血症等类肾病综合征症状。检测显示模型组小鼠血清、肾组织匀浆上清液、脾淋巴细胞培养上清液IL-18、INF-γ、TNF-α水平均高于对照组,而IL-4水平均低于对照组,组间比较差异均有统计学意义(P0.01)。mAb组小鼠24hUPQ及IL-18、IFN-γ、TNF-α水平均低于模型组,组间比较差异有统计学意义(P0.01)。结论模型小鼠病程中,Th1类细胞因子分泌增强,Th2类因子受抑制,且IL-18mAb起到部分中和内源性IL-18的作用,表明IL-18是小鼠MCN病程中重要的免疫失调因子。     

淋巴细胞体外杀伤小鼠神经母细胞瘤实验观察

【目的】建立体外小鼠神经母细胞瘤细胞和淋巴细胞共培养的细胞模型,通过检测不同免疫学指标来衡量淋巴细胞杀伤肿瘤细胞能力。【方法】从正常C57BL／6小鼠体内分离脾淋巴细胞,调节到适当的浓度,将神经母细胞瘤的细胞株（N2a）和新鲜分离的脾淋巴细胞共培养。在倒置显微镜下观察脾淋巴细胞形态,同时分离培养上清,用ELISA方法检测IL-6、IFN-r、TNF-α含量。MTT方法检测共培养体系中存活细胞状况,用来反映脾淋巴细胞体外杀伤神经母细胞瘤细胞的能力。【结果】体外共培养模型显示,脾淋巴细胞具有强大的杀伤N2a肿瘤细胞的能力,37℃5％C02培养48h后,在4—1×10^6／mL脾淋巴细胞浓度下无肿瘤细胞生长。细胞培养上清中可以检测到高浓度的IL-6（1849pg／mL）和中浓度的TNF-α（137pg／mL）,却检测不到IFN-r。【结论】脾淋巴细胞具有很强体外杀伤N2a肿瘤细胞能力,IL-6可能发挥着比TNF-α更重要作用,这为临床上神经母细胞瘤手术后的免疫治疗提供了新的思路。