TNFα诱导人大肠癌Lovo细胞凋亡的时间效应

目的探索肿瘤坏死因子(TNF)诱导人大肠癌细胞凋亡的可能性及其发生规律。方法用细胞体外培养方法,以 TNFα 10万 U/ml 作用人大肠癌 Lovo 细胞12-48小时,经 HE 染色和 Hoechst33258荧光染色,光镜观察细胞的形态改变;DNA 抽提、琼脂糖凝胶电泳,检测 DNA 断裂情况。结果随作用时间延长,Lovo细胞渐出现明显的凋亡形态学改变:作用48小时,DNA 电泳出现梯形条带。结论 TNFα能够诱导人大肠癌 Lovo细胞凋亡,并存在时间效应。     

TNFα诱导大肠癌细胞凋亡的实验研究

目的:探索肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导人大肠癌细胞凋亡的可能性及其发生规律。方法用细胞体外培养方法,以TNFα不同剂量、不同时间作用于人大肠癌Lovo细胞,经Hoechst33258荧光染色,光镜观察细胞的形态改变;DNA抽提、琼脂糖凝胶电泳,检测DNA断裂情况。结果:TNFα1×10~5μ/ml作用12—48h和1×10~4—1×10~5μ/ml作用48h,Lovo细胞出现逐渐明显的凋亡形态学改变;1×10~5μ/ml作用48h,DNA电泳出现显示凋亡特性的梯形条带。结论 TNFα能够诱导人大肠癌Lovo细胞凋亡,并存在时间与剂量效应。     

TNFα诱导大肠癌细胞凋亡的实验研究

目的探索肿瘤坏死因子α(TNF_α)诱导人大肠癌细胞凋亡的可能性及其发生规律。方法用细胞体外培养方法,以TNF_α不同剂量、不同时间作用于人大肠癌Lovo细胞,经Hoechsl 33258荧光染色,光镜观察细胞的形态改变;DNA抽提、琼脂糖凝胶电泳,检则DNA断裂情况。结果TNFal×10~5μ/ml作用12-48h和J×10~4-1 x10~5μ/ml作用48h.Lovo细胞出现逐渐明显的凋亡形态学改变;1×10~5μ/ml作用48h.DNA电泳出现显示凋亡特性的梯形条带。结论TNF_α能够诱导人大肠癌Lovo细胞凋亡,并存在时间与效果效应。     

TNFa诱导大肠癌细胞凋亡的实验研究

目的：探索肿瘤坏死因子a（TNFa）诱导人大肠癌细胞凋亡的可能性及其发生规律。方法 用细胞体外培养方法，以TNFa不同剂量，不同时间作用于入大肠癌Lovo细胞，经Hoechst33258荧光染色，光镜观察细胞的形态改变；DNA抽提、琼脂糖凝胶电泳，检测DNA断裂情况。结果：TNFal×10^5μ/ml作用12-48h和1×10^4-1×10^5μ/ml作用45h，Lovo细胞出现逐渐明显的凋亡形态学改变，1×10^5μ/ml作用48h，DNA电泳出现显示凋亡特性的梯形条带。结论 TNFa能够诱导人大肠癌Lovo细胞凋亡，并存在时间与剂量效应。     

TNFα诱导人大肠癌Lovo细胞凋亡的时间效应

目的探索肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）诱导人大肠癌细胞凋亡的可能性及其发生规律．方法用细胞体外培养方法，以ＴＮＦα１×１０８Ｕ／Ｌ作用人大肠癌Ｌｏｖｏ细胞０ｈ～４８ｈ，经ＨＥ染色和Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８荧光染色，光镜观察细胞的形态改变并计算凋亡百分率；ＤＮＡ抽提、琼脂糖凝胶电泳，检测ＤＮＡ断裂情况．结果随作用时间由０，１２，２４，３６延长到４８ｈ，Ｌｏｖｏ细胞渐出现明显的凋亡形态学改变，凋亡百分率分别为２０４％，６５９％，２３８９％，６０４７％，９２６６％（Ｐ＜００１）；作用４８ｈ，ＤＮＡ电泳出现梯形条带．结论ＴＮＦα能够诱导人大肠癌Ｌｏｖｏ细胞凋亡，并存在时间效应．     

放线菌酮和TNFα协同诱导Lovo细胞凋亡

目的探索放线菌酮和ＴＮＦα协同诱导人大肠癌Ｌｏｖｏ细胞凋亡的发生规律．方法用细胞体外培养方法,以放线菌酮和ＴＮＦα均小剂量作用于人大肠癌Ｌｏｖｏ细胞,经Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８荧光染色,光镜观察形态改变,并用流式细胞术检测ＤＮＡ断裂情况．结果单用ＴＮＦα５×１０５Ｕ／Ｌ或放线菌酮４ｍｇ／Ｌ,均未引起Ｌｏｖｏ细胞凋亡效应．而两者协同,随作用１２ｈ～４８ｈ,Ｌｏｖｏ细胞渐出现明显的凋亡形态学改变和ＤＮＡ断裂．结论小剂量的放线菌酮和ＴＮＦα协同作用于人大肠癌Ｌｏｖｏ细胞,出现明显的凋亡效应．     

TNFα诱导人大肠癌LoVo细胞凋亡的电镜观察

目的观察用肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导的人大肠癌 LoVo 细胞凋亡的超微结构特点。方法用体外细胞培养方法,以 TNFα诱导 LoVo 细胞凋亡,倒置显微镜、透射电镜观察细胞形态。结果凋亡早期,LoVo 细胞外形不规则,胞体大小及胞浆变化不大,微绒毛变细,染色质凝集,开始向核膜下集中;中期,胞体缩小,胞膜完整,染色质呈颗粒、块状凝集在核膜内侧、核孔之间;后期,核裂解,形成凋亡小体,并可被未凋亡的肿瘤细胞吞噬和消化。结论 TNFα能够诱导大肠癌 LoVo 细胞凋亡,经透射电镜观察,其具有特征性的形态学改变。     

胰淀素诱导人肾小球系膜细胞凋亡

目的:研究胰淀素（amylin) 对人系膜细胞的毒性作用。方法：采用电镜、TUNEL、DNA凝胶电泳和碘化丙啶染色（PI）流式细胞仪分析技术及免疫组化技术，观察amylin对人系膜细胞的作用。结果：光镜和电镜下见细胞体积缩小、梁色质浓梁、致密、边移和凋亡小体形成；TUNEL细胞染色阳性，DNA凝胶电泳出现DNA“梯形”片断；amylin处理48h后，均可见亚二倍体细胞凋亡峰。定量分析示：系膜细胞的凋亡数量与amylin浓度呈剂量依赖性（P＜0．01）。amylin治疗组和对照组乳酸脱氢酶活性细胞释放率无显著性差异（P＞0．05）。结论：amylin对人系膜细胞具有细胞毒性作用，并可诱导系膜细胞的凋亡。amylin诱导人肾小球系膜细胞的凋亡可能是糖尿病肾病患者进行性肾小球硬化和系膜细胞逐渐消失的机制之一。     

抗内皮细胞抗体介导的内皮细胞损伤机制

目的探讨抗内皮细胞抗体（antiendothelial cell antibody，AECA）对内皮细胞凋亡的影响及重组α-烯醇化酶对内皮细胞凋亡的阻断作用。方法以EA．hy926细胞（内皮细胞永生细胞）提取物蛋白为抗原，采用免疫印迹法检测并筛选47000-AECA阳性患者血清，用蛋白G亲和层析法纯化IgG，在体外诱导内皮细胞凋亡，观察重组α-烯醇化酶对凋亡的阻断作用。结果含47000-AECA IgG在体外可诱导内皮细胞凋亡，荧光染色可见明显的核形态变化及典型的凋亡小体；含47000-AECA系统性红斑狼疮患者的IgG作用于EA．hy926细胞24、48和72小时后，凋亡率均明显高于相同剂量正常人kG作用EA．hy926细胞的凋亡率；而经重组α-烯醇化酶预处理后EA．hy926细胞凋亡率则明显降低。含47000-AECA IgG作用于EA．hy926细胞8小时后，AnnexinV^＋细胞数明显增加，并随IgG作用时间和浓度的增加而升高；而经重组α-烯醇化酶预处理的含47000-AECA IgG作用于EA．hy926细胞后，AnnexinV^＋细胞有所减少。结论AECA在体外可诱导内皮细胞凋亡，引起内皮细胞损伤；重组α-烯醇化酶可部分阻断47000-AECA体外诱导内皮细胞凋亡的作用，α-烯醇化酶是AECA识别的自身抗原之一。     

肿瘤坏死因子α通过丝裂原活化蛋白激酶激酶6诱导LA795肺腺癌细胞凋亡

目的：为了研究肿瘤坏死因子α（TNF－α）诱导肺癌细胞凋亡的分子机制，寻找肺癌基因治疗的新方法。方法：建立TNF－α诱导LA795肺腺癌细胞凋亡的细胞模型；使用人胚肾293包装细胞制备丝裂原活化蛋白激酶激酶6（mitogen-activated protein kinase kinase 6,MKK6)及其结构活性和无活性突变体的重组腺病毒；使用激酶活性测定法检测细胞内MKK6的激酶活性。结果：TNF－α刺激可明显诱导LA795肺腺癌细胞MKK6激活；用TNF－α刺激肺腺癌细胞可明显诱导细胞凋亡；MKK6结构活性突变体也可明显诱导LA795细胞凋亡；而MKK6无活性突变体可明显抑制TNF－α诱导的LA795细胞凋亡。结论：TNF－α诱导LA795肺腺癌细胞凋亡是通过MKK6发挥作用的，MKK6的重组腺病毒有希望用于肺癌的基因治疗。     

雌激素对肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞凋亡的影响

目的 观察17β-雌二醇(E2)及肿瘤坏死因子(TNFα)对培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响.方法 将HUVEC分为4组,空白对照组、TNFα(40 μg/L)组、TNFα(40 μg/L)加E2(1 μmol/L)和E2(10 μmol/L)组,各组细胞经维持液培养48 h使细胞生长同步,加入相应药物培养24 h后收获细胞.采用免疫组化方法测定bcl-2蛋白表达及流式细胞仪测定细胞凋亡发生百分率.结果 TNFα诱导的细胞凋亡发生率较正常对照组明显增多(P＜0.001),bcl-2蛋白表达少,DNA直方图上可见高大的凋亡峰,而雌激素干预后凋亡发生率明显降低(P＜0.001),bcl-2蛋白表达增加.结论 E2可增加bcl-2蛋白的表达,抑制TNFα诱导的人内皮细胞细胞凋亡的发生率,维持内皮细胞结构和功能的完整,可能为其抗动脉粥样硬化的机制之一.     

Bcl-xl阻断肿瘤坏死因子α诱导的caspase 8活化及细胞凋亡

目的探讨BCl-xl对肿瘤坏死因子α(TNFα)介导的细胞凋亡信号通路以及细胞凋亡的影响。方法将iκBα负性突变体质粒pmiκB与绿色荧光蛋白(GFP)表达质粒pEGFP-Cl，pmiκB、DBcl-xl／HA与pEGFP-Cl分别共转染HeLa细胞；将pBcl-xl／HA转染核因子κB(NFκB)／p65基因敲除的p65／MEF细胞，并用嘌呤霉素筛选及westernblot鉴定获得稳定表达Bcl-xl的细胞系p65／／Bcl-xlMEF。用TNFα处理HeI。a／miκB、IteLa／miκB／Bcl-xl细胞以及p65／MEF、p65／／Bcl-xlMEF细胞，并在冠微镜下观察细胞形态变化、台盼蓝染色计算死亡细胞以检测各组细胞凋亡情况；采用western blot检测凋亡信号通路中caspase8活化及腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)裂解情况。结果单独转染pmiκB的HeLa细胞，TNFα诱导的细胞凋亡明显，表现为细胞变圆、脱落、死亡，而PBCl-xl／HA与PmiκB共转染的HeLa细胞，TNFα处理后未见细胞凋亡。P65／MEF细胞经TNIrα处理发生凋亡，该作用在TNFα处理后4h即可出现，处理12h后绌胞死亡率为90％，而在表达Bcl-xl的p65／／Bcl-xlMEF细胞，TNFα处理24h也未见细胞凋亡或死亡发生。Westernblot检测表明单独转染pmiκB的HeLa细胞，TNFα诱导了caspase8裂解活化及PARP裂解，而pBcl-xl／HA与pmiκB共转染、表达Bcl-xl的HeLa细胞，TNFα诱导的caspase8裂解活化及PARP裂解被阻断。结论在NFκB被抑制的实验细胞系统，Bcl-xl能阻断TNFα介导的细胞凋亡信号通路以及细胞凋亡，这对于进一步研究TNFα相关疾病发生机制及治疗措施有重要价值。     

丹参酮ⅡA对人肝癌细胞TGF-β1基因表达的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对人肝癌细胞TGF-β1表达的影响及其抗肿瘤作用机制。方法体外培养SMMC-7721肝癌细胞株，采用倒置相差显微镜、Hoechst 33342染色荧光显微镜观察，以及“梯状”DNA确定凋亡的发生并计算凋亡率；用RT—PCR方法检测肝癌细胞TGF．岛的表达。结果倒置相差显微镜观察可见各试验组细胞的生长不同程度受抑，并可见典型的凋亡形态改变；Hoechst 33342染色可见凋亡细胞核浓染，亮度明显加深或有染色质边集现象，亦可见典型的凋亡小体；提取基因组DNA电泳检测，出现典型的梯状条带；RT—PCR检测显示，丹参酮ⅡA作用48小时后TGF—β1表达量随药物浓度的增大而逐渐减低。结论丹参酮ⅡA可抑制人肝癌细胞SMMC-7721的细胞增殖，促进其凋亡，此作用可能与细胞内TGF-β1表达下调有关。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白5A抑制肿瘤坏死因子α诱导HepG2细胞凋亡的作用研究

目的 研究丙型肝炎病毒非结构蛋白5A(HCV NS5A)对肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导HepG2细胞凋亡的抑制作用。方法 设计HCV—1b NS5A区基因片段的特异引物,以逆转录巢式PCR方法扩增NS5A基因片段,并将其进行TA克隆,对阳性克隆进行酶切与序列鉴定;构建NS5A基因表达载体;通过Lipofectamine基因转染法,将NS5A区基因导入HepG2细胞,加入TNFα培养48h;应用Western blot检测caspase-3被切割、细胞色素C释放的情况以及通过AnnecxinV-FITC染色两种方法,观察NS5A蛋白对TNFα诱导的HepG2细胞凋亡的抑制效应。结果 成功建立HCV NS5A蛋白真核表达转基因细胞模型,发现该蛋白对TNFα所诱导HepG2细胞凋亡有抑制作用。结论 HCV NS5A蛋白可以抑制TNFα诱导的HepG2细胞凋亡。     

阿霉素抑制人子宫内膜癌细胞生长机制探讨

为探讨阿霉素（DOX）抑制人子宫内膜癌细胞生长的分子机制。用不同浓度的DOX处理体外培养的HHUA细胞，利用台盼蓝染色记数活细胞数；光镜观察凋亡细胞形态学改变；琼脂糖凝胶电泳检测梯状DNA条带；流式细胞仪分析测定凋亡细胞百分率；Western Blot分析Ｂax蛋白和Ｂcl-2蛋白表达。结果显示，ＤＯＸ浓度为２０、５０μg/ml时，活细胞数显著减少（Ｐ＜０.０５）；ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳显示曲型的梯状条带；ＤＯＸ作用后６小时Bax蛋白表达开始增强，而Ｂcl-2蛋白表达不变。提示ＤＯＸ能够诱导ＨＨＵＡ细胞凋亡，其诱导细胞凋亡可能与Ｂax介导的凋亡凋节通路活化有关。     

2，3-吲哚醌抑制人神经母瘤细胞增殖及诱导其凋亡作用的研究

运用台盼蓝拒染法测定人神经母瘤细胞（SH—SY5Y细胞）生长曲线，Hoechst33258核染色形态学检测细胞凋亡，流式细胞仪检测2，3-吲哚醌对SH—SYSY细胞凋亡率的影响。结果 2,3-吲哚醌作用48h后开始抑制SH-SY5Y细胞生长．并且细胞核出现核裂解、浓缩等典型凋亡形态学改变，凋亡率升高，诱导细胞凋亡呈现时间和剂最依赖关系。提示2，3-吲哚醌可用于肿瘤的治疗。     

含蟾酥胶囊血清诱导人肝癌细胞株凋亡及机制探讨

目的观察含蟾酥胶囊（CC）血清诱导人肝癌细胞株BEL-7402凋亡作用,并探讨其机制。方法体外培养的BEL-7402加入含不同浓度CC血清,分别孵育24、48h,显微镜下观察细胞形态;MTT比色测算细胞抑制率;流式细胞术测算细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳测定其DNA梯状条带;免疫细胞化学染色检测细胞中Bcl-2表达变化。结果与不加CC血清比较,加入含CC血清的BEL-7402呈凋亡细胞形态学改变;细胞生长抑制率、凋亡率升高;孵育48h时,琼脂糖凝胶电泳呈现DNA梯状条带;细胞Bcl-2表达明显降低。结论CC可以诱导BEL-7402凋亡,其作用机制可能与下调细胞Bcl-2表达有关。     

TNFa诱导人大肠癌LoVo细胞凋亡的电镜观察

目的 观察用肿瘤坏死因子a（TNFa)诱导的人大脑癌LoVo细胞凋亡的趣微结构特点。方法 用体外细胞培养方法．以TNFa诱导LoVo细胞凋亡，倒置显微镜、透射电镜观察细胞形态。结果凋亡早期，LoVo细胞外形不规则．胞体大小及胞浆变化不大．微绒毛变细．染色质凝集．开始向核膜下集中；中期，胞体缩小，胞骥完整，染色质呈颗粒、块状凝集在核膜内侧、核孔之间；后期．核裂解．形成凋亡小体．并可按未凋亡的肿瘤细胞吞噬和消化。结论 TNFa能够诱导大肠癌LoVo细胞凋亡．经透射电镜观察．其具有特征性的形态学改变。     

TGF-α、TNF-α和VEGF对人嗜铬细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的研究转化生长因子α(TGFα)、肿瘤坏死因子α(TNFα)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)对原代培养的人嗜铬细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法用噻唑兰(MTT)法观察TGFα、TNFα和VEGF对原代培养的人嗜铬细胞瘤细胞增殖的作用;用PI染色流式细胞分析、Hochest33342染色的方法检测上述细胞因子对人嗜铬细胞瘤细胞凋亡的影响。结果0.1～100μg/L的TGFα、TNFα和VEGF均促进人嗜铬细胞瘤细胞增殖。无血清培养72h,人嗜铬细胞瘤细胞的凋亡率为3.98%,100μg/L的TGFα、TNFα和VEGF对其凋亡无明显影响。结论TGFα、TNFα和VEGF刺激原代培养的人嗜铬细胞瘤细胞增殖,但对其凋亡无明显影响。     

熊果酸诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的：观察熊果酸（UA）对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制及诱导其凋亡作用。方法：MTT法检测5、10、20、30、40、50μmol/L UA对SMMC-7721细胞生长的抑制作用,吖啶橙（AO）荧光染色、电镜和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：UA能显著抑制SMMC-7721细胞的增殖,其作用呈剂量依赖性。35.2μmol/L UA作用SMMC-7721细胞48小时后AO染色,荧光显微镜下可见细胞出现体积缩小,核碎裂,染色质凝集等凋亡形态改变;电镜下SMMC-7721细胞出现明显的细胞凋亡的形态学改变,细胞核染色质出现边聚和中聚,细胞内部分线粒体肿胀;SMMC-7721细胞凋亡率为（67.91±5.24）%,与对照组（2.95±0.56）%比较差异有显著性意义（P〈0.05）。结论：UA通过诱导SMMC-7721细胞凋亡抑制其生长。