煤烟致大鼠肺细胞氧化应激损伤的机制探讨

目的：探讨煤烟导致细胞体系氧化应激损伤的机制。方法：以Ｎ－乙酰半胱氨酸（ＮＡＣ）和甘露醇等不同作用位点的抗氧化剂作为实验干预手段，采用ＭＴＴ比色法和溴乙锭荧光法观察煤烟所致细胞毒性和肺细胞ＤＮＡ交联形成作用。结果Ｎ－乙酰半胱氨酸（ＮＡ）可以有效地降低煤烟气致的细胞毒性和细胞ＤＮＡ交联形成作用；而甘露醇却没有观察到上述作用。结论煤烟在细胞内经代谢活化后产生的某些代谢产物可以降低氏内谷胱甘肽含量，引起     

煤烟颗粒提取物对大鼠肺细胞的氧化 性损伤作用

目的：通过加入抗氧化剂N－乙酰半胱氨酸,作为实验干预手段。方法：观察煤烟对大鼠肺Ⅱ型细胞生长和DNA交联形成作用的影响。结果：与对照组相比,分别加入10、30mmol/L N－N乙酰半胱氨酸后的实验组细胞毒性有所下降, 从而间接地证实了氧化性损伤的存在;同时,N－乙酰半胱氨酸还可以降低煤烟经细胞染毒所致的DNA交联作用 。结论：煤烟可能是经过细胞代谢活化后产生的某些代谢产物而导致细胞的氧化性损伤。     

铁路危险品货运站空气颗粒物诱导肺细胞氧化应激损伤

[目的 ]探讨铁路危险品货运站空气污染颗粒提取物诱导大鼠肺细胞氧化应激损伤作用的机制。 [方法 ]应用滤膜法采集铁路危险品货运站空气颗粒提取物。常规分离与原代培养大鼠肺Ⅱ型细胞 ,以N 乙酰半胱氨酸 (NAC)、维生素E(VitE)、维生素C(VitC)和甘露醇 (MT)等不同作用位点的抗氧化剂预处理 3 0min后 ,加入空气颗粒提取物染毒 2 4h。采用四氮甲基唑蓝比色法、溴乙锭荧光法检测肺细胞的生长情况和DNA交联的形成。 [结果 ]在 1 0 2～ 8 13mg/ml浓度范围内 ,铁路危险品货运站空气颗粒提取物对大鼠肺细胞有明显的细胞毒性和致DNA交联作用。加入NAC、VitE、VitC和MT可有效地减低铁路危险品货运站空气污染颗粒提取物所致的细胞毒性 ,VitE、VitC则具有减低铁路危险品货运站空气污染颗粒提取物所致的DNA损伤作用。 [结论 ]铁路危险品货运站空气污染颗粒提取物对大鼠肺细胞具有氧化应激作用 ,其可能途径是产生活性氧自由基、羟自由基或导致细胞过氧化等     

煤烟对大鼠肺细胞氧化性损伤作用途径的探讨

目的：探讨煤烟导致肺Ⅱ型细胞氧化性损伤的途径，方法：通过对加入抗氧化剂N－乙酰半胱氨酸、维生素E、维生素C和甘露醇作为实验干预手段，采用MTT法观察其对煤烟所致大鼠肺Ⅱ型细胞毒性的影响，结果：与对照组相比，加入10mmol/L N-乙酰半胱氨酸，维生素E，维生素C后的实验组细胞毒性有所下降，而甘露醇没有观察到类似的作用。结论：煤烟可以通过产生氧自由基或脂质过氧化物等多种途径对机体造成氧化性损伤。     

煤烟对大鼠肺Ⅱ型细胞DNA损伤作用的研究

目的探讨煤烟对大鼠肺Ⅱ型细胞DNA的损伤作用.方法采用单细胞凝胶电泳法(SCGE)和溴乙锭荧光法(EFA)结合细胞原代培养技术检测了煤烟颗粒提取物对大鼠肺Ⅱ型细胞DNA单链断裂作用和双链交联形成作用.结果煤烟颗粒提取物在15～120 mg/L的浓度范围内具有细胞毒性,受试物剂量和检测到的A值存在剂量-反应关系(r=-0.943, P<0.05).在10～40 mg/L的剂量范围内可以引起细胞DNA发生单链断裂和DNA双链交联作用.与对照组相比,各剂量组检测到的DNA交联率分别增加了18.2%、23.7%和31.4%,最高剂量组检测到的平均彗尾长度是对照组的3.6倍.结论煤烟可以导致肺Ⅱ型细胞DNA的损伤.     

食用油烟对大鼠肺Ⅱ型细胞毒性及与氧化应激的关系

[目的 ]研究食用油烟对大鼠肺Ⅱ型细胞的细胞毒性、DNA损伤及其与氧化应激的关系。 [方法 ]采用MTT比色法、溴乙锭荧光法和单细胞凝胶电泳技术 ,分别测定食用油烟对大鼠肺Ⅱ型细胞的细胞毒性、DNA交联和DNA链的断裂作用 ,并用抗氧化剂N 乙酰半胱氨酸 (NAC)进行干预。 [结果 ]食用油烟对大鼠肺Ⅱ型细胞具有细胞毒作用 ,对DNA既有交联作用又有链断裂作用 ,在受试剂量范围内呈剂量 反应关系。染毒前对大鼠肺Ⅱ型细胞用抗氧化剂NAC预处理 ,可降低食用油烟对大鼠肺细胞的细胞毒性和DNA损伤作用。 [结论 ]食用油烟对大鼠Ⅱ型细胞以及DNA的损伤与氧化应激有关     

铁路危险品货运站空气颗粒提取物对大鼠肺细胞的损伤及抗氧化剂的干预作用

目的了解铁路危险品货运站空气颗粒提取物对大鼠肺Ⅱ型细胞的损伤,并探讨多种抗氧化剂的干预作用。方法原代培养SD大鼠肺Ⅱ型细胞分别以N-乙酰半胱氨酸（NAC）、维生素C（VC）和维生素E（VE）等抗氧化剂预处理,加入某铁路危险品货运站空气颗粒提取物染毒。用四甲基偶氮唑盐比色法、溴乙锭荧光法检测大鼠肺Ⅱ型细胞的生长情况和DNA交联的形成。结果经1．02～8．13mg／ml提取物染毒,大鼠肺Ⅱ型细胞的吸光度（A）值明显下降,有剂量-反应关系（r=0．962,P〈0．05）,经过终浓度为10-80mmol／L的NAC处理后,各实验组细胞的A值升高（P〈0．01）,加入终浓度为10mmol／L的NAC、VC和VE,各实验组细胞的A值升高,（P〈0．01）。经1．02-8．13mg／ml空气颗粒提取物染毒,大鼠肺Ⅱ型细胞DNA交联率上升,有剂量．反应关系（r=-0．981,P〈0．01）,加入终浓度为10mmol／L的VC和VE,各实验组DNA交联率下降（P〈0．05）。结论铁路危险品货运站空气颗粒提取物能导致大鼠肺Ⅱ型细胞损伤并具有致DNA交联作用,NAC、VC和VE等抗氧化剂能拮抗这些作用。     

烹调烟雾冷凝物对DNA完整性影响的研究

采用体外作用的方式探讨烹调烟雾致遗传损伤的机制。通过细胞毒性试验得出 :油烟冷凝物与大鼠肺Ⅱ型细胞生长抑制率之间存在剂量 -效应关系 (r=0 943,P <0 0 1) ,剂量在 2 0 μg ml及以上对细胞有明显毒性作用。在不产生细胞毒性作用的剂量范围内 ,单细胞凝胶电泳试验表明 :大鼠肺Ⅱ型细胞经油烟冷凝物染毒 2小时可引起细胞DNA链断裂 ,在 0～ 5 μg ml剂量范围内 ,损伤程度与剂量存在直线相关关系 (r=0 918,P <0 0 5 ) ;在 10 μg ml剂量下 ,DNA损伤已达最大程度。发生DNA损伤的细胞经修复培养 2小时后受损伤的DNA能被修复。油烟冷凝物对 30 μg小牛胸腺DNA交联试验显示 :在 5 0～ 80 0 μg剂量范围 ,DNA交联率与受试物间存在剂量 -效应关系 (r=0 96 3,P <0 0 1)。提示烹调烟雾冷凝物在较低作用剂量下就可导致大鼠肺Ⅱ型细胞DNA损伤 ,在一定剂量下可以导致DNA交联率的增加     

气态苯染毒对大鼠多组织细胞DNA损伤作用

目的建立气态苯动式吸入染毒大鼠的实验模型,探讨苯所致大鼠多组织细胞DNA损伤作用,同时为室内装修污染对人体健康的潜在危害提供早期灵敏的生物标志物。方法苯吸入染毒组(处理组)大鼠每天吸入苯浓度为106 mg.m-3的空气4 h,连续7 d,染毒结束后,分别取外周血、脑、肺和肝组织并分离活细胞,应用彗星实验检测各组织细胞的DNA损伤情况,以DNA移动距离(慧星尾长)来表示损伤程度,其结果与空白对照组比较。结果彗星实验发现,处理组肝细胞、脑细胞和外周血淋巴细胞DNA移动距离均大于对照组(P<0.05);在加入蛋白酶K(PK)孵化后,处理组肺细胞、脑细胞、外周血淋巴细胞DNA移动距离的增加量与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);而肝细胞经过PK孵化后,处理组细胞DNA移动距离的增加量显著高于对照组(P<0.05)。结论在此种染毒剂量下苯可致大鼠肺细胞、脑细胞和外周血淋巴细胞发生DNA断裂损伤,苯致上述细胞DNA发生DNA蛋白质交联的能力很弱,或者不产生DNA蛋白质的交联。而苯所致肝细胞DNA损伤方式以DNA-蛋白质交联为主。     

053 抗氧化营养素与老年性痴呆

越来越多的研究发现氧自由基的产生与老年性痴呆(AD)有关，并认为氧应激在AD发生发展中起关键作用，β淀粉样蛋白的产生和聚集可能诱导氧自由基产生并导致AD。氧应激反应也可能是过量铁、铝等微量元素蓄积导致AD的作用途径之一。雌激素具有抗氧化活性，故可保护神经元免受氧应激所致的细胞损伤，从而防治AD。采用抗氧化剂如维生素E对AD患者单独或作为药物辅助治疗，不失为一种有效而安全的改善其症状和生活质量的好方法。     

氧化型染发剂DNA交联作用的研究

采用溴乙锭荧光法测定氧化型染发剂的主要成分对苯二胺（ＰＰＤ）、过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）和ＰＰＤ－Ｈ２Ｏ２混合物对小牛胸腺ＤＮＡ的双链间交联形成作用。结果表明：用０～６％的对苯二胺及０～３％的Ｈ２Ｏ２对小牛胸腺ＤＮＡ直接染毒，３７℃３０ｍｉｎ时无双链间ＤＮＡ交链的形成；而ＰＰＤ和Ｈ２Ｏ２发生氧化反应后则具有双链ＤＮＡ交联形成作用并具有剂量反应关系（ｒ＝０．８２９，Ｐ＜０．０１），在受试剂量为０～０．８％（以对苯二胺含量计）时，氧化型对苯二胺的ＤＮＡ交联作用增加了４．２倍。研究结果提示，ＤＮＡ交联作用可能是氧化型染发剂遗传毒作用过程中ＤＮＡ损伤的一种方式。     

三氯乙烯对大鼠肝细胞DNA损伤和氧化应激的影响

目的研究三氯乙烯对大鼠肝细胞DNA损伤和肝组织氧化应激的作用。方法选用雄性SD大鼠,每组5只,用1500和3000mg／kg的三氯乙烯经口灌胃染毒,48h处死动物。用单细胞凝胶电泳（彗星实验）检测肝细胞DNA损伤,并检测肝组织中活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）的含量。结果三氯乙烯在1500和3000ms／ks剂量条件下,肝细胞DNA的Olive尾矩增加,DNA损伤细胞率分别为41．96％和54．13％,也明显高于对照组的9．30％（P〈0．01）;大鼠肝组织中的ROS、MDA均较对照组显著增高（P〈0．01）,同时GSH又较对照组明显下降（P〈0．01）。结论三氯乙烯在1500和3000mg／kg剂量条件下染毒大鼠后,造成肝组织明显的氧化应激并引起肝细胞DNA损伤。     

NAC对染尘大鼠模型血清及肺组织中丙二醛的影响

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对二氧化硅所致大鼠肺纤维化血清及肺组织中丙二醛(MDA)的影响。方法取健康、雄性Wistar大鼠90只,随机分为3组:染尘组:采用经非暴露气管注入法,气管内注入无菌SiO2粉尘悬液(50 mg/ml)1 ml建立矽肺模型;4周后再次予以染尘1次。NAC预防治疗组:模型制备同染尘组,于染尘前1周及此后每日予以NAC[500 mg/(kg.d)]灌胃;对照组:同样条件下向气管内注入等量生理盐水。3组动物于实验第8周处死,取肺组织标本行病理学观察、测定肺组织及血清中MDA水平。结果染尘组及预防治疗组MDA含量明显高于对照组;预防治疗组MDA的含量明显低于染尘组,差异有统计学意义(P0.01)。结论 NAC可降低SiO2所致肺纤维化大鼠MDA的产生,抑制肺纤维化的发展,减轻对肺组织的损伤。     

胆红素拮抗间二硝基苯致大鼠肝细胞DNA氧化损伤作用

[目的]探讨胆红素拮抗间二硝基苯(m-DNB)诱导大鼠肝细胞DNA氧化损伤作用。[方法]原代培养大鼠肝细胞与不同剂量m-DNB孵育,细胞色素C还原法和电子顺磁自旋捕获法观察m-DNB染毒大鼠肝细胞超氧阴离子自由基()和羟自由基(OH?)生成;以单细胞凝胶电泳和氚胸腺嘧啶(3H-TdR)掺入法分别观察m-DNB对大鼠肝细胞DNA损伤和合成抑制情况,分析胆红素干预对以上情况的影响。[结果]随m-DNB剂量增加,大鼠肝细胞和OH?水平、DNA受损细胞数和细胞DNA断裂程度增加,3H-TdR掺入量下降,具有较明显的剂量-反应关系(P<0.01)。10μmol/L胆红素干预可明显减低m-DNB致大鼠肝细胞和OH?水平、降低DNA受损细胞数和细胞DNA断裂程度、拮抗m-DNB对大鼠肝细胞DNA合成的抑制(P<0.01)。[结论]胆红素可拮抗m-DNB诱导大鼠肝细胞活性氧导致的DNA氧化损伤、减轻m-DNB对大鼠肝细胞DNA合成的抑制作用。     

体外甲基丙烯酸环氧丙酯-DNA加合物的研究

目的 探讨新诱变剂甲基丙烯酸环氧丙酯（ＧＭＡ）与ＤＮＡ形成加合物的类型和特性。方法 在体外条件下,dＡＭＰ、dＣＭＰ、dＧＭＰ、dＴＭＰ及小牛胸腺ＤＮＡ与ＧＭＡ发生反应,反应产物经紫外光谱、反相高效液相色谱（ＲＰ－ＨＰＬＣ）和质谱先进方法分析。结果 ＧＭＡ能与dＡＭＰ、dＣＭＰ、dＧＭＰ及小牛胸腺ＤＮＡ形成专一性共价结合。已 被证实１捉ＧＭＡ－ＤＮＡ加合物为Ｎ３－甲基丙烯酸－２羟丙－基－脱氧胞嘧啶核苷一磷     

Quantitative detection of apoptotic thymocytes in low-dose X-irradiated mice by an anti-single-stranded DNA antibody

The quantitative detection of apoptotic cells in low frequency in the thymus of mice irradiated with X-rays using an anti-single-stranded DNA antibody was explored. The antibody against single-stranded DNA (anti-ssDNA) was obtained with rabbits hyperimmunized with complexes of alkaline-denatured calf thymus DNA. AKR female mice were irradiated with 10 to 100 cGy or 4 Gy X-rays; thereafter, thymus sections were prepared at various times after irradiation. The detection and counting of apoptotic cells in the section were performed after histochemical staining using an anti-ssDNA antibody. The results demonstrate that, although sensitive and quantitative detection of apoptotic cells in irradiated thymus using the anti-ssDNA antibody is possible, the sensitivity is lower compared to that of in situ end-labeling methods, such as TUNEL or ISEL. The antibodies could also be used for rat thymus and spleen. In addition, an increase in positively stained cells by both methods was detected as early as 6 min after the irradiation of mice.     

芥子气对人皮肤细胞DNA交联形成与细胞毒性的关系

用不同剂量芥子气对单层人表皮基底细胞和人拟表皮染毒，观察诱发双链间ＤＮＡ交联的形成。结果表明在相同染毒剂量时，芥子气致人拟表皮ＤＮＡ交联形成率仅为单层人角朊细胞的１／４。染毒后１ｈ人角朊细胞ＤＮＡ交联形成率与染毒２４ｈ后比较明显降低。芥子气对皮肤细胞的ＤＮＡ交联作用与其细胞毒性作用之间存在有明显的剂量反应和时间反应关系。该种交联作用可能是芥子气导致皮肤细胞死亡的原因之一。芥子气对具有完整屏障结构的人拟表皮同样显示有致ＤＮＡ交联形成作用，这与芥子气能迅速直接穿过表皮的屏障结构作用于表皮基底细胞的报道相吻合     

多壁碳纳米管致大鼠肺损伤效应的研究

[目的]探讨多壁碳纳米管（multi-wall carbon nanotubes,MWCNTs）对大鼠的肺损伤效应。[方法]Wistar大鼠160只,随机分成5组：生理盐水对照组、脱氧核苷酸钠盐（deoxyribonucleic acid sodium salt,DNA钠盐）组、DNA钠盐-MWCNTs 2.0、10.0、20.0mg/mL3组（低、中、高染毒组）,并用DNA钠盐提高MWCNTs的分散度。采用气管滴注的方法染毒,一次滴注量为每kg体重1.5mL,每天1次,连续滴注3d,分别于滴注结束后24h、7d、28d、90d时间段,每实验组各处死8只动物,测定肺灌洗液中总蛋白（TP）、乳酸脱氢酶（LDH）、谷胱甘肽（GSH）和超氧化物歧化酶（SOD）等细胞毒性及细胞氧化损伤指标及大鼠体重,并观察动物肺组织病理学改变情况。[结果]MWCNTs染毒结束后24h,各染毒组大鼠进食及饮水量均有所下降。染毒结束后7、28、90d时,大鼠体重与滴注前体重相比有不同程度的升高,但染毒剂量越高,体重增加幅度越小。中、高剂量染毒组灌洗液中TP和LDH含量随着染毒浓度的增加而升高;灌洗液中GSH和SOD有不同程度的下降,但随时间的延长有不同程度的升高。电镜下,MWCNTs染毒后7d可观察到大鼠肺组织细胞核膜发生肿胀,核固缩,单位膜结构不清楚;内质网扩张,线粒体发生肿胀,嵴断裂等病理改变。[结论]MWCNTs可引起肺组织损伤和氧化损伤,对大鼠具有肺毒性作用。