缺氧促进猪肺动脉内皮细胞sis／PDGF－B链基因的表达

应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｓｌｏｔ一ｂｌｏｔ杂交技术研究了缺氧对猪肺动脉内皮细胞血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）基因表达的影响。结果表明，缺氧能明显增加肺动脉内皮细胞ＰＤＧＦ一Ｂ链ｍＲＮＡ的表达，而ＰＤＧＦ一Ａ链ｍＲＮＡ表达无明显影响。提示缺氧可能是体内刺激肺动脉内皮细胞ｓｉｓ／ＰＤＧＦ一Ｂ链基因表达的因素之一，通过控制肺动脉平滑肌细胞增生和收缩，在肺动脉高压血管改建中可能具有重要作用。     

缺氧对肺动脉内皮细胞PDGF基因及PDGF—B链蛋白表面的影响

应用核酸杂交和定量免疫细胞化学分析技术研究了缺氧对猪肺动脉内皮细胞血小板源性生长因子ＰＤＧＦ基因及ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白表达的影响。结果，缺氧能明显增强肺动脉内皮ＰＤＧＦ－Ｂ细胞边ｍＲＮＡ的表达，而ＰＤＧＦ－Ａ链ｍＲＮＡ表达水平无明显改变。免疫细胞化学定量分析与证实ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白染色比正常对照明显增强，与ＰＤＧＦ－Ｂ链基因表达的改变基本一致。提示缺氧可以刺激肺动脉内皮细胞ＰＤＧＦ的表达。ＰＤＦＧ在     

缺氧促进猪肺动脉内皮细胞sis／PDGF—B链基因的表达

应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｓｌｏｔ－ｂｌｏｔ杂交技术研究了缺氧对猪肺动脉内皮细胞血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）基因表达的影响，结果表明，缺氧能明显中肺动脉内皮细胞ＰＤＧＦ－Ｂ链ｍＲＮＡ的表达，而ＰＤＧＦ－Ａ链ｍＲＮＡ表达无明显影响，提示缺氧可能是体内刺激肺动脉内皮细胞ｓｉｓ／ＰＤＧＦ－Ｂ链基因表达的因素之一，通过肺动脉平滑机细胞增生和收缩，在肺动脉高压血管改建中可能具有重要作用。     

缺氧对肺动脉内皮细胞PDGF基因及PDGF－B链蛋白表达的影响

应用核酸杂交和定量免疫细胞化学分析技术研究了缺氧对猪肺动脉内皮细胞血小板源性生长因子ＰＤＧＦ基因及ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白表达的影响。结果表明，缺氧能明显增强肺动脉内皮细胞ＰＤＧＦ＿Ｂ链ｍＲＮＡ的表达，而ＰＤＧＦ－Ａ链ｍＲＮＡ表达水平无明显改变。免疫细胞化学定量分析也证实ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白染色比正常对照明显增强，与ＰＤＧＦ－Ｂ链基因表达的改变基本一致。提示缺氧可以刺激肺动脉内皮细胞ＰＤＧＦ的表达。ＰＤＦＧ在缺氧引起的肺动脉高压血管构形改建中可能具有重要作用。     

低氧致鼠腺泡内肺动脉PDGF—B链蛋白表达的变化

目的：探讨血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）在低氧肺动脉高压血管构形重建发生中的作用。方法：应用免疫组化技术结合计算机图像分析，检测了低氧大鼠腺泡内肺动脉（ＩＡＰＡ）ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白表达水平。结果：常氧时，ＩＡＰＡ仅有ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白弱表达；低氧１天时，ＩＡＰＡ便有较强的ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白表达，定位于ＩＡＰＡ的内皮和中膜，低氧３天至１４天仅分布于中膜；低氧１、３、５、７、１４天各时间点ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白表达分别为常氧组的１．５３、１．５９、１．５６、１．６２和１．４２倍，差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。结论：ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白可能参与了低氧肺动脉高压血管构形重建的发病过程     

低氧对人胚肺成纤维细胞转化生长因子β1表达的影响

应用核酸原位杂交及增强化学发光免疫斑点法,观察常氧（Ｎ）、低氧（Ｈ）、常氧和低氧猪肺动脉内皮细胞条 件培养液（ＮＥＣＣＭ和 ＨＥＣＣＭ）对人胚肺成纤维细胞转化生长因子β_１（ＴＧＦβ_１） ｍＲＮＡ和蛋白表达的影响。结果表 明：Ｈ组ＴＧＦβ_１ｍＲＮＡ表达为Ｎ组的１．３６倍（Ｐ＜０．０１）,同时在其培养上清液中,ＴＧＦβ_１蛋白含量也明显升高为Ｎ 组的１．８倍。ＨＥＣＣＭ组ＴＧＦβ_１ｍＲＮＡ和蛋白表达较ＮＥＣＣＭ组均下降,ｍＲＮＡ为ＮＥＣＣＭ组的９０％,Ｐ＜０．０１。蛋 白含量为后者的６２．２％。提示：（１）低氧促进入胚肺成纤维细胞合成和分泌ＴＧＦβ_１。（２）在低氧条件下,肺动脉内皮 细胞可能合成某种因子,抑制成纤维细胞ＴＧＦβ_１基因转录和蛋白表达。     

血小板源生长因子及其受体基因表达在低氧大鼠肺中的变化

本文观察了血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）Ａ、Ｂ链及其α、β受体基因表达在低氧大鼠肺中的变化。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交显示正常大鼠肺中可表达ＰＤＧＦ－Ａ链、Ｂ链和ＰＤＧＦ－α受体、β受体的ｍＲＮＡ。随着低氧时间的延长，ｍＲＮＡ水平迅速增加。ＰＤＧＦ－Ａ、Ｂ链ｍＲＮＡ均在低氧的第二天达高峰，分别为正常的１．５１倍及１．６９倍，且Ｂ链ｍＲＮＡ基本维持在该水平至第七天。ＰＤＧＦ－α、β受体的ｍＲＮＡ在低氧第     

TNFα对血管内皮细胞PDGF-B链基因转录的影响

ＴＮＦα主要由巨噬细胞、Ｔ细胞和ＮＫ细胞产生,是一种在急、慢性炎症过程中均有重要作用的炎症介质。动脉粥样硬化（ＡＳ）是以动脉壁内皮结构、功能损害和平滑肌细胞增殖变化为主的慢性炎症过程。ＡＳ时ＴＮＦα合成增多,且与ＡＳ的严重程度成正比。ＰＤＧＦ是以二聚体（ＡＡ,ＢＢ和ＡＢ）形式存在的促分裂剂。其中,ＰＤＧＦ－Ｂ链由ＰＤＧＦ－Ｂ链基因编码,该基因ｍＲＮＡ在ＡＳ血管内皮细胞中表达明显增高。因此,研究在ＴＮＦα作用下,血管内皮细胞ＰＤＧＦ－Ｂ链基因表达调控的分子机制对于阐明动脉粥样硬化的发病机制具有重要…     

缺氧诱导大鼠肺动脉PDGF和c－myc基因表达增强

为了研究生长因子和原癌基因在缺氧所致肺血管结构重建中的作用，我们选用Ｗｉｓｔａｒ大鼠，置于低压仓内模拟海拔５０００米高度持续缺氧７天和１４天。与平原对照组相比，缺氧７天时肺动脉血小板源生长因子Ａ链（ＰＤＧＦ－Ａ）基因表达水平略有升高，而后有下降趋势；缺氧１４天时ＰＤＧＦ－Ｂ链３．５ｋｂｍＲＮＡ表达显著升高。点杂交结果显示：ｃ－ｍｙｃ原癌基因正常时表达水平很低。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ可见缺氧７天时有２．２ｋｂｍＲＮＡ转录，缺氧１４天时其含量进一步增加为正常的６倍。结果表明，缺氧过程中，ＰＤＧＦ－Ａ链和Ｂ链是顺序表达的，其表达水平与缺氧性肺血管结构重组过程有一定相关。ＰＤＧＦ的促增殖作用是通过ｃ－ｍｙｃ基因产物实现的。     

血小板衍生性生长因子对体外培养人肾小球系膜细胞生长的影响

目的观察血小板衍生性生长因子（ＰＤＧＦ）对体外培养的人肾小球系膜细胞（ＭｓＣ）生长、基质合成和分泌以及ｃ┐ｍｙｃ癌基因表达的影响。方法体外培养的ＭｓＣ培养液中掺入５┐溴脱氧尿嘧啶（ＢｒｄＵ）,采用ＢｒｄＵ单克隆抗体免疫组化法检测ＭｓＣ的增殖情况;应用［３Ｈ］脯氨酸掺入酶消化法测定ＭｓＣ细胞内、外胶原蛋白总量;采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法检测纤维连接蛋白（ＦＮ）、Ⅳ型胶原、核癌基因ｃ┐ｍｙｃｍＲＮＡ表达结果。结果（１）ＢｒｄＵ掺入法的阳性细胞标记指数在对照组为１９．５％,ＰＤＧＦ组为３４．５％（Ｐ＜０．０１）;（２）ＭｓＣ经ＰＤＧＦ作用后,细胞内、外胶原蛋白量分别为２．６９±０．６０％和３．８７±０．６５％,较正常对照组１．２５±０．５０％和１．６１±０．５１％明显增加（Ｐ＜０．０１）;（３））Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法显示ＰＤＧＦ组细胞的ＦＮ、Ⅳ型胶原及ｃ┐ｍｙｃｍＲＮＡ的表达明显高于正常组。结论ＰＤＧＦ不仅可刺激肾小球ＭｓＣ的增殖和胶原蛋白合成,而且可从基因转录水平增加ＦＮ、Ⅳ型胶原及ｃ┐ｍｙｃ癌基因的表达。由此推断ＰＤＧＦ在肾小球疾病的发生、发展中可能起着重要作用     

缺氧内皮细胞培养液对肺动脉平滑肌细胞表型的影响

用细胞培养和形态定量分析方法观察缺氧对肺动脉平滑肌细胞表型的影响。结果显示，缺氧性内皮细胞条件培养液组肺动脉平滑肌细胞的二倍体细胞和α－ｓｍ－ａｃｔｉｎ含量均少于常氧性内皮细胞条件培养液组（Ｐ＜０．０５），尤以肌丝成份减少最明显；粗面内质网和线粒体却显著增多。而直接缺氧组与常氧组无明显差异。提示：缺氧可促使内皮细胞产生和释放某种促平滑肌细胞表型转化的物质或因子，从而改变了肺动脉管壁细胞之间的正常调控关系，导致平滑肌细胞肥大，合成细胞外基质增多。     

DDPH在低氧内皮细胞条件培养液促肺动脉平滑肌细胞增殖中对c-fos和c-myc表达的影响

目的在细胞水平研究1-(2,6-二甲基苯氧基)-2-(3,4-二甲氧基苯乙胺基)丙烷盐酸盐(DDPH)在低氧内皮细胞条件培养基(HECCM)促肺动脉平滑肌细胞(PASMC)的增殖过程中对c-fos和c-myc表达的影响。方法采用MTT比色法作为HECCM促PASMC的增殖指标,采用核酸斑点杂交法检测c-fos与c-myc mRNA的相对表达量,同时观察DDPH对它们的影响。结果低氧可刺激内皮细胞产生某些因子,经旁分泌作用促进PASMC的c-fos和c-myc基因转录以及促使PASMC增殖。DDPH能显著抑制HECCM促PASMC的增殖作用以及下调c-fos和c-myc mRNA的表达量。结论 DDPH能显著抑制HECCM促PASMC的增殖作用,其作用机制可能是通过下调C-fos和C-myc mRNA的表达量来实现的。     

Regulatory role of Epo3’-enhancer in cellular hypoxic response

Regulatory role of Epo3’-enhancer in cellular hypoxic response     

Heterotrimeric G proteins and the platelet-derived growth factor receptor-beta contribute to hypoxic proliferation of smooth muscle cells

Hypoxic proliferation of pulmonary arterial smooth muscle cells (PASMC) is mitogen dependent, but the signaling pathways mediating hypoxia-induced cell growth are not well understood. We investigated hypoxic proliferation in primary cultures from porcine pulmonary artery smooth muscle. The cells were grown in medium with or without platelet-derived growth factor (PDGF)-B, a potent smooth muscle cell mitogen. Hypoxia induced upregulation of PDGF receptor-beta expression, the primary receptor for PDGF-B. However, PDGF-B-mediated hypoxic enhancement of proliferation was abolished by pertussis toxin, indicating (1) involvement of heterotrimeric Galpha i proteins and (2) minimal effect of increased PDGF receptor expression in hypoxic enhancement of proliferation. We treated PASMC with labeled, nonhydrolyzable analogs of GTP to determine directly if GTP binding proteins were activated by hypoxia in PASMC. We show that hypoxia stimulates GTP incorporation in PASMC both in the presence and absence of PDGF-B. Serum-starved PASMC are able to increase their incorporation of GTP after only 10 min of hypoxia, and this response is not pertussis toxin sensitive. In serum-starved PASMC, we show that hypoxia stimulates incorporation of GTP into a 44-kD protein. The results show that heterotrimeric G proteins are involved in hypoxia-induced signaling in pulmonary vascular smooth muscle cells.     

连代低氧培养肺动脉平滑肌及内皮细胞的急性低氧反应中环核苷酸的作用

目的:探讨环核苷酸在慢性低氧动物的低氧性肺血管收缩反应(HPV)弱化机制中的作用。方法:用RIA法测定连代常氧与连代低氧培养猪肺动脉平滑肌细胞(PASMC)和内皮细胞(PAEC)的cAMP和cGMP及其在急性低氧时的变化;用图像分析系统检测常氧与低氧培养PASMC在急性低氧时的收缩程度。结果:低氧组PASMC的cAMP、cGMP和PAEC的cGMP基础值较常氧组低(P＜0.01)。急性低氧状态下,低氧组PASMC的cAMP、cGMP含量升高(P＜0.01);低氧组弱收缩反应PASMC的百分率明显高于常氧组。结论:慢性低氧PASMC和PAEC的cAMP、cGMP基础值下降可能与慢性低氧动物肺动脉基础张力增高有关;慢性低氧PASMC在急性低氧反应时cAMP、cGMP含量升高可能是慢性低氧机体HPV弱化的机制之一。     

拉马克啉对缺氧培养的肺动脉内皮及平滑肌细胞的影响及其机制探讨

目的:探讨三磷酸腺苷(ATP)敏感钾通道开放剂拉马克啉(Lev)对缺氧条件下培养的肺动脉内皮(PAEC)及平滑肌细胞(PASMC)的影响及其可能的作用机制。方法:分析Lev对缺氧条件下培养的PAEC及PASMC的[Ca²⁺]_i、上清液中NO^-₂及ET-1水平、细胞内PKC_α、eNOS、iNOS及PDGF-B的mRNA和蛋白质水平及PASMC增殖和凋亡的影响及其作用的细胞内机制。结果:①Lev可降低缺氧时PASMC及PAEC上清液中ET-1及细胞内PKC_α、iNOS及PDGF-B的mRNA和蛋白质水平,可降低PASMC[Ca²⁺]_i,抑制PASMC增殖,促其凋亡(P均<0.05),而对PAEC[Ca²⁺]_i及PASMC、PAEC上清液中NO^-₂水平及细胞内eNOS的mRNA和蛋白质水平无明显影响(P均>0.05)。②Lev下调缺氧时PASMC及PAEC上清液中ET-1水平及PASMC增殖的机制涉及抑制缺氧时PKC_α信号通道的功能活性。结论:Lev可减轻缺氧对PAEC及PASMC的某些不利影响,其作用的部分机制涉及下调缺氧时PAEC及PASMC内PKC_α信号通道的功能活性和降低PASMC的[Ca²⁺]_i,而与eNOS-NO信号通道无关。     

血小板源生长因子可促进低氧的牛肺动脉平滑肌细胞核内NF-κB表达

目的:为探讨血小板源生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)受体信号转导途径的介质分子之一过氧化氢( H₂O₂ )在低氧的肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cell,PASMC )增殖中是否起作用。方法:应用共聚焦显微镜、细胞免疫组织化学及Western印迹杂交等方法,检测了低氧的PASMC PDGF受体途径中的H₂O₂的变化及PDGF和H₂O₂对细胞核内与增殖作用相关的核转录因子NF-κB表达量的影响。 结果:PDGF可使常氧的PASMC中H₂O₂浓度增高,但明显降低低氧的PASMC中H₂O₂的量;同一浓度的H₂O₂,作用于常氧的PASMC,则引起核NF-κB的表达量增加,但对低氧的PASMC核NF-κB有明显的抑制作用;同时加入PDGF和H₂O₂的低氧的PASMC较仅以H₂O₂作用的低氧的PASMC,核NF-κB的量显著增加。结论:PDGF受体的信号转导途径在低氧的PASMC同常氧的PASMC相反,H₂O₂为抑制因子,对细胞可能产生损伤作用,PDGF可抑制低氧的PASMC产生H₂O₂并达到促进NF-κB表达增强的目的,从而使胞内与增殖相关的基因表达增强,最终达到低氧条件下表达增强的PDGF对低氧性PASMC过度增殖的正反馈调节作用。     

低氧对肺动脉平滑肌和内皮细胞蛋白激酶C α mRNA表达的影响

目的：探讨低氧对肺动脉平滑肌和内皮细胞蛋白激酶C(PKC)αmRNA表达的影响。方法：应用原位杂交技术了大鼠不同节段肺动脉平滑肌细胞和内皮细胞PKCαmRNA的分布及低氧对在体和离体肺动脉平滑肌细胞及内皮细胞PKCαmRNA表达的影响。结果：正常大鼠各级肺动脉平滑肌细胞和内皮细胞均有PKCαmRNA的表达,腺泡内肺动脉平滑肌细胞中的表达明显高于肌型肺动脉（P＜0．01）,低氧14d和28d肌型动脉和腺泡内肺动脉内皮细胞的表达均明显增高（P＜0．01）,腺泡内腺动脉平滑肌细胞的表达较对照组明显升高（P＜0．01）,低氧14d肌型肺动脉平滑肌细胞表达升高不明显,但低氧28d明显升高（P＜01）,正常条件下离体培养猪肺动脉平滑肌细胞和内皮细胞均有PKCαmRNA的表达,低氧1h对其表达无明显影响,48,72h表达明显升高,以72h升高最显著（P＜0．001）,结论：低氧可促进肺动脉平滑肌细胞和内皮细胞PKC amRNA 的表达,而以腺泡内肺动脉平滑肌细胞的变化最明显,PCKα在低氧性肺动脉高压的形成中可能起一定作用。