清肠温中方通过miR-675-5p/VDR信号通路调控溃疡性结肠炎Th17/Treg免疫平衡及肠黏膜屏障的机制研究

目的研究清肠温中方调控DSS诱导溃疡性结肠炎(UC)大鼠Th17/Treg免疫平衡及肠黏膜屏障的作用机制。方法 24只SPF级雄性SD大鼠,按体质量依照随机数字表将其随机分为空白组、模型组、清肠温中方组。空白组自由饮用去离子水,同时予去离子水灌胃;模型组和清肠温中方组自由饮用4.5%DSS溶液制备UC模型,同时模型组给予去离子水,清肠温中方组予清肠温中方灌胃。7 d后麻醉大鼠后取血及结肠组织,应用Real time-PCR法检测结肠miR-675-5p、VDR m RNA、RORγt mRNA、Foxp3 m RNA的表达,ELISA法检测血清IL-10、IL-17的表达,免疫组织化学法检测ZO-1、Occludin的蛋白表达及分布。结果与空白组比较,DSS诱导的UC大鼠结肠mi R-675-5p、RORγt mRNA及血清IL-17的表达较空白组明显升高(P 0.05或P 0.01),VDR mRNA、Foxp3 mRNA、ZO-1、Occludin、血清IL-10的表达较空白组明显降低(P 0.05或P 0.01);清肠温中方干预后,大鼠结肠mi R-675-5p、RORγt mRNA、血清IL-17的表达较模型组明显降低(P 0.05),VDR mRNA、Foxp3 mRNA、ZO-1、Occludin、血清IL-10的表达较模型组明显升高(P 0.05或P 0.01)。结论清肠温中方可能通过降低mi R-675-5p的表达,靶向调控VDR信号通路,从而调控溃疡性结肠炎Th17/Treg免疫平衡、修复肠黏膜屏障损伤,达到治疗UC的目的。     

复方芩柏颗粒剂对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中RORγt、Foxp3表达的影响

目的研究复方芩柏颗粒剂对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中RORγt、Foxp3表达的影响。方法复合法(三硝基苯磺酸+乙醇)制备溃疡性结肠炎大鼠模型,大鼠随机分为正常对照组、模型组、美沙拉嗪组(5%)及复方芩柏颗粒剂高、中、低剂量组(6%、12%、24%),灌肠给药3周。然后,评估大鼠饮食量、体质量、结肠组织损伤程度,ELISA法测定血清中TGF-β1、IL-17水平,HE染色观察病理变化,Western blot、RT-PCR法检测结肠组织中RORγt、Foxp3蛋白和mRNA表达。结果与模型组比较,复方芩柏颗粒剂组大鼠饮食量、体质量、TGF-β1及IL-17水平、结肠组织损伤程度显著改善(P0.05,P0.01),同时可调节RORγt/Foxp3失衡,并呈一定量效关系。结论复方芩柏颗粒剂对溃疡性结肠炎大鼠的治疗作用可能是通过调控RORγt/Foxp3失衡,从而下调IL-17表达来实现。     

Th17/Treg平衡在湿热型结肠炎大鼠中的变化及黄芩汤的调节作用

目的:观察湿热型结肠炎大鼠模型中Th17/Treg的平衡变化以及黄芩汤对Th17/Treg的调节作用,从免疫学的角度探讨其治疗湿热型结肠炎的机制。方法:应用高脂、高糖饲料联合人工气候箱法等复合因素造出大鼠湿热模型,再结合三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠法建立湿热+TNBS结肠炎模型;将60只大鼠随机分为空白组、湿热+TNBS结肠炎模型组、黄芩汤组、美沙拉嗪组。对大鼠进行一般临床观察,采用酶联免疫吸附法(ELISA)分析大鼠血清中白细胞介素17(IL-17)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)和转化生长因子β(TGF-β)水平,用Western blot方法检测结肠组织中Treg转录因子FOXP3和Th17转录因子RORγt的表达水平。结果:黄芩汤免煎剂0.12g/100g能够有效的缓解湿热型结肠炎的炎症反应,与对照组比较,湿热+TNBS结肠炎大鼠模型中Th17/Treg表达失衡,Th17类细胞因子IL-17和IL-6和转录因子RORγt表达升高而Treg类细胞因子IL-10和TGF-β和转录因子FOXP3表达降低;与模型组相比,黄芩汤能够降低IL-17、IL-6和RORγt的水平而增强IL-10、TGF-β和FOXP3的表达。结论:Th17/Treg失衡可能与湿热型结肠炎的发生发展密切相关,黄芩汤能够有效的调节Th17/Treg的平衡关系,这可能是其治疗湿热型结肠炎的免疫机制之一。     

玉屏风颗粒对变应性鼻炎大鼠Th17/Treg平衡及相关细胞因子的影响

目的研究玉屏风颗粒对变应性大鼠Th17/Treg免疫平衡的影响。方法采用OVA制备AR大鼠模型,大鼠随机分为正常组、模型组、氯雷他定组、玉屏风颗粒组(12、6 g/kg)。各组干预后评估大鼠AR行为学总分,HE和AB-PAS染色观察鼻黏膜组织病变情况,ELISA检测AR大鼠血清中的IL-17、TGF-β1水平,RT-PCR检测鼻黏膜组织中RORγt mRNA、Foxp3 mRNA的表达,Western blot检测鼻黏膜组织中RORγt、Foxp3蛋白表达。结果与模型组比较,玉屏风颗粒组(12、6 g/kg)大鼠挠鼻次数、打喷嚏次数等行为学总分降低(P0.05);上皮细胞结构完整、少量炎症细胞浸润、杯状细胞化生明显减少;血清中的IL-17水平降低、TGF-β1水平升高(P0.05);鼻黏膜RORγt mRNA表达降低、Foxp3 mRNA表达升高(P0.05);鼻黏膜组织RORγt/Foxp3蛋白表达比例升高(P0.05)。结论玉屏风颗粒能明显改善变应性大鼠鼻黏膜炎性症状,其作用机制可能与调节Th17/Treg平衡及相关细胞因子有关。     

穴位注射对变应性鼻炎大鼠Th17/Treg相关转录因子及细胞因子表达的影响

目的:观察穴位注射对变应性鼻炎(AR)大鼠鼻黏膜叉头状转录因子p3(Foxp3)和维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)、血清白细胞介素-17(IL-17)表达的影响,从Th17/Treg平衡角度探讨穴位注射治疗AR的作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、穴位注射组、非经非穴组,每组8只。采用卵清蛋白致敏法复制AR模型。穴位注射组每隔3d于"印堂"和双侧"迎香"注射地塞米松、转移因子和利多卡因混合液各0.1mL,共4次。非经非穴组同样方法于大鼠左右臀部"后海"与"环跳"连线中点和左(或右)前肢腋窝直下5cm处注射。采用叠加量化记分法进行行为学评分,采用免疫组织化学法检测鼻黏膜中Foxp3和RORγt的表达,酶联免疫吸附法检测血清中IL-17的表达。结果:模型组症状评分高于正常组(P0.05),穴位注射组症状评分低于模型组和非经非穴组(P0.05),非经非穴组症状评分略低于模型组,但差异无具统计学意义(P0.05)。模型组较正常组鼻黏膜Foxp3阳性细胞率降低(P0.05),鼻黏膜RORγt阳性细胞率增高、血清IL-17表达升高(P0.05),Foxp3/RORγt比值下降(P0.05)。与模型组和非经非穴组比较,穴位注射组鼻黏膜Foxp3阳性细胞率增高(P0.05),鼻黏膜RORγt阳性细胞率、血清IL-17表达降低(P0.05),Foxp3/RORγt比值升高(P0.05)。大鼠鼻黏膜Foxp3表达与症状评分呈负相关(P0.05),鼻黏膜RORγt表达和血清IL-17表达与症状评分呈正相关(P0.05),鼻黏膜Foxp3/RORγt与症状评分呈负相关(P0.05)。结论:穴位注射可通过上调鼻黏膜Foxp3表达水平,下调鼻黏膜RORγt表达水平,纠正其失衡,并抑制IL-17产生,从而缓解鼻部炎性反应。     

艾灸对实验性RA家兔Th17/Treg平衡的影响

目的:观察艾灸对类风湿关节炎(RA)的抗炎作用,探索艾灸对Th17/Treg平衡的影响。方法:将日本大耳白兔按随机数字表法分为空白组、模型组、治疗组,分别于造模前后以及治疗第1、2、3周测量膝关节周长,用ELISA法测滑膜液的IL-10、IL-17含量,用RT-PCR法测滑膜组织中Foxp3、RORγt基因表达量。结果:与模型组比较,治疗组膝关节周长明显偏低。与空白组比较,模型组IL-10量偏低,IL-17量明显偏高,IL-10/IL-17值明显偏低;与模型组比较,治疗组IL-10量偏高,IL-17含量偏低,IL-10/IL-17值偏高。与空白组比较,模型组Foxp3mRNA表达存在下降趋势,但差异无统计学意义,RORγtmRNA表达升高,Foxp3/RORγt值降低;与模型组比较,治疗组Foxp3mRNA表达存在升高趋势,但差异无统计学意义,RORγmRNA表达降低,Foxp3/RORγt值存在升高趋势,但差异无统计学意义。结论:对于RA艾灸具有明显的抗炎效应,艾灸可显著调节RA家兔滑膜液IL-10、IL-17的含量,可调节滑膜组织中Foxp3、RORγt基因的表达,表明艾灸具有调节Th17/Treg平衡的作用,可能是艾灸治疗RA抗炎效应的重要机制之一。     

基于TGF-β1/Foxp3/RORγt通路探讨清窍胶囊对分泌性中耳炎大鼠的作用机制＊

目的 基于TGF-β1/Foxp3/RORγt通路探讨清窍胶囊对分泌性中耳炎大鼠的作用机制。方法 36只雌性SD大鼠，其中30只构建分泌性中耳炎大鼠模型，造模成功后，30只大鼠随机分为模型组、强的松组（0.003 g/100 mL）、清窍胶囊低剂量治疗组（0.36 g/100 mL）、清窍胶囊中剂量治疗组（0.54 g/100 mL）、清窍胶囊高剂量治疗组（0.72 g/100 mL），每组6只，另6只设为空白对照组。治疗组分别按不同剂量灌胃给药，模型组与空白对照组灌服相同容积的蒸馏水，1次/天，连续14天。给药结束采血，处死，采样待检。苏木精-伊红染色（Hematoxylin-eosin stain，HE）染色观察各组大鼠中耳炎症细胞的变化；酶联免疫吸附（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测血清白介素-4（Interleukin-4，IL-4）、β-转化生长因子（Transforming growth factor beta，TGF-β）、白介素-6（Interleukin-6，IL-6）、γ-干扰素（Interferon γ，IFN-γ）、白介素- 10（Interleukin-10，IL-10）、白介素-17（Interleukin-17，IL-17）水平；流式细胞技术检测脾脏和胸腺Th17/Treg细胞含量；实时荧光定量PCR检测脾脏和胸腺组织叉头盒P3（Forkhead Box P3，FOXP3）、IL-17、维甲酸相关核孤儿受体γt（Retinoic acid-related orphan receptor γt，RORγt）mRNA表达；蛋白质免疫印迹（Western Blot，WB）检测脾脏和胸腺组织RORγT、Foxp3表达。结果 与空白组比较，分泌性中耳炎大鼠黏膜层明显增厚，有大量炎性细胞浸润；且TGF-β、IL-6、IFN-γ、Th17、Treg细胞、IL-17、RORγT水平明显升高，IL-10、IL-4、Foxp3水平明显降低（P<0.01）；与模型组比较，清窍胶囊高剂量组可明显改善中耳炎炎细胞浸润，明显降低模型大鼠TGF-β、IL-6、IFN-γ、IL-17水平，明显升高IL-10、IL-4水平（P<0.05），并明显降低模型大鼠Treg细胞、RORγT水平，明显升高Foxp3表达（P<0.05）。结论 清窍胶囊可有效地调节TGF-β/Foxp3/RORγt信号通路，进而调节Treg和Th17细胞介导的中耳炎的发生及发展，改善分泌性中耳炎。     

温阳益气方对脾肾阳虚型UC模型大鼠Th17细胞的影响

目的:观察温阳益气方对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型Th17细胞的影响。方法:40只SPF级Wistar大鼠运用TNBS造模法,成功制备出脾肾阳虚型UC大鼠模型后,随机分为4组:正常组、模型组、温阳益气(WYYQ)组、美沙拉嗪(MT)组。药物干预28 d后取标本。运用HE染色法进行UC大鼠结肠黏膜组织病理学观察,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中IL-17、IL-23的表达;采用实时荧光定量PCR法定量分析结肠组织中RORγt mRNA的表达;采用Western Blot法测定结肠组织中Stat3蛋白的表达。结果:病理切片HE染色后在光镜下观察,可见结肠黏膜水肿、糜烂、出血,黏膜上皮缺损,溃疡灶形成。与模型组相比,WYYQ组和MT组镜下病理组织评分明显降低(P0.05),血清IL-17、IL-23含量明显降低(P0.05),结肠组织中RORγt mRNA的表达明显降低(P0.05),Stat3蛋白的表达明显降低(P0.05)。结论:温阳益气方能明显改善UC模型大鼠的炎症情况和黏膜组织的病理情况,降低血清IL-17、IL-23的含量,降低结肠组织中RORγtmRNA和Stat3的表达。抑制和降低UC模型大鼠结肠组织中Th17细胞的分化,可能是温阳益气方发挥其治疗溃疡性结肠炎的作用机制之一。     

壮医药线点灸对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织Th17细胞及IL-17F的影响

目的:观察壮医药线点灸干预溃疡性结肠炎(UC)大鼠的疗效,并探讨其对辅助性T细胞17(Th17)/白细胞介素17F(IL-17F)轴的影响。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药物组、壮医药线点灸组,每组10只。采用4%葡聚糖硫酸钠(DSS)自由饮水法制备UC大鼠模型。阳性药物组予柳氮磺胺嘧啶(SASP)灌胃,1 mL/次,2次/日,连续干预14 d;壮医药线点灸组予壮医药线点灸"天枢"和"气海"穴,1壮/穴,1次/日,双侧腧穴交替灸疗,连续干预14 d。观察记录大鼠疾病活动指数(DAI)评分;HE染色法观察大鼠结肠组织病理学变化;流式细胞术检测大鼠结肠组织中Th17细胞百分比;酶联免疫吸附法检测大鼠结肠组织中维甲酸相关孤儿核受体γt(RORγt)和IL-17F含量;荧光定量PCR法检测大鼠结肠组织RORγt和IL-17F mRNA相对表达量。结果:模型组大鼠出现粪便不成形、脓性黏液血便;镜下结肠黏膜脱落,杯状细胞消失,大量炎性细胞浸润,成纤维细胞增生;与空白组比较,模型组大鼠DAI评分、结肠组织Th17细胞百分比、结肠组织RORγt和IL-17F含量及mRNA表达量均显著升高(...     

补肾平喘膏方对支气管哮喘大鼠Th17/Treg平衡的影响

目的观察支气管哮喘(哮喘)大鼠肺组织中维甲酸受体相关孤儿受体(RORγt)和叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)的变化情况以及补肾平喘膏方对其的影响,以探讨补肾平喘膏方防治哮喘的作用机制。方法 60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、西药组、膏方预防组、膏方治疗组和膏方防治(预防+治疗)组,每组10只。除正常对照组外,其余各组大鼠以卵蛋白(OVA)致敏并诱发哮喘模型。采用地塞米松或膏方治疗(正常组与模型组除外)后,RT-PCR法检测肺组织中RORγt和Foxp3的mRNA表达情况。结果模型组肺组织Foxp3 mRNA表达低于正常组(P0.01),经膏方干预的各组大鼠肺组织Foxp3 mRNA表达升高(P0.05),与正常组表达相似(P0.05),膏方各组组间差异无统计学意义(P0.05)。模型组肺组织RORγt mRNA表达高于正常组(P0.01),经膏方干预的各组大鼠肺组织RORγt mRNA明显降低(P0.05),膏方各组组间差异无统计学意义(P0.05)。结论补肾平喘膏方可以通过调节哮喘大鼠RORγt/Foxp3平衡,改善Th17/Treg的失衡状态,从而防治哮喘。     

助阳舒心方对抑郁大鼠脑组织IL-6、IL-17和RORγt表达的影响

目的:观察助阳舒心方对细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17(IL-17)和视网膜相关孤儿受体-γt(RORγt)的影响,探究其抗抑郁机制.方法:采用慢性不可预见性轻度应激(CUMS)结合孤养法制作抑郁大鼠模型,将30只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(盐酸氟西汀,2 mg/kg)和助阳舒心...     

针灸治疗对狼疮性肾炎小鼠Th17/Treg细胞及其细胞因子表达影响的研究

目的:观察针灸治疗对狼疮性肾炎小鼠的影响,并探讨针灸对调节性T细胞(Treg)及辅助性T细胞17 (Th17)分化及其细胞因子表达的调控作用。方法:将MRL/lpr狼疮性肾炎模型小鼠随机分为针灸组、地塞米松组、模型组,每组10只。另取10只C57BL/6小鼠作为正常组。采用HE染色法检测小鼠肾脏病理改变;PI单染流式细胞术检测各组小鼠肾脏组织中Th17/Treg比例;采用q RT-PCR和ELISA法检测肾脏中叉头样转录因子3 (Foxp3)、维A酸相关孤儿受体-γt (RORγt)及白细胞介素-17 (IL-17)的水平。结果:与正常组比较,模型组肾小球肾炎、间质性肾炎以及血管病变评分、Th17/Treg比值及RORγt、IL-17蛋白及mRNA表达水平均显著升高(P<0.05),Foxp3蛋白及mRNA表达水平均下降(P<0.05)。与模型组比较,地塞米松组、针灸组肾小球肾炎、间质性肾炎以及血管病变评分、Th17/Treg比值及肾脏组织RORγt、IL-17蛋白及m RNA表达水平均显著降低(P<0.05);Foxp3蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05)。结论:针灸能显著减少狼疮性肾炎小鼠肾脏RORγt及IL-17表达,增加Foxp3水平,调控Th17/Treg比例,改善肾脏病理改变,从而对MRL/lpr狼疮肾炎小鼠肾脏起到保护作用。     

靛玉红对溃疡性结肠炎小鼠CD4CD25Treg细胞Foxp3表达的影响

目的观察青黛及其有效成分靛玉红对溃疡性结肠炎（UC）小鼠脾脏CD4CD25Treg细胞Foxp3表达的影响,探讨其治疗uc的作用机制和靶点。方法将50只BABL／c小鼠随机分为正常组、模型组、靛玉红组、青黛组和5-ASA组。除正常组外,其余小鼠采用自由饮用5％葡聚糖硫酸钠（DSS）溶液5天,制备DSS诱导的UC小鼠模型。于造模后第5天开始,予各组小鼠给药治疗7天。观察各组小鼠一般状况及结肠组织病理学改变,同时检测脾脏CD4CD25Treg细胞Foxp3的表达变化。结果与正常组比较,模型组小鼠CD4CD25Treg细胞Foxp3的表达显著减少（P〈0．01）;各治疗组CD4CD25Treg细胞Foxp3的表达较模型组升高（P〈0．01）。结论青黛及其有效成分靛玉红可通过上调CD4CD25Treg细胞Foxp3表达以防治UC。     

中药苦参水提取物抑制Th17细胞分化的研究

目的探讨苦参水提取物(Sophora flavescens aqueous extract,SFAE)对Th17细胞分化的影响。方法通过体外分离豚鼠淋巴结获取原代淋巴细胞,采用磁珠分选技术获得初始CD4^+T细胞。采用CCK-8法筛选SFAE对T细胞活力的最佳抑制浓度。通过白细胞介素-6(IL-6)和转化生长因子-β(TGF-β)诱导建立初始CD4^+T细胞向Th17细胞分化的细胞模型,并以SFAE进行干预;采用流式细胞仪检测各组Th17细胞比例,采用qRT-PCR及Western Blot法检测各组细胞中视黄酸相关的孤儿受体γt(RORγt)、信号转导子和转录激活子3(STAT3)、白细胞介素-17A(IL-17A)和白细胞介素-17F(IL-17F)的mRNA及蛋白表达水平。结果与对照组比较,SFAE浓度在0.01 mg·mL^-1时对初始CD4^+T细胞的活力有抑制作用(P<0.01),选择该浓度作为后续实验浓度。与对照组比较,模型组能明显上调CD4^+IL-17A+T细胞的比例(P<0.001),上调RORγt、STAT3、IL-17A、IL-17F mRNA及蛋白的表达(P<0.01,P<0.001)。与模型组比较,SFAE干预后模型处理组的CD4^+IL-17A+T细胞比例明显下调(P<0.05),STAT3、RORγt、IL-17A、IL-17F mRNA及蛋白表达水平均明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论SFAE能够抑制Th17细胞分化,降低Th17细胞比例,其作用机制可能是通过抑制转录因子RORγt及STAT3的活性,降低IL-17A、IL-17F的表达。     

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术分析不同配伍比例雄黄对青黛入血成分的影响

目的:基于青黄散的配伍组方,探讨不同比例雄黄与青黛配伍后青黛在大鼠血清中移行成分的差异。方法:采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术对青黛供试品溶液、空白血清以及3种不同配比(青黛10 g分别配伍雄黄52. 5,105,210 mg,依次记为A组,B组,C组)青黄散含药血清进行检测,结合青黛供试品溶液中鉴定的化学成分,分析3组复方中青黛在大鼠体内的移行成分差异;以3组青黄散含药血清作用于人白血病细胞HL-60细胞,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各含药血清对HL-60细胞活性的影响。结果:从青黄散A组,B组,C组含药血清中分别检测到了19,22,25个移行成分,且3组含药血清均含有来自青黛供试品溶液中的5个原型成分,分别为色胺酮,靛蓝,靛玉红,2-氨基苯甲酸和N-苯基-2-萘胺;CCK-8法检测结果表明青黄散C组含药血清对HL-60细胞的抑制作用最强。结论:固定青黛剂量后,随着雄黄剂量的增加,含药血清中移行成分增多,且对HL-60细胞的抑制作用也逐渐增强,提示雄黄可能会促进青黛中有效成分在体内的吸收,从而增强药效,进一步阐释了不同比例雄黄和青黛的配伍规律及药效物质基础。     

青黛镇痛、抗炎药效学研究

目的:观察不同给药方式下青黛的镇痛、抗炎作用。方法:分别采用ig和外涂两种给药途径,用药4 d。动物分为空白对照组,阳性药组以及青黛治疗组(600,300,150 mg·kg-1 ig 3个剂量;外涂青黛给药剂量为小鼠400 mg/只、大鼠500 mg/只)。以热板法和小鼠扭体法观察青黛的镇痛作用;以二甲苯致小鼠耳廓肿胀法、大鼠棉球肉芽肿法观察青黛的抗炎作用。结果:ig给药,青黛对热板所致的小鼠疼痛可使痛阈提高达47%,醋酸致小鼠疼痛的扭体减少达40%,与空白组比较差异显著(P<0.05或P<0.01);对急性炎症模型耳廓肿胀抑制率为48%,与空白组比较抗炎作用显著(P<0.05),对亚急性炎症模型作用不明显;外涂给药,对热板法致的小鼠疼痛有显著镇痛作用(P<0.01),对醋酸所致的小鼠扭体反应影响不明显,对急性、亚急性炎症模型均有明显抗炎作用(P<0.01)。结论:结果提示青黛内服、外用均有一定的镇痛、抗炎作用;不同给药途径对于不同疼痛、炎症模型的影响表现出一定的差异性。     

溃疡性结肠炎外周血RORC和Foxp3 mRNA表达水平的变化及黄芩苷的干预作用

目的:本研究旨在探讨活动期UC患者外周血单个核细胞RORC和Foxp3 mRNA及相关细胞因子并予以不同浓度的黄芩苷干预的作用。方法:应用Q-PCR检测转录因子RORC和Foxp3 mRNA的表达,用ELISA法检测血清IFN-r、IL-6、IL-10、TGF-β水平及体外黄芩苷干预下的检测上述指标。结果:研究发现IFN-r、IL-4、IL-5、IL-10和TGF-β1与IBS-D组和健康对照组均有不同程度的升高,IL-6较IBS-D组和健康对照组稍降低。体外不同溶度的黄芩苷可引起IFN-r、IL-5、IL-6明显降低,IL-4和IL-10升高,以20μmol和40μmol浓度更明显。与健康对照组和IBS-D组相比较,UC患者的RORC和Foxp3mRNA明显增高,差异有显著性(P<0.05)。体外黄芩苷干预下,40μmol浓度干预下的RORC和Foxp3均明显下降,RORγt/FOXP3比值降低,间接调节了Th17/Treg分化的平衡。结论:较高浓度黄芩苷干预对Foxp3下降的作用更明显,使RORγt/FOXP3比值降低,间接调节了Th17/Treg分化的平衡,黄芩苷作为黄芩汤的重要组成成分之一,可能通过调节免疫平衡而缓解溃疡性结肠的炎症反应,为深入研究UC的发病机制及新药开发提供理论基础。     

加味归脾合剂治疗慢性免疫性血小板减少症气虚证临床研究

目的:观察加味归脾合剂治疗慢性免疫性血小板减少症(ITP)的疗效,探讨中药复方制剂对ITP患者Treg/Th17免疫紊乱调控的有效干预机制。方法:将符合标准的60例慢性ITP患者随机分为中药组和激素组各30例,中药组予加味归脾合剂治疗,激素组予泼尼松治疗,记录治疗前后ITP患者血清中细胞因子Treg细胞、Th17细胞以及Treg/Th17比值,Foxp3mRNA、RORγt mRNA、Foxp3/RORγt比值检测结果及外周血血小板计数。结果 :(1)血小板计数:中药组和激素组治疗后均有所上升,与治疗前比较差异有统计学意义(P0.01),组间比较差异无统计学意义(P0.05)。(2)Treg/Th17:中药组与激素组治疗前与正常对照组比较,Treg细胞、Th17细胞、Treg/Th17比值、Foxp3mRNA、RORγt mRNA表达、Foxp3/Ro Rγt比值差异均有统计学意义(P0.05);治疗后中药组Treg细胞表达与Treg/Th17比值、Foxp3mRNA表达、Foxp3/Ro Rγt比值检测均高于激素组,组间比较差异有统计学意义(P0.05);Th17和RORγtmRNA表达,组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:加味归脾合剂可有效提升血小板计数及Treg细胞、Treg/Th17比值、Foxp3mRNA、Foxp3/Ro RγT比值,其上调Treg细胞及Foxp3mRNA表达,从而改善Treg/Th17免疫功能紊乱,健脾益气统血是治疗ITP气虚证的主要机制之一。