新型甲型H1N1流感检测方法的临床观察

目的研究新型甲型H1N1流感病毒RNA荧光定量的检测方法,探讨取材方法、时间等对检测结果的影响。方法采集发热人群的标本800份,其中鼻咽拭子混悬液308例,咽拭子280例,鼻拭子212例,采集时间以患者的就诊时间为准,荧光定量PCR法检测其甲型H1N1流感病毒RNA,同时做季节性流感病毒检测、B型流感病毒检测、高致病性禽流感病毒(H5N1)RNA检测。结果 800份样本中有423例为甲型H1N1流感病毒RNA阳性,占53%;其他流感352例,占44%。就取材方法而言,鼻咽拭子混悬液的阳性率为68%,咽拭子的阳性率为47%,鼻拭子的阳性率为39%。就采集时间而言,发病1天内采集的样本阳性率为64%,发病3天内采集的样本阳性率为31%,发病7天内采集的标本阳性率为8%,发病7天后采集的标本阳性率为0。结论在新型甲型H1N1流感的检测中,取材时应尽可能取鼻咽拭子混悬液,且采样时间越早阳性率越高。     

一种快速核酸提取试剂在流感病毒检测中的应用评价

目的 探讨一种快速核酸提取试剂在流感病毒检测中的适用性及有效性。方法 选取流感病毒H3亚型、乙型Yamagata系细胞株和甲型H1N1型鸡胚株各1株,对其倍比稀释液及2015年北京市流感病原学监测阳性的67份咽拭子样本,同时采用快速提取法及离心柱提取法提取病毒核酸,经实时荧光PCR法进行定性、定量检测,检测结果采用SPSS 19.0软件进行统计分析。结果 快速提取法提取细胞培养液、鸡胚培养液中流感病毒核酸的最低检测限高于离心柱法10倍,咽拭子样本则高100倍;快速提取法提取核酸后检测到的病毒载量均低于离心柱法,其中对含有病毒量较高的毒株检测到的病毒载量低于离心柱法10倍,而对病毒量较少的咽拭子样本,则低100倍;快速提取法稳定性优于离心柱法;提取后的核酸-80℃保存10 d后冻融复测,快速提取法核酸损失量大于离心柱法。67份离心柱提取法检测阳性咽拭子样本使用快速提取法提取核酸后检测,两种方法阳性符合率总计为92.54%,其中10～102拷贝/ml组,阳性符合率为76.92%,102～103拷贝/ml组,阳性符合率为92.59%,103拷贝/ml组,阳性符合率为100%。结论 快速提取法具有稳定性高、易于操作、不易污染的优势,适用于细胞培养液、鸡胚培养液等病毒含量较高的大量样本中流感病毒核酸提取,适于检测样本量大、人手不足、设备欠缺的基层实验室使用;但-80℃冻融后核酸损失量较大,不宜反复冻融后使用;传统的离心柱法对于病毒含量较少的咽拭子样本及核酸需被反复冻融使用时具有优势。     

直接免疫荧光法对多种呼吸道病毒检测的临床意义

目的为临床提供一种快速诊断呼吸道病毒感染的方法。方法采用直接荧光免疫法检测呼吸道分泌物的合胞病毒、腺病毒、流感病毒A、流感病毒B及副流感病毒1、2、3型。结果对195例呼吸道感染者的鼻咽分泌物标本采用直接荧光免疫法进行病毒原检测，结果显示本地区病毒感染率为57．94％，病毒原以呼吸道合胞病毒为主，副流感病毒1、3型次之，感染以冬季好发。结论该法具有快速、简便、特异性高等优点，对确定临床呼吸道病毒感染是一种非常好的方法。直接荧光免疫法操作简便，费用较低，适合基层医院推广使用。     

聚合酶链式反应技术和间接血凝试验检测肺炎支原体的应用比较

今年来,聚合酶链式反应已被用于检测肺炎支原体DNA,但多采用咽拭子标本,我们应用负压吸引法从鼻咽部采取分泌物进行MP DNA检测,同时应用间接血凝法检测血清抗MP-IgM,并对两方法进行了对比分析。1材料和方法1.1材料1.1.1标本采集257例肺炎患儿均为齐鲁医院门诊或住院病人。男167     

小婴儿肺炎患者沙眼衣原体培养的临床探讨

目的 了解小婴儿肺炎患者沙眼衣原体感染情况及对应的临床症状。方法 用鼻咽拭子采集226例标本,同时用此采集法与鼻咽抽吸物采集法同时采集63名患儿标本,用细胞培养法。结果 除去污染酶菌35例小婴儿鼻咽拭子细胞培养沙眼衣原体20．9％(40／191)阳性。鼻咽拭子与鼻咽部抽吸物63例,培养阳性分别的11例与10例,前者更适宜于临床应用。回顾并总结了小婴儿沙眼衣原体肺炎常见的特征性症状体征。结论 儿科医师应对沙眼衣原体引起的小婴儿肺炎要给予的足够重视。     

鼻咽拭子与口咽拭子呼吸道病毒抗原检出率比较

目的比较鼻咽拭子与口咽拭子常见呼吸道病毒抗原阳性检出率,为临床选择样本类型提供参考。方法选取199例上呼吸道感染患儿,同时采集其口咽拭子和鼻咽拭子样本,按随机原则确定不同患儿采集2个部位样本的先后顺序。2份样本同时送检,采用胶体金免疫分析法检测流行性感冒病毒(Flu)A、FluB、呼吸道合胞病毒(RSV)和腺病毒(ADV)抗原。结果 199例上呼吸道感染患儿中,鼻咽拭子FluA、FluB、RSV、ADV阳性率和4种病毒的总阳性率分别为31.2%、10.6%、6.0%、5.5%和52.3%,口咽拭子分别为20.6%、7.0%、5.0%、5.0%和37.6%;鼻咽拭子FluA、FluB阳性率和4种病毒总阳性率高于口咽拭子(P0.05),RSV、ADV 2种样本阳性率差异无统计学意义(P0.05)。有40例患儿鼻咽拭子阳性、口咽拭子阴性;有11例患儿鼻咽拭子阴性、口咽拭子阳性;以鼻咽拭子检测结果为标准,口咽拭子FluA、FluB、RSV、ADV的检测敏感性分别为59.7%、61.9%、75.0%和45.5%,特异性均97%。结论结合操作的便利性,对于儿童患者而言,取单个咽拭子样本检测呼吸道病毒时可仅采集鼻咽拭子样本。对于临床高度疑似病例,可同时采集鼻咽拭子和口咽拭子样本,以提高检出率。     

桥联酶标法检测小儿呼吸道病毒抗原156例报告

为提高小儿呼吸道感染治疗质量，作者于1995年4月～1997年10对住院呼吸道感染患儿156例用桥联酶标法快速检测鼻咽部脱落细胞中6种常见的呼吸道病毒抗原，现将结果报告如下。1临床资料与方法156例住院呼吸道感染患儿，年龄27d～11岁。临床诊断上呼吸道感染54例，下呼吸道感染102例（后者包括肺炎58例，支气管炎29例，儿童哮喘伴感染3例）。将吸痰管经鼻腔插至患儿鼻咽部，负压抽吸出鼻咽分泌物，放入PBS液中立即送检。采用单克隆抗体桥联酶标法（ApAAp法）[1,2]。抗体及试剂由北京262医院提供，可测副流感病毒，副流感病毒A、B型，合胞病…     

快速检测方法在呼吸道感染病原体检测的临床价值

目的探讨快速检测方法对呼吸道流感病毒、肺炎支原体检测的临床应用价值。方法选取该院2011年1月至2015年12月收集的386例上呼吸道感染患者标本进行检测,采用胶体金免疫沉积法检测患者鼻咽部分泌物中的A、B型流感病毒,采用快速培养法检测肺炎支原体,以间接免疫荧光法检测患者的血清病原体抗体IgM结果作为金标准,判断2种快速方法检测的临床价值。结果间接免疫荧光法共检出A型流感病毒感染患者54例,检出率13.59%;检出B型流感病毒感染患者37例,检出率9.59%;检出肺炎支原体感染患者61例,检出率15.80%。胶体金免疫沉积法检出A型流感病毒感染的敏感度为20.37%,特异性为92.77%;胶体金免疫沉积法检出B型流感病毒感染的敏感度为18.92%,特异性为93.41%;快速培养法检出肺炎支原体感染的敏感度为37.70%,特异性为89.85%。结论快速检测方法对呼吸道流感病毒、肺炎支原体检出的敏感度较低,临床上只能作为间接免疫荧光法检测的1种辅助手段。     

实时荧光RT-PCR检测不同标本中甲型H1N1流感病毒核酸的临床意义

目的通过检测甲型H1N1流感感染患者不同标本中甲型H1N1流感病毒核酸,了解其对甲型H1N1流感的快速诊断及病程进展的关系。方法 118例甲型H1N1流感患者,采用实时荧光逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)分别检测发病48 h后和(或)恢复期咽拭子、血浆及下呼吸道分泌物中甲型H1N1流感病毒核酸。结果 118例甲型H1N1流感患者发病48 h后咽拭子甲型H1N1流感病毒核酸阳性;23例(23/40)重症患者下呼吸道分泌物中甲型H1N1流感病毒核酸阳性;15例(15/40)重症患者血浆中检测到甲型H1N1流感病毒核酸。结论实时荧光RT-PCR方法可以快速检测甲型H1N1流感病毒感染,血浆中甲型H1N1流感病毒核酸阳性可能是重症患者的标志。     

健康儿童鼻咽部金黄色葡萄球菌带菌及耐药性分析

目的 为了解广州地区健康儿童鼻咽部金黄色葡萄球菌的带菌情况及耐药性.方法 用鼻咽拭子法采集1 052名3～5岁广州市幼儿园健康儿童鼻咽分泌物进行金黄色葡萄球菌分离培养,采用K-B法检测178株金黄色葡萄菌对替考拉宁、头孢西丁、阿米卡星、环丙沙星、头孢唑啉、氨苄/舒巴坦、青霉素、红霉素、克林霉素、庆大霉素、头孢他啶、四环素、复方新诺明等13种抗菌药物的耐药性;用E-Test法检测178株金黄色葡萄菌对万古酶素的耐药性.结果 健康儿童鼻咽部金黄色葡萄球菌带菌率为16.9%,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为0%,对万古霉素、替考拉宁、头孢西丁、氨苄/舒巴坦、阿米卡星、头孢唑啉和复方新诺明的耐药率均为0%,对青霉素、红霉素、克林霉素、头孢他啶、四环素、庆大霉素的耐药率分别为91.1%,74.3%,25.7%,25.7%,4.3%和2.9%.结论 健康儿童鼻咽部金黄色葡萄球菌带菌率不高,其中MRSA比例及对14种药物的耐药性明显低于上呼吸道感染患儿所带金黄色葡萄球菌.     

流感病毒快速检测方法特异性和敏感性研究

目的比较多重逆转录聚合酶链反应(mRT-PCR)和胶体金法检测流感病毒的敏感性和特异性。方法采用mRT-PCR和胶体金法检测经细胞培养和红细胞凝集抑制试验(HI)鉴定为A/H1、A/H3、B型流感病毒的鼻咽拭标本78份,阴性鼻咽拭标本40份,并对已稀释成101~105病毒半数感染量(TCID50)/0.1 mL的3株H1、H3、B型流感病毒进行敏感性试验。结果mRT-PCR对A型流感病毒的检测敏感性为44.8%,特异性为97.5%;对B型流感病毒检测敏感性为20.0%,特异性为100.0%。胶体金法对A型流感病毒检测敏感性为44.8%,特异性为100.0%;对B型流感病毒检测敏感性为5.0%,特异性为97.5%。对经20代内狗肾细胞(MDCK)分离培养阳性的4份A/H1、4份A/H3和3份B型流感培养液,mRT-PCR和胶体金法检测的阳性符合率与型别符合率均为100.0%。mRT-PCR检测流感病毒敏感性为103TCID50/0.1 mL;胶体金法检测的敏感性为103TCID50/0.1 mL。结论mRT-PCR和胶体金法的敏感性与特异性无差异;mRT-PCR和胶体金法均可用于人群流感鼻咽拭标本流感病毒快速检...     

Comparison of the NOW Influenza A & B, NOW Flu A, NOW Flu B, and Directigen Flu A+B assays, and immunofluorescence with viral culture for the detection of influenza A and B viruses

To evaluate the Binax NOW Influenza A & B combination assay, we tested upper respiratory tract samples in parallel with the Binax NOW Flu A and Binax NOW Flu B assays, the Becton-Dickinson Directigen Flu A+B assay, and immunofluorescence, and the results were compared with viral culture. Of the 521 samples tested, influenza A was cultured from 113 and influenza B from 6. There were no significant differences in the performance of all rapid antigen tests, with sensitivities of 53% to 59% for detecting influenza A compared with culture and immunofluorescence (80%). The sensitivities for all rapid tests were significantly higher for nasopharyngeal samples than for throat swabs. The Binax NOW Influenza A & B assay performed as well as other rapid assays. Commercial antigen detection assays are useful tools for the rapid diagnosis of influenza; however, confirmatory testing is always recommended. The use of nasopharyngeal samples for all rapid detection methods should be strongly encouraged.     

流感病毒快速诊断的临床应用价值

目的 评估流感病毒快速检测法在临床应用中的价值.方法 从2010年10月至2012年5月,在该院发热门诊每日随机选择年龄在2～8岁符合卫生部流感样病例患者7～10例留取鼻咽分泌物进行流感病毒抗原快速检测,同时调查患者基本信息、临床症状、诊治情况等,并对在该院流感病毒快速检测达到3次阳性的患者进行细菌培养和耐药性分析.另从在该院诊治为流感样病例3次及以上的2～8岁患者中随机选取从未进行流感病毒抗原快速检测的相同例数作为对照组,调查内容同实验组.结果 留取鼻咽分泌物进行流感病毒抗原快速检测人次为5 122例,阳性报告1 885例,阳性报告率为36.8%;达3次阳性的患者进行细菌培养和耐药分析最终有208例纳入分析.结果 如下:在对照组按流感病毒阳性报告率36.8%计算,实验组及对照组的抗菌药物使用率分别为5.8%(12/208)剧增至26.9%(56/208);细菌感染比例由4.3%(9/208)大幅提升到24.0%(50/208),耐药比例由2.9%(6/208)增加到13.9%(29/208),差异具有统计学意义(P<0.05).结论 对流感样病例进行流感病毒快速检测,可明显降低抗菌药使用率和患者的细菌感染率,并提高患者的药敏水平,降低患者的耐药程度.同时,有利于指导临床医生在患者临床早期进行有效的抗病毒治疗以减少目前医疗机构广泛存在的抗生素滥用现象.     

一次性婴儿吸痰器在危重病人痰培养标本采集中的应用

[目的]探讨一次性婴儿吸痰器在危重病人痰培养标本采集中的应用。[方法]将156例存在肺部感染需行痰细菌培养检查不能自行咳痰的危重病人随机分为对照组与观察组,每组78例,对照组采用一次性普通吸痰管吸痰采集痰培养标本,观察组病人采用一次性婴儿吸痰器吸痰采集痰培养标本。比较两组病人标本合格情况、致病菌检出情况。[结果]观察组病人标本合格率、致病菌检出率均高于对照组(P<0.05)。[结论]危重病人痰培养标本采集中采用一次性婴儿吸痰器,可提高痰标本合格率及致病菌检出率,效果优于一次性普通吸痰管。     

应用小瓶离心培养法分离检测2009年1-6月广州市成人流感样病例相关病毒

目的 应用高通量的小瓶离心法快速分离检测广州市成人流感样病例相关病毒,分析广州地区患有ILI的成人呼吸道病毒感染情况,评价其在临床实验室开展快速病毒培养的意义.方法 采集2009年1-6月广州市成人流感样病例患者标本652份,应用小瓶离心法(包括MDCK、HEp-2、LIE-MK_2和MRC-5 4种细胞),离心接种后,通过观察CPE、血凝(HA)、血吸附(HAD)及直接免疫荧光法(IF)等方法进行病毒分离鉴定.结果 652份成人流感样病例标本中共检出阳性161份,5种病毒病原体,病毒培养阳性率为24.69%,其中甲型流感病毒62株(62/161,38.51%),乙型流感病毒88株(88/161,54.65%),副流感病毒8株(8/161,4.96%),腺病毒2株(2/161,1.24%),呼吸道合胞病毒1株(1/161,0.62%).用小瓶离心培养法发出各种病毒培养报告的平均时间分别为:流感病毒2 d、腺病毒3 d、副流感病毒3 d.结论 (1)离心培养法具有快速、灵敏、高通量的特点,对临床实验室诊断病毒具有应用推广价值.(2)在分离的Iu病原体中,流感病毒占主导,乙型流感病毒为优势毒株,自2009年1月延续至6月,并呈逐步增多的态势,出现夏季高峰.     

3种流感病毒检测方法的比较和应用

目的探讨比较荧光定量RT-PCR、普通RT-PCR和细胞培养3种方法在流感病毒检测中的应用,从而确定每种方法各自的实用领域。方法通过荧光定量RT-PCR、普通RT-PCR和狗肾传代细胞(MDCK)培养3种方法检测398件流感样病例(ILI)咽拭子样本。比较3种方法的灵敏度和特异性。结果实时荧光RT-PCR检测阳性样本129件(阳性率为32.4%);普通RT-PCR检测出阳性样本93件(阳性率为23.4%);MDCK细胞培养法分离出流感病毒64株(阳性率为16.1%)。荧光定量RT-PCR的灵敏度达到0.01TCID50,特异性强。结论无论从敏感性、特异性还是从时间上,荧光RT-PCR对于疫情的爆发更有应用价值。细胞培养法分离流感病毒对于核实疫情的实验室诊断和病原学监测具有重大意义。     

免疫荧光分析法在快速诊断 A、B 型流感病毒中的临床应用

目的：探讨 Sofia Influenza A＋B FIA 检测系统在快速诊断 A、B 型流感病毒中的临床应用价值。方法获取临床168例流感患儿的鼻咽拭子样本,分别通过 Sofia Influenza A＋B FIA 检测系统和胶体金免疫层析（GICA）法分别进行 A、B 型流感病毒检测,并通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）进行验证。结果Sofia Influenza A ＋B FIA 检测系统的阳性检出率为17．86％（30/168）,高于 GICA 法;同时,与 RT-PCR 相比,对 A 型流感病毒和 B 型流感病毒的灵敏度分别达到83．3％和71．4％,特异性均达到100．0％。结论Sofia Influenza A＋B FIA 检测系统是一种灵敏度和特异性均较高,能够快速检测 A、B 型流感病毒的方法。