葫芦素B磷脂复合物制备、表征及体外抗肿瘤活性研究

目的制备葫芦素B磷脂复合物(Cu B-PLC),对其进行理化性质评价和体外抗肿瘤活性测定。方法采用溶剂挥发法制备Cu B-PLC,用Box-Behnken设计-效应面法优化其制备工艺,考察其表观油水分配系数、粒径及形态;用X射线衍射光谱(XRD)、红外光谱(IR)综合分析Cu B-PLC的形成机制,利用MTT法测定其体外抗肿瘤活性。结果优化的Cu B-PLC制备工艺为以四氢呋喃作为反应溶剂,磷脂与葫芦素B的投药物质的量比为1∶1,反应质量浓度为1.5 mg/m L,反应温度和反应时间分别为60℃和3 h,复合率可达97.15%。XRD和IR分析表明葫芦素B与磷脂未形成新的化合物或混合物,而是磷脂复合物;Cu B-PLC在水中的溶解度提高到原料药的3.9倍;在水中复合物粒径为(521.30±10.50)nm,多分散指数(PDI)为0.133 2±0.024 0;MTT实验表明,葫芦素B与Cu B-PLC对Hep G2细胞增殖的半数抑制浓度(IC50)值分别为42.55、27.61μmol/L。结论成功制备了Cu B-PLC,工艺简单可行,复合率高,水溶性有所改善,且对Hep G2细胞增殖的抑制作用显著增强,为葫芦素B的制剂学研究提供了参考。     

醋酸钙梯度法制备阿魏酸脂质体的研究及体外评价

 目的采用醋酸钙梯度法制备阿魏酸脂质体,考察其制备工艺及理化性质,进行体外释放度及稳定性评价。方法以包封率为指标,考察阿魏酸脂质体胆固醇含量、脂药比、孵育时间、孵育温度、钙离子浓度等因素对包封率的影响。评价其粒径、Zeta电位、体外释放、稳定性。采用冷冻蚀刻电镜观察其显微结构。结果磷脂-胆固醇比例为0.5,脂药比为26,钙离子浓度120 mol·L^-1,孵育条件为37℃,30 min制备的脂质体包封率达80.2%,粒径152 nm。荷电脂质体粒径增加,Zeta电位升高。载药脂质体Zeta电位降低,粒径无变化。体外5 h释放80%。30 d内包封率及粒径均无显著变化。结论通过工艺和处方考察优选出最佳制备条件,制得的阿魏酸脂质体为单室结构,包封率高,稳定性好。     

姜黄素聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物纳米粒的制备及其质量评价

目的制备姜黄素(Cur)聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物(mPEG-PLA)纳米粒(Cur-mPEG-PLA-NPs),并考察其理化性质、体外释药特性及抗肿瘤活性。方法采用乳化溶剂挥发法制备Cur-mPEG-PLA-NPs,通过正交设计优化处方工艺。利用透射电子显微镜观察纳米粒形态;激光粒度仪考察其粒径和Zeta电位;超速离心法测定其包封率及载药量;透析法考察其体外释药特性;四甲基偶氮唑盐(MTT)法考察其对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用。结果根据优化处方工艺制备的Cur-mPEG-PLA-NPs外观呈圆形或类圆形,平均粒径为(129.24±1.45)nm,包封率和载药量分别为(82.15±1.07)%和(4.03±0.11)%;体外释药符合Weibull方程;与原料药Cur比较,Cur-mPEG-PLA-NPs对SMMC-7721细胞具有更强的抑制作用(P<0.05)。结论乳化溶剂挥发法可成功制备Cur-mPEG-PLA-NPs,为Cur新剂型的研究开发提供了实验基础。     

基于甘草酸为载体的吴茱萸碱胶束的构建及抗肝纤维化活性

构建吴茱萸碱(evodiamine, EVO)-甘草酸(glycyrrhizic acid,GL)胶束,以增强吴茱萸碱的抗肝纤维化效果。首先采用薄膜分散法制备吴茱萸碱-甘草酸EVO-GL,以胶束的粒径、包封率、载药量、吴茱萸碱溶解度为指标,考察不同因素对所制备胶束的影响,筛选出最优处方及制备工艺;然后对最优处方工艺制备的EVO-GL的制剂学性质及对四氯化碳诱导的肝纤维化的治疗作用进行评价。试验结果显示采用薄膜分散法制备的EVO-GL大小均匀,平均粒径为(130.80±12.40)nm,Zeta电位为(-41.61±3.12)mV,包封率为91.23%±1.22%,载药量为8.42%±0.71%,4℃储存3个月内稳定,体外缓慢释放。在治疗四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的实验结果显示,EVO-GL抗肝纤维化作用显著,可使肝纤维化大鼠的肝功能指标显著下降。综上,甘草酸作为载体所制备的EVO-GL具有潜在成为抗肝纤维化治疗新药剂的应用前景。     

葫芦素B磷脂复合物纳米结构脂质载体的制备

目的制备葫芦素B磷脂复合物纳米结构脂质载体。方法溶剂挥发法制备磷脂复合物后,乳化-超声分散法制备其纳米结构脂质载体。以脂质用量、固液脂质比、投药量、乳化剂浓度为影响因素,包封率为评价指标,正交试验优化处方。5%甘露醇制备冻干粉,考察其粒径、Zeta电位、包封率、载药量、体外释放度、体内药动学行为。结果最佳处方为脂质用量350 mg,固液脂质比5∶1,投药量45 mg,乳化剂浓度1.0%。冻干前后,粒径、Zeta电位、包封率、载药量无明显变化。纳米结构脂质载体24 h内累积释放度高于原料药、磷脂复合物,相对生物利用度分别提高到200.41%、158.22%。结论磷脂复合物纳米结构脂质载体可促进葫芦素B体内吸收,提高其生物利用度。     

甘草酸二铵磷脂复合物水针剂的制备和初步稳定性研究

目的：制备甘草酸二铵磷脂复合物水针剂,并考察其初步稳定性。方法：采用浓配法制备水针剂,热压法灭菌。以平均粒径、粒度分布和Zeta电位为主要指标考察小针剂的物理稳定性,以含量测定、有关物质为主要指标考察小针剂化学稳定性。结果：所研制的甘草酸二铵磷脂复合物小针剂可耐受热压灭菌,并且高温、光照实验和30℃加速实验显示注射剂粒径均匀,电位稳定,含量和有关物质未发生明显变化。结论：甘草酸二铵磷脂复合物注射剂制备工艺简单,终端灭菌方法可靠,并且具有良好的理化稳定性。     

盐酸小檗碱脂质体的制备工艺优选及体外释放性质考察

目的:优选盐酸小檗碱脂质体的制备工艺并考察其体外释放性质.方法:采用pH梯度结合薄膜分散法制备盐酸小檗碱脂质体,以包封率为指标,通过正交试验考察磷脂胆固醇比、药脂比、磷脂质量浓度、外水相pH对处方工艺的影响.采用透析法考察脂质体的体外释放性质.结果:最佳处方工艺为磷脂胆固醇比3∶1,药脂比1∶15,磷脂质量浓度30 g·L-1,外水相pH7.0.制备的盐酸小檗碱脂质体包封率89.34％,平均粒径123.3 nm,Zeta电位-20.0 mV,24h累积释放率90.46％.结论:pH梯度结合薄膜分散法制备的脂质体包封率较高,粒径均匀,具有显著体外缓释特性.     

人参皂苷Rh_2脂质纳米粒的制备表征及冰片对其抗肿瘤活性的协同作用研究

制备人参皂苷Rh2脂质纳米粒,并考察其协同冰片的体外抗肿瘤活性。借助正交设计优化工艺,采用超声辅助溶剂挥发法制备人参皂苷Rh2脂质纳米粒,并对其包封率、载药率、粒径分布、Zeta电位、形态、体外药物释放行为等进行表征,MTT法初步考察其协同冰片的抗肿瘤活性。运用优化工艺制备的纳米乳颗粒圆整均匀,形态良好,3批平均包封率为(77.3±2.5)%,载药率为(7.2±0.2)%。,体外具有明显的缓释特征,96 h累计释放52.42%;人参皂苷Rh2纳米粒作用24,48 h对脑胶质瘤C6细胞体外增殖作用的IC50分别为22.33,11.46μmol·L-1,纳米粒配伍冰片后IC50为16.36,8.04μmol·L-1,并呈现浓度依赖性。     

隐丹参酮纳米混悬剂的制备及其抗肿瘤活性

目的 制备隐丹参酮纳米混悬剂,并评价其抗肿瘤活性.方法 高压均质法制备纳米混悬剂后,测定其平均粒径、Zeta电位、形态、稳定性、体外释药,MTT法检测它对人胃癌细胞SGC-7901的抑制作用.结果 所得纳米混悬剂呈球形,平均粒径为104.15 nm,PDI为0.014,Zeta电位为-36.3 mV;室温下30 d内粒...     

用于基因治疗的磁性脂质体-DNA复合物的制备与初步评价

 目的制备用于基因治疗的磁性脂质体-DNA复合物并对其进行初步评价。方法以二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)和3β-[N-(N′,N′-二甲氨基乙基)]氨甲酰基-胆固醇(DC-Chol)为脂质材料,采用逆相蒸发法制备得到磁性脂质体,并在此基础上制得磁性脂质体-DNA复合物。用邻菲啰啉法测定复合物中铁含量;用透射电子显微镜观察复合物的形态并对其进行能谱分析;用纳米粒度及电位分析仪测定复合物的粒径大小及Zeta电位;对复合物进行琼脂糖凝胶电泳考察形成稳定复合物所需的最低(DC-Chol)-DNA质量比值;并考察(DC-chol)-DNA质量比对磁性脂质体-DNA复合物的粒径、Zeta电位以及DNA包封率的影响;还初步考察了复合物的体外磁场响应性能。结果制得的复合物形态较为圆整,粒径分布均匀,复合物内含有磁性物质,且具有良好的磁场响应性能。(DC-Chol)-DNA质量比值对复合物的粒径、Zeta电位及DNA包封率的影响均呈现一定趋势。结论本实验制备得到的复合物具有高包封率、稳定性好且具有磁场响应性能等特点。且当(DC-Chol)-DNA质量比值在9左右时,复合物具有粒径较小、Zeta电位较高且包封率高的特点。     

A new strategy of enhancing absorptivity and safety for evodiamine: polyamidoamine derivatives modified by polyethylene glycol chain

Background:Traditional Chinese medicine involves complex ingredients and mixtures of ingredients that often exhibit low bioavailability,and excipients are often lacking to increase the absorption-enhancing effects.This study modified the generation 4 polyamidoamine dendrimer with polyethylene glycol of different molecular weights(5000,2000,1000)to form a series of polyamidoamine-co-polyethylene glycol(PAMAM-co-PEG)as a novel class of oral absorption enhancers.Evodiamine,the major alkaloid found in the traditional Chinese medicine Wu Zhu Yu(Fructus Evodiae),was used as a model drug to verify the absorption-enhancing effects and the safety of this alkaloid.Methods:This study utilized the solubility determination method documented in the Pharmacopoeia of the People’s Republic of China(2015 edition)and the D0 values recommended in the US FDA guidelines to comprehensively evaluate the solubility of evodiamine.The permeability of evodiamine was assessed using the apparent permeability coefficient in experiments based on in vitro cell models.Multiple aspects of the biological safety of PAMAM-co-PEG were explored using the MTT assay,LDH assay,and total protein release of the rat intestinal tract.Moreover,the absorption-enhancing effects of PAMAM-co-PEG at different molecular weights on evodiamine were verified via the use of in vitro cell models and in vivo intestinal loop circulation experiments with rats.Results:Evodiamine exhibited low solubility and permeability and was classified into class IV compounds using the biopharmaceutical classification system.PAMAM-co-PEG 2000 demonstrated improvement in the biosafety and absorption-enhancement effect of evodiamine at a specific concentration.This study showed that 0.05%(w/v)of PAMAM-co-PEG 2000 increased the cumulative penetration of evodiamine via cell transport by 1.32 times,and 0.10%(w/v)of PAMAM-co-PEG 2000 increased the area under curve value of evodiamine by 1.31 times.Conclusion:Evodiamine possesses low solubility and permeability and leads to poor oral bioavailability and a certain degree of cytotoxicity.PAMAM-co-PEG 2000 was found to be a potentially safe and efficient oral absorption enhancer.The results of this study might create a foundation for the development of novel excipients suitable for the complex active ingredients of traditional Chinese medicine.     

吴茱萸生物碱抗肿瘤活性的研究

目的:研究吴茱萸生物碱的抗肿瘤活性.方法:取从吴茱萸中分离得到的吴茱萸碱粗品,以吴茱萸碱粗品500mg/kg灌胃给予大鼠,考察吸收入血成分;通过离体抗肿瘤活性实验,考察对MCF-7、HL-60、K562、SPC-A-1和NCI-H446等5种肿瘤细胞的影响;通过在体抗肿瘤活性实验,考察吴茱萸碱对小鼠S180、HepA和MFC的影响.结果:大鼠口服吴茱萸碱粗品后吸收入血的主要成分为吴茱萸碱.离体实验发现吴茱萸碱粗品对MCF-7、SPC-A-1、NCI-H446等肿瘤细胞有明显抑制作用;在体实验发现吴茱萸碱粗品对S180、MFC、HepA等小鼠肿瘤细胞有明显抑制作用.结论:吴茱萸生物碱具有很强的抗肿瘤活性.     

山楂叶总黄酮固体自乳化颗粒的处方优化和评价

目的:制备山楂叶总黄酮固体自乳化颗粒,并对其进行质量评价.方法:通过溶解度考察、伪三元相图的绘制,以形成自乳化效果和自乳化时间为指标,选择最佳自乳化处方.通过对不同处方比例成型率、重分散性及体外溶出度进行综合考察,筛选山楂叶总黄酮固体自乳化颗粒的处方,并对其粒径、Zeta电位、DSC、X-衍射、溶出度进行考察.结果:优化的最佳处方为山楂叶总黄酮-聚山梨醇酯80-Transcutol P-蓖麻油-淀粉-乳糖-甘露醇的质量比为1∶1.5∶1.35∶0.15∶12∶2∶2,其分散后平均粒径(169.3 ±7.6) nm,30 min溶出度达89.5％.结论:山楂叶总黄酮固体自乳化颗粒制备简单,质量稳定,可以提高药物的溶出度.     

吴茱萸碱作用mTOR信号通路引起胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

吴茱萸碱(evodiamine)是中药吴茱萸最主要的具有抗肿瘤活性的生物碱之一,研究初步探讨吴茱萸碱作用哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用机制,为其抗肿瘤机制的探索及胃癌临床治疗奠定基础。采用MTT法观察吴茱萸碱单独作用对SGC-7901细胞及对人外周血单个核细胞(PBMCs)的细胞毒效应。Real-time PCR,Western blot分别检验吴茱萸碱单独或联合胱天蛋白酶抑制剂(z-VAD-fmk)作用后,mTOR,p70S6K和4EBP1基因表达以及mTOR和p-mTOR蛋白表达。结果表明,吴茱萸碱抑制SGC-7901细胞增殖存在时间剂量依赖性,且对人PBMCs无细胞毒作用。吴茱萸碱及联合z-VAD-fmk分别作用后,细胞变圆,漂浮于培养基中;与对照组比较,2种处理方法均能抑制mTOR,p70S6K和4EBP1基因表达,存在显著性差异,且与吴茱萸碱单独作用比较,联合z-VAD-fmk作用对基因表达抑制率加强;Western blot结果显示吴茱萸碱可以抑制mTOR和p-mTOR蛋白的表达无论是否有z-VAD-fmk的参与,且z-VAD-fmk阻断胱天蛋白酶作用后,抑制率增强。综上说明吴茱萸碱可能通过mTOR信号通路促进胃癌SGC-7901细胞凋亡。     

党参多糖分离鉴定及体外抗肿瘤活性的研究

目的 分离党参总多糖(CPS)并研究各分离组分的结构及体外抗肿瘤活性.方法 水提醇沉法提取CPS,DE - 52纤维素离子交换色谱法分离纯化得到CPS分离组分,MTT法、SRB法检测CPS及其分离组分体外抗肿瘤活性.高效凝胶渗透色谱法(GPC)测定各分离组分相对分子量.气相色谱法测定多糖分离组分单糖组成及摩尔比.结果 党参总多糖中分离得到两种新的党参多糖,包括CPS -3,分子量为1.24×106,由木糖、葡萄糖、半乳糖组成,摩尔比为1.17:0.96,对BGC - 823人胃腺癌细胞的增殖有抑制作用;CPS -4,由分子量为1.96×106、1.51×106的两种多糖组成,可抑制Bel- 7402人肝癌细胞增殖.结论 CPS中的组分CPS -3和CPS -4分别是CPS对BGC - 823人胃腺癌细胞、Bel - 7402人肝癌细胞起抑制作用的关键活性组分.     

吴茱萸碱和盐酸小檗碱对大肠癌HT29细胞端粒酶活性的影响

目的:探讨左金丸的主要成分吴茱萸碱和盐酸小檗碱对结肠癌HT29细胞凋亡及端粒酶催化亚基(hTERT)表达的影响,为临床应用左金丸治疗大肠癌提供实验依据。方法:体外培养人结肠癌HT29细胞,加入不同浓度的吴茱萸碱及盐酸小檗碱进行培养,采用活细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖,TRAP法检测端粒酶活性,RT-PCR法检测hTERT的表达。结果:吴茱萸碱和盐酸小檗碱作用HT29细胞后,增殖明显受到抑制,呈剂量和时间依赖性;能够降低HT29端粒酶活性,但二者无协同作用;并且端粒酶hTERT表达降低,具有剂量依赖关系。结论:吴茱萸碱和盐酸小檗碱对结肠癌HT29细胞具有显著生长抑制作用,该抑制作用可能通过下调端粒酶hTERT基因表达,降低端粒酶的活性,为临床治疗大肠癌提供实验依据。     

吴茱萸碱对涎腺腺样囊性癌SACC-M细胞生长的调控影响

目的:研究茱萸碱对涎腺腺样囊性癌SACC-M细胞生长的调控影响,为临床治疗涎腺腺样囊性癌提供理论依据。方法:选择口腔颌面外科手术治疗的20例涎腺腺样囊性癌患者的癌组织细胞ACC-M,置于含有RPMI1640、小牛血清、青霉素及链霉素的培养基中,恒温37℃下传代培养。再使用MTT比色实验将对数生长期的细胞悬浮液种于孔板内培养24h后,按浓度由小到大5种不同浓度比例加入吴茱萸碱溶液,另外设1组空白对照,1组调零组,进行培养后分别加入MTT、二甲基亚砜溶液用酶标法测定各组吸光度值并计算细胞生长的抑制率,显微镜下观察细胞生长状况,用流式细胞仪检测细胞凋亡状况。结果:MTT比色试验结果显示,吴茱萸碱对SACC-M细胞的生长具有明显的抑制效果,它的抑制率随时间的延长而增长,在药物作用后的24、48、72h的抑制率分别为35%,65%,85%,经过对细胞的抑制作用与药物浓度做二变量相关性分析可知二者呈正相关性(r=1.194,r0.01)。显微镜下观察可见对照组细胞生长迅速,实验组生长缓慢;流式细胞仪下可见实验组大量细胞死亡,对照组凋亡率低。结论:吴茱萸碱对涎腺腺样囊性癌细胞具有生长抑制作用,它可以控制SACC-M细胞的增殖与凋亡,且具有随浓度升高药效增强的趋势,可以将此运用于SACC的治疗。     

灯盏花素包合物冻干粉针的制备及安全性初步考察

 目的制备灯盏花素包合物冻干粉针并初步考察其安全性。方法以2-羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)为包合材料,采用冷冻干燥法制备灯盏花素包合物冻干粉针,摩尔连续递变法确定包合物的包合比例,红外光谱法、差示扫描量热法对包合物进行验证,高效液相色谱法测定包合物前后水溶液中药物的溶解度,并考察灯盏花素冻干粉针剂的溶血性和血管刺激性。结果包合物的包合比例为1∶2,红外光谱法和差示扫描量热法证明了包合物的形成,包合后药物的溶解度显著增加,且包合物冻干粉针无溶血性和血管刺激性。结论羟丙基-β-环糊精能够显著提高灯盏花素的溶解度,且制备的冻干粉针无溶血性和血管刺激性。     

薯蓣皂苷元衍生物的合成和抗肿瘤活性研究

目的合成薯蓣皂苷元衍生物并研究其体外抗肿瘤活性。方法以薯蓣皂苷元为原料,选择性地合成一系列运用AutoDock4.2对接设计的薯蓣皂苷元衍生物。采用噻唑蓝(MTT)法考察了目标化合物对人恶性黑色素瘤细胞A375、人肺腺癌细胞A549、人肝癌细胞HepG-2以及人慢性髓原白血病细胞K562进行体外抗肿瘤活性试验。结果合成12个新化合物,其结构经1H-NMR和13C-NMR确定,药理实验结果表明,大部分化合物有一定的抗肿瘤活性。结论大部分化合物有良好的抗肿瘤活性而对正常细胞无毒或低毒性。     

丹皮酚固体分散体制备表征及体外溶出特性研究

目的:制备并表征丹皮酚固体分散体,绘制体外多条溶出曲线并分析体外溶出特性。方法:采用熔融法制备固体分散体,以溶出度为评价指标优化丹皮酚固体分散体制备工艺;采用电镜扫描分析(SEM)、差示扫描量热分析(DSC)、X-射线衍射分析(XRD)与傅里叶红外扫描分析(FTIR),对其理化性质进行制剂学表征;绘制体外多条溶出曲线,进行溶出动力学方程拟合。结果:最优处方工艺为以PEG4000∶PEG6000(2∶1)为基质,丹皮酚与基质比例为1∶9;SEM、DSC及XRD分析显示丹皮酚由晶型态转变为无定型态或分子态存在,FTIR分析显示丹皮酚化学结构未发生改变;体外多条溶出曲线基本重合且均具有较好的溶出行为,20 min时各组溶出均超95%,接近溶出完全,且各组累积溶出度RSD为1.89%,溶出行为符合一级动力学方程,拟合相关性系数r均高于0.99。结论:丹皮酚固体分散体可明显改善丹皮酚在水系环境的溶出度,且具有很好的溶出适应性,为提高生物利用度奠定了制剂基础。