去甲斑蝥素诱导人肝癌BEL—7402细胞凋亡的研究

目的 研究新型抗癌药物去甲斑螯素抑制人肝癌（ＢＥＬ－７４０２）细胞生长的机制。方法 从细胞的形态学观察和ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳等方面考察去甲斑螯素作用人肝癌细胞的特点，并进一步用免疫细胞化学及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ等分析手段研究癌基因蛋白Ｂｃｌ－２在此过程中的表达情况。结果 １０ｍｇ／Ｌ去甲斑螯素作用人肝癌细胞２４ｈ，部分细胞出现固缩、细胞质膜突起、核染色质异常凝集等，并伴有膜包被的凋亡小     

斑蝥素及去甲斑蝥素诱导人红白血病K562细胞凋亡的细胞 …

目的 研究抗癌药物斑蝥素及去甲斑蝥素诱导人红白血病Ｋ５６２细胞凋亡细胞学变化特点。方法 观察药物作用后Ｋ５６２细胞开矿的动态变化、一般及超微结构特征,并用流式细胞术分析斑蝥素及去甲斑蝥素诱导Ｋ５６２细胞凋民细胞周期的关系。结果 ２ｍｇ／Ｌ斑蝥素任用４h,部分Ｋ５６２细胞质膜突起,染色质异常凝集,原位复染显示这些细胞质膜 的通透性没有增强,ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳呈现细胞凋亡特有的“梯子”状带纹。电镜下。     

HBVx基因在肝癌细胞中的表达及其对肝癌细胞凋？…

目的：研究乙型为病毒Ｘ基因在肝癌细胞中的表达及其对肝癌细胞凋亡的影响。方法：用分子生物学的构建ＨＢＶｘ真核表达载体ｐ＾ＣＤＮＡ３．１．ＨＢＸ,用脂质体将真核表达载体Ｐ＾ＣＤＮＡ３．１－ＨＢＸ转染入肝癌细胞ＨＣＣ９２０４,Ｇ４１８ ５００ｍｇ·Ｌ＾－１筛选,获得稳定表达ＨＢｘ蛋白的细胞,阿霉素２０μｍｏｌ·Ｌ＾－１诱导细胞凋亡。电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡细胞。结果：２０μｍｏｌ·Ｌ＾－     

重症烧伤大鼠早期外周血单个核细胞凋亡的实验研究

目的：探讨烧伤后早期外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）凋亡的发生、变化规律及ｂｃｌ－２蛋白表达的变化。方法：应用流式细胞仪、ＤＮＡ凝胶电泳等手段观察烧伤大鼠ＰＢＭＣ凋亡发生的动力学变化、ｂｃｌ－２蛋白的表达及烧伤血清对细胞凋亡的影响。结果：烧伤后６ｈ起,ＰＢＭＣ凋亡率明显增加,随时间的推延呈增高趋势,此时ｂｃｌ－２蛋白表达下调;烧伤血清可以诱导单核细胞株Ｒａｗ２６４．７凋亡。结论：ＰＢＭＣ凋亡在严重烧伤的免疫功能紊乱方面起重要作用,而ｂｃｌ－２基因下调可能是重症烧伤早期ＰＢＭＣ细胞凋亡的分子机制之一;烧伤血清含有（或缺乏）某种物质,可以介导细胞凋亡。     

HBVx基因在肝癌细胞中的表达及其对肝癌细胞凋亡的影响

目的：研究乙型肝炎病毒 Ｘ 基因在肝癌细胞中的表达及其对肝癌细胞凋亡的影响。方法：用分子生物学的方法构建 Ｈ Ｂ Ｖｘ 基因真核表达载体ｐ Ｃ Ｄ Ｎ Ａ３１ Ｈ Ｂ Ｘ，用脂质体将真核表达载体ｐ Ｃ Ｄ Ｎ Ａ３１ Ｈ Ｂ Ｘ转染入肝癌细胞 Ｈ Ｃ Ｃ９２０４ ， Ｇ４１８ ５００ ｍｇ· Ｌ－ １ 筛选，获得稳定表达 Ｈ Ｂｘ 蛋白的细胞，阿霉素２０ μｍｏｌ· Ｌ－ １ 诱导细胞凋亡。电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡细胞。结果：２０ μｍｏｌ· Ｌ－ １ 阿霉素可诱导肝癌细胞凋亡，稳定表达 Ｈ Ｂｘ 蛋白的肝癌细胞凋亡率比未进行基因转染的肝癌细胞凋亡率低。结论： Ｈ Ｂｘ 蛋白可抑制阿霉素诱导的肝癌细胞调亡。     

细胞凋亡调控因素有关基因的研究

抑制细胞凋亡的基因主要是Ｂｃｌ－２基因和Ｂｃｌ－２相关基因（Ｂｃｌ－ＸＬ，ＭＣＬ－１），其编码的蛋白质能抑制细胞凋亡和延长细胞寿命，其抑细胞凋亡作用以Ｂｃｌ－２最为重要。促进细胞凋亡基因或因素较多，主要有Ｂｃｌ－２相关基因（Ｂａｘ，Ｂｃｌ－Ｘｓ）、ｐ５３肿瘤抑制基因、ｃ－ｍｙｃ原癌基因、ＴＧＦ－β、Ｆａｓ抗原及其配体，其中Ｂａｘ基因、ｐ５３基因与Ｂｃｌ－２基因在细胞凋亡的调控作用方面密切相关     

SLE病人外周血Bcl—2／JH基因重排检测的意义

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测３１例ＳＬＥ病人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）Ｂｃｌ－２／ＪＨ基因重排现象和流式细胞仪间接双标记法分析其Ｔ（ＣＤ３）、Ｂ（ＣＤ１９）细胞Ｂｃｌ－２蛋白的表达。结果显示，ＳＬＥ病人Ｔ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达明显高于正常人（４２．９５％±２８．４７％对比９．９４％±４．９６％，Ｐ＝０．０００４），尤其以活动期ＳＬＥ病人为明显，而Ｂ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达与正常人之间并无统计学差异（７９．２１％±１０．６９％对比８１．９６％±６．９７％；Ｐ＝０．４６０２）。７例ＳＬＥ病人具有典型的Ｂｃｌ－２／ＪＨ基因重排（占２２．５８％），且均为ＳＬＥ活动期病人，其Ｔ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达明显高于无基因重排的ＳＬＥ病人，其Ｂ细胞Ｂｃｌ－２表达并无差异（Ｐ＞０．３９０５）。说明Ｂｃｌ－２／ＪＨ基因重排现象可见于ＳＬＥ，并与Ｔ细胞Ｂｃｌ－２蛋白高表达有关，表明细胞凋亡抑制基因Ｂｃｌ－２在ＳＬＥ发病机制中具有重要作用。     

肝癌的分子遗传学研究

肝癌为一种常见肿瘤,其发生与ＨＢＶ ＤＮＡ整合,癌基因及细胞凋亡基因的表达有关。肝癌细胞中有ＨＢＶ 的Ｘ及ｐｒｅＳ２／Ｓ基因的整合;癌基因ｃ－ｍｙｃ和突变型Ｔｐ５３基因等表达增强,Ｔｐ５３的第２４９密码子第三个碱基Ｇ→Ｔ颠换;促细胞凋亡基因ｂａｘ和细胞凋亡抑制基因ｂａｌ－２表达水平的增强。     

高温诱导低分化鼻咽癌细胞系CNE-2Z凋亡及其bcl-2表达

目的：探讨高温诱导低分化鼻咽癌细胞系ＣＮＥ－２Ｚ凋亡的作用。方法：用激光共聚焦显微技术、核酸电泳、免疫组化等方法分析了４２．５℃高温处理６、１２、２４ｈ后鼻咽癌细胞的变化。结果：激光共焦显微镜观察可见高温处理６ｈ肿瘤细胞出现空泡，有不同程度的固缩；１２ｈ染色质浓缩缘边化，呈“半月形”、细胞出芽，出现凋亡小体，２４ｈ后大部分细胞死亡。ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳可见高温处理６ｈ和１２ｈ后有断裂成小分子片段，呈典型梯状图谱；２４ｈ后为不规则的图谱。ｂｃｌ－２免疫组化显示高温处理后的鼻咽癌细胞ｂｃｌ－２蛋白表达逐渐减弱。结论：高温可诱导鼻咽癌细胞的凋亡，特别是４２．５℃处理１２ｈ后明显。ｂｃｌ－２蛋白与细胞凋亡之间关系密切。     

维生素A对胸腺凋亡有关基因的影响

为观察营养缺乏及补充维生素Ａ（ＶＡ）对胸腺细胞凋亡有关基因的影响，采用原位杂交及免疫组化的方法观察了胸腺组织ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ，Ｆａｓ及Ｂａｘ蛋白的表达。结果表明营养缺乏的大鼠胸腺细胞ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ的表达明显降低，而Ｆａｓ及Ｂａｘ蛋白的表达则明显增强；补充ＶＡ后大鼠胸腺ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ的表达明显增强，Ｂａｘ蛋白的表达明显降低，而Ｆａｓ蛋白的表达无明显变化。本结果表明：营养缺乏时胸腺细胞凋亡增加导致免疫功能降低，补充ＶＡ可抑制细胞凋亡，可能是通过促进ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ的表达，抑制Ｂａｘ蛋白的表达而起作用     

蝌蚪提取液诱导HL60细胞分化和凋亡的实验研究

目的 为了寻找新的肿瘤细胞分化诱导剂,探讨蝌蚪醚提取液（Ｔ８７１２）的抗肿瘤作用。方法 将ＨＬ６０细胞培养于Ｔ８７１２和ＲＰＭＩ１６４０按１：２００（ｖ／ｖ）混合的培养基中。结果 Ｔ８７１２能诱导ＨＬ６０细胞向单核／巨噬细胞方向分化,表现为生长抑制,ＮＢＴ还原能力提高,酸性非特异性酯酶（ＡＮＡＥ）活性增加,形态学观察类似单核／巨噬细胞。当Ｔ８７１２与ＲＰＭＩ１６４０培养基按１：１００（ｖ／ｖ）混合     

缺氧复氧致神经细胞凋亡中Bcl—2、Bax基因蛋白的表达

目的 探讨缺氧复氧致原代培养的大鼠大脑皮层神经细胞凋亡中Bcl-2、Bax基因蛋白的表达及其与凋亡的关系。方法 用胎龄17－18d Wistar大鼠的大脑皮层神经细胞进行原代分离培养。采用TUNEL染色方法、流式细胞术确立缺氧复氧神经细胞凋亡病理模型,并用免疫组织化学方法显示缺氧复氧不同时间Bcl-2、Bax基因的动态表达。结果 1.缺氧复氧可以使大鼠大脑皮层神经细胞发生凋亡,在分别缺氧2、4、6、8h,复氧0h和18h组中,缺氧4h开始出现凋亡细胞,随缺氧时间的延长,凋亡细胞数逐渐升高,两者呈显著负相关,而凋亡的发生也与Bax基因、Bcl-2基因表达呈显著正、负相关性。在缺氧复氧组中,未发现相关性。结论 缺氧复氧可致胎鼠大脑皮层神经细胞发生凋亡;缺氧复氧所引起Bcl-2基因表达增高,Bax基因表达降低,可能是胎鼠大脑皮层神经细胞发生凋亡的机制之一。     

脑缺血再灌注后神经元和内皮细胞凋亡与Bc1-2和Bax表达的时相关系

目的　探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后受损伤的神经细胞和血管内皮细胞凋亡 ,以及Bcl 2和Bax蛋白表达与再灌注时间的关系。　方法　应用原位末端标记 (TUNEL)技术和免疫组织化学方法 ,分别观察脑缺血再灌注 2h、6h、12h、2 4h、2d、3d、7d、14d和 2 1d等不同时间点神经细胞和血管内皮细胞凋亡数及Bcl 2和Bax蛋白的表达。　结果　 1.脑缺血周围区 ,再灌注 2h神经细胞和内皮细胞凋亡开始明显增多 ,12～ 2 4h达高峰 ,之后逐渐减少 ,7～ 14d降至假手术组水平 ;血管内皮细胞凋亡迟于神经元凋亡约 12h。 2 .Bcl 2蛋白表达于缺血再灌注 2h开始逐渐增强 ,12～ 2 4h达高峰 ,之后逐渐下降 ,至 7～ 14d接近假手术组水平 ;3.Bax蛋白表达于缺血再灌注 6h开始逐步增高 ,2 4～ 4 8h达高峰 ,之后逐渐下降 ,至 14d与假手术组已无显著性差异。 4 .Bcl 2表达与细胞凋亡的时相变化基本一致 ,Bax表达时相迟于细胞凋亡。　结论　细胞凋亡是脑缺血再灌注损伤细胞死亡的形式之一 ,血管内皮细胞凋亡迟于神经细胞凋亡 ,Bcl 2和Bax参与细胞凋亡的调节。     

生发中心淋巴细胞凋亡与小结树突细胞关系的研究

研究人淋巴结和扁桃体生发中心内的凋亡细胞与小结树细胞之间的关系。方法用ＴＵＮＥＬ和免疫化学方法分别检测凋亡细胞,ＦＤＣ和Ｂｃｌ－２蛋白的表达。结果在生发中心有散在的凋亡细胞且多被巨噬细胞所吴噬;     

Bcl-2表达与小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的关系

利用免疫荧光技术和激光扫描共聚焦显微镜（共焦镜）技术检测了地塞米松介导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡时调亡抑制基因Ｂｃｌ－２表达的时空变化。结果显示,免疫荧光技术和共焦镜技术可对细胞内的蛋白表达作定量和定位检测,凋巨噬细胞内Ｂｃｌ－２逐渐减少,核中Ｂｃｌ－２相对量逐渐减少,胞浆中Ｂｃｌ－２相对量逐渐增多,Ｂｃｌ－２表达和地塞米松介导的巨噬细胞凋亡呈极显著负相关。结果表明,地塞米松介导巨噬细胞凋亡时,凋亡抑制     

自然流产中的早孕期蜕膜细胞Bcl-2 /Bax 比例异常

探讨早孕期蜕膜细胞细胞凋亡异常与妊娠失败的关系。应用TUNEL法测定凋亡的发生及凋亡细胞的定位，免疫组化法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达和相互关系。结果发现：（1）正常早孕40d蜕膜组织细胞大量凋亡，Bcl-2蛋白表达量较低，Bax蛋白有较强表达。（2）正常早孕50d，凋亡细胞明显减少，Bcl-2的表达显著增强，Bax蛋白表达减弱。（3）早孕50d自然流产组，蜕膜组织大量凋亡，与同时期正常蜕膜组织相比，P＜0．01。Bcl-2蛋白表达明显降低，Bax蛋白表达明显增强，Bcl-2/Bax比例降低。早孕期蜕膜组织凋亡异常可能是自然流产的机制之一，Bcl-2/Bax途径可能是诱导早孕期蜕膜细胞凋亡的重要因素。     

Caspase 9及其相关分子基因表达水平改变对同型半胱氨酸内皮凋亡的影响

目的 了解caspase 3信号传导通路中上游分子Bcl 2、细胞色素c（cytochrome-c）、caspase 9在同型半胱氨酸作用下的人脐静脉血管内皮细胞内的mRNA及蛋白表达水平的改变，揭示线粒体参与信号传导链在caspase 3所介导的内皮细胞凋亡过程中的作用。方法 培养人脐静脉内皮细胞，用不同浓度同型半胱氨酸作用于细胞后，用逆转录-聚合酶链反应及Western印迹分别检测各分子基因及蛋白表达水平的改变。结果 Bcl 2、cytochrome-c和caspase 9在同型半胱氨酸作用下mRNA及蛋白表达水平下降，并且随同型半胱氨酸浓度的升高而降低。结论 Bcl 2可能参与了同型半胱氨酸促进细胞凋亡的信号传导途径。Caspase 3没有通过上游分子apoptosome和caspase 9途径活化。这些研究结果提示，同型半胱氨酸诱导细胞凋亡并不是通过以线粒体凋亡通路为主的信号传导通路。     

bcl—2在一氧化氮诱导血管平滑肌细胞凋亡中的作用

目的：对一氧化氮（NO）作用下血管平滑肌细胞（VSMC）中bcl-2蛋白表达的变化进行定量检测,并进一步探讨bcl-2过表达对NO诱导VSMC凋亡的影响,以确定bcl-2在NO诱导VSMC凋亡中的作用。方法以亚硝基乙酰青霉胺（SNAP）作为NO供体,将5－8代的大鼠VSMC接种于Petri培养皿中,条件培养液培养24－48h,换成含0．5mmol/LSNAP的条件培养液8－10h后,固定细胞、间接免疫荧光法检测抗原,借助粘附式细胞仪对细胞中bcl-2蛋白表达进行定量检测,通过逆转录病毒载体将bcl-2基因导入VSMC,使其过量表达,检测SNAP作用下细胞的凋亡率,并与未经转染的VSMC进行比较,结果：SNAP使得VSMC中B蛋白表达下调,而bcl-2过表达能够抑制SNAP作用下VSMC的凋亡。结论下调bcl-2表达是SNAP诱导VSMC凋亡的途径之一。     

枸杞多糖调控老年大鼠T细胞凋亡及相关基因表达的研究

目的 :探讨枸杞多糖对老年大鼠T细胞过度凋亡及相关基因表达的调节作用。方法 :利用TUNEL标记的流式细胞术和荧光实时定量PCR技术 ,研究了老年大鼠和年轻大鼠T细胞凋亡百分率及抗凋亡和促凋亡基因 (Fas,FasL ,TNFR1,Bax ,Bcl 2 ,TNFR2 )mRNA表达情况 ,并研究了枸杞多糖对老年大鼠T细胞凋亡百分率及促凋亡和抗凋亡基因mRNA表达的影响。结果 :枸杞多糖能够有效地降低老年大鼠T细胞的过度凋亡 ,而且可以下调促凋亡的TNFR1基因mRNA表达并上调抗凋亡的Bcl 2基因mRNA表达。结论 :枸杞多糖下调促凋亡基因表达的同时上调抗凋亡基因的表达 ,从而改善老年大鼠T细胞过度凋亡的状态     

大鼠急性心肌缺血再灌注的心肌细胞凋亡研究

目的　为证实急性心肌缺血再灌注过程中存在着不同程度的心肌细胞凋亡现象 ,初步研究心肌细胞凋亡与Bcl 2 /Bax蛋白表达的关系。　方法　透射电镜观察心肌细胞的超微结构变化 ,抽提心肌组织DNA琼脂糖凝胶电泳 ,TUNEL法原位标记凋亡的心肌细胞 ,免疫组织化学技术和图像分析技术检测心肌细胞内Bcl 2 /Bax蛋白表达。　结果　缺血及再灌注组电镜观察心肌细胞出现典型凋亡超微结构特征 ,TUNEL染色可见不同程度的心肌细胞凋亡阳性反应 ,DNA电泳显示在缺血再灌注 2h出现明显的DNA条纹图像 ,再灌注组较缺血组心肌细胞中Bcl 2表达明显降低 (P <0 0 5 ) ,而Bax表达显著增高 (P <0 0 1)。　结论　急性心肌缺血及再灌注能诱导不同程度的心肌细胞凋亡 ,Bcl 2 /Bax基因对心肌细胞凋亡的发生有着重要的调控作用