转基因食品PCR定性检测技术的研究

目的建立简便、快速、灵敏、特异的植物源性转基因食品DNA检测技术。方法针对转基因植物技术中载体上常用花椰菜花叶病毒的35S启动子和根农杆菌的NOS终止子特异基因序列,设计合成特异的引物对35S、NOS,利用基因PCR扩增技术检测转基因食品。结果引物对35S、NOS分别成功从转基因大豆中扩增出195bp和180bp特异的DNA带。结论基于35S启动子和NOS终止子基因序列的PCR扩增技术是一种简便、快速、灵敏、特异的转基因食品DNA检测技术。     

PCR定性技术与定量技术的应用分析

PCR技术自诞生以来,以其快捷、特异性好、灵敏度高的特点,在检验界得到广泛的应用;同时,为了获得较好的扩增效果,科研人员不断地对技术进行改进。从常规扩增到引入套式、槽式技术,从普通杂交到分子灯塔荧光技术,从定性到半定量、定量技术,每一发展,都使技术本身在灵敏度、特异性方面有较大的提高。本文对标本进行常规定性技术检测与荧光定量技术检测,旨在通过试验过程探讨两者的利弊,以便不同的实验室选择各自相适宜的方法。1　材料与方法1)　标本:乙肝免疫指标HBsAg、HBeAg、HBcAb均( )血清10 0份,乙肝免疫指标全阴性血清10 0份,均由…     

实时荧光定量PCR在食品致病菌检测中的应用

目的研究实时荧光定量PCR在食品致病菌检测中的应用。方法对PCR在不同食品致病菌的检测效果进行比较,分析PCR在食品致病菌检测中的作用。结果实时荧光定量PCR技术在食品致病菌包括沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌等多种致病菌都有着较为有效地检测结果。结论作为一种新兴的检测方法,PCR技术可以快速,准确地检测食品中的各种致病菌。为保障消费者的食品安全工作做出了很大的贡献。     

PCR扩增产物的量化检测技术

随着分子生物学的日益发展与普及,PCR产物的定量检测受到广泛重视。本文将近年国外报道PCR扩增产物的量化检测技术的某些方法的原理、特点等作简要的介绍。并着重介绍杂交酶免疫测定法的优点及其广阔的应用前景。     

PCR为基础的DNA甲基化检测技术进展

人类基因组中ＣｐＧ位点的普遍低甲基化导致癌基因表达增强及５’ＣｐＧ岛的高甲基化导致抑癌基因失活是细胞恶性转化的重要机制之一。为准确理解ＤＮＡ甲基化与细胞恶性转化的关系，有必要了解肿瘤ＤＮＡ中特定序列的甲基化改变，本文对国外学者运用ＰＣＲ技术检测基因组中ＤＮＡ特定序列的甲基化状态的进展作一介绍。     

定量PCR技术

聚合酶键反应（PCR）是模拟DNA体内复制过程,在体外将DNA片段加以人工扩增的技术。有许多因素都可以影响PCR的扩增效率,导致常规PCR的特异性不强,准确性不高,为此,大量学者设计了定量PCR技术,以克服各种因素对PCR扩增的干扰,从而提高PCR的特异性及准确性。本文对定量PCR技术进行了简要的综述。     

Taqman技术定性检测主要性病病原体的临床评价

目前对性传播疾病主要病原体淋病奈瑟菌 (ＮＧ)、沙眼衣原体 (ＣＴ)和解脲脲原体 (ＵＵ)的病原检测 ,主要采用培养法和常规聚合酶链反应 (ＰＣＲ)技术。本试验采用Ｔａｑｍａｎ技术对临床标本中ＮＧ、ＣＴ及ＵＵ进行定性检测 ,并与培养法和常规ＰＣＲ方法比较 ,评价Ｔａｑｍａｎ技术在性病病原体定性检测中的临床应用价值。一、材料与方法1 .仪器试剂 :ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ热循环仪系罗氏公司产品 ;ＮＧ、ＣＴ、ＵＵ所用引物及Ｔａｑｍａｎ探针由上海生工生物工程有限公司合成。2 .标本来源与分类 :2 0 0 1年 1～ 6月四川大学华西医院泌…     

PCR技术检测麻风分枝杆菌进展

麻风病是一个严重的公共卫生问题,由于麻风分枝杆菌不能体外培养,控制疾病传播主要依靠早期诊断。临床诊断主要依据抗酸染色结果和临床体征,但抗酸染色方法敏感性低。本文就PCR技术尤其是巢式PCR和实时定量PCR检测麻风分枝杆菌的可行性和应用作一综述。     

PCR技术在淋巴系统恶性肿瘤患者MRD检测中的应用

基于PCR技术检测MRD的方法多种多样，如共同引物和特异引物PCR，RT-PCR，ASO-PCR，SSCP-PCR，荧光PCR结合毛细管电泳技术以及定量的竞争PCR和实时定量．PCR(RQ-PCR)、LightCycle RQ-PCR等。各种方法均有其优缺点及适用情况，合理选择才能获得所需的灵敏度和特异性。     

ELISA定性检测HBsAg的室内质控探讨

目前国内检测HBsAg的ELISA大多参照生化的质控方法,即选弱阳性标本为质控物,以X图法控制日常工作的精密度,判断实验的有效性。我们改用临界值法进行室内质控,简便易行,现特予介绍。一、室内质控物　高值质控物为10μg/ml,低值质控物为1ng/ml,阴性质控物则取A值在0.04～0.08间的样本20份以上混匀后分装。二、室内质控方法　实验除用试剂盒内的质控品外,同时也检测高值、低值和阴性三种质控物,并将质控结果算出S/CO值点入质控图中(S/CO值:S为样本A值,CO为临界(CutOff)值,即阴性对照A值×2.1。如阴性对照小于0.05时,以0.05计)。参…     

介绍一种原位PCR检测方法

原位PCR就是将PCR的高效扩增与原位杂交的细胞定位相结合，在组织细胞原位检测单拷贝或低拷贝的特定DNA或RNA序列。作者介绍一种原位PCR方法是利用卵白素与生物素问的极高亲和力，通过一段外源性DNA片段，来达到连接标记NTPs的目的，再通过原位杂交技术来检测目的DNA。具体方法如下。     

荧光定量PCR技术在结核杆菌检测中的应用

目的：建立结核病荧光定量PCR快速检测方法。方法：建立检测结核杆菌的荧光定量PCR方法并进行特异性、敏感性、重复性实验，对临床样品进行检测分析。结果：该方法的敏感性达到了1Pg，且特异性高．重复性好。应用荧光定量PCR法及抗酸染色、结核杆菌培养法，对332例活动性肺结核患者晨痰、215例活动性肺结核患者外周血、187例结核性胸膜炎患者胸水进行检测．荧光定量PCR技术阳性率分别为53．0％（176／332）、34．4％（74／215）、36．9％（69／187），经统计学比较分析，3种方法检测率差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：荧光定量PCR技术具有简便、快速、防污染、敏感性与特异性高等优点，是结核病诊断的有效方法之一。[著者文摘]     

6种食品致病菌的多重PCR检测

目的寻求食物中毒诊断及食品检测的有效方法。方法建立多重PCR体系一次检测多种食品致病菌方法。结果可以一次检测出肠毒性大肠埃希菌(E.coli-ETEC),蜡样芽胞杆菌(Bacilluscereus),沙门菌属(Salmonellaspp),大肠埃希菌O157:H7(E.coli-O157:H7),志贺菌属(Shigellaspp),霍乱弧菌(Vibriocholerae)等菌属或菌。结论多重PCR体系检测6种菌DNA的灵敏度最低为10.30fg,与单独的PCR检测的灵敏度相同。将它做成体外基因诊断试剂盒,将成为细菌性食物中毒诊断及食品检测的有效工具。     

应用生物发光技术定量检测PCR扩增产物

目的　建立一种基于生物发光技术的定量检测PCR产物的方法 ,并用于HBV定量PCR检测。方法　首先利用ATP硫酰化酶 (ATPsulfurylase)将焦磷酸 (PPi)定量转化成ATP ,然后利用虫荧光素酶 (luciferase)系统发光检测ATP ,从而确定样品中PPi含量。利用 2次PCR法扩增HBVDNA目的片段 ,并进行回收纯化定量 ,以之作为阳性标准模板制作标准曲线。选择适当的循环次数扩增样品中HBVDNA ,利用化学发光法检测扩增产物中PPi的量 ,进而确定样品中HBVDNA模板的量。结果　当起始模板量为 (10～ 5 )× 10 5拷贝 ,循环次数为 2 5 ,发光值与起始模板浓度呈现良好的相关。检测 32份样品血清 ,其中 2 3例HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)标本中HBVDNA平均含量为 1 6× 10 5拷贝 / μl,9例HBsAg(+)、HBeAg(- )、HBcAb(+)标本中HBVDNA平均含量为 5 6× 10 3 拷贝 / μl。结论　本方法是一种操作简便、灵敏度高的定量PCR方法     

实时荧光PCR技术在手足口病检测中应用

目的:探讨实时荧光PCR技术检测手足口病肠道病毒的价值.方法:建立手足口病的实时荧光PCR检测技术平台,检测茂名地区手足口病患者243份标本中人肠道病毒通用型、柯萨奇病毒A16型和肠道病毒71型特异性核酸,再将标本送广东省疾病预防控制中心进行复检.结果:243份标本中肠道病毒通用型核酸阳性27份,柯萨奇A16核酸阳性16份,肠遘71型病毒核酸阳性17份,与广东省疾病预防控制中心复检结果一致,符合率100%.结论:实时荧光PCR检测技术平台具有特异性强、灵敏度高等优点,是一种手足口病肠道病毒的快速检测方法.     

定量PCR技术的研究进展

定量ＰＣＲ技术的研究进展陈建魁综述牟兆钦审校（军事医学科学院附属医院，北京１０００３９）关键词定量ＰＣＲ核酸检测技术聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术建立以来，定性技术不断改进和完善，可以达到检测单个靶序列的水平。但实际工作中常需要定量检测标本中核酸，而不是...     

定量PCR与传统RT-PCR检测HCV RNA的比较研究

目的用荧光定量PCR（FQ-PCR）和逆转录PCR（RT-PCR）法检测抗-HCV阳性血清中的HCVRNA，探讨两种方法检测结果的临床意义。方法抗-HCV阳性血清样本1062份，其中481份用RT-PCR法检测，465份用FQ-PCR法检测，另有116份同时用两种PCR法检测。结果RT-PCR法检测HCV RNA的阳性率为49．90％（240／481），FQ-PCR法的阳性率为62．58％（291／465），两种方法的阳性率有显著性差异（P〈0．001）。同时用两种方法检测116份，RT-PCR法阳性率为49．14％（57／116），FQ-PCR法阳性率为65．52％（76／116），也有显著性差异（P〈0.05）。FQ-PCR法检测的40份阴性中RT-PCR法检测出4例HCVRNA阳性。结论FQ-PCR检测HCVRNA比RT-PCR特异性高．但RT-PCR的敏感性较FQ-PCR高，部分FQ-PCR检测的阴性结果不能排除HCV RNA阳性的可能性。     

运用PCR检测胃粘膜中幽门螺杆菌

聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction，PCR）技术，具有简便、快速、特异、灵敏度高等优点，应用PCR技术检测幽螺杆菌（HelicobacterPylorlHP）无疑会对慢性胃炎的传染源及传播途径等目前所知甚少的流行病学方面知识有进一步的了解。我们参照来氏等[1]设计的HP的16srRNA基因片段引物，检测慢性胃炎的胃粘膜标本中的HP，现报告如下：1材料与方法1．1试剂①脱氧核糖核苷三磷酸（dNTP）购自上海华美生物工程公司。②FDTaqDNA聚合酶为Promega公司产品。③引物选自HP的16srRNA基因保守区的一j对寡核着酸。引物P；为5’－GCG－…