成年小鼠嗅球神经干细胞的培养和鉴定

目的 建立完善的成年小鼠嗅球神经千细胞分离培养和鉴定方法,探索新的成年神经干细胞种子来源. 方法 用无血清方法 分离培养成年小鼠嗅球来源的神经干细胞;用克隆培养、5-溴2-脱氧尿嘧啶核昔(BrdU)整合的方法 检验培养细胞的干细胞特性;用免疫荧光细胞化学的方法 检测BrdU、神经干细胞标记物巢蛋白(nestin)和SOX2、分化的细胞标记物Tuj1、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、04的表达. 结果 从成年小鼠嗅球能够分离、培养出具有自我更新、增殖能力的神经球.构成神经球的细胞呈nestin和SOX2阳性,它们分化后产生TuJ1阳性的神经元、GFAP阳性的星形胶质细胞、04阳性的少突胶质细胞. 结论 成年小鼠嗅球存在神经干细胞,其能够在体外进行培养、增殖、分化.是神经干细胞的新的种子来源.     

人类神经干细胞的研究进展

神经干细胞存在于中枢神经系统内，可以分化为神经元、少突胶质细胞和星型胶质细胞。目前，神经干细胞的定义应是神经系统的始祖细胞，具有分化为以上３种神经细胞的能力，神经干细胞进一步分化为双潜能或单潜能的干细胞，双潜能干细胞可以分化为一种胶质细胞和神经元，单潜能干细胞只分化为神经元或一种胶质细胞。由于目前尚无特异的标志物对全能的神经干细胞和单潜能或多潜能的神经干细胞进行区分，因此，神经干细胞笼统地包括以上３种神经前体细胞。现在用于鉴定神经干细胞的标志物是巢蛋白、波形蛋白和Musashi蛋白犤１犦。在啮齿类动物…     

神经干细胞及其在脑修复中的可能应用

成年哺乳动物脑内存在有能分化成神经元或神经胶质的神经干细胞,这种神经前体细胞一般位于脑室壁部位。从胎脑分离下来的神经前体细胞能在体外分裂并进一步分化成神经元和胶质细胞,许多包括生长因子在内的活性物质或分子结构参与这一分化过程并决定这些细胞的转归;从成年脑中也能分离出有繁殖能力的细胞,当这些存在于中枢神经系统内的干细胞（即多潜能细胞）和具有明确前景的前体细胞（神经母细胞和胶质母细胞）遇到与胚胎时期相同因子的影响时也会分裂、分化。由于在体外培养状况下难以提供神经前体细胞分化繁殖的所有条件,故将其植入发育中或成年中枢神经系统特定部位的做法是研究神经干细胞特性,特别是研究决定其分化微环境的有效办法。对神经干细胞的研究,为进一步探讨神经元的发生、迁移、分化和诊治多种神经疾患提供了新的机遇。     

神经干细胞体外培养定向分化为多巴胺能神经元相关因子的研究

神经干细胞(neural stem cell,NSCs)是一类具有分裂潜能和自我更新能力的母细胞,并具有分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力,存在于中枢神经系统多个部位。神经干细胞的最直接应用是利用神经干细胞的多方向分化潜能特性,进行神经干细胞的移植,以恢复宿主的中枢神经系统的正常结构和功能。由于细胞移植治疗需要相当     

胎鼠海马神经干细胞生物学特性的研究

目的研究胎鼠脑组织中海马神经干细胞的自我繁殖特性及多向分化潜能.方法在碱性成纤维生长因子(FGF-2)作用下从胎鼠脑组织中分离、培养神经干细胞并诱导其分化,然后采用间接免疫荧光和免疫组化技术研究神经干细胞的特性.结果由胎鼠海马中分离出的神经干细胞在体外分裂增殖形成干细胞团,分化产生神经元和胶质细胞,它们分别对神经上皮干细胞蛋白、神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白等抗原标记呈现阳性.结论胎鼠脑海马中存在神经干细胞,其具有自我增殖特性和多向分化潜能,在FGF-2的作用下分裂增殖,并分化成神经元、胶质细胞.     

成年C57小鼠脊髓神经干细胞的培养与鉴定

目的　 从成年小鼠脊髓中培养神经干细胞 ,并对其进行鉴定和诱导分化。方法　 成年C5 7小鼠 ,悬浮培养神经干细胞技术。结果　培养 1～ 2周时 ,培养液中即可出现神经干细胞克隆球。该克隆球具有很强的自我增殖能力 ,可多次传代。免疫细胞化学技术证明该克隆球表达大量的神经干细胞特征性的中间丝———巢蛋白(Nestin) ;经 1%胎牛血清诱导后可表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞特征性标志物β tubulinIII、胶质纤维酸性蛋白 (Gliafibrillaryacidicprotein ,GFAP)和RIP ,提示它们可朝神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞方向分化。 结论　 本研究结果提示正常成年C5 7小鼠脊髓中含有神经干细胞 ,在体外条件下可以大量增殖 ,经诱导后可朝神经元和胶质细胞的方向分化     

神经干细胞的来源

神经干细胞是近年来神经科学领域研究的一个热点。神经干细胞可来源于胚胎干细胞和成年干细胞，前者包括早期胚胎细胞和胎儿神经组织细胞，由于从胚胎获取干细胞面l临伦理学的束缚，从成年来源的神经干细胞将是未来临床应用更具可行性的途径。成年来源的神经干细胞包括存在于成年神经组织中的干细胞和从其他组织中分化得到的干细胞，其中骨髓基质细胞具有多分化潜能，在适当的条件下可以诱导分化出神经干细胞，目前备受关注。     

神经干细胞的基础和临床研究

由于固有观念的束缚,直到最近神经干细胞（neural stemcells）的概念才开始应用于成熟的中枢神经系统研究中。 一、基础研究 1.神经干细胞的定义和特性:1989年,Anderson参照造血系统干细胞的特性,提出了神经干细胞的概念:一类具有自我更新能力、高增殖潜能以及多分化潜能的细胞。关于神经干细胞的概念,目前尚无统一的定义。有人称之为神经祖细胞（neural progenitor cell）或神经前体细胞（neural precursorcell）。但这3个概念还是存在一定差异的,神经干细胞是指具有分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞的能力,能自我更新并足以提供大量脑组织细胞的细胞。祖细胞是相对于干细胞而言,仅具有单潜能或双潜能分化能力或其干细胞样特性只能维持较短的时间。而前体细胞则是一个不太严格的术语,是指在发育进程中较另一种细胞处于更早阶段的细胞,可统称干细胞和祖细胞。     

神经干细胞的定向分化调控及移植治疗颞叶癫痫

一、神经干细胞的来源和分裂 神经干细胞是指具有分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞的能力，能自我更新并足以提供大量脑组织细胞的细胞。     

液压性脑损伤后室下区神经干细胞的分离培养与鉴定

目的分离液压性脑损伤室下区巢蛋白（nestin）和胶质酸性纤维蛋白（GFAP）阳性（nestin^＋／GFAP^＋）共存细胞进行培养和诱导分化，观察其分裂、增殖和分化能力，以阐明损伤反应性星形胶质细胞增生过程中nestin^＋／GFAP^＋共存细胞是否具有神经干细胞特性。方法用液压冲击法建立动物模型，分离损伤成年SD大鼠室下区nestin^＋／GFAP^＋共存细胞，制成单细胞悬液，培养和诱导分化，以免疫荧光化学方法对原代和传代培养形成的神经球以及原代和传代培养诱导分化的细胞进行鉴定。结果结果显示培养及传代的细胞不断分裂增殖，可以形成悬浮生长nestin阳性的神经球；神经球诱导分化后可以分化为少突胶质细胞、神经元和星形胶质细胞。结论成年大鼠液压性脑损伤后分离的室下区细胞具有自我更新能力和多向分化潜能，是中枢神经系统神经干细胞。     

神经干细胞移植治疗Alzheimer病

阿尔茨海默病是一种中枢神经系统进行性变性疾病,为痴呆的常见原因,其较明确的病理变化是前脑胆碱能投射系统胆碱能神经元变性、细胞数量减少。神经干细胞具有自我更新和多分化潜能属性,可分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。神经干细胞移植后可分化成胆碱能神经元,有潜力替代AD病程中丢失的细胞,从而达到治疗疾病的目的。     

新生大鼠全大脑组织分离诱导分化神经干细胞的体外实验

背景：神经干细胞的供体一般以胎鼠和成年鼠为主，利用细胞培养技术分离步骤较繁琐。 目的：以新生大鼠为神经干细胞供体，拟建立一种较为简便、细胞获得率较高的分离培养方法。 设计、时间及地点：以细胞为对象观察性实验，于2006-10/2007-03在重庆医科大学完成。 材料：新生1~3 d 的Wistar大鼠全大脑。 方法：以胰蛋白酶消化、无血清、悬浮培养原代细胞，并加含体积分数为0.10胎牛血清的DMEM/F12培养液诱导其分化。 主要观察指标：应用相差显微镜观察神经干细胞的生长特点及分化后的细胞形态学变化。应用间接免疫细胞化学染色法鉴定神经干细胞及其分化后神经元和胶质细胞标志蛋白的表达。以BrdU标记神经干细胞，观察其增殖情况。 结果：新生大鼠脑组织分离的细胞具有连续传代和增殖的能力，能稳定表达神经干细胞特异性巢蛋白。诱导分化后的细胞能表达神经元细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞的特异性蛋白。 结论：从新生大鼠脑组织分离培养出的神经干细胞获得率高，保持了干细胞的未分化属性，具有自我更新和多项分化潜能。     

表皮生长因子对胎鼠纹状体神经干细胞的作用

目的：研究表皮生长因子（EGF）对胎鼠纹状体神经干细胞分裂增殖及分化的诱导作用。方法：应用EGF促使体外培养中的胎鼠神经干细胞分裂增殖并诱导其分化,随后使用透射电子显微镜及免疫组化方法研究干细胞的生物学特性。结果：胎鼠纹状体存在多潜能神经干细胞,EGF可以促使胎鼠纹状体神经干细胞分裂,并使其分化产生一定比例的神经元及胶质细胞。结论：EGF作为外源性信号因子作用于胎鼠纹状体神经干细胞的相应受体,对其分裂分化可产生重要作用。     

人胚神经干细胞的体外培养和超微结构观察

目的观察体外分离培养的人胚脑神经干细胞的生物学行为和超微结构特征。方法利用无血清培养和单细胞克隆技术从人胚脑组织中分离培养神经干细胞并用血清诱导其分化,应用免疫荧光细胞化学技术对培养细胞及其分化细胞进行鉴定,并分别用扫描电镜和透射电镜观察其超微结构。结果从人胚脑组织分离的细胞群呈悬浮球状生长,具有连续增殖的能力,并可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。扫描电镜发现神经干细胞球中的细胞之间连接较为松散,无紧密连接结构;透射电镜发现神经干细胞的胞核巨大,胞浆少,核浆比例较大,胞浆内细胞器简单,以核糖体和内质网居多。结论神经干细胞具有自我更新能力和多向分化潜能,其超微结构显示早期原始幼稚细胞的发育特征。本研究为进一步的神经干细胞基础研究和临床应用奠定了基础。     

骨髓基质细胞移植治疗脑缺血的MRI活体示踪研究进展

骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)是成年哺乳动物骨髓中存在的一类特殊的非造血组织干细胞,其数量不到髓内细胞总数的0.05%,属于间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)范畴.它不表达造血干细胞的标志,如CD34,曾被称为"成纤维集落形成单位(CFU-fibroblast)"[1].具有多向分化潜能和高度自我复制能力,能够在特定条件下分化为多种起源组织 [2],包括神经元和胶质细胞等.由于BMSCs来源广泛,取材方便,具有神经分化的潜能,而且在临床应用中自身骨髓的取材不受伦理学和供体组织来源的限制,因此在神经系统疾病的细胞基因工程治疗方面有广阔的应用前景.     

神经干细胞及其临床应用前景

近年研究证实胚胎期和成年哺乳动物的神经组织及人脑中可以分离出神经干细胞。干细胞可被生长因子诱导而增殖并保持分化成神经元及胶质细胞的潜能，移植后能在宿主的神经组织中良好地生存、整和及分化，并且通过基因操作可表达外源性基因。本文就神经干细胞的生物学特性及其在颅脑损伤和其它神经系统疾病中的基因治疗前景进行综述。     

脂肪间充质干细胞在神经修复中的研究进展

脂肪间充质干细胞（ADSC）具有自我更新和多向分化的潜能,可被诱导分化为神经元、神经胶质细胞等,表达多种神经营养因子并具有免疫调节作用,且来源广泛、采集方便、无伦理学问题,为神经修复及功能重建提供了新的细胞来源,可在多种神经系统疾病中发挥治疗作用。     

影响神经干细胞定向分化因素的研究进展

神经干细胞(NSC)具有自我更新和多分化潜能属性,可分化产生神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,这使得NSC移植替代神经系统疾病中丢失的细胞成为可能.NSC在胚胎和成体中枢神经系统均存在.NSC移植在体内环境下(尤其是非神经发生区域)绝大多数分化成胶质细胞(星形胶质细胞),有可能会加重胶质瘢痕形成.在中枢神经系统疾病的NSC细胞替代治疗策略中,NSC分化成合适的细胞类型显得格外重要.现就影响NSC定向分化的因素作一综述.     

新生小鼠端脑组织神经干细胞诱导分化为胆碱能神经元的研究

目的探讨新生小鼠端脑组织神经干细胞是否能够分化成胆碱能神经元。方法取新生小鼠端脑组织．用无血清方法分离培养神经干细胞；用克隆培养的方法检验培养细胞的干细胞特性；用免疫荧光细胞化学的方法检测神经干细胞标志巢蛋白（nestin）及干细胞诱导分化后神经元标志微管相关蛋白2（MAP2）、星形胶质细胞标志胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、胆碱能标志胆碱乙酰转移酶（CHAT）；比较不同的诱导分化条件（5％胎牛血清、5％胎牛血清＋碱性成纤维细胞生长因子）对胆碱能神经元分化的影响。结果从新生小鼠端脑组织分离培养出具有自我更新、扩增能力的神经球；各培养基中神经球均为nestin阳性。诱导分化后均能够产生MAP2阳性神经元、GFAP阳性星形胶质细胞以及ChAT阳性的胆碱能神经元。分化培养中加入碱性成纤维细胞生长因子能够提高胆碱能神经元分化的比例。结论新生小鼠端脑组织神经干细胞能够分化成胆碱能神经元。     

大鼠胚胎神经干细胞的冷冻复苏

目的:建立大鼠胚胎神经干细胞冷冻复苏方法,探讨冻存后神经干细胞的活力及生物学特性.方法:采用10%BSA+7.5%DMSO作冷冻保护剂,于液氮中冻存;采用细胞培养和间接免疫荧光染色方法对冻存后细胞的活力、形态及分化能力作鉴定.结果:不同的冻存时间、细胞代数、组织来源以及神经营养因子对冻存后细胞存活率没有明显差异(P＞0.05).冷冻保存复苏后培养的大鼠胚胎神经干细胞能够存活,能在体外多次传代,并能分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞.结论:大鼠神经干细胞的冻存复苏并不影响其原有的生物学特性包括其正常的形态、增殖能力和多向分化能力.