大肠癌患者外周血树突状细胞免疫功能研究

本实验检测大肠癌患者外周血树突状细胞（ＤＣ）表面ＨＬＡ－ＤＲ及Ｂ７表达水平,并进一步探讨ＤＣ表面ＨＬＡ－ＤＲ及Ｂ７表达水平与ＤＣ免疫功能的相关性及其在肿瘤逃避宿主免疫监视中的作用及机制;１材料和方法１．１材料１９９６／１９９７本院病理确诊ＤｕｋｅＣ期大肠癌患者１１例,男８例,女３例,年龄３０岁～６５岁,平均４９岁,均未接受任何抗肿瘤治疗．健康成人１０例（本校学员）,男女各５例,年龄２０岁～２４岁,平均２１岁．１．２方法参照Ｔｈｏｍａｓ方法［１］分离及纯化,ＤＣ及Ｔ细胞,ＦＩＴＣ荧光素标记的抗ＣＤ…     

树突状细胞体外诱导抗肝癌免疫

目的应用树突状细胞（ＤＣ）在体外诱导高效而特异抗肝癌免疫．方法自肝癌患者外周血中分离ＤＣ;以粒／巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）及白介素４（ＩＬ４）联合刺激ＤＣ;以人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２肿瘤细胞的肿瘤相关抗原（ＴＡＡ）激活ＤＣ;ＤＣ诱导自体Ｔ淋巴细胞增殖、分化为细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）;检测ＣＴＬ及其上清液对ＨｅｐＧ２肿瘤细胞、ＬＯＶＯ肿瘤细胞及ＨＯＳ８６０３肿瘤细胞的细胞毒作用．结果经人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２肿瘤细胞的ＴＡＡ激活并经ＧＭＣＳＦ及ＩＬ４联合刺激后,肝癌患者外周血ＤＣ能够诱导自体Ｔ淋巴细胞增殖分化为ＣＴＬ,该ＣＴＬ及其上清液对ＨｅｐＧ２肿瘤细胞均有高效而特异性的杀伤作用（杀伤率分别为９２％±１０５％和４１％±８９％）．结论肝癌患者外周血ＤＣ体外能够诱导高效而特异抗肝癌免疫．提示ＤＣ作为一新概念上的抗肿瘤疫苗可能在肿瘤治疗及预防中发挥重要作用．     

负载肝癌细胞裂解物的树突状细胞Transgelin表达水平与其功能的关系

目的 探讨负载肝癌细胞裂解物的树突状细胞(DC)Transgelin表达与其表型和功能的关系.方法 正常人来源的DC分成3组,分别为负载高转移潜能肝癌细胞MHCC97H、低转移潜能肝癌细胞MHCC97L的裂解物组和无负载DC(对照)组.用共聚焦显微镜和扫描电子显微镜观察DC形态;流式细胞仪检测DC表型,混合淋巴细胞反应及其上清液中白细胞介素(IL)-12含量测定以反映DC功能;Western blot测定DC中Transgelin的表达.结果 3组DC的形态未有明显不同,负载低转移潜能肝细胞癌组DC的CD80、CD83、CD86、混合淋巴细胞反应和IL-12含量明显高于对照组(P<0.01);负载高转移潜能肝细胞癌组DC的CD80、CD86、Transgelin表达明显高于对照组(P<0.05);负载高转移潜能肝细胞癌组DC的CD80、CD83、CD86和IL-12含量明显低于低转移组(P<0.05),而Transgelin表达则高于低转移组.结论 负载肝细胞癌裂解物的DC中Transgelin表达与其表型和功能有关.     

树突状细胞与肝癌的免疫治疗

近20年来通过对树突状细胞(dendritic cells,DC)的研究,学者们逐渐认识到DC是目前发现的功能最强的抗原提呈细胞,DC是启动、调控、并维持免疫应答的中心环节。成熟活化的DC除了与初始型T细胞相互作用诱导抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞外,还可以通过直接或间接方式影响B细胞的增殖,活化体液免疫应答;     

树突状细胞诱导的肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞对裸鼠人肝癌转移的预防和治疗

目的探讨肿瘤抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对裸鼠人肝癌转移模型LCI-D20的治疗作用。方法从健康人外周血单个核细胞中诱导树突状细胞,用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素-4刺激活化,经人肝癌细胞株MHCC97-H肿瘤抗原致敏后,诱导肿瘤抗原特异性CTL,经腹腔注射,以自然杀伤样T淋巴细胞(CIK)和磷酸盐缓冲液为对照,研究其对LCI-D20肝癌治疗和预防转移作用。结果肿瘤抗原特异性CTL组、CIK 组和对照组肝癌肿块重量、血清甲胎蛋白含量、肝癌肝内转移率和存活期依次为(1．11±0．63)g、(1．12±0．36)g 和(2．68±0．53)g;(52．1±9．7)μg／L、(48．6±5．2)μg／L和(82．2±7．2)μg/L;16．7％、16．7％和58．3％; (79．0±5．0)d、(73．3±7．0)d和(52．3±5．2)d。对照组与前两组比较差异均有统计学意义(P值均<0．01)。结论肿瘤抗原特异性CTL可以预防LCI-D20模型肝癌发生转移,延长动物存活时间。     

肝癌患者外周血树突状细胞免疫功能的研究

目的研究树突状细胞(DC)表面免疫分子 HLA-DR 及 B_7表达水平及其与 DC 免疫诱导能力相关性,并进一步探讨 DC 免疫功能在宿主免疫功能中的作用.方法以健康成人(n=10)作为对照,检测临床确诊肝癌患者(n=10)外周血 DC 表面免疫分子 HLA-DR 及 B_7表达水平及 DC 免疫诱导能力.结果肝癌患者 DC 表面 HLA-DR 及 B_7表达水平(6.7±1.6及6.1±1.1)明显低于对照组(10.7±1.4及9.6±1.2 VOF,P<0.05),其 DC 体外诱导 T细胞增殖能力(3100±120cpm)亦明显低于对照组(6200±90cpm,P<0.01);以抗 HLA-DR 单抗及抗 B_7单抗完全封闭对照组 DC 表面 HLA-DR 及 B_7。则该 DC 诱导 T 细胞增殖能力(3900±1.5cpm)亦明显低于对照组(6200±90cpm,P<0.05)。结论肝癌患者 DC 表面 HLA-DR 及 B_7表达水平下降与 DC 免疫功能低下密切相关,DC 免疫功能低下可能是肝癌(或许包括其它肿瘤)逃避宿主免疫监视的重要原因。     

体外负载冻融抗原的脐血树突状细胞诱导的抗肝癌效应

目的评价体外应用肝癌细胞冻融抗原负载的脐血树突状细胞（DC）所诱导的抗肝癌效应。方法采集健康足月剖宫产孕妇胎盘端脐血,分离脐血单个核细胞（CBMNC）及T淋巴细胞,用GM-CSF、IL-4及TNF-α联合诱导CBMNC分化为DC,观察形态学变化并以流式细胞术鉴定,选培养的第3天以肝癌细胞冻融抗原负载的CBMNC-DC,以负载抗原的DC刺激自体淋巴细胞活化为自体细胞毒性T淋巴细胞（CTL）,并用CTL对肝癌细胞进行杀伤,MTT法测定活化的自体淋巴细胞的相对数量和CTL对肝癌细胞的杀伤率。结果体外负载肿瘤冻融抗原的脐血DC可诱导显著的自体效应淋巴细胞增殖及抗肝癌效应。结论体外负载抗原的脐血DC可诱导显著的抗肝癌效应,是具有临床应用前景的肝癌疫苗。     

肝癌凋亡相关抗原的表达与原位末端标记的关系

目的探讨Ｆａｓ等凋亡相关抗原在肝细胞癌（ＨＣＣ）的表达及其与凋亡的关系．方法剖腹ＨＣＣ３０例，标本作Ｆａｓ，Ｂａｘ，Ｉｃｅ，Ｂｃｌ２免疫组化和原位末端标记（ＩＳＥＬ）．结果ＩＳＥＬ与ＨＥ的凋亡形态及定位基本吻合，ＨＣＣ有小片及大片的凋亡；凋亡与坏死形态不同，且坏死ＩＳＥＬ阴性，可与凋亡鉴别．凋亡及健全癌细胞Ｆａｓ，Ｂａｘ阳性率均较高．癌旁及正常肝的Ｆａｓ，Ｂａｘ均较ＨＣＣ者低．Ｂｃｌ２在ＨＣＣ表达甚低．结论凋亡的ＨＣＣ组织Ｆａｓ表达高，较健全癌细胞、癌旁及正常肝组织的表达为高     

中国肝癌临床研究进展

我国２７个省１９９０／１９９２抽样调查表明，肝癌在癌症死亡率中已上升为第二位，达２０３７／１０万，其中男性２９０１／１０万，女性１１２１／１０万［１］．我国肝癌的主要病因因素有：病毒性肝炎感染－我国肝癌患者中约９０％有乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染...     

肝细胞性肝癌AFP-mRNA检测外周血癌细胞的价值

目的通过对原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）外周血中癌细胞的检测，为临床建立诊断肝癌转移的常规方法．．方法以甲胎蛋白（ＡＦＰ）ｍＲＮＡ为ＨＣＣ的标记物，应用ｎｅｓｔｅｄＲＴＰＣＲ对３０例ＨＣＣ外周静脉全血标本及不同细胞株进行检测及分析．结果ＨＣＣ患者３０例外周血癌细胞阳性检出率为５６７％，并与肝内静脉癌栓形成（１１／１３，８４６％ｖｓ６／１７，３５３％）、肝内转移（１６／２３，６９６％ｖｓ１／７，１４３％）和细胞分化密切相关（Ｐ＜００５）；最低检出浓度为全血肝癌细胞２×１０４／Ｌ．对照组中结肠癌、鼻咽癌等肝转移癌以及胆囊结石患者的外周血中均未发现ＡＦＰｍＲＮＡ．结论ＮｅｓｔｅｄＲＴＰＣＲ对ＨＣＣ的检测具有较强的特异性和较高的灵敏度，对于ＨＣＣ诊断、判断转移可能具有较为重要的临床应用价值     

肝癌与肝硬变患者自然杀伤细胞活性的比较

肝癌与肝硬变患者自然杀伤细胞活性的比较胡建石张立Ｓｕｂｊｅｃｔｈｅａｄｉｎｇｓｌｉｖｅｒｎｅｏｐｌａｓｍｓ／ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；ｌｉｖｅｒｃｉｒｈｏｓｉｓ／ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；ｋｉｌｅｒｃｅｌｓ，ｎａｔｕｒａｌ主题词肝肿瘤／免疫学；肝硬化／免疫...     

MAGE-1修饰的树突状细胞体外诱导杀伤人肝癌细胞

目的通过观察肿瘤相关抗原基因MAGE-1转导的树突状细胞(dendritic     

肝癌患者外周血树突状细胞免疫功能的研究

目的 研究树突状细胞(DC)表面免疫分子HLA-DR及B2表达水平及其与DC免疫诱导能力相关性.并进一步探讨DC免疫功能在宿主免疫功能中的作用。方法 以健康成人(n=10)作为对照．检测临床确诊肝癌患(n=10)外周血DC表面免疫分子HLA-DR及B，表达水平及DC免疫诱导能力．结果 肝癌患DC表面HLADR及B2表达水平(6.7±1.6及6.1±1.1)明显低于对照组(10.7±1.4及9.6±1.2VOF,P<0.05).其DC体外诱导T细胞增殖能力(3100±120cpm)亦明显低于对照组(6200±90cpm,P<0.01)：以抗HLA-DR单抗及抗B2单抗完全封闭对照组DC表面HLA-DR及B2．则该DC诱导T细胞增殖能力(3900±1.5cpm)亦明显低于对照组(6200±90cpm．P<0.05)．结论 肝癌患DC表面HLA-DR及B2表达水平下降与DC免疫功能低下密切相关，DC免疫功能低下可能是肝癌(或许包括其它肿瘤)逃避宿主免疫监视的重要原因。     

原发性肝癌雌激素受体表达及内分泌治疗

目的研究原发性肝癌雌激素受体（ＥＲ）的表达及内分泌治疗的临床价值．方法应用Ｌｅｅ氏荧光配体细胞化学法检测４１例手术病理确诊的原发性肝癌ＥＲ的表达．本组男３８例，女３例，年龄２５岁～７２岁．同时检测肝癌的组织类型、分化程度、肿瘤大小、血清ＡＦＰ及ＣＥＡ．６例ＥＲ阳性者采用他莫昔芬治疗（每次２０ｍｇ，２次／ｄ，长期服用）并观察疗效．结果肝癌组织ＥＲ阳性２０／４１例，阳性率４８８％．ＥＲ阳性率与患者年龄、性别、ＡＦＰ、ＣＥＡ含量及组织类型（梁状型ＥＲ阳性４５０％，腺样型３３３％，实体型７１４％，硬化型６６７％，透明细胞型２５０％；Ｐ＞００５）无明显关系，与肿瘤体积（≥１０ｃｍ，ＥＲ阳性率７５０％；＜１０ｃｍ，ＥＲ阳性２３８％；Ｐ＜００１）和分化程度（分化好２６例，ＥＲ阳性３４６％；分化差１５例，ＥＲ阳性７３３％；Ｐ＜００５）有显著关系．本组ＥＲ阳性病例中６例经他莫昔芬内分泌治疗有效５／６（８３３％），其中４例ＡＦＰ下降．结论ＥＲ阳性肝细胞癌患者进行内分泌治疗有一定疗效     

树突状细胞对不同诱导时间LPAK抗肝癌作用的影响

目的　比较ＤＣ对诱导４ ｄ（Ｌ４） 和诱导７ ｄ（Ｌ７） 的ＬＰＡＫ 细胞体外杀伤人肝癌细胞株ＢＥＬ－ ７４０２（Ｂ） 的杀伤力和杀伤模式的影响．方法　Ｌ４ 组为Ｂ＋ Ｌ４ ,ＬＤ４ 组为Ｌ４ 组＋ ＤＣ;Ｌ７ 组为Ｂ＋ Ｌ７ ,ＬＤ７ 组为Ｌ７ 组＋ ＤＣ．Ｌ４ 和Ｌ７ 与Ｂ的效靶比均为５∶１ 和１０∶１两种． 采用杀伤细胞检测技术及电镜技术,比较各组的杀伤效应和杀伤模式．结果　各组的细胞毒活性为ＬＤ４ ＞ Ｌ４（ Ｐ＜ ０－０１） ,ＬＤ７ ＞ Ｌ７（ Ｐ＜ ０－０１） ．Ｌ４ 组和ＬＤ４ 组的ＢＥＬ７４０２ 细胞呈现不同程度的变性坏死,Ｌ７ 组和ＬＤ７ 组的ＢＥＬ７４０２ 细胞则呈现不同程度的凋亡改变．结论　ＤＣ对不同诱导时间的ＬＰＡＫ 细胞体外杀伤肿瘤细胞都有明显的促进作用,但并不改变ＬＰＡＫ 细胞对肿瘤细胞的杀伤模式．     

乙型肝炎相关肝癌外周血树突状细胞负载肿瘤抗原前后免疫功能的变化

目的探讨肝癌患者外周血单个核细胞(PBMC)来源树突状细胞(DC)表面分子表达及负载肿瘤抗原前后免疫功能变化与免疫逃逸的关系。方法分离18例乙型肝炎相关原发性肝癌、11例乙型肝炎肝硬化患者和10名健康献血者PBMC,体外培养,并加入重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)诱导DC。以共聚焦显微镜和扫描电镜观察形态,以流式细胞仪检测DC表面人类白细胞抗原(HLA)-DR、CD1a、CD80、CD83、CD86等分子表达水平。以HCCLM6肝癌细胞株制备肿瘤抗原,分别负载3种DC,最后以混合淋巴细胞反应(MLR)测定DC负载前后刺激同种异型T淋巴细胞增殖能力,并测定MLR上清液中IL-12的含量。结果肝硬化和肝癌组PBMC、DC得率低于正常组(P<0.05);HLA- DR、CD1a、CD80和CD86等分子表达水平也低于正常组(P<0.05);负载肿瘤抗原前肝硬化和肝癌组刺激同种异型T淋巴细胞增殖能力和MLR上清液中IL-12含量明显低于正常组,负载肿瘤抗原后3组均提高, 并以肝硬化组提高最为明显,但IL-12含量仍低于正常组。结论DC表型和功能缺陷可能是乙型肝炎病毒产生免疫耐受和肝癌细胞免疫逃逸的重要机制。肝硬化患者DC仍有一定功能。     

细胞因子对树突状细胞抗肝癌作用的影响

目的研究人血树突状细胞（ＤＣ）和细胞因子ＴＮＦ,ＧＭＣＳＦ或ＩＦＮγ联合ＤＣ对淋巴因子和ＰＨＡ激活的杀伤细胞（ＬＰＡＫ细胞）体外杀伤人肝癌细胞株ＢＥＬ７４０２的影响．方法实验分为Ｌ组（ＬＰＡＫ）,Ｄ组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ）,Ｔ１组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＴＮＦ５０００ｋＵ／Ｌ）,Ｔ２组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＴＮＦ５００ｋＵ／Ｌ）,Ｇ１组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＧＭ－ＣＳＦ５００ｋＵ／Ｌ）,Ｇ２组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＧＭ－ＣＳＦ１００ｋＵ／Ｌ）,Ｉ１组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＩＦＮγ５００ｋＵ／Ｌ）和Ｉ２组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＩＦＮγ１００ｋＵ／Ｌ）．每组效靶细胞比分别采用５∶１和１０∶１两种．培养４８ｈ后用中性红比色法检测细胞毒活性．结果Ｌ,Ｄ,Ｔ２和Ｔ１组的细胞毒活性依次增强,各组间差异有显著性（Ｐ＜００１）．Ｇ１和Ｇ２组均高于Ｄ组（Ｐ＜００１）,但Ｇ１,Ｇ２组间差异无显著性．Ｉ１,Ｉ２组与Ｄ组相比,也无显著性差异．随效靶比增加,各组细胞毒活性均相应增强．结论ＤＣ能增强ＬＰＡＫ细胞对肝癌细胞ＢＥＬ７４０２的细胞毒活性;ＴＮＦ或ＧＭＣＳＦ与ＤＣ联用,两者有协同作用;但与ＩＦＮγ联用,则无进一步增强作用     

树突状细胞和巨噬细胞对肝癌细胞抗原的提呈作用

目的 比较同一个体来源的树突状细胞(DC)和巨噬细胞(MΦ)对肝癌细胞抗原的提呈作用。 方法 从同一健康外周血中分离出单核细胞,在粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)联合白细胞介素-4(IL-4)或单独在GM-CSF的作用下,分别诱导出DC和MΦ;DC或MΦ与自体淋巴细胞和肝癌细胞抗原共培养5d,结束培养前12 h加入37 kBq/孔(1 μci=37 kBq)3H-胸腺嘧啶,收获细胞,用液体闪烁计数仪测定增殖效应(cmp值)。 结果 接触肝癌细胞抗原的DC和MΦ都具有显著地刺激自体淋巴细胞增殖的能力,而以DC的刺激能力更为明显。加20μl/ml抗原时刺激效应最明显,DC组、MΦ组和淋巴细胞组的cpm值分别是11950.3±1621.8、8708.5±176.1和402.5±43.1。结论 同一个体来源的DC的抗原提呈能力明显强于MΦ。     

原发性肝癌组织P16蛋白的缺失与HBV感染

目的研究Ｐ１６蛋白缺失与原发性肝癌发生发展的关系以及ＨＢＶ感染与Ｐ１６蛋白缺失的相关性．方法用免疫组化技术（ＬＳＡＢ法）检测７０例原发性肝癌组织标本中的Ｐ１６蛋白和ＨＢｓＡｇ．结果有６０６％（４０／６６）的肝细胞癌（ＨＣＣ）和７５０％（１／４）的胆管细胞癌（ＣＣＣ）Ｐ１６蛋白缺失；Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ和Ⅳ级（按Ｅｄｍｏｎｄｓｏｎ标准）ＨＣＣＰ１６蛋白缺失率分别为００％（０／１），４４１％（１５／３４），８２１％（２３／２８）和６６７％（３／４），组间差异显著（Ｐ＜００５）．在有癌旁肝组织的４８例标本中，癌组织Ｐ１６蛋白阴性率（７２６％）明显高于癌旁肝组织（４１２％，Ｐ＜００５）．有６２５％（３０／４８）的ＨＣＣ癌旁肝组织ＨＢｓＡｇ阳性．ＨＢｓＡｇ阳性病例与阴性病例的Ｐ１６阴性率分别为７３３％（２２／３０）和６６７％（１２／１８），差异无显著性（Ｐ＞００５）．结论Ｐ１６蛋白缺失与原发性肝癌相关，与肝癌的恶性发展关系密切，可能对预后有重要影响．ＨＢＶ感染与Ｐ１６蛋白缺失无明显相关性．