温肺降浊方对血管性痴呆模型大鼠 ERK1/2信号通路相关蛋白的影响

目的:观察温肺降浊方对血管性痴呆(VaD)模型大鼠细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)信号通路的影响,探讨其治疗VaD可能的相关作用机制。方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术组和模型组(等体积0.9%氯化钠溶液灌胃),温肺降浊方低、中、高剂量组(1.5、3、6 ml剂量灌胃)。观察造模后大鼠水迷宫评分和HE病理变化,免疫组化、RT-qPCR和Western blot检测海马组织中ERK1/2、钙蛋白酶(Calpain)、Bcl-2关联死亡启动子重组蛋白(Bad)、B淋巴细胞瘤-xl(Bcl-xl)蛋白和mRNA表达情况。结果:与假手术组相比,模型组和温肺降浊方各剂量组大鼠逃避潜伏期延长、穿越平台次数缩短(P<0.05),海马组织形态稀疏、水肿及核缩小;海马组织ERK1/2、Calpain、Bad蛋白和mRNA表达升高(P<0.05),Bcl-xl蛋白和mRNA表达下降(P<0.05)。与模型组比较,温肺降浊方高剂量组大鼠逃避潜伏期缩短、穿越平台次数增加(P<0.05),海马组织形态逐渐紧密、水肿减少,数量增多;海马组织ERK1/2、Calpain、Bad蛋白和mRN...     

四逆散对心理应激肝郁证模型大鼠ERK1/2-CREB信号通路的影响

[目的]探讨四逆散对心理应激肝郁证模型大鼠应激相关激素、神经递质及海马和下丘脑部位细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK)1/2-c AMP反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响。[方法]采用慢性束缚制动结合孤养的方法制备心理应激肝郁证大鼠模型,根据大鼠一般状态、体质量增长情况、高架十字迷宫实验验证模型成功。将120只大鼠随机分为正常对照组、模型空白组、模型+四逆散组(四逆散组)、模型+艾司唑仑组(艾司唑仑组),各30只。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血浆及脑脊液促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)的含量,半定量PCR法检测大鼠海马和下丘脑部位丝裂原活化蛋白激酶激酶1/2(MEK1/2)、ERK1/2、CREB、c-fos m RNA的表达,蛋白印迹(Western blot)法检测大鼠海马和下丘脑部位磷酸化(p-)MEK1/2、p-ERK1/2、p-CREB、c-fos蛋白的表达。[结果]与正常对照组比较,模型空白组大鼠血浆和脑脊液中CRH、ACTH、E、NE的含量明显增加(P0.05),5-HT的含量明显减少(P0.05),海马和下丘脑部位MEK1/2、ERK1/2、CREB m RNA及p-MEK1/2、p-ERK1/2、p-CREB蛋白的表达明显降低(P0.05)。与模型空白组比较,四逆散和艾司唑仑均可降低血浆和脑脊液中CRH、ACTH、E、NE的水平(P0.05),升高5-HT的水平(P0.05),上调海马和下丘脑部位MEK1/2、ERK1/2、CREB m RNA及p-MEK1/2、p-ERK1/2、p-CREB蛋白的表达(P0.05)。各组之间大鼠海马和下丘脑部位c-fos m RNA和蛋白质的表达差异无统计学意义(P0.05)。[结论]四逆散能降低心理应激肝郁证模型大鼠血浆和脑脊液CRH、ACTH、E、NE的水平,增加5-HT的含量,提高应激反应能力,其机制可能与上调ERK1/2-CREB信号通路活动有关。     

三七总皂苷对慢性肾衰竭大鼠AngⅡ/AT1R/ERK1/2 信号通路的 影响

目的研究三七总皂苷（PNS）对腺嘌呤诱导的慢性肾衰竭（CRF）大鼠AngⅡ/AT1R/ERK1/2 信号通路的影 响,探讨其延缓慢性肾衰竭进展的作用机制。方法将65 只雄性SD 大鼠随机分为正常组10 只、造模组 55 只,正常组常规饲养,造模组采用250 mg·kg-1·d-1 腺嘌呤混悬液连续灌胃28 d 复制CRF 大鼠模型。将造模 成功大鼠随机分为模型组、贝那普利组（10 mg·kg-1）及PNS 低、中、高（40、80、160 mg·kg-1）剂量组,灌胃给 药,每日1 次,连续28 d。检测大鼠24 h 尿蛋白（24 h U-pro）及血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）的含量;采用 HE 染色法观察肾组织病理形态,Masson 染色法观察肾间质纤维化程度;采用ELISA 法检测血清及肾组织匀浆 中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、血清中胱抑素C（Cys-C）的含量;采用Western Blot 法分析肾组织中血管紧张素Ⅱ受 体Ⅰ型（AT1R）、细胞外调节激酶（ERK1/2）、磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）蛋白表达情况;Real-time PCR 法检测 肾组织中AngⅡ、AT1R、结缔组织生长因子（CTGF）mRNA 的表达;免疫组化法检测肾组织中AT1R 蛋白的表 达。结果与正常组比较,模型组大鼠的24 h U-pro、Scr、BUN、Cys-C 水平显著升高（P < 0.01）,血清、肾 组织匀浆中的AngⅡ含量明显增加（P < 0.01）,肾组织中的AngⅡ、AT1R、CTGF mRNA 表达均明显上调（P < 0.01）,AT1R、p-ERK1/2 蛋白表达均明显上调（P < 0.01）。与模型组比较,给药组大鼠的Scr、BUN、24 h U-pro 及Cys-C 水平均明显降低（P < 0.05,P < 0.01）,血清、肾组织中的AngⅡ含量均明显降低（P < 0.05,P < 0.01）,肾组织中的AngⅡ、AT1R、CTGF mRNA 表达均明显下调（P < 0.05,P < 0.01）,AT1R、p-ERK1/2 蛋 白表达均明显下调（P < 0.05,P < 0.01）。结论三七总皂苷可改善CRF 模型大鼠的肾功能和肾脏的病理学改 变,其机制可能与调控Ang Ⅱ/AT1R/ERK1/2 信号通路有关。     

乌头汤对CIA大鼠MCP-1/CCR2/ERK1/2信号的作用

目的:研究乌头汤对胶原诱导关节炎大鼠体内MCP-1/CCR2/ERK1/2信号的影响。方法:50只SD大鼠,随机选10只为正常组,剩下40只造胶原诱导关节炎模型,造模成功后随机分成模型组、乌头汤低剂量组(3.75 g·kg~(-1)·d~(-1))、乌头汤高剂量组(7.5 g·kg~(-1)·d~(-1))和甲氨蝶呤组(1 mg·kg~(-1)·w~(-1)),灌胃给药28 d后取材。采用ELISA法检测大鼠血清中单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)的含量,免疫组织化学法检测大鼠踝关节中MCP-1的表达水平,利用Western Blotting检测大鼠踝关节中CC趋化因子受体2(CC chemokine receptor 2,CCR2)和细胞外信号调节激酶1/2(extracellular-signal-regulated kinases 1/2,ERK1/2)及其磷酸化形式的表达水平。结果:乌头汤能显著降低胶原诱导关节炎大鼠血清及踝关节中MCP-1的含量,同时能够显著降低模型大鼠踝关节中CCR2的含量及ERK1/2的磷酸化水平,但对总的ERK1/2没有明显影响。结论:乌头汤具有下调胶原诱导关节炎大鼠体内MCP-1/CCR2/ERK1/2信号的作用。     

斑蝥素酸镁通过ERK1/2信号通路对肝癌细胞增殖的抑制作用

目的 探讨斑蝥素酸镁抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖及其裸鼠皮下移植瘤生长的作用。方法 体内外实验随机分为空白对照组、斑蝥素酸镁组、ERK1/2激动剂组(EGF组)、ERK1/2抑制剂组(SCH772984组)、斑蝥素酸镁+EGF组、斑蝥素酸镁+SCH772984组。CCK-8法、流式细胞术分别检测各组细胞增殖、周期及凋亡变化,Western blot法检测各组细胞周期蛋白(Cdc25C、Cdc2、p-Cdc2)、ERK1/2蛋白磷酸化表达及凋亡蛋白(Bad、cleaved caspase-3和Bcl-2)表达;观察各组裸鼠皮下移植瘤的生长及质量变化,Western blot法检测裸鼠移植瘤组织中增殖细胞核抗原(PCNA)表达及裸鼠移植瘤组织ERK1/2蛋白磷酸化表达。结果 斑蝥素酸镁+EGF组、斑蝥素酸镁+SCH772984组SMMC-7721细胞增殖率、p-ERK1/2、Cdc25C、Cdc2、Bcl-2蛋白表达分别低于EGF组、SCH772984组(P<0.01),而G₂/M期细胞比例、凋亡率、p-Cdc2、Bad、cleaved caspase-...     

芪附汤调节ERK1/2信号通路改善UUO阳虚证模型肾间质纤维化的作用和机制

目的:探讨芪附汤改善阳虚证模型鼠肾间质纤维化(RIF)的作用和机制。方法:将大鼠随机分为假手术组(A组)、模型组(B组)、芪附汤组(C组)、依那普利组(D组)。通过腺嘌呤灌胃联合单侧输尿管接扎术(UUO)的方法而建立RIF模型。造模成功后,C,D组大鼠分别经灌胃给予芪附汤水煎液或依那普利悬浊液;其余2组大鼠经灌胃给予蒸馏水,共干预3周。各在药物和蒸馏水干预前和干预后第1,2,3周末,分别称量大鼠体重,并检测24 h尿蛋白排泄量(Upro)、尿β2-微球蛋白(Uβ2-MG)、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(NAG)酶。药物干预第3周末,处死全部大鼠,抽取血液,摘除左肾,称重,并留取相应标本,观察肾脏外观和肾小管/间质形态;检测血清环磷酸腺苷(c AMP)、环磷酸鸟苷(c GMP)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)和尿酸(UA);检测肾组织中上皮型黏钙蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、细胞外调节激酶(ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白相对表达量。结果:芪附汤可以改善模型鼠血清中降低的c AMP和c AMP/c GMP;减少模型鼠升高的Uβ2-MG、尿NAG酶,改善肾间质细胞外基质及其胶原沉积,上调肾组织E-cadherin蛋白表达,下调肾组织α-SMA,TGF-β1,CTGF,p-ERK1/2蛋白表达;但是,对Scr,BUN,UA没有影响。芪附汤改善RIF的作用优于依那普利。结论:芪附汤可以改善模型鼠阳虚证指标以及尿β2-MG、尿NAG酶排泄,它可能是通过上调肾组织E-cadherin蛋白表达,下调肾组织α-SMA,TGF-β1,CTGF以及ERK1/2信号通路中关键信号分子——p-ERK1/2蛋白表达,改善肾小管EMT,从而减轻RIF。     

山茱萸提取物对慢性肾功能衰竭大鼠的肾保护作用及对oxidase/ROS/ERK信号通路的影响

目的:探讨山茱萸提取物对慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠的肾保护作用及对氧化酶(oxidase)/活性氧(ROS)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的影响。方法:将40只雄性SD大鼠分为正常组、模型组、阳性药组和山茱萸组,每组10只。除正常组外,其余各组按0.25 g/(kg·d)的剂量灌胃腺嘌呤溶液,连续给予21 d制备CRF模型。模型制备成功后,阳性药组按0.75 g/(kg·d)的剂量给予黄葵胶囊,山茱萸组按0.60 g/(kg·d)的剂量给予山茱萸提取物,正常组和模型组给予等量生理盐水,持续28 d。对肾组织进行病理学检查及评分,同时检测肾功能指标、血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量及肾脏中相关蛋白的含量。结果:正常组大鼠肾脏病理未观察到损伤迹象;模型组出现弥漫肾小球和肾小管萎缩、炎性细胞浸润和间质纤维化等病变;阳性药组肾小球和肾小管萎缩、炎性细胞浸润和间质纤维化等病变较模型组减轻;山茱萸组肾小球和肾小管萎缩、炎性细胞浸润和间质纤维化等病变程度介于模型组和阳性药组之间。与正常组比较,模型组炎症评分、纤维化评分及尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、...     

补阳还五汤大鼠含药血清对肺成纤维细胞TGF-β1/Smad/ERK信号通路的影响

目的:观察补阳还五汤大鼠含药血清对博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠肺成纤维细胞中Smad3、Smad4、ERK1/2、p-ERK表达的影响。方法:含药血清的制备:24只SPF级SD大鼠,雄性,随机分为3组,即补阳还五汤水煎液组(简称补阳还五汤组,1 g生药/m L),强的松水溶液组(简称阳性组,5 mg/m L)和生理盐水组(简称模型组),每组8只,补阳还五汤组以9.24 g/(kg·d)(临床等效剂量)进行灌胃,阳性组及模型组以1 m L/100 g灌服相应溶液,1次/d,连续灌服7 d,采血前禁食12 h,于末次灌胃1 h后,腹主动脉取血,离心后分离血清,将收集到的补阳还五汤含药血清配制成含药血清浓度分别为5%、10%、20%的培养液备用;体外培养的肺成纤维细胞,分别加入含5%、10%、20%浓度的补阳还五汤药物血清干预,72 h后收集细胞及上清,采用Western blot检测细胞中Smad3、Smad4、ERK1/2、p-ERK蛋白的表达。结果:与模型组比较,20%含药血清组肺成纤维细胞中Smad3蛋白的表达显著减少(P<0.05),阳性组,10%和5%含药血清组Smad3蛋白表达有减少趋势;阳性组和不同浓度含药血清组肺成纤维细胞中Smad4蛋白表达有减少趋势;20%含药血清组肺成纤维细胞中ERK1/2蛋白有显著减少(P<0.05),阳性组,10%和5%补阳还五汤含药血清组肺成纤维细胞中ERK1/2蛋白有减少趋势;阳性组和不同浓度补阳还五汤含药血清组肺成纤维细胞中p-ERK蛋白均有减少趋势。结论:20%补阳还五汤含药血清能够有效抑制TGF-β1/Smad/ERK信号通路中关键细胞因子Smad3、ERK1/2蛋白的表达,从而发挥较好的抗肺纤维化作用。     

绿原酸对心肌细胞炎症反应和MEK/ERK信号通路的影响

目的:探讨绿原酸对心肌细胞炎症反应和MEK/ERK信号通路的影响。方法:常规培养心肌细胞,利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导细胞炎症模型,将细胞分为正常对照组、LPS诱导组、LPS+50μg/m L绿原酸组、LPS+100μg/m L绿原酸组、LPS+200μg/m L绿原酸组;采用CCK8试验分析绿原酸对心肌细胞相对存活率的影响,流式细胞术检测绿原酸对心肌细胞凋亡的影响,ELISA法分析绿原酸对心肌细胞炎症反应的影响,免疫印迹法探讨绿原酸对心肌细胞MEK/ERK信号通路活化的影响。结果:LPS诱导组心肌细胞凋亡率为(52.3±4.2)%,高于正常对照组的(4.6±0.7)%;LPS诱导组炎症因子白细胞介素6(IL-6)为(1702±287)pg/mL,高于正常对照组的(529±102)pg/mL;LPS诱导组肿瘤坏死因子α(TNF-α)为(198±24)pg/mL,高于正常对照组的(81±13)pg/mL;LPS诱导组较正常对照组MEK及p-ERK蛋白表达水平显著上调(P0.05)。与LPS诱导组相比,绿原酸可以提高细胞的存活率、抑制其凋亡、降低炎症因子IL-6和TNF-α的释放、抑制MEK/p-ERK蛋白的表达,相对于LPS诱导组差异均有统计学意义(P0.05)。结论:绿原酸可降低LPS诱导的心肌细胞炎症反应,其机制可能与抑制MEK/ERK信号通路活化有关。     

扶阳强心方通过调节ERK1/2信号通路改善CHF血流动力参数

目的:研究扶阳强心方对兔CHF模型血流动力学变化和ERK1/2信号通路调节的影响。方法:将新西兰大白兔40只随机等分为耳缘注射阿霉素并扶阳强心方组(A)、耳缘注射阿霉素并地高辛组(B)、耳缘注射阿霉素组(C)、正常对照组(D)共4组,A、B、C组采用注射阿霉素的方法构建CHF模型,D组不做任何处理。造模后第14天开始给药,A组用扶阳强心方中药浸膏溶液(12 m L·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,B组用地高辛(1.25μg·m L~(-1)·d~(-1))灌胃,C、D组分别给予等量生理盐水灌胃。以上各组连续灌胃30 d后行超声心动图观察其血流动力学变化,苏木素-伊红(HE)染色观察各组组织形态学差异,RT-PCR与Western blot分别检测ERK1/2mRNA和蛋白表达。结果:与C组相比较,A和B组LVSD、LVDD明显降低(P0.05),LVFS、LVEF显著升高(P0.05)。HE染色显示A、B两组心肌纤维化程度有所改善,并且两组改善情况相似。RT-PCR检测:与D组比较,A、B、C3组兔心肌组织ERK1/2 mRNA表达明显升高(P0.05);治疗后,与C组比较,A组ERK1/2 mRNA表达均明显下调(P0.05),B组ERK1 mRNA表达显著下调(P0.05)。与B组比较,A组ERK1/2 mRNA表达差异无统计学意义(P0.05)。与C组比较,A、B两组ERK1/2蛋白表达显著减少(P0.05)。结论:扶阳强心方能明显改善兔CHF兔血流动力学参数,其机制可能是通过调控CHF模型兔心肌组织内ERK1/2信号通路,影响ERK1/2信号通路的活化而改善血流动力学参数。     

紫草素通过调节ERK信号通路对子宫肌瘤大鼠的影响

目的 探讨紫草素对子宫肌瘤大鼠的作用及其分子机制。方法 SPF级别SD大鼠60只,雌性,体质量200~250 g,随机分为空白组、模型组、紫草素低、中、高剂量组（5,10,20 mg·kg^-1）和米非司酮组;建立子宫肌瘤大鼠模型,连续给药4周后检测子宫湿重、子宫系数和平滑肌厚度的变化;采用苏木素-伊红（HE）染色观察子宫组织的病理染色变化;采用酶联免疫吸附测定试验（ELISA）检测血清和子宫中雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）的含量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测子宫组织中ER,PR,磷酸化细胞外调节激酶（p-ERK）和ERK的蛋白水平。结果 与空白组比较,模型组大鼠的子宫湿重、子宫系数和平滑肌厚度显著升高（P<0.01）;子宫发生畸变,平滑肌细胞局灶性坏死和增生,且伴有中性粒细胞浸润等病理变化;血清ER和PR含量显著升高（P<0.01）;子宫组织ER,PR和p-ERK的蛋白表达升高（P<0.01）。与模型组比较,紫草素中剂量组、高剂量组和米非司酮组大鼠的子宫湿重、子宫系数和平滑肌厚度显著降低（P<0.01）;子宫病理变化缓解,且血清ER和PR含量降低,子宫组织ER,PR和p-ERK的蛋白表达降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。紫草素低剂量组较模型组大鼠子宫湿重、平滑肌层厚度、血清中ER水平,子宫组织PR和p-ERK蛋白表达水平明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。结论 紫草素可能通过抑制ERK信号活化,从而产生抗子宫肌瘤活性。     

温经通络汤对膝骨关节炎模型小鼠VEGF/VEGFR2/ERK1/2信号通路的影响

目的 探讨温经通络汤改善膝骨关节炎关节（KOA）软骨缺损,延缓关节退变的可能作用机制。方法 采用前交叉韧带切除术（ACLT法）建立KOA模型,实验分为假手术组、模型组、温经通络汤组（高、低剂量）和阳性药组。造模4周后中药组分别予以高、低剂量（80,20 g·kg^-1）的温经通络汤灌胃;阳性药组予以硫酸氨基葡萄糖胶囊（0.29 g·kg^-1）;假手术组与模型组均予等体积生理盐水灌胃。连续干预4周后苏木素-伊红（HE）染色观察软骨组织形态学变化并进行Mankin''s评分;蛋白免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测血管内皮生长因子A（VEGFA）,血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）,细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）和血小板反应蛋白解整合素金属肽酶4（ADAMTS4）蛋白和mRNA的表达。结果 HE染色结果显示与假手术组比较,模型组小鼠Mankin''s评分显著升高（P<0.01）;与模型组比较,药物组均能明显改善造模引起的关节软骨面缺损,Mankin''s评分均有显著降低（P<0.01）,但各给药组间差异无有统计学意义。与假手术组比较,模型组VEGFA,VEGFR2,ERK1/2和ADAMTS4蛋白和mRNA的表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较,各给药组可以显著抑制VEGFA和ERK1/2的蛋白表达（P<0.01）,硫酸氨基葡萄糖胶囊组效果要优于温经通络汤低剂量组（P<0.05）,但弱于温经通络汤高剂量组（P<0.01）;硫酸氨基葡萄糖胶囊组可以抑制VEGFR2和ADAMTS4的蛋白表达,作用与温经通络汤低剂量组相当,作用均弱于温经通络汤高剂量组（P<0.05）。结论 温经通络汤可以改善KOA小鼠关节软骨损伤,其作用机制可能与VEGF/VEGFR2/ERK1/2信号通路有关。     

基于Nrf2/Keap1/p62信号通路探讨百合固金汤对LPS诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用

目的:探究百合固金汤对脂多糖诱导的急性肺损伤(LPS-ALI)小鼠的预防作用及其机制。方法:将KM小鼠随机分为5组:空白组,模型组,地塞米松组(0. 002 g·kg~(-1)),百合固金汤组(0. 417,1. 25 g·kg~(-1))。除空白组外,其余各组采用LPS诱导小鼠ALI模型。给药组分别在造模前的第1～7天连续灌胃给药7 d。在造模后6 h取小鼠肺组织,测定左肺湿/干质量比(W/D);收集小鼠血清检测超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),活性氧(ROS),一氧化氮(NO)的水平;应用苏木素-伊红(HE)染色方法观察肺组织病理改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织中核转录因子E2相关因子2(Nrf2),Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Keap1),p62以及自噬相关蛋白(LC3)Ⅱ蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠W/D显著升高(P 0. 01),血清中MDA水平显著性升高(P 0. 01),SOD显著降低(P 0. 01),肺组织病变严重,并显著降低肺组织Nrf2,Keap1,升高p62,LC3Ⅱ的蛋白表达(P 0. 01)。与模型组比较,地塞米松组、百合固金汤1. 25 g·kg~(-1)组W/D显著降低(P 0. 01);百合固金汤1. 25 g·kg~(-1)组及地塞米松组,能够明显抑制血清中MDA的水平(P 0. 05,P 0. 01),升高SOD(P 0. 05,P 0. 01)水平,地塞米松组及百合固金汤各剂量组对小鼠肺组织病变较模型组有不同程度的改善,且显著性升高肺组织Nrf2,Keap1,降低p62及LC3Ⅱ的蛋白表达(P 0. 05,P 0. 01),但百合固金汤各剂量组对LC3Ⅱ无影响。结论:百合固金汤对LPS-ALI小鼠具有明显的预防作用,其机制可能与调控Nrf2/Keap1/自噬反馈回路有关。     

Rac1通过调控JAK2/STAT1信号通路参与神经炎症

目的 研究BV2小胶质细胞上Ras相关C3肉毒菌素物底物1(ras-related C3 botulinum toxin,Rac1)参与神经炎症的作用.方法 采用脂多糖(lipopcly saccharide,LPS)诱导BV2小胶质细胞,加入Rac1抑制剂EHT1864,用MTT法检测细胞活力;G-LISA和免疫荧光...     

基于Hedgehog信号通路探析白头翁汤抗结直肠癌HCT116细胞机制

目的：探讨白头翁汤水煎液通过调控经典Hedgehog(Hh)信号通路诱导人结直肠癌细胞HCT116凋亡的作用及其机制。方法：用白头翁汤(25、50、100、200、500、750、1 000 mg·L^-1)处理HCT116细胞24 h,然后用噻唑蓝(MTT)比色法检测白头翁汤对细胞增殖的影响;分别设置空白组、白头翁汤组(125、250、500 mg·L^-1)和五氟尿嘧啶(5-FU)组(40 mmol·L^-1),显微镜观察细胞给药前后形态变化;划痕实验检测白头翁汤对细胞迁移的影响;Hoechest 33324/碘化丙锭(PI)染色法评价白头翁汤对细胞凋亡的影响;流式细胞术检测白头翁汤对HCT116细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞凋亡相关B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平及Hh信号通路关键因子音猬因子(SHh)、GLI家族锌指蛋白1(Gli1)、G蛋白偶联受体蛋白Smoothened(Smo)、苏氨酸蛋白激酶Fused抑制因子(SuFu)、c-核蛋白类基...     

吴茱萸碱调节SphK1/S1P信号通路对慢性肾衰竭大鼠肾纤维化的影响

【目的】探讨吴茱萸碱调节鞘氨醇激酶1 （SphK1） /S1P信号通路对慢性肾衰竭 （CRF） 大鼠肾纤维化的影响。 【方法】通过 饲喂0.5%腺嘌呤饲料建立CRF大鼠模型。将造模后的大鼠随机分为模型组,吴茱萸碱低、高剂量组,尿毒清颗粒组及吴茱萸 碱高剂量+K6PC-5 （SphK1激活剂） 组,另设正常组。干预结束,检测24 h尿蛋白 （24 h-UTP） 及血清尿素氮 （BUN） 、血清肌酐 （SCr） 水平,酶联免疫吸附分析 （ELISA） 检测大鼠血清中单核细胞趋化因子1 （MCP-1） 、白细胞介素6 （IL-6） 水平,苏木素-伊 红 （HE） 染色法、Masson染色法观察肾组织病理学变化并计算胶原容积分数 （CVF） ,实时定量聚合酶链反应 （qRT-PCR） 法 检测肾组织中转化生长因子β1 （TGF-β1） 、Ⅳ型胶原 （COL-Ⅳ） mRNA表达,Western Blot法检测肾组织中SphK1、S1P蛋白 表达。 【结果】与正常组比较,模型组肾组织出现明显炎性浸润及胶原纤维沉积,肾小球数量减少,SCr、BUN、24 h-UTP, IL-6、MCP-1,CVF,TGF-β1、COL-Ⅳ mRNA,SphK1、S1P表达水平显著增加 （P＜0.05） ;与模型组比较,吴茱萸碱低、 高剂量组及尿毒清颗粒组肾组织病理改变得到改善,SCr、BUN、24 h-UTP,IL-6、MCP-1,CVF,TGF-β1、COL-Ⅳ mRNA,SphK1、S1P表达水平显著降低 （P＜0.05） ;各指标组间比较,吴茱萸碱低剂量组与吴茱萸碱高剂量组差异有统计学 意义 （P＜0.05） ,吴茱萸碱高剂量组与尿毒清颗粒差异无统计学意义 （P＞0.05） ;与吴茱萸碱高剂量组比较,吴茱萸碱高剂量 +K6PC-5组肾组织病理改变进一步加重,各指标的改善作用均被逆转 （P＜0.05） 。 【结论】吴茱萸碱可通过抑制SphK1/S1P信 号通路改善CRF大鼠肾纤维化。     

熊胆粉通过调节Keap1/Nrf2/ARE信号通路产生对急性酒精性肝损伤小鼠的肝保护作用＊

目的 观察研究熊胆粉（Pulvis Fellis Ursi， PFU）对急性酒精性肝损伤小鼠的肝保护作用及其可能的机理。方法 取昆明种小鼠50只，随机分为正常组、模型组、PFU低、中、高剂量组（剂量分别为150、300、600 mg·kg^-1，溶于生理盐水），每组10只。正常组和模型组小鼠每天灌胃生理盐水（10 mL·kg^-1），PFU组每天灌胃相应剂量溶液，连续8天。末次给药结束后，模型组以灌胃的方法给予50%乙醇溶液（10 mL·kg^-1），每12 h一次，共6次，末次给予50%乙醇溶液4 h后，处死小鼠并收集血清及肝脏组织。分别用生化试剂盒检测血清中ALT、AST、TG、TC和肝脏组织中GSH、T-SOD和MDA水平；用酶联免疫法检测肝脏组织TNF-α、IL-1β和IL-6水平；用HE染色法观察肝脏组织显微结构变化情况；用免疫印迹法检测肝组织总Keap1的表达和肝组织核内Nrf2的表达，用免疫印迹和免疫组化法分别检测肝组织总HO-1和GCLC蛋白的表达。结果 PFU能显著下调乙醇所致肝损伤小鼠血清中ALT、AST、TG和TC的异常升高，并改善乙醇诱导的肝脏显微结构变化。与肝损伤模型组比较，PFU组小鼠肝组织内MDA水平明显降低，GSH和T-SOD水平则明显增加。进一步研究表明，乙醇能诱导小鼠肝脏内炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的上调，PFU可以剂量依赖性地缓解了上述病变。并且PFU预处理组下调了Nrf2的抑制因子Keap1的表达，从而促进了Nrf2蛋白的入核并上调了乙醇抑制的下游蛋白HO-1和GCLC的表达，从而发挥肝保护的作用。结论 熊胆粉对小鼠急性酒精性肝损伤有一定的预保护作用，其机制可能与调控肝脏内Keap1/Nrf2/ARE信号通路，恢复并上调由乙醇所破坏的肝脏氧化平衡有关。     

裘氏内异方对子宫腺肌病模型小鼠MAPK/ERK1/2信号通路的影响及机制研究

目的：探讨裘氏内异方对子宫腺肌病模型小鼠丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶1/2 (MAPK/ERK1/2)信号通路的影响及作用机制。方法：将60只8周龄未孕ICR雌性小鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组(3.60 g/kg孕三烯酮)和中药低、中、高剂量组(1.80、3.60、7.20 g/kg裘氏内异方)各10只。采用子宫内膜组织形态学评分评估各组小鼠子宫内膜组织形态学病理改变;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组小鼠子宫组织雌激素(E₂)、雌激素受体(ER)、细胞凋亡相关蛋白[半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Bcl相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2 (bcl-2)]表达水平;Western Blot法检测各组小鼠子宫组织丝裂原激活化蛋白激酶(MEK-2)、细胞外调节蛋白激酶1/2 (ERK1/2)、核转录因子(NF-κB)、原癌基因(c-jun)、即早基因(c-fos)蛋白表达。结果：与假手术组比较,模型组小鼠子宫内膜组织形态评分升高(P<0.05);与模型组比较,中药低、中、高剂量组小鼠和阳性对照组小鼠的子宫内膜组织形态学评分均降低...     

中药复方通脉口服液对IL-1β诱导肾小球系膜细胞ERK通路活化的影响

目的:探讨中药复方"通脉口服液"对IL-1β诱导肾小球系膜细胞ERK通路活化的影响,进一步揭示中药复方"通脉口服液"抑制系膜细胞增生、延缓肾纤维化的可能机制。方法:应用细胞培养技术,进行肾小球系膜细胞的培养,采用血清药理学方法,制备中药复方"通脉口服液"、黄芪、三七药物血清,分别用IL-1β(终浓度1μg/L)刺激系膜细胞5、15、30min后,Western印迹法测定细胞外调节激酶(ERK)1/2的表达。分别加入10%中药复方"通脉口服液"、10%黄芪药物血清、10%三七药物血清以及特异性络氨酸激酶抑制剂genistein(10μg/mL)预处理12h后,观察磷酸化细胞外调节激酶(ERK)1/2的表达情况。结果:IL-1β刺激下,ERK活化在5min时出现高峰,后逐渐减弱,genistein预处理12h后,ERK活化延迟到30min时才出现。通脉、黄芪含药血清预处理12h后均可使IL-1 beta刺激下ERK活化延迟到15min时出现,30min时增强,且峰值较前减弱。三七含药血清预处理12h后在3个观察时间点上(5min、15min、30min)均未出现磷酸化。通脉、黄芪、三七含药血清与genistein联合使用后在3个观察时间点上(5min、15min、30min)均未观察到ERK的磷酸化。结论:中药复方"通脉口服液"、黄芪、三七含药血清对ERK的磷酸化均有一定的阻断作用,与genistein合用可增强这一阻断作用。组间相比较结果显示三七组作用要优于黄芪组,提示在抑制ERK的磷酸化作用方面,活血类中药作用可能要优于益气类中药;中药复方"通脉口服液"抑制系膜细胞增生、延缓肾纤维化的可能机制为抑制ERK抗体的磷酸化。