从膀胱癌尿脱落细胞中提取RNA进行RT—CPR的研究

目的：建立从膀胱癌尿液脱落细胞中提取ＲＮＡ进行ＲＴ－ＰＣＲ研究的实验方法。方法：从２０例膀胱癌患者尿液脱落细胞中提取ＲＮＡ，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增癌细胞中ＣＤ４４基因Ｖ６－Ｖ１１显子序列。结果：１８例尿液标本均可被扩增出所设计的相应片段，并经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交证实。结论：临床上采用此技术可从分子水平上对大批膀胱癌２的癌基因表达产物进行无创伤性检测；为深入研究膀胱癌的发病机制、生物学行为和探     

检测膀胱癌患者尿液脱落细胞中Survivin的表达及意义

目的：探讨检测膀胱癌患者尿液脱落细胞中Survivin的表达及意义。方法：留取40例膀胱移行细胞癌患者、15例其他泌尿系统疾病患者和8例正常健康成人的新鲜尿液，离心收集脱落细胞，以逆转录多聚酶联反应(RT-PCR)检测膀胱癌患者尿液脱落细胞中Survivin的表达．并行尿脱落细胞学检查。结果：40例膀胱移行细胞癌患者尿脱落细胞中有38例检测出Survivin表达，而15例其他泌尿系统疾病患者和8例正常健康成人的尿脱落细胞中均未检测出Survivin的表达。以RT-PCR反应检测膀胱癌患者尿液脱落细胞中Survivin的方法敏感性为95％，特异性为100％。结论：初步的试验结果显示．RTPCR法检测膀胱癌患者尿液脱落细胞中Survivin的方法可以作为诊断膀胱癌的无创性方法。     

膀胱癌患者尿液脱落细胞Livin检测的临床意义

目的探讨膀胱癌患者尿液脱落细胞中Livin的表达及临床意义。方法采用逆转录聚合酶链反应技术（RT-PCR）检测52例膀胱癌患者,18例泌尿外科非肿瘤患者以及10例健康志愿者尿液脱落细胞Livinα和β的表达,以-βactin为内参照。结果52例膀胱癌患者42例尿液脱落细胞Livinα表达阳性,阳性率86.5%,而Livinβ均表达阴性;18例泌尿外科非肿瘤患者及10例健康志愿者Livinα及β均表达阴性。结论检测膀胱癌患者尿液脱落细胞Livinα的表达,敏感性和特异性均较高,可作为临床筛选膀胱癌的理想指标。     

尿液脱落细胞CD44基因拼接变异体对膀胱癌的诊断价值

作者应用逆转录－聚合酶链反应和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交技术对２０例膀胱癌和２０例非癌对照组尿液脱落细胞ＣＤ４４基因拼接变异体进行检测,并与尿细胞学检查结果进行比较。结果显示：９０％的膀胱癌患者尿液脱落细胞均检测到ＣＤ４４基因拼接变异体的过量表达,而２０例非癌对照标本均未检测到这种异常。本技术诊断膀胱癌的敏感性为９０％,较尿细胞学检查的６５％明显提高。提示尿液脱落细胞ＣＤ４４基因拼接变异体是一种很有前途的用于膀胱癌早期无创伤性诊断的新的分子标记物。     

粘蛋白7在膀胱癌尿脱落细胞中的表达及意义

目的:探讨粘蛋白7(mucin7,MUC7)在膀胱移行细胞癌(TCC)诊断中的意义。方法:采用巢式逆转录聚合酶链反应(nested RT-PCR)方法检测MUC7mRNA在TCC患者尿脱落细胞中的表达。结果:68例TCC患者中有42例尿液MUC7表达阳性,敏感性为62%;MUC7表达与临床分期有关而与病理分级无关。对照组25例中有3例在尿液中MUC7为阳性表达,特异性为88%。结论:用RT-PCR的方法检测尿脱落细胞中的MUC7,具有较高的膀胱癌诊断价值。     

膀胱癌新的尿液诊断标记物粘液素7和细胞角蛋白20

为了减少重复使用侵入性的膀胱镜对膀胱癌进行诊断和监测 ,作者对粘液素 7(MUC7)和细胞角蛋白 2 0 (CK 2 0 )作为膀胱癌新的无创性尿液诊断标记物进行了研究。作者收集了经病理证实的膀胱癌患者 5 0例 (pTaN0 M0 G3 19例 ,pTisN0 M0 G3 ～pT4N1M1G3 31例 )、尿结石患者 2 0例、尿路感染患者 2 0例、其他泌尿系肿瘤患者 2 0例和 2 0例健康志愿者的尿液标本。使用巢式RT PCR技术检测从 2 0 0ml尿液中收集的脱落细胞里提取的RNA。 4个膀胱癌细胞系 (分级分别为G1、G2 、G3 、G4)作为阳性对照。另检测了 10例手术患者的正常膀胱上皮…     

尿脱落细胞Cox-2mRNA检测在膀胱癌诊断中的价值

目的探讨尿脱落细胞Cox-2基因检测在膀胱癌诊断中的价值.方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量法检测31例膀胱癌患者、42例泌尿系良性疾病患者和8例健康志愿者清晨中、后段尿脱落细胞Cox-2mRNA的表达,并与尿脱落细胞学检查相对照.结果用RT-PCR法检测尿脱落细胞Cox-2 mRNA用于诊断膀胱癌的特异性为72.1%,低于尿脱落细胞学检测(100%)(P ＜0.05),但敏感性为100%,高于尿脱落细胞学检测(64.5%)(P＜0.01).;表达Cox-2 mRNA的部分膀胱良性疾病患者,其强度与G1膀胱癌患者之间的差异无统计学意义(P＞0.05),但与G2、G3膀胱癌患者之间的差异有统计学意义(P＜0.05);膀胱癌患者尿脱落细胞Cox-2mRNA的表达强度随膀胱癌分级的增高而升高(P＜0.05);浸润性膀胱癌患者表达Cox-2的强度高于浅表性膀胱癌患者(P＜0.01).结论采用RT-PCR法检测尿脱落细胞Cox-2mRNA的表达可作为膀胱癌早期诊断、复发监测的一项极其灵敏的方法,并有助于肿瘤分级分期的判断.     

激光捕获显微切割结合RNA线性扩增技术在膀胱移行细胞癌相关基因研究中的应用

目的 当对有问质细胞混杂的膀胱移行上皮细胞与癌细胞进行基因差异表达分析时，激光捕获显微切割技术(LCM)是不可缺少的。LCM与RNA线性扩增结合，目的是确定一条可行的技术路线，获取均质的、足量的RNA，以备进一步用于膀胱癌相关基因研究。方法 采用LCM技术分别从正常膀胱黏膜及膀胱癌组织冰冻切片中获取膀胱移行上皮细胞及癌细胞，提取RNA，并对120ng上皮细胞RNA进行线性扩增，获得aRNA 20μg。用逆转录．聚合酶链反应(RT-PCR)验证扩增前、后RNA中β-actin基因表达水平。结果对照实验Ⅰ证实LCM后RNA完整性较好；产物RNA扩增后获得片段大小为0．5～2．5kb的水NA，且β-actin表达完整。结论 LCM结合RNA线性扩增技术获取均一的、足量的、完整性好的目的细胞RNA．能用干讲一步研究．     

膀胱癌尿脱落细胞端粒酶活性检测及其临床意义

目的检测尿脱落细胞端粒酶活性并探讨其临床意义。方法应用改良的端粒重复序列扩增（ＴＲＡＰ）银染方法,分别对膀胱癌组织、正常膀胱组织,以及膀胱癌患者和非尿路上皮肿瘤患者的尿脱落细胞、膀胱冲洗液进行端粒酶活性检测。结果１２例正常膀胱组织均无端粒酶活性,４８例膀胱癌组织中４４例（９１．７％）端粒酶阳性。膀胱癌患者尿液及膀胱冲洗液中脱落细胞端粒酶阳性率分别为８３．３％（４０／４８）和８７．５％（４２／４８）。１２例分化良好（Ｇ１级）膀胱癌患者中,尿液和膀胱冲洗液中脱落细胞端粒酶阳性率分别为７５．０％（９／１２）和８３．３％（１０／１２）。结论尿脱落细胞端粒酶活性检测敏感性高,可用于膀胱癌的早期诊断和术后随访。     

尿脱落细胞增殖细胞核抗原mRNA检测在膀胱癌诊断中的应用价值

目的探讨尿脱落细胞增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA检测在膀胱癌诊断中的应用价值。方法收集32例膀胱癌、52例泌尿系统良性疾病患者和10例健康志愿者清晨中、后段尿液,采用RT-PCR法检测尿脱落细胞PCNAmRNA表达,并与尿脱落细胞学检查结果比较。结果PCNAmRNA诊断膀胱癌的特异性为64%,低于尿脱落细胞学检测的88%(P<0.05),敏感性为100%,高于尿脱落细胞学检测的69%(P<0.01)。膀胱良性疾病患者、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级膀胱癌患者尿脱落细胞PCNAmRNA表达强度分别为0.5128±0.0307、0.5153±0.0402、0.6560±0.0626、0.8657±0.0266。膀胱良性疾病患者与Ⅰ级膀胱癌患者间差异无统计学意义,与Ⅱ、Ⅲ级膀胱癌患者间差异有统计学意义(P<0.05)。膀胱癌患者尿脱落细胞PCNAmRNA表达强度随膀胱癌分级增加而升高(P<0.05)。浸润性膀胱癌患者尿脱落细胞PCNAmRNA表达强度高于浅表性膀胱癌患者(P<0.01),分别为0.8040±0.0807、0.5595±0.0447。结论尿脱落细胞PCNAmRNA检测在膀胱癌早期诊断、常规筛查以及术后复发监测中具有潜在的应用价值。     

尿脱落细胞CD44基因变异表达产物对膀胱癌诊断价值的研究

应用逆转录－聚合酶链反应和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交技术对３０例尿液标本脱落细胞ＣＤ４４基因含Ｖ６外显子的表达产物进行检测，并与尿细胞检查结果进行比较。结果显示：９０％的膀胱癌尿脱落细胞均检测到ＣＤ４４基因含Ｖ６外显子的拼接变异转录物的过量表达；     

人膀胱移行细胞癌T24细胞中CK20 mRNA表达检测方法的建立

目的 建立巢式RT-PCR方法检测人膀胱移行细胞癌124细胞中CK20 mRNA表达进行分析的实验方法.方法 培养人膀胱移行细胞癌124细胞,利用普通RT-PCR及巢式RT-PCR方法分别检测其CK20mRNA的表达.结果 1.5%琼脂糖凝胶电泳发现普通RT-PCR及巢式RT-PCR结果均出现与预期结果一致的阳性条带.结论 巢式RT-PCR方法检测人膀胱移行细胞癌T24细胞中有CK20 mR-NA的表达.为进一步利用巢式RT-PCR方法研究临床膀胱移行细胞癌患者尿脱落细胞及肿瘤组织中CK20 mRNA的表达、提高检测敏感性及可靠性打下基础.为膀胱癌早期诊断和术后监测提供一种新的有效手段.     

尿脱落细胞CK20检测在膀胱癌诊断中的价值

目的:检测膀胱癌患者尿脱落细胞细胞角蛋白20(CK20)表达情况并探讨其在膀胱癌诊断中的价值。方法:应用RT-PCR方法分别检测35例膀胱癌患者、8例泌尿生殖系良性疾病患者及4例健康自愿者尿脱落细胞CK20表达情况,并与尿脱落细胞学检查结果进行比较。结果:35例膀胱癌患者中有26例的自排尿标本中可检测出CK20(敏感度为74.29％)。尿脱落细胞学检测阳性例数则为12例(敏感度为34.29％)。前者与后者比较差异有显著性意义(P<0.05)。8例泌尿生殖系良性疾病患者及4例健康自愿者的自排尿标本中无一例可检测出CK20(特异性为100％)。不同分化程度及不同临床病理分期膀胱癌患者之间尿脱落细胞(2K20阳性表达率的差异有显著性意义(P<0.05)。结论:尿脱落细胞CK20检测的敏感性及特异性均高,有望成为膀胱癌诊断和术后复发监测的一种有效手段。     

Evaluation of survivin reverse transcriptase-polymerase chain reaction for noninvasive detection of bladder cancer

PURPOSE: Survivin, a member of the inhibitor of apoptosis gene family, is expressed in most common cancers. We investigated the expression pattern of survivin in the tumors of patients with bladder cancer and assessed the diagnostic potential of RT-PCR detection of survivin mRNA in urine. MATERIALS AND METHODS: RT-PCR was used to analyze mRNA expression of survivin in 161 cases of bladder cancer, including TCC in 97, SCC in 53 and adenocarcinoma in 11, and their matched nontumor tissues. Urine specimens (50 ml) were collected from 84 patients in whom bladder cancer was documented by transurethral resection or biopsy, 41 with nonbladder cancer urological diseases and 42 healthy volunteers. Total RNA was extracted from urine sediments and RT-PCR was performed for survivin. RESULTS: Survivin expression was detected in all bladder cancer tissues. In contrast, survivin was not detectable in normal urothelium specimens. Urinary survivin was detected in urine samples from 51 of 53 patients with TCC, 22 of 25 with SCC and 6 of 6 with adenocarcinoma. Overall sensitivity was 94%. Survivin mRNA was not detected in any healthy volunteers. Positive results were obtained in 2 patients with renal cell carcinoma, 1 with hematuria and 1 with a contracted bladder but in none with other urological diseases. Overall specificity was 95%. CONCLUSIONS: Survivin mRNA detection in urine sediment using RT-PCR shows high sensitivity and specificity for bladder cancer. It may prove useful for the routine screening and monitoring of patients.     

膀胱移行细胞癌患者尿脱落细胞中生存素的检测及其意义

目的:探讨膀胱移行细胞癌(TCCB)患者尿脱落细胞生存素(Survivin)蛋白和mRNA表达及其临床意义。方法:采用免疫组化SP法和巢式逆转录聚合酶链反应方法,对TCCB患者32例(TCCB组)、非TCCB16例(对照组)尿脱落细胞Survivin的蛋白和mRNA进行检测,同时行尿脱落细胞学检查。结果:TCCB组尿脱落细胞Survivin的蛋白、mRNA阳性表达率分别为28例(87.5%),32例(100%);对照组仅1例mRNA阳性表达(6.2%)。两组Survivin阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01);尿液中Survivin的敏感性和特异性,分别为87.5%,80%和96.9%,93.8%。而尿脱落细胞阳性率为18例(56.2%),其敏感性和特异性分别为56.2%和100%。结论:尿脱落细胞Survivin检测诊断TCCB的敏感性和特异性均较高,且对患者无创、无痛苦,可作为早期诊断TCCB的敏感指标,其中RT-PCR检测敏感性更高。