委内瑞拉马脑炎病毒基因工程减毒活疫苗：动物模型试验[英]／Pratt WD，Davis NL，Johnston RE，et al ／／Vaccine.

目前的委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)减毒疫苗TC-83和灭活疫苗C-84都尚欠完善，美国陆军医学传染病研究所Pratt等对新型VEEV基因工程减毒活疫苗通过动物模型试验来评价其安全性、免疫性和有效性。     

乙型脑炎减毒活疫苗病毒群体的异质性分析

 目的  通过观察疫苗病毒群体中病毒个体的遗传和生物学特征,分析SA14-14-2株乙型脑炎减毒活疫苗病毒的均一性,为疫苗病毒的遗传稳定性提供实验证据。 方法   对3批疫苗病毒连续进行3次蚀斑纯化后,各挑选8个蚀斑纯化株,扩大培养一代。比较24个病毒纯化株的包膜（envelope,E）蛋白基因序列、单斑培养病毒滴度以及蚀斑特征。 结果   24个纯化株中共有6个病毒株（25%）的E蛋白核苷酸发生变化,其中2株（8.3%）的核苷酸变异导致其编码氨基酸发生改变,这些变异占总核苷酸变异数的28.6%。动物实验表明,这2个纯化株没有引起小鼠神经毒力变化。在所有24个纯化株中,我国2010年版药典规定的影响疫苗病毒遗传稳定性的8个E蛋白关键位点的氨基酸均未发生改变。24个纯化株病毒的蚀斑大小和形态以及单斑培养滴度均无明显差异。 结论   疫苗病毒具有典型的准种群体多样性特征,但在群体病毒中未检测到E蛋白氨基酸位点为野生型病毒位点的个体病毒,因此,疫苗病毒具有很好的减毒群体特征和遗传稳定性。     

狂犬病病毒基因工程活疫苗

作者将源于狂犬病疫苗ＳＡＤＢ1 9的非致病株ＳＮ 1 0的Ｇ基因分别用银麾蝙蝠相关街毒株ＳＨＢＲＶ 1 8及固定毒ＣＶＳ2 4来源的ＣＶＳ Ｎ2ｃ、ＣＶＳ Ｂ2ｃ的Ｇ基因取代 ,产生三种重组病毒Ｒ ＳＨＢ1 8、Ｒ Ｎ2ｃ和Ｒ Ｂ2ｃ。与亲本株相比其毒力显著减弱 ,但Ｒ Ｎ2ｃ和Ｒ Ｂ2ｃ接种小鼠仍有致病性。将其Ｇ蛋白 333位精氨酸突变成谷氨酰胺产生Ｒ Ｎ2ｃ 333和Ｒ Ｂ2ｃ 333,与亲本株相比ＳＮ 1 0 333完全没有致病性 ,Ｒ Ｂ2ｃ 333的毒力剧减 ,而Ｒ Ｎ2ｃ 333的毒力没有改变。进一步将Ｒ Ｎ2ｃ的Ｇ蛋白胞浆区用ＳＨＢ1 8的相应部分取代后产生…     

委内瑞拉马脑炎病毒活疫苗和死疫苗免疫地鼠对气溶胶攻击的防御效果

作者用委内瑞拉马脑炎病毒活疫苗和福尔马林灭活疫苗免疫地鼠,然后用同种病毒进行皮下和气溶胶鼻腔吸入攻击,以比较两种疫苗的保护效果。实验动物为雄性金黄色地鼠(体重90～110g),减毒活疫苗组和灭活疫苗组各14只;同时用10只未经免疫的地鼠作为对照。攻击时每组又分皮下及气溶胶鼻腔吸入两种途径。活疫苗(TC-83株)组每只地鼠腹腔注射0.5ml;灭活疫苗(C-84株)组地鼠免疫两次,每次0.5ml,间隔14天。两组地鼠均于第1     

乙型脑炎减毒活疫苗稳定性评价

目的 对乙型脑炎减毒活疫苗(乙脑疫苗)的稳定性进行评价.方法 选取2种规格(1、5次人用剂量)的成品乙脑疫苗进行(25±2)、(37±2)℃条件下保存的加速稳定性试验,以及2～8℃条件下的长期稳定性考察,检定关键质量指标,并对长期稳定性数据进行回归分析.结果 4批1次人用剂量、2批5次人用剂量疫苗于(25±2)℃、相对湿度(60±5)％存放3个月,(37±2)℃、相对湿度(75±5)％存放14d,其外观、病毒滴度、水分、pH值均符合质量标准.9批1次人用剂量、7批5次人用剂量疫苗在2～8℃存放24个月的检定结果均符合质量标准.回归分析显示,在2～8℃存放时间每增加1个月,1、5次人用剂量疫苗的病毒滴度分别平均降低0.020和0.017 lg蚀斑形成单位/ml,水分分别平均增加0.055％和0.047％.根据回归方程因变量均值95％置信区间计算出的乙脑疫苗有效期远长于现行注册标准规定的18个月.结论 被检乙脑疫苗质量稳定性良好,产品安全可靠.     

候选的基因工程甲型流感病毒减毒活疫苗

减毒活疫苗遗传稳定性不够,有明显的毒性回复倾向,很难推广使用。若能使其主要功能部位发生多点突变,则可解决这个问题。     

乙型脑炎减毒活疫苗单次病毒收获液冻融条件研究

 目的  摸索乙型脑炎减毒活疫苗单次病毒收获液最适冻融条件。方法  将单次病毒收获液于不同温度中冻存不同时间后,在不同条件下融解,用噬斑法检测收获液病毒滴度,通过数据分析找到最适冻融方法。调整冻存袋内冻存病毒液的体积,确定冻存量对冻融效果的影响。结果  -70 ℃条件下冻存6个月,27 ℃水浴中解冻,对不同冻存量冻融前后单次病毒收获液滴度变化进行统计分析F=0.182,P=0.907。结论  确定了乙型脑炎减毒活疫苗单次病毒收获液最适冻融条件。     

乙型脑炎减毒活疫苗的国外临床研究

 乙型脑炎减毒活疫苗（乙脑活疫苗）是中国自主研发的疫苗,也是中国第一个通过世界卫生组织预认证的疫苗。此文介绍了乙脑活疫苗在国外进行的临床研究,包括该疫苗在亚洲不同地区人群中的免疫原性、免疫效力和安全性研究,从而为该疫苗在中国以外的乙型脑炎流行区的推广和使用提供科学依据。     

乙型脑炎减毒活疫苗生产工艺液体质量验证

 目的   对乙型脑炎（乙脑）减毒活疫苗生产过程中使用的工艺液体进行系统验证,确保其配制过程和储存过程的一致性。 方法   根据工艺液体在生产中是否接触或进入产品,确定验证主要针对8种关键工艺液体。针对制备和储存过程中影响液体质量的变量建立工艺参数,并根据液体在生产中的用途建立能反映工艺液体质量的标准。通过系统性实验收集数据来证明液体制备和储存过程工艺参数的可行性。 结果  在对8种关键工艺液体每种各3次的混合均一性验证中,每次9个样品的相对标准差均<5%,并且8种液体每种各3批在经过最长可能储存时间后,样品检定结果均符合可接受标准。 结论  验证证明了采用乙脑活疫苗关键工艺液体的制备程序能配制出均一并符合工艺要求的液体,且每种工艺液体均能在规定的储存条件下在最长储存时间内维持质量稳定,从而为质量、安全性和有效性都符合中国药典及WHO标准的乙脑活疫苗生产提供了保障。     

乙型脑炎减毒活疫苗安全性和免疫原性观察

目的 观察乙型脑炎（乙脑）减毒活疫苗的接种反应和免疫原性.方法 分别选择52名（8月龄～50岁）和607名（8月龄～12岁）健康志愿者进行Ⅰ和Ⅲ期临床试验.试验组每人接种1次由上海生物制品研究所有限责任公司研制的乙脑减毒活疫苗（0.5 ml）,对照组接种同样剂量的已上市乙脑减毒活疫苗.两组接种后的不良反应率和中和抗体阳转率用x2检验进行比较,中和抗体几何平均滴度用t检验进行比较.结果 试验组接种后有5.91％的人体温升高,对照组为7.96％,两组的体温反应发生率差异无统计学意义（x^2 =0.917,P=0.338）.试验组Ⅰ期试验局部反应率为1.92％,Ⅲ期试验为0.25％,对照组Ⅲ期试验局部反应率为0.50％,两组的局部反应率差异无统计学意义（确切概率法,P=0.553）.Ⅲ期免疫原性试验中,试验组的血清中和抗体阳转率为89.00％,抗体几何平均滴度为29.69;而对照组分别为74.59％和19.25,差异均有统计学意义（x^2=11.708,P=0.001;t=4.281,P=0.001）.结论 本研究的试验性乙脑减毒活疫苗接种反应轻微,并具有良好的免疫原性.     

乙型脑炎减毒活疫苗主种子批猴体神经毒力试验

 目的   为了解乙型脑炎（乙脑）减毒活疫苗主种子批弱毒株的神经毒力减弱程度,对其进行猴体神经毒力试验,以观察其安全性。 方法  对恒河猴脑内和脊髓内同时注射乙脑病毒强毒株SA14或减毒活疫苗主种子批弱毒株SA14-14-2,然后进行为期21 d的临床体征观察,并进行组织病理学检查。 结果   强毒株组动物接种后的临床体征为典型的神经毒性反应,动物发病并死亡。组织病理学检查显示,中枢神经系统严重受损,并有神经细胞坏死。弱毒株组动物仅出现短时发热,组织病理学检查可见轻微炎症反应,未见神经细胞坏死现象。 结论   乙脑减毒活疫苗主种子批的神经毒力高度减弱, 对恒河猴是安全的。     

呼吸道合胞病毒减毒活疫苗研制进展

人呼吸道合胞病毒(resipiratory syncytial virus,RSV)是世界范围内儿童下呼吸道感染的主要病原体,但其疫苗的开发面临许多困难和挑战.随着反向遗传学及相关技术和工具的应用,RSV疫苗,尤其是减毒活疫苗的研制已经取得很大进展.此文就RSV减毒活疫苗研发的主要突破和研究进展进行综述.     

减毒曼哥病毒:重组活疫苗的新载体

曼哥病毒基因组只有一个解读框架,它编码一种大的多聚蛋白,后者可分为三段,P1、P2和P3。病毒RNA基因组只在感染细胞的胞质中表达,它之所以能致病,完全是由其基因组5＇非编码区中聚C片段决定的,如果截去或缺失此片段,致病性随之丧失,因此易于得到稳定的减毒株。为了研究表达外源基因的重组曼哥病毒能否诱导保护性免疫力,作者用经过充分（钅监）定的淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒（LCMV）核蛋白（NP）序列中一个细胞毒性T淋巴细胞（CTL）表位与曼哥病毒重组为VLCMG4病毒,免疫小鼠,观察其保护作用。     

甲型肝炎减毒活疫苗开始进行试验

据Carpenter报道,由Merck公司研制的甲型肝炎病毒减毒活疫苗的第一个接受者是纽约血液中心遗传学科主任Allen博士。 Allen是这个血液中心接受甲型肝炎疫苗第一期预防试验的5个志愿者之一,每     

单剂冻干乙型脑炎减毒活疫苗开始上市

流行性乙型脑炎俗称大脑炎,主要引起儿童大脑炎,病死率5％～20％,得病后幸免死亡者约30％～40％有手脚瘫痪,痴呆,智力缺损等后遗症,特别是近来发现一些儿童在出院后一段时间表现正常,但经过数年后开始出现神经系统疾患如麻痹、抽搐、视神经萎缩及智力显著下降等症状,因此乙脑对儿童的危害性很大,务必给儿童提早接种乙脑疫苗。注射什么样的疫苗     

乙型脑炎减毒活疫苗批签发管理与质量评价

目的比较乙型脑炎减毒活疫苗实施批签发前后的质量变化,评价疫苗的质量控制。方法通过对市场抽检疫苗样品和批签发送检的疫苗样品质控关键项目测定结果及制造和检定记录摘要审核,对疫苗的质量和改进趋势进行分析、归纳和总结。结果3个企业生产的乙脑活疫苗在1990～2004年期间,尤其是生产初期,疫苗病毒滴度≥5.7lgpfu.mL-1的批次合格率为58.6%～100%;疫苗热稳定性试验合格批次占15%～100%;其中A企业2001～2004年,疫苗热稳试验100%合格。从2005年实施批签发后,3个企业生产的乙脑活疫苗病毒滴度均为100%合格。2006和2008年国家市场监督抽验的疫苗病毒滴度结果合格率达97.4%。结论乙脑活疫苗实施批签发后的病毒滴度合格率达100%,较实施前有明显提高。国家市场监督抽验的疫苗测定结果显示,乙脑活疫苗的质量稳定,病毒滴度合格率为97.4%。通过疫苗批签发可以准确、具体的了解企业生产和质量管理情况,督促企业规范生产、完善工艺、加强质量管理。     

水痘减毒活疫苗病毒的单核苷酸多态性分析

水痘-带状疱疹病毒（varicella-zoster virus,VZV）是引起水痘和带状疱疹的主要病原体,Oka株水痘减毒活疫苗（V-Oka）能有效预防水痘发生。V-Oka株与Oka亲本株之间存在至少42个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）位点差异,部分位点与V-Oka株的减毒特性有关。目前已知有6个SNP位点为疫苗型位点,可用于区分V-Oka病毒与野生型病毒。近期研究发现某些SNP位点与疫苗相关皮疹有关。此文对水痘减毒活疫苗的重要SNP位点做一综述。     

表达HIV-1蛋白的委内瑞拉马脑炎病毒载体:提高疫苗效力的载体设计方案

以减毒疫苗株为基础的促进异源病毒蛋白表达的病毒疫苗载体 ,可诱生抗病毒载体和抗外源蛋白的免疫应答 ,这种策略尤其适用于 1型人类免疫缺陷症病毒 ( HIV- 1)这样的病毒。作者报告了以委内瑞拉马脑炎( VEE)病毒弱毒株为载体表达 HIV- 1蛋白的情况。　　作者将 VEE病毒株改造成含 2个独立的减毒突变 ( E2 Lys2 0 9和 E1Thr2 72 )的突变体 ,并进一步引入 2 6 S亚基因组 m RNA启动子复制拷贝 ,为了产生下游启动子载体 ,将此额外启动子紧接在 E1基因之后插入 ,而上游启动子载体则将额外启动子紧插在真正的 2 6 S启动子的上游。外源性…