细胞外基质金属蛋白酶诱导因子对细胞滋养细胞分泌基质金属蛋白酶的调节

胎盘植入和胎盘形成过程中，滋养细胞向母体子宫内膜有节制的浸润是细胞外基质降解和重建的关键步骤，基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMP）在这一过程中发挥重要作用。细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（extracellular matrix metalloproteinase inducer，EMMPRIN）是免疫球蛋白超家族的成员之一，能刺激与肿瘤有关的成纤维细胞和肿瘤细胞自身的MMP显著增加。最新的研究发现，在足月妊娠妇女的胎盘和胎膜组织中有高水平的EMMPRIN表达，推测与维持妊娠和发动分娩有关。作为MMP的上调因子EMMPRIN，在妊娠早期胎盘绒毛组织中的表达未见报道。本研究采用高纯度的原代细胞滋养细胞体外培养模型，探讨EMMPRIN在胎盘绒毛组织中的表达变化及其对细胞滋养细胞分泌MMP的调节作用。     

MMP-9在绒毛外滋养细胞诱导内皮细胞凋亡中作用的研究

目的:探讨绒毛外滋养细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达对血管内皮细胞凋亡的影响。方法:MMP-9的siRNA转染绒毛外滋养细胞株(TEV-1),利用实时定量逆转录-聚合酶链反应(real time RT-PCR)和ELISA法检测转染前后细胞中MMP-9、FasL基因及蛋白表达的变化;通过trans well共培养技术,研究滋养细胞对内皮细胞凋亡的影响。结果:(1)MMP-9 siRNA转染后24h,滋养细胞MMP-9 mRNA的表达较对照组明显降低(P0.05),而FasL mRNA表达与对照组无明显差异(P0.05);转染后48h,细胞培养液中MMP-9蛋白及FasL蛋白表达均较对照组显著降低(P0.05);(2)与未转染者比较,转染MMP-9 siRNA的滋养细胞与内皮细胞共培养48h后,内皮细胞凋亡率显著降低,差异有显著性(P0.05)。结论:绒毛外滋养细胞表达MMP-9的水平影响其诱导内皮细胞凋亡的作用,此作用可能与MMP-9调节FasL蛋白的分泌表达有关。     

蜕膜基质细胞条件培养液对滋养细胞浸润功能的影响

目的:探讨蜕膜基质细胞条件培养液(DSCM)对滋养细胞浸润力的影响。方法:体外培养人早孕正常蜕膜基质细胞,收集DSCM处理早孕滋养细胞系(B6Tert)。应用浸润实验分析B6Tert细胞浸润力的改变,采用RT-PCR与明胶酶谱技术检测B6Tert细胞中基质金属蛋白酶(MMPs)的表达变化。结果:DSCM浓度较低时(占细胞培养液5%),可促进B6Tert细胞的浸润力与该细胞MMP-2mRNA及pro-MMP-2的表达;反之,高浓度的DSCM(20%)则抑制滋养细胞的浸润力与MMP-2的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。DSCM不影响B6Tert细胞中MMP-9的表达。结论:早孕DSCM可能通过调节滋养细胞中MMP-2的表达影响滋养细胞的浸润能力。     

人早孕期绒毛和绒毛外细胞滋养细胞的分离、培养及鉴定

目的:建立人早孕期绒毛细胞滋养细胞(villous cytotrophoblasts,VCT)及绒毛外细胞滋养细胞(extravillous cytotrophoblasts,EVCT)的分离、培养方法。 方法:利用不同的胰酶消化条件,收集人早孕期绒毛组织的VCT及EVCT并分别培养。倒置显微镜、扫描电镜观察VCT及EVCT的形态学特征;免疫细胞化学鉴定细胞来源及纯度。 结果:胰酶短期、温和消化获得的EVCT,可生长于Matrigel包被的培养器皿上,并表达特异性标志物c-crbB-2;延长消化时间、增加胰酶浓度获得的VCT,种植于塑料或玻璃培养器皿上可聚集并融合形成合体滋养细胞。VCT不表达c-crbB-2。结论:采用不同的胰酶消化及体外培养条件,可简单、快捷地分别获得高纯度人早孕期VCT及EVCT。     

内毒素调节细胞滋养细胞侵入能力的机制

目的:探讨内毒素(lipopolysacchraride,LPS)对细胞滋养细胞侵入能力的影响。方法:留取正常早孕绒毛,分离细胞滋养细胞,用无血清培养基培养。对照组:培养基中不添加内毒素。实验组:培养基中加入不同浓度的内毒素,其终浓度分别为25、50、100、200ng/m l。Transwell小室检测细胞滋养细胞的侵入能力;采用激光共聚焦-免疫荧光技术检测基质金属蛋白酶-2、9(MMP-2、9)蛋白的表达;RT-PCR检测MMP-2、MMP-9 mR-NA表达水平。结果:内毒素降低细胞滋养细胞侵入Transwell小室的能力,在浓度为0、25、50、100、200ng/m l的LPS作用24h后,细胞滋养细胞侵至滤膜下表面的细胞为145.6±20.7、139.6±18.8、123.1±17、76.5±18、47.9±16,差异有统计学意义(P<0.01);内毒素显著抑制细胞滋养细胞MMP-2、MMP-9蛋白和mRNA的表达。结论:内毒素能够抑制细胞滋养细胞的侵入能力,可能是通过抑制基质金属蛋白酶表达来实现。     

绒毛外滋养细胞的基础知识

绒毛外滋养细胞（extravillous trophoblast,EVT）涉及母胎免疫和妊娠期母体常见并发症的发生与发展,在20世纪80年代就已经成为国外胎盘病理学家和生物学家研究的热点.我国此项研究起步较晚,本文主要介绍其相关的基础知识.     

甲氧滴滴涕对人绒毛外滋养细胞侵袭能力的影响

目的:探讨甲氧滴滴涕(MXC)对绒毛外滋养细胞侵袭能力的影响。方法:用胰蛋白酶消化后再经流式细胞仪分离得到人绒毛外滋养细胞进行原代培养及鉴定。细胞分为MXC(1μmol/L,3μmol/L、5μmol/L、7μmol/L)处理组及空白对照组,培养12h、24h和48h。用侵袭小室检测每组各时间点的侵袭能力,Western blot检测各组各时间点MMP-2、MMP-9、TIMP-2、TIMP-1表达,RT-PCR法检测MMP-9 mRNA、MMP-2 mRNA表达。结果:MXC处理组滋养细胞侵袭能力呈时间剂量依赖型下降,MMP-9 mRNA、MMP-2 mRNA表达下降,MMP-9、MMP-2表达下降,TIMP-2、TIMP-1表达增高。MMP-2及其mRNA下降程度与MXC有时间剂量效应。结论:MXC可通过改变基质金属蛋白酶及其抑制物的比例降低绒毛外滋养细胞侵袭能力。     

不同浓度瘦素对人早孕期滋养细胞MMP9表达的影响

目前普遍认为绒毛外滋养细胞侵蚀子宫螺旋小动脉参与了子宫胎盘血液循环的建立过程。作为肥胖基因产物的瘦素（1eptin）在能量代谢平衡、造血功能方面发挥很重要的作用。近年研究证实瘦素在人类胎盘滋养细胞中有表达。体外研究亦发现人工培养的滋养细胞有合成瘦素的功能，且细胞滋养细胞经诱导转变为合体滋养细胞后，其合成和分泌瘦素的能力亦显著提高。MMP是降解蜕膜基质的重要酶类，且妊娠早期以基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinases，MMP9）较为重要。蜕膜基质降解后，     

瘦素协同纤连蛋白对早孕绒毛细胞滋养细胞浸润特性的影响

目的:探讨瘦素(leptin)、纤连蛋白(FN)对细胞滋养细胞浸润能力的影响及其协同作用。方法:①取孕6-8周的人工流产妊娠绒毛,分离、培养细胞滋养细胞并经光镜、电镜、免疫细胞化学鉴定。②用RT-PCR方法检测细胞滋养细胞中瘦素的表达。③应用体外培养侵袭模型检测瘦素、FN及二者协同时对细胞滋养细胞浸润能力的影响。结果:①分离、纯化所得细胞滋养细胞有瘦素mRNA表达。②瘦素组、FN组和瘦素与FN协同组浸润穿过matrigel的滋养细胞数均显著多于对照组(P<0.01),其中瘦素与FN协同组滋养细胞浸润能力最强。结论:①瘦素能增强细胞滋养细胞的侵袭能力。②FN对细胞滋养细胞的浸润具有趋化作用。③瘦素与FN对细胞滋养细胞的浸润有正协同作用。     

ROCKⅡ对细胞滋养细胞ERM蛋白表达及细胞浸润能力调节的研究

目的:探讨Rho/ROCK/ERM通路与细胞滋养细胞浸润能力的关系。方法:免疫荧光细胞化学法定位ROCKⅡ和ERM在体外培养细胞滋养细胞中的表达,Western blot检测ROCKⅡ活性被抑制时细胞滋养细胞中p-ERM表达变化,MTT实验、体外细胞侵袭实验和细胞运动实验检测ROCKⅡ活性被抑制时细胞滋养细胞生长、运动、浸润能力的改变。结果:ROCKⅡ和ERM在细胞滋养细胞的胞浆中表达;随着ROCKⅡ活性下降,p-ERM表达下降,细胞生长、浸润、运动受到抑制,呈浓度依赖关系。结论:ROCKⅡ在体外培养的细胞滋养细胞中可能通过调节ERM蛋白来调节细胞的生长、浸润和运动能力,提示Rho/ROCK/ERM通路可能在人孕早期胚泡植入过程中发挥作用。     

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子在绒毛和胎盘组织中的表达

目的 探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)在绒毛及胎盘组织中的表达以及表达部位。方法 分别取36例妊娠6～9周妇女的早孕绒毛组织、7例因病理指征行中期引产妇女的胎盘组织和11例足月妊娠妇女的胎盘组织,免疫组化方法检测绒毛组织和胎盘组织中EMMPRIN的表达部位变化特点。结果 (1)表达部位：EMMPRIN在早孕绒毛组织、中期和足月妊娠的胎盘组织中均有高度表达。在早孕绒毛组织中的表达部位主要集中在绒毛内细胞滋养细胞、合体滋养细胞及细胞滋养层柱细胞;在中期和足月妊娠的胎盘组织中,主要表达于底蜕膜的绒毛外细胞滋养细胞。(2)表达特点：在早孕绒毛组织中细胞滋养细胞、合体滋养细胞和细胞滋养层柱细胞的。EMMPRIN阳性率随妊娠进展逐渐下降。在妊娠中期的胎盘组织中,细胞滋养细胞、合体滋养细胞和细胞滋养层柱细胞的EMMPRIN阳性率分别为5／7、3／7、5／7;在足月妊娠的胎盘组织中,细胞滋养细胞、合体滋养细胞和细胞滋养层柱细胞的EMMPRIN阳性率分别为73％、18％和82％。在中期和足月妊娠的底蜕膜中的EMMPRIN阳性率较弱,且趋于稳定。而早期妊娠阶段,侵入到底蜕膜的绒毛外细胞滋养细胞中。EMMPRIN阳性表达则随孕周进展逐渐增强。结论 EMMPRIN在妊娠早期与胚胎植入有关,在妊娠的中晚期则可能参与妊娠维持。     

MMPs及TIMPs在滋养细胞疾病中表达的分析

目的 :分析基质金属蛋白酶 (MMPs)及其组织抑制物 (TIMPs)在滋养细胞疾病中表达水平与预后的关系。方法 :采用免疫组化S P法检测 17例正常绒毛、39例葡萄胎 (HM)、4 2例侵蚀性葡萄胎 (IM)和 2 0例绒毛膜癌 (CC)组织中MMP 2、MMP 9及其TIMP 1、TIMP 2的表达情况。结果 :葡萄胎恶变组MMP 2、MMP 9表达较正常绒毛和葡萄胎未恶变组高 (P =0 .0 0 0 ,0 .0 0 0 ;P =0 .0 4 0 ,0 .0 11)。未化疗滋养细胞肿瘤 (包括IM和CC)MMP 2表达强于早孕绒毛和葡萄胎组 (P均 =0 .0 0 0 ) ,而≥ 3疗程化疗后MMP 2、9表达明显低于未化疗和≤ 2疗程化疗组 (P =0 .0 0 0 ,0 .0 35 ;P =0 .0 10 ,0 .0 18) ,TIMP 1在未化疗滋养细胞肿瘤组表达低于早孕绒毛和葡萄胎组 (P =0 .0 0 5 ,P =0 .0 0 0 )。MMP 2在Ⅱ、Ⅲ期的表达明显强于Ⅰ期 (P均 =0 .0 0 0 ) ,WHO预后评分中、高危者明显强于低危者 (P =0 .0 0 2 ,P =0 .0 0 5 )。结论 :MMPs及TIMPs表达水平高低与滋养细胞疾病预后有关 ,深入了解两者在滋养细胞疾病中的生物作用 ,有望为耐药患者的治疗提供新的途径     

CXCL12/CXCR4在绒毛外滋养细胞中的表达及其意义

目的:研究趋化因子CXCL12及其受体CXCR4在绒毛外滋养细胞(extravillous trophoblasts,EVTs)中的表达及其在妊娠中的作用。方法:取妊娠早期绒毛,培养绒毛外滋养细胞,用免疫细胞化学技术检测其中CXCR4与CXCL12的表达;并通过体外侵袭实验,分析绒毛外滋养细胞在CXCL12作用下的侵袭能力。结果:在EVTs的胞膜和胞浆中均检测到CXCL12和CXCR4的表达;EVTs在CXCL12作用下的侵袭能力在一定范围内与CXCL12浓度呈正相关(r=0.79,P<0.01),当CXCL12浓度达到10ng/ml时最强,达到100ng/ml时则开始下降。最大趋化指数为1.71±0.14。结论:CXCL12/CXCR4受体配体系统参与绒毛外滋养细胞的侵蚀,在妊娠过程中有重要意义。     

母体蜕膜微环境与滋养细胞浸润

在正常妊娠过程中,胎盘滋养细胞具有类似肿瘤的浸润能力,但与肿瘤细胞不同的是,滋养细胞对母体子宫蜕膜的浸润受到机体的严格调控,是有节制的正常生理行为.滋养细胞侵入过度可以导致绒毛膜癌等滋养细胞疾病的发生,浸润不足则可造成流产、子痫前期等妊娠期疾病.目前,滋养细胞有节制浸润母体的机制尚不明确,研究表明母体蜕膜微环境对滋养细胞的浸润起着重要的调控作用,对其进行深入研究有助于理解病理性妊娠的发生、发展过程.     

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子与妇科肿瘤

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）又称CDl47，广泛地存在于人类各种肿瘤细胞，刺激与肿瘤有关的成纤维细胞和肿瘤细胞自身的基质金属蛋白酶合成增加，在恶性肿瘤的发生、浸润和转移中起重要作用。近年来其在肿瘤的早期发生和浸润及肿瘤抗药性方面的作用已受到重视。EMMPRIN与妇科肿瘤的发展关系密切，现就其与妇科肿瘤的关系及其结构和功能作一综述。     

中间型滋养细胞及其相关疾病

为帮助病理医师和临床医师了解中间型滋养细胞的性质和特征,以及它所致疾病的诊断及治疗。现将中间型滋养细胞的发生与发展过程,及4种中间型滋养细胞疾病的特征及诊断要点作一综述。     

瘦素对妊娠早期绒毛滋养细胞MMP-2/TIMP-2表达的调控作用

目的:观察体外模拟早孕微环境(雌激素、孕激素)条件下瘦素(leptin)对妊娠早期绒毛滋养细胞MMP-2/TIMP-2表达的影响,初步探讨其调控机制及意义.方法:选取正常妊娠妇女人工流产绒毛组织(6～9周),按常规方法分离滋养细胞,分为雌激素加孕激素(E+P组)、瘦素组(leptin组)、雌激素加孕激素加瘦素组(E+P+leptin组)、空白对照组(N组).置37℃、5%CO2培养24小时,收集细胞及培养上清,流式细胞仪检测瘦素受体(leptin R)表达;ELISA检测上清中可溶性瘦素受体(sleptin-R)表达,RT.PCR检测MMP-2、TIMP-2 mRNA;酶谱检测上清中MMP-2表达.结果:流式细胞仪检测结果显示,E+P组滋养细胞leptin R表达显著上调(P<0.05),上清中未检测到sleptin-R;E+P组、leptin组和E+P+leptin组MMP.2均显著上调,TIMP-2的表达下调(P<0.05).E+P+leptin组的调节效应强于E+P组和leptin组(P<0.05).结论:leptin-leptin R途径参与滋养细胞MMP-2的上调,并增强雌、孕激素联合对MMP-2的上调作用.该调节途径可能通过调控MMP-2/TIMP-2的平衡来调节滋养细胞侵袭性.     

滋养层细胞浸润的调节

胎盘功能与滋养层细胞浸润密切相关，妊娠高血压综合征与胎儿宫内发育迟缓(IUGR)等许多病理妊娠都存在滋养层细胞浸润能力的改变，而滋养层细胞浸润过程又受到一系列因素调控，加强此调节机制的研究，有助于理解病理妊娠的发生过程。     

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子与妇科肿瘤

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)又称CD147,广泛地存在于人类各种肿瘤细胞,刺激与肿瘤有关的成纤维细胞和肿瘤细胞自身的基质金属蛋白酶合成增加,在恶性肿瘤的发生、浸润和转移中起重要作用.近年来其在肿瘤的早期发生和浸润及肿瘤抗药性方面的作用已受到重视.EMMPRIN与妇科肿瘤的发展关系密切,现就其与妇科肿瘤的关系及其结构和功能作一综述.     

滋养层细胞浸润的调节

胎盘功能与滋养层细胞浸润密切相关，妊娠高血压综合征与胎儿宫内发育迟缓（IUGR）等许多病理妊娠都存在滋养层细胞浸润能力的改变，而滋养层细胞浸润过程又受到一系列因素调控加强此调节机制的研究。有助于理解病理妊娠的发生过程。