缝隙连接和卵巢卵泡发育的关系研究进展

卵巢中的卵泡处于无血管的微环境中,因而缝隙连接介导卵母细胞和其周围体细胞(颗粒细胞和卵泡膜细胞)的代谢交换,传递内分泌和旁分泌的生长因子。卵巢卵泡的整个发育过程离不开细胞间的缝隙连接。连接蛋白Cx32、Cx37、Cx43、Cx45和Cx57参与卵泡的发育,其中Cx43和Cx37对卵巢卵泡的发育起了至关重要的作用。现就卵巢卵泡的发育和缝隙连接的关系进行综述。     

间隙连接蛋白Cx43和Cx37在多囊卵巢综合征大鼠卵巢中的表达及意义

目的:建立来曲唑诱导的多囊卵巢综合征(PCOS)动物模型,观察Cx43和Cx37在PCOS大鼠卵巢中的表达变化,探讨PCOS的发病机制。方法:①选择6周龄SD清洁级雌性大鼠60只,随机分为实验组、实验对照组、空白对照组,每组各20只。应用来曲唑灌胃制备PCOS大鼠模型,观察3组大鼠双侧卵巢及子宫大体解剖及组织学改变。②放射免疫法测定血清LH、FSH、E2、P、T水平。③免疫组化法观察卵巢组织中Cx43和Cx37的表达变化。结果:①动情周期:实验组大鼠失去规律性动情周期变化,提示无排卵。②器官重量:卵巢重量实验组显著高于实验对照组及空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05);子宫重量实验组显著低于实验对照组及空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。③卵巢组织学检查:实验组早期发育的小卵泡及闭锁卵泡,囊状扩张卵泡明显增加,颗粒细胞层数减少至2～3层,卵泡内卵母细胞或放射冠消失,黄体数量明显下降并伴有不完全的黄素化,而对照组镜下见多个黄体及不同发育阶段的卵泡,有排卵表现。④血清性激素水平:实验组血清T、LH、FSH浓度显著高于实验对照组及空白对照组(P<0.05),血清E2、P实验组浓度显著低于实验对照组及空白对照组(P<0.05)。⑤卵巢的颗粒细胞中Cx43的表达水平实验组显著低于实验对照组及空白对照组(P<0.05),卵母细胞与颗粒细胞间Cx37的表达水平实验组显著低于实验对照组及空白对照组(P<0.05)。结论:①来曲唑诱导的大鼠模型是理想的PCOS动物模型。②Cx43和Cx37在实验组卵巢中表达下调,与PCOS的发病密切相关。     

大气细颗粒物对心肌细胞缝隙连接通讯的影响

目的 探讨大气细颗粒物(PM2.5)对原代培养大鼠心肌细胞的急性毒性作用及对缝隙连接通讯的影响.方法 对出生24 h的SPF级SD大鼠乳鼠分离心肌细胞进行原代培养,以不同浓度(0、1、10、100g/μml)的PM2.5染毒24 h,采用划痕染料标记示踪法(SLID)测定细胞缝隙连接通讯(GJIC)水平,采用间接免疫荧光细胞化学方法测定缝隙连接蛋白Cx43分布及密度,采用免疫印迹法测定连接蛋白Cx43的表达.结果 随PM2.5浓度的上升,细胞间荧光扩散面积减少,细胞膜连接处Cx43绿色荧光减弱,Cx43蛋白表达量稍有减少.与对照组比较,10和100μg/ml染毒组细胞间荧光扩散面积减少,差异有统计学意义(P<0.01);10和100 μg/ml染毒组Cx43荧光强度下降,差异有统计学意义(P<0.01).结论 PM2.5可抑制心肌细胞的缝隙连接通讯功能.其机制可能是通过影响心肌细胞的Cx43表达和分布.     

子宫内膜基质细胞的缝隙连接蛋白43及其作用

子宫内膜基质细胞靠缝隙连接传递信号,在月经周期不同的激素调节下,协调一致地呈现周期性变化。缝隙连接蛋白是子宫内膜基质细胞上缝隙连接的基本单位。缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)参与了细胞生长、分化、肿瘤化、血管重塑、凋亡等过程,Cx43的正常表达是发生蜕膜反应的必要条件,直接影响子宫内膜对胚胎的容受性;同时参与子宫内膜异位症、子宫内膜癌等病理反应。由于目前辅助生殖技术的成功率主要受限于较低的胚胎着床率,能够区别容受性与非容受性子宫内膜的生物学标记尚不明确。因此,阐明如何诱导形成容受性子宫内膜,以及如何维持容受性变得尤为重要。本文综述了Cx43如何参与蜕膜反应,与子宫内膜容受性的关系,Cx43的信号调节通路及其与子宫内膜疾病发生的关系,分析了Cx43参与诱导容受性子宫内膜的可能机制。     

缝隙连接蛋白43在生殖中的研究进展

摘要：子宫内膜基质细胞靠缝隙连接传递信号,在月经周期不同的激素调解下,协调一致地呈现周期性的变化。缝隙链接蛋白作为子宫内膜基质细胞上缝隙连接的基本单位,缝隙链接蛋白43（connexion43,Cx43）参与了细胞生长、分化、肿瘤化、血管重塑、凋亡等过程,Cx43的正常表达,是发生蜕膜反应的必要条件,直接影响子宫内膜对胚胎的容受性。同时参与了子宫内膜异位症,子宫内膜癌等病理反应。由于目前辅助生殖技术成功率主要受限于较低的胚胎着床率,能够区别容受性与非容受性子宫内膜的生物标志尚不清楚。因此,阐明如何诱导形成容受性子宫内膜,以及如何维持容受性变得尤为重要。本文综述了Cx43如何参与蜕膜反应,与子宫内膜容受性的关系,Cx43的信号调节通路及其与子宫内膜疾病发生的关系,分析了Cx43参与诱导容受性子宫内膜的可能机制     

微小RNA在卵巢颗粒细胞中的研究进展

微小RNA(microRNAs,miRNAs)是一类内源性非编码RNA,可以在转录后水平通过对靶基因的调控,影响蛋白质的表达,其参与调节各个环节的细胞生命活动。特定的miRNAs低表达、过表达或者变异都可能引起细胞功能的异常。卵巢颗粒细胞是卵泡中最重要的体细胞,其围绕在卵母细胞周围,可合成多种激素及生长因子,并表达其受体,通过缝隙连接调控卵泡膜细胞和卵母细胞的生长、分化和成熟,进而调控卵泡的发育。MiRNAs在卵泡发育过程中的作用除了miRNAs对卵母细胞的直接作用外,其在颗粒细胞中的调控作用也尤为重要。研究发现,miRNAs在卵巢颗粒细胞的增殖与分化、凋亡、性激素分泌等过程中发挥重要的作用。本文综述近年卵巢颗粒细胞中miRNAs的研究进展。     

PCOS患者糖脂代谢特点及其相关细胞因子参与卵泡发育的研究现状北大核心CSCD

多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是常见的女性内分泌、代谢紊乱性疾病,其糖脂代谢异常与生殖功能障碍密切相关。卵巢是能量代谢活跃的器官,颗粒细胞的增殖,卵母细胞的发育成熟及排卵,都是耗能的过程,需要足够的能量供应。糖、脂类在颗粒细胞中被分解,通过缝隙连接为卵母细胞发育提供能量。PCOS患者糖脂代谢异常表现在卵巢颗粒细胞和卵泡液中信号分子及细胞因子、卵泡液中代谢产物的变化,影响卵泡发育及卵母细胞质量。本文就PCOS患者糖脂代谢特点及与糖脂代谢相关的细胞因子对卵泡发育和卵细胞质量的影响进行综述,为临床提供参考。     

缝隙连接蛋白43及26mRNA在自身免疫性甲状腺疾病患者甲状腺组织中的表达

目的 研究自身免疫性甲状腺疾病(AITD)患者甲状腺组织中缝隙连接蛋白(Cx)43、Cx26基因表达的变化.方法 外科手术收集76例甲状腺组织,均经病理诊断.其中Graves病(CD)30例(GD组),桥本甲状腺炎(HT)30例(HT组),甲状腺腺瘤旁正常甲状腺组织16例(正常组).应用反转录(RT)-聚合酶链反应(PCR)技术,以GAPDH为内参照分析三组甲状腺组织中Cx43、Cx26mRNA表达的差异.结果 正常及AITD甲状腺组织中均表达Cx43及Cx26 mRNA;Cx43及Cx26mRNA在GD组甲状腺组织中的表达明显高于正常组(0.9307±0.0716比0.5938±0.0484,0.7371±0.0463比0.3431±0.0399)(P＜0.01),在HT组中的表达明显低于正常组(0.3581±0.0458比0.5938±0.0484,0.3150±0.0218比0.3431±0.0399)(P＜0.01或＜0.05).结论 Cx43、Cx26 mRNA在人甲状腺组织中有所表达,且其表达在AITD患者甲状腺组织中有明显变化,提示缝隙连接与AITD发生有关.     

牛磺酸对青春前期大鼠睾丸缺血再灌注Cx43蛋白表达的影响

正睾丸扭转是导致睾丸损伤的泌尿外科急症之一,尤以青少年多发,常为单侧,在25岁以下的男性中发病率高达1/4000[1]。众多学者认为其过程主要是缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)。缝隙连接(gapjunction,GJ)在细胞之间起着重要的电和生物化学分子信号传递的作用,睾丸组织中GJ通道主要由缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)构成[2]。目前关于     

缝隙连接蛋白43在长波紫外线诱发人皮肤光老化中的作用

目的 探讨缝隙连接蛋白43（connexin 43，Cx43）在长波紫外线（ultraviolet A，UVA）诱发人皮肤光老化中的作用。方法（1）体外培养原代人皮肤成纤维细胞（human dermal fibroblasts，HDFs），分为对照组、UVA照射组，采用CCK-8实验筛选出安全条件后，使用5 J/cm2 UVA照射实验组细胞1 h；在照射后0 h、6 h、12 h、24 h分别收集细胞及培养上清液，采用ELISA法检测细胞上清中基质金属蛋白酶-1（matrix metalloproteinases-1，MMP-1）和MMP-9的水平；采用qRT-PCR法和Western blot法检测细胞内Cx43 mRNA和蛋白的表达水平。（2）瞬时转染Cx43-siRNA，采用ELISA法检测细胞上清中MMP-1和MMP-9的水平。（3）将HDFs分为对照组、UVA组、UVA+TNF受体1中和抗体组，经UVA照射后，采用qRT-PCR和ELISA法检测细胞中Cx43 mRNA表达和上清中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和MMP-1水平。结果（1）与对照组相比，UVA组MMP-1和MMP-9水平呈时间依赖性上升（P<0.001），同时Cx43 mRNA和蛋白表达水平均明显下降（P<0.01）；（2）Cx43-siRNA显著下调Cx43表达后，MMP-1和MMP-9水平显著上升（P<0.001）；（3）与对照组相比，UVA组TNF-α和MMP-1水平显著上升（P<0.01），同时UVA+TNF受体1中和抗体组Cx43和MMP-1水平无明显升高。结论 Cx43可能参与介导了UVA通过诱导TNF-α信号通路引发的皮肤光老化过程，这种介导作用可能是通过Cx43对皮肤中MMP-1的调控得以实现。     

全反式维甲酸提高HSV-TK/GCV系统旁观者效应治疗髓母细胞瘤的研究

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)和单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因疗法在治疗髓母细胞瘤时的协同效应。方法:采用MTT法观察不同浓度ARTA对细胞增殖的抑制作用,划痕标记染料示踪技术检测细胞间缝隙连接通讯情况,Westernblot检测通过诱导接合蛋白43(Connexin43,Cx43)的表达。结果:3μmol/L的ATRA可以诱导Daoy细胞的Cx43的表达上调,同时使细胞间隙连接通讯(GJIC)增强约3倍。以不同比例(1∶1～1∶16)体外共培养C17.2tk细胞和Daoy细胞,ATRA能显著增强抗肿瘤效应。结论:HSV-tk/GCV自杀基因疗法治疗Daoy髓母细胞瘤中,ATRA可以通过增强旁观者效应来加强该系统的肿瘤杀伤效应。     

胎膜早破孕妇生殖道B族链球菌感染胎膜组织中Cx43和Bcl-2及Bax蛋白的表达

目的 研究孕妇生殖道B族链球菌(GBS)感染与胎膜早破(PROM)的关系及对胎膜组织中缝隙连接蛋白43(Cx43)、B细胞淋巴瘤基因-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的影响。方法 选取2018年12月-2020年12月东南大学附属中大医院妇产科收治的PROM孕妇91例和健康孕妇90名分别为PROM组和对照组,分析生殖道GBS感染情况以及胎膜组织中Cx43、Bcl-2和Bax蛋白阳性率。结果 PROM组和对照组GBS感染率分别为53.85%和25.56%,比较有统计学差异(P<0.05);PROM组Cx43和Bcl-2蛋白阳性率均低于对照组,Bax蛋白阳性率高于对照组(P<0.05);PROM组GBS阳性组孕妇Cx43蛋白和Bcl-2蛋白阳性率低于阴性组,Bax蛋白阳性率高于阴性组(P<0.05)。结论 孕妇生殖道GBS感染是PROM重要危险因素,其作用机制可能与胎膜组织Cx43、Bcl-2和Bax蛋白表达异常有关。     

汞中毒大鼠QRS时限与Cx43及其Ser368位点磷酸化表达水平研究

目的探讨汞中毒大鼠心电图QRS时限与心肌缝隙连接蛋白43(Cx43)及其Ser368位点磷酸化(pS368Cx43)表达水平。方法40只Wistar大鼠随机分为对照组(0.2ml生理盐水)及氯化汞低、中、高剂量染毒组(33.5、67.0、134.0μg/kg氯化汞溶液)，皮下注射染毒，1次/d。染毒90d后采集大鼠心电图，分析QRS时限改变，采用免疫组织化学染色法和Western blot法检测心室肌组织Cx43、pS368Cx43蛋白的表达情况；分析汞中毒大鼠QRS时限与Cx43及pS368Cx43表达量与分布改变的关系。结果与对照组相比，慢性汞中毒大鼠心电图QRS时限延长(P<0.05)，心室肌组织Cx43、pS368Cx43表达量降低(P<0.05)；Cx43和pS368Cx43在对照组主要分布于闰盘处，汞中毒组分布紊乱，部分呈现侧膜化改变。结论汞中毒大鼠QRS时限延长，其机制可能与汞中毒导致心肌Cx43和pS368Cx43表达降低及分布异常有关。     

白细胞介素1系统和女性生殖

有证据表明,处于发育过程中的卵泡是白细胞介素(IL)的作用位点,卵巢细胞能够分泌IL,而且这些细胞同时做为IL调节的靶位点存在.在许多哺乳动物都发现IL家族分布在不同的卵巢细胞(卵母细胞、颗粒细胞、卵泡膜细胞)当中.排卵时IL-1在人和猪的卵泡液中具有相似的生物学活性.尽管有证据证明IL-1参与了排卵过程和卵母细胞的成熟过程,但其在卵巢中的作用机制尚不十分清楚.IL-1可能参与了排卵的某些相关过程,如蛋白酶的合成、血纤维蛋白溶酶原激活剂活性的调节、前列腺素和一氧化氮的合成.IL-1还调节卵巢甾体激素合成.     

ERK-MAPK通路在DBP致大鼠睾丸缝隙连接损伤中作用

目的探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对大鼠睾丸的损害作用及与细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路激活、缝隙连接损伤关联性。方法 SD大鼠随机分为3个DBP剂量组(50、500、1 000 mg/kg)和溶剂对照组,经口灌胃染毒,每日1次,持续5周。酶联免疫吸附试验检测大鼠血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮等生殖激素水平;精子分析仪分析精子密度、活率和总畸形率;苏木素-伊红染色法观察睾丸组织结构变化;Western blot法检测ERK1/2和p-ERK蛋白表达;RT-PCR法检测缝隙连接蛋白43(Cx43)mRNA表达。结果与对照组比较,中、高剂量DBP组大鼠血清睾酮水平[(6.65±0.97)、(3.57±0.54)nmol/L]明显降低(P0.05),高剂量DBP组大鼠精子密度(64.71±11.36)10~5个/mL显著降低(P0.05),中、高剂量DBP组大鼠精子总畸形率[(13.64±1.68)%、(19.54±2.86)%]明显升高(P0.05);随DBP剂量升高大鼠睾丸组织结构损伤程度增加;与对照组比较,中、高剂量DBP组大鼠睾丸组织中p-ERK表达明显升高,各剂量DBP组大鼠睾丸组织中Cx43 mRNA表达均明显下降,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 DBP可激活ERK通路、下调Cx43表达,引起大鼠睾丸组织结构和功能损伤。     

原始卵泡激活与卵泡发育相关机制的研究进展

雌性哺乳动物出生之前原始卵泡已经形成,出生后卵泡池中储备不再增加。随着原始卵泡激活,原本处于休眠状态的卵泡渐次进入生长阶段,逐步由初级卵泡、次级卵泡发育成窦卵泡。在促性腺激素刺激下,优势卵泡发生排卵。卵母细胞内、外源性因子通过旁分泌、自分泌、内分泌等方式调控卵母细胞成熟、膜细胞与颗粒细胞的增殖分化过程。此外,卵母细胞与颗粒细胞之间通过缝隙连接发生信号交换使卵泡各部分同步发育,维持卵泡结构完整性。对卵泡激活和发育机制的深入研究将有利于解决生殖医学领域中卵源性不孕问题。     

DEHP对大鼠睾丸支持细胞间隙连接蛋白43表达和间隙连接通讯功能的影响

目的 通过对原代培养的大鼠睾丸支持细胞进行邻苯二甲酸二乙基己酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)染毒,探讨DEHP体外对大鼠睾丸支持细胞间隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)表达及间隙连接通讯(gap junction intercellular communication,GJIC)功能的影响.方法 体外分离和原代培养大鼠睾丸支持细胞,应用不同浓度的DEHP(10、50、100nmol/L)作用于支持细胞24h,应用荧光定量PCR法检测Cx43基因mRNA表达,用Weastern blot方法检测Cx43蛋白表达,划痕标记荧光染料示踪方法检测GJIC功能.结果 与对照组相比,DEHP各组支持细胞Cx43基因mRNA和蛋白表达均下降(P＜0.05),呈浓度依赖关系,同时支持细胞GJIC功能降低.结论 DEHP在体外可通过抑制大鼠睾丸支持细胞Cx43基因表达而抑制GJIC功能,进而影响支持细胞功能.     

RA对宫颈癌Hela细胞增殖的影响

目的研究RA对宫颈癌Hela细胞中Cx26和Cx43表达的影响,探讨RA对Hela细胞增殖的影响及其机制。方法培养Hela细胞,用计数法和MTT比色法观察并比较不同浓度RA对细胞增殖的影响情况,用免疫细胞化学方法检测Hela细胞中Cx26和Cx43蛋白的表达。结果①RA抑制Hela细胞增殖,抑制率与RA浓度相关。②Cx26和Cx43蛋白定位于Hela细胞的胞膜和胞质,RA组Cx26和Cx43蛋白的表达明显高于对照组(P<0.05)。结论 RA可抑制Hela细胞增殖,其机制可能与Cx26和Cx43的表达上调有关。     

VSMC-Cx43-/-条件性基因敲除小鼠模型的构建及基因型鉴定

目的 应用CRISPR-Cas9技术和LoxP-Cre系统构建血管平滑肌缝隙连接蛋白Cx43条件性基因敲除小鼠(VSMC-Cx43-/-)模型.方法 采用受精卵同源重组的方式,对Gja1基因进行flox修饰.通过体外转录的方式,获得Cas9 mRNA和gRNA;通过In-Fusion cloning的方法构建同源重组载...     

抗苗勒管激素与卵巢功能关系的研究进展

抗苗勒管激素(anti-Mullerian hormone, AMH)是由睾丸未成熟支持细胞和卵巢生长卵泡的颗粒细胞分泌的一类单糖蛋白,隶属于转化生长因子β超家族,具有抑制雄性苗勒管发育、调节两性生殖细胞和性腺发育的重要功能.近年来,各国学者对其在女性生殖领域的作用进行了广泛的研究.在女性,AMH可以调节卵泡发育、反映卵巢储备功能、预测卵巢对超排卵的反应性,对生殖内分泌疾病的研究有一定的价值.现就国内外AMH与卵巢功能的最新研究进展做一综述,对其进一步研究将有助于对人类生殖的了解.